Base Agar Gelosa Sangre Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adición de

sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente

exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de reacciones de hemólisis.

También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.

El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, también

puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de

enriquecimiento. Se usa también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor

de virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:

• Hemolyses of Streptococcus spp. (left) α-hemolysis (S. mitis); (middle) β-hemolysis (S. pyogenes); (right) γ-hemolysis (= non-hemolytic, S. salivarius

• alfa: halos verdosos (hemolisis parcial) • beta: halos incoloros (hemolisis total) • gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)

Beta hemolisis en agar sangre (los tres círculos son colonias; lo de alrededor de los círculos es la beta hemolisis

Glóbulos rojos (eritrocitos o hematíes) de la sangre en una placa de Petri con agar de las utilizadas para el diagnóstico de

infecciones. La placa de la izquierda muestra una infección por estafilococos y la de la derecha, por estreptococos. Red

blood cells on an agar plate are used to diagnose infection. The plate on the left shows a positive staphylococcus

infection. The plate on the right shows a positive streptococcus infection and with the halo effect shows specifically a

beta-hemolytic group A.

FUNDAMENTO

La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de

una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes.

El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de

5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemólisis.

Mac Conkey Agar Mac Conkey Agar Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y

anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y

alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el

hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el

desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la

colonia.

Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las

sales biliares.

Sirve como indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+)

y las que no pueden (Lac-).

LAC +

Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+ como Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual

baja el PH bajo 6,8 lo que tiene como consecuencia la aparición de colonias de color rojo oscuro.

LAC –

Bacterias que no fermenten la lactosa como Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando

ammonio, lo cual incrementa el PH del agar, formando colonias blancas o incoloras.

(LAC +) IZQ Y (LAC –) DERECHA

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras

MICROORGANISMOS COLONIAS Escherichia coli Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium Incoloras, transparentes

Shigella flexneri Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis Incoloras transparentes

Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas

CARACTERISTICAS DEL MEDIO

Medio Preparado: Rojo púrpura

Sal y Manitol Agar Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos. Es recomendado

para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros

materiales de importancia sanitaria

También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de medios

apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar

FUNDAMENTO

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva

hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante

Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias

sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la

coagulasa

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y

minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración)

es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH

Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que

se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo

Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.

Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona

del mismo color.

Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color

o púrpura.

MICROORGANISMOS CRECIMIENTO CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS

Staphylococcus aureus ATCC 25923

Excelente Amarilla

Staphylococcus epidermidis ATCC 14990

Bueno Roja

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Inhibido Inhibido

CARACTERÍSTICAS DEL MEDIO: ROJO

AGAR DEXTROSA SABOURAUD

El agar Sabouraud es un tipo de agar que contiene peptonas.1 Se usa para cultivar dermatofitos y otros tipos de hongos.

Medio Sabouraud dextrosa (SAB):

El ágar Sabouraud dextrosa, modificado por Emmons, contiene un 2% de glucosa y es ligeramente ácido (pH=6.9), se

considera el medio estándar para recuperar y mantener una amplia variedad de hongos que pueden aislarse en el

laboratorio de micología clínica. Es el medio estándar para observar la morfología típica de los hongos, pero no es el

medio ideal de crecimiento o para estudiar la esporulación.

Este medio permite el crecimiento de actinomicetos aerobios, pero el SAB original (4% de glucosa), dificulta la

recuperación de algunos hongos, sobre todo de Blastomyces dermatitidis.

Se utiliza indistintamente en tubo o en placa.

Fue inventado por, Raymond Sabouraud en 1892. Más tarde Emmons mejoró el medio, el nivel de pH se fue acercando

al neutral para permitir el crecimiento de otros subcultivos de hongos

CANDIDA ALBICANS

Líquido ascítico Es el líquido contenido y formado en la cavidad peritoneal por trasudación (ICC, cirrosis hepática,

hipoproteinemia…), exudación (neoplasias, infecciones, traumatismos, pancreatitis…) o por derrame quiloso (lesión u

obstrucción del conducto torácico). Cuando esta cavidad se inflama debido a una infección o el líquido ascítico

contenido en ella se sobreinfecta deviene una peritonitis, cuyo resultado es el acúmulo de gran cantidad de éste.

Clásicamente se han reconocido 2 tipos de peritonitis, la primaria y la secundaria. El progreso médico ha contribuido

a la aparición de nuevas formas de infección peritoneal, como aquellas que ocurren en pacientes en diálisis peritoneal

crónica, con derivaciones ventriculoperitoneales de LCR o con derivaciones peritoneovenosas del líquido ascítico.

La peritonitis primaria, de prevalencia escasa, se produce espontáneamente sin evidencia de patología

intraabdominal, es prácticamente una enfermedad no quirúrgica (ligada a ciertos grupos de enfermos con cirrosis

hepática, síndrome nefrótico y otras condiciones predisponentes) y su etiología varía dependiendo de si los pacientes

son pediátricos o adultos.

Las causas de peritonitis secundarias son múltiples, destacando las inflamaciones de la pared intestinal o de vísceras

contiguas con posterior perforación intestinal (apendicitis, pancreatitis…), traumatismos o como complicación de la

cirugía. Otras causas son mecánicas (obstrucciones intestinales…), vasculares (colitis isquémica necrotizante…) y

neoplasias.

En aquellos casos en que el acúmulo de líquido ascítico sea debido a peritonitis infecciosa, nos podemos encontrar en

la tinción de gram con:

· Peritonitis primaria:

- Niños:

* Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes: ídem a lo visto en LCR.

* Haemophilus influenzae y otros estreptococos: con menor frecuencia. Ídem a lo visto en LCR.

- Adultos: es esencialmente la peritonitis del cirrótico con ascitis.

* Escherichia coli y otras enterobacterias: ídem a lo visto en LCR.

* Enterococcus spp.: menor frecuencia. Muy difíciles de diferenciar del resto de estreptococos. Se

asemejan mucho al neumococo, pero sin forma lanceolada. 18: Imagen gram:

IMAGEN 18

· Peritonitis secundaria: por lo general es una infección mixta que comprende predominantemente anaerobios

obligados y facultativos (de 3 a 6 microorganismos de media). El líquido peritoneal presenta > 3 gr/dL de proteínas

totales y multitud de leucocitos (principalmente polimorfonucleares (PMN) ). Se debe realizar examen del contenido en

amilasa. Es habitual la presencia de 17.000 a 25.000 leucocitos/mm3 con desplazamiento a la izquierda de la fórmula, y

valores elevados de hematocrito y uremia (el flujo neto de formación de líquido peritoneal puede llegar a ser de 300-500

ml/hora; en estos casos el hemograma puede rendir solo 5.000 leucocitos/mm3, pero el recuento diferencial muestra un

desplazamiento extremo hacia formas PMN inmaduras). En la tinción de Gram, si es positiva, nos encontraremos con

más de 2 tipos de bacterias que, ordenadas de mayor a menor prevalencia, son:

- E.coli y otras enterobacterias: ídem a lo visto en líquido pleural.

- Bacteroides spp.: ídem a lo visto en líquido pleural.

- Cocos anaerobios: ídem a lo visto en líquido pleural.

- Clostridium spp.: grandes bacilos gram (+), con o sin esporas, como trozos de cinta. 19: Imagen gram de

muestra; 20: Imagen gram de cultivo:

IMAGEN 19

- Enterococcus spp.: ídem a lo visto en líquido pleural.

- Streptococcus spp. y Staphilococcus spp.: ídem a lo visto en LCR.

- Fusobacterium spp.: ídem a lo visto en líquido pleural.

· Peritonitis asociada a dispositivos intraperitoneales: escapan al fundamento de esta revisión, ya que

directamente se remiten al laboratorio de microbiología. Pero cabe resaltar que, mayoritariamente se observan

Staphilococcus spp. y en algunas ocasiones bacilos gram (-) y levaduras tipo Candida.