antígenos
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Primer parcialTRANSCRIPT
Antígenosreacción Ag-Ab
Pruebas inmunológicas
ANTIGENOS
Conceptos
• Un antígeno es cualquier sustancia (molécula) que reacciona con productos de la respuesta inmune.
• Epitopo o determinante antigénico. Es la porción de un Ag que se combina con los productos de una respuesta inmune especifica.
Características de los AgInmunogenicidad: capacidad de inducir respuesta (celular o
humoral).Cel B + Ag
Cel plasmaticas + Cel B de memoria
Anticuerpos
Antigenicidad: capacidad de
combinarse de forma especifica a los productos de la
respuesta inmune
Mol. Inmunogenicas = antigenicas
Mol. antigenicas≠inmunogenicas(ej. haptenos)
Que es un Hapteno
• Son moléculas pequeñas que no son inmunogénicas pero que pueden reaccionar con los productos de una respuesta inmune.
• No inducen respuesta inmune por si solas, pero si cuando son transportadas por otras moléculas.
Propiedades de los Antígenos• ALTERIDAD: entre mas extraña es la
molécula es mejor la respuesta inmune. Depende de la distancia filogenética.
Albumina bovina ≠ albumina de ratón Excepciones moléculas conservadas como el citocromo C
• COMPLEJIDAD QQ: entre mas compleja es la molécula será mas inmunogenica (estructura 1ª,2ª,3ª,4ª. heteropolimeros>>homopolimeros).
prots>polisacaridos>lipidos>acidos nucleicos Ag particulados>>solubles
Ag desnaturalizados>>forma nativa
Propiedades de los Antígenos• TAMAÑO MOLECULAR: entre mas
grande es una molécula es mas inmunogenica.
100,000 Da >> inmunogenicidad
• DEGRADABILIDAD: capacidad de procesarse y presentarse junto a MHC.
Ag fagocitados >> inmunogenicos
Tipos de antígenosT independientes
• Son los que pueden estimular directamente a las células B para producir ab.
• No requieren de la ayuda de los linfocitos T
• Generalmente polisacáridos
Ag T independientesPropiedades
• Estructura polimérica. Repetición del mismo determinante antigénico
• Activación policlonal de células B.
Tipo 1: activadores policlonales
Tipo 2: no
• Resistencia a la degradación. Persisten por mas tiempo estimulando el SI.
Tipos de antígenosT dependientes
• Son aquellos que no estimulan directamente la producción de ab, sin la ayuda de las células T.
• Estructuralmente se caracterizan por pocas copias de un mismo epitopo.
• Las Proteínas son un buen ejemplo
Superantígenos
• Son antígenos capaces de activar una gran población de linfocitos T (25 %)
Ag convencionalSuperantigeno
Polyclonal T cell response
1:4 - 1:10
Monoclonal/Oligoclonal T cell response
1:104 - 1:105
REACCION Ag-Ab
Reconocimiento Ag-Ac
• Depende de los receptores de T y B– B: Igs– T: TCR
• T y B reconocen los ags de diferente manera
• Ambos tiene regiones variables y constantes,
• El proceso de recombinación en genes permite la variabilidad
Reconocimiento Ag-Ac
Reconocimiento Ag-Ac
• Los ab reconocen los ag en solución o en la superficie de células, en su forma nativa.
Reconocimiento Ag-Ac
• El TCR sólo reconoce ags asociado con el MHC en la superficie de células, este antígeno ha sido degradado en fragmentos
Reconocimiento Ag-Ac
Naturaleza de las Rx Ag-AbAfinidad
• es la fuerza de la Rx entre un determinante Ag y un sitio de union de un Ab .
• Es la suma de las fuerzas de atracción y repulsión
Ab
Ag
High Affinity
Ab
Ag
Low Affinity
Naturaleza de las Rx Ag-AbAvidez
• Es la medida de la fuerza de unión de un Ag con muchos determinantes Ag y Ab multivalentes.
• Esta influenciada por las valencias del Ag y del Ab.
Fuerzas que intervienen• Puentes de hidrogeno
• Enlaces hidrofobicos
• Enlaces electrostaticos
• Fuerzas de Van der Wals
No son enlaces covalentes por lo tanto la unión es REVERSIBLE
Especificidad y Rx cruzada• Especificidad: se refiere a
la habilidad de un Ab individual de reaccionar con solo un determinante Ag. Un Ab puede distinguir entre:
• La estructura 1ª de un ag.• Formas isomericas• Estructura 2ª y 3ª
Especificidad y Rx cruzada• Rx cruzada: se refiere a
la habilidad de uno o varios Ab de reaccionar con mas de un determinante Ag.
• Estas Rx se dan porque los Ag comparten epitopos en común o epitopos con estructuras similares
Pruebas para la detección de la reacción Ag-Ab
Factores que afectan la medición de la Rx Ag-Ab
• Afinidad • Avidez
• Radio Ag/Ab
• Forma física del Ag.
Ab excess Ag excess
Equivalence – Lattice formation
Pruebas de aglutinación• Son pruebas que tienen como punto de
visualización la aglutinación de un Ag particulado. La prueba puede ser cualitativa o cuantitativa.
+
HemaglutinaciónUsos: tipeaje sanguíneo, infecciones
es fácil de realizar y es semicuantitativa 1/
2
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
1/12
8
1/25
6
1/51
2
1/10
24
Pos.
Neg
.
Titer
648
512<232
128324
Patient
12345678
Aglutinación pasiva
• Prueba de aglutinación donde una partícula (latex) se recubre con el Ag.
• Aplicación: medida de Ab para Ag solubles
+
Inhibición de la aglutinación/hemaglutinación
+
Prior to Test
+ +
Test
Patient’s sample
Pruebas de precipitación
• Inmunodifusión radial• inmunoelectroforesis
Ag Ab- +
Ensayos inmunoenzimaticos (ELISA) radioinmunoensayos (RIA)
Utiliza un contador de radiación
La determinación puede ser visual o por un lector de ELISA
ELISA y RIAcompetitiva para
Ag
+
Prior to Test
Labeled Ag
+
Test
+Patient’ssample
LabeledAg
+
+ Test
+Patient’ssample
LabeledAg
+
ELISA y RIA no competitivapara Ag y Ab
SolidPhase
AgImmobilized
Ab in Patient’s
sample
LabeledAnti-Ig
SolidPhase
AgImmobilized
Ag in Patient’s
sample
LabeledAb
InmunofluorescenciaUtiliza un microscopio de
fluorescencia• Directa: detecta Ag
en tejidos, usando Ab marcados con fluorocromo
Ag
FluorochromeLabeled Ab
Tissue Section
• Indirecta: detecta Ab. El Ab para el Ag no esta marcado. Luego se usa un Ab marcado con fluorocromo
Ag
FluorochromeLabeled Anti-Ig
Tissue Section
UnlabeledAb
Inmunocromatografía
Western blot