transferencia de material genético ii transformación
Post on 16-Feb-2015
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Transferencia de material genético II
Transformación
Código génetico
Es el conjunto de normas por las que la información codificada en el material genético (secuencias de ADN o ARN) se traduce en proteínas.
Está organizado en tripletes o codonesEs degenerado: un mismo aminoácido puede estar determinado por más de un triplete o codónEl triplete de inicio es AUG.Existen tres tripletes sin sentido o de terminación que no codifican para ningún aminoácido: UAA (ocre), UAG (ambar) y UGA.
Plásmido o vector de clonación
Son cadenas dobles de DNA circular de 1 kb a 200 kb que se pueden encontrar en las bacterias.
Características
1. ORIGEN DE REPLICACIÓNCapaz de hacer copias exactas de si mismo independiente del cromosoma del hospedero
2. MARCADORES DE SELECCIÓN
Permite aislar a las células que poseen el gen deseado, generalmente resistencia a un antibiótico
3. SITIO DE CLONACIÓN MULTIPLE (SCM) Sitios de enzimas de restricción en regiones no esenciales. Permite abrir al plásmido e insertar DNA.
Enzimas de restricción
Permiten cortar DNA de hebra doble en enlaces fosfodiester donde reconocen secuencias palindrómicas.
Nomenclatura Ejemplo Corresponde a:E Escherichia Género de la bacteriaco coli Especie de la bacteriaR RY13 Cepa de la bacteriaI La primera enzima identificada Orden de identificación de la enzima
TRANSFORMACIÓN
Es la introducción y expresión de material genético externo (DNA)
En bacterias, generalmente se introduce mediante un choque térmico o por electroporación.
CHOQUE TÉRMICO
Las bacterias (hospederas) son pretratadas con agentes como como CaCl2 (células competentes) y sometidas a un choque de temperatura que ocasiona un incremento en la permeabilidad membranal y facilita la entrada del plásmido.
ELECTROPORACIÓN Aumento de la conductividad electrica y la permeabilidad de la membrana causado por un campo eléctrico aplicado externamente, formando poros.
Proceso de transformación bacteriana
Células competentesHielo
45 s
1-5 uL plásmido
Resistencia a antibiótico
PlásmidoBacteria30 min hielo Selección
Sin Antibiotico
Con Antibiotico
Microinyección permite introducir DNA en el núcleo celular (Ej. microinyección de DNA en óvulos fecundados para obtención de animales transgénicos)
En Eucariontes…..
ORGANISMO TRANSGÉNICO
Cualquier planta, animal o bacteria que tiene información genética de otra especie introducida mediante ingenieria genética.
ORGANISMO TRANSGÉNICO
Producción de Proteínas Recombinantes de uso médico• Insulina: para diabéticos • Factor VIII: para pacientes con hemofilia A • Factor IX: para hemofilia B • Hormona del crecimiento humana: enanismo • Eritropoyetina: para el tratamiento de anemias • Interferón: defensa contra infecciones • Antígeno de superficie de hepatitis B: vacunas • Activador del plasminógeno tisular: disolución de coágulos
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