trabajo de colorantesssssssssssssssssss ennnnnnnnnnnd biocelularrrrrrr mlena
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LABORATORIO 2 – COLORANTES EN BIOLOGÌA
COLORANTES EN BIOLOGÌA
I. OBJETIVOS
Valorar la importancia del uso de los colorantes, resaltanto las diferentes
estructuras de tejidos observando los diferentes contrastes coloreados.
Observar y reconocer la acción de los diversos colorantes (ácidos,
básicos y neutros), en determinadas estructuras de las células.Ejm:
cuando se tiñe con hematoxicilina lo tiñe de color violáceo, reconociendo
así el núcleo; y otro colorante “eosina”, lo tiñe de color rosáceo
reconociendo el citoplasma.
II. MARCO TEÒRICO
Los colorantes son sustancias que transmiten su color a las estructuras con las cuales esté en contacto, permitiendo de esa manera su fácil reconocimiento de ciertas estructuras de la célula.
Por eso es que realizamos coloraciones tanto en el campo de la biología como en la medicina.
DOCENTE: Blgo.César Zaa– UNFV
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LABORATORIO 2 – COLORANTES EN BIOLOGÌA
Fig.1.Cuadro de clasificación de colorantes
Existen varios tipos de tinciones:
Tinciones vitales: teñir células vivas. De rutina: la tinción de hematoxilina y eosina. Mediante esta
tinción se puede demostrar la relación entre células tejidos y orgánulos.
Especiales: se tiñe una estructura en particular de la célula. (Ej. Técnicas histoquímicas).
Clasificación de colorantes:
Según su origen:
Naturales: tomados del medio natural
Artificiales: fabricados
Según su composición:
Ácidos: eosina: tiñen elementos básicos como citoplasma de un color rosa anaranjado.
Básicos: hematoxilina: tiñen elementos ácidos como el núcleo de color violeta.
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Eosina y hematoxilina se emplean juntas al realizar una tinción para ver la célula entera.
Neutros : tiene una parte ácida y una parte básica.Ejm: Wright
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CROMÓFORO +ESQUELETO INCOLORO+ AUXÓCROMO = CROMÓGENO
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III.-INTRODUCCIÒN
Las partes constitutivas de las células y sustancias intercelulares son, por lo
general, transparentes e incoloras y no se pueden distinguir entre sí a menos
que haya diferencias en el índice de refracción.
En el área de coloración tenemos que distinguir entre “sustancia coloreada” y
“materia colorante”. La primera aunque dotada de color no ejerce acción alguna
sobre las fibras y tejidos vegetales y/o animales. La segunda(materia colorante)
reacciona de forma diferente con las células y fibras que constituyen un corte de
tejido, dependiendo de su constitución química y llegando a no reaccionar con
algunos de los constituyentes tisulares , en alguna ocaciones.Esta coloración
diferencial es la que nos permite distinguir, los elementos que integran el tejido,
unos de otros.
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IV.-PARTE EXPERIMENTAL
4.1. MATERIALES
Microscopio óptico
Portaobjetos
Cubreobjetos
Palitos de dientes
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Lanceta hematológica
Alcohol absoluto(se empleó de 96º)
Gotero
Pinza de punta fina
Tallo de geranio
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Alcohol éter o éter etílico
Soporte de tinción
Pizeta (agua destilada)
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Colorantes:
a) Eosina(excelente colorante citoplasmático)
b) Hematoxilina
c) Wright
d) Safranina
Guía de práctica (imágenes microscópicas).
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Placa petri.
V.-PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS
A.-COLORACIÒN SIMPLE: EN MUCOSA LABIAL
1) Con un palito de dientes raspe ligeramente la parte interna del
labio.
2) Se colocó la muestra en el tercio medio del portaobjeto y se hizo
una extensión de la mucosa obtenida.
3) Secar el preparado al medio ambiente.
4) Fijar la lámina con dos gotas de alcohol, durante 2 a 3 minutos.
5) Agregar dos gotas de colorante eosina(ácido).
6) Dejar secar al ambiente por periodo de 2 a 3 minutos.
7) Lavar con agua destilada, a chorro fino, hasta que ya no arrastre
colorante.
8) Secar la lámina al medio ambiente.
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9) Observar al microscopio empezando desde el menor aumento(10X)
B.-COLORACIÒN COMPUESTA: EN MUCOSA LABIAL
1) Proceda como en el caso anterior, hasta el paso Nº 8.
2) Agregar colorante de contraste (2 gotas de hematoxilina durante 2
a 3 minutos).
3) Lavar con agua destilada.
4) Secar la lámina al medio ambiente.
5) Observar al microscopio.
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Magnificación: 100x
C.-COLORACIÒN NEUTRA: EN EXTENSIÒN SANGUÌNEA
1) Desinfectar con alcohol la yema del dedo mayor.
2) Mediante una lanceta extraiga una gota de sangre y colóquela en el
en un porta objeto limpio.
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Citoplasma (rosáceo)
Núcleo(púrpura)
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3) Con la ayuda de otro porta objeto, colocado sobre la gota de
sangre y con una inclinación de 45º.Proceda a extender la sangre
hacia adelante, con movimiento continuo.
4) Secar la lámina al medio ambiente.
5) Cubrir el extendido con 2 o 3 gotas del colorante Wright, durante 1
a 2 minutos.
6) Sobre la lámina con el colorante, agregar agua destilada, hasta
cubrir la lámina y esperar 7 minutos.
7) Lavar con agua destilada a chorro fino.
8) Observar al microscopio.
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D.-COLORACIÒN DE MUESTRAS VEGETALES
1) Con la ayuda de una navaja realizar el corte transversal de una
tallo de geranio (se deberá realizar varios cortes los que se
depositan en una placa petri con agua para hidratarla).
2) Colocar una gota de agua sobre el portaobjeto.
3) Colocar la muestra más delgada de la placa petri.
4) Añadir una gota de safranina.
5) Observar al microscopio.
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Aumento: 100X
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FloemaXilema
Aumento: 100X
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ANEXO PRÀCTICA 2
TINCIÒN DE LEUCOCITOS (GLÒBULOS BLANCOS)
NEUTRÒFILO
1. Neutròfilo en banda.
2. Neutròfilos segmentados.
3. Eritrocito
4. Neutròfilo en segmentación representan 50- 70 %
LINFOCITOS
El núcleo es redondo y no tan comprimido se observa un reborde
basòfilo (azulado) en el borde del citoplasma celular.
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EOSINÒFILO
Obsérvese el núcleo en forma de anteojo y los gránulos rojos del
citoplasma. Representan menos del 5% de glóbulos blancos.
BASÒFILO
Posee un núcleo en forma de lóbulos que muchas veces cuesta verlo
por los gránulos gruesos del citoplasma.
MONOCITO
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Células agranulares más grandes que otros leucocitos y representan el 3 – 9 %.
Se ofrece los siguientes datos para que puedas identificar los glóbulos blancos:
1.-El linfocito está inmediatamente a la derecha del basòfilo.
2.-El neutròfilo está inmediatamente a la izquierda del monocito.
3.-El eosinòfilo no está adyacente al monocito, al neutròfilo, o al basòfilo.
¿Puedes nombrar los glóbulos blancos de izquierda a derecha?
-Los glóbulos blancos son: 1) neutròfilo, 2) monocito, 3) basòfilo, 4) linfocito,
5) eosinòfilo.El fondo muestra algunos eritrocitos (glóbulos rojos) que no tienen
núcleo.
OBSERVACIÒN DE VACUOLA VEGETAL
- Rojo neutro al 1%
- NaCl al 1%
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TINCIÒN CON LUGOL
- Tiñe el almidón de azul, el glucógeno de amarillo y el resto en tonos de
ocre.
CATAFILO DE CEBOLLA
-Remover una hoja interna, colocar sobre la laminilla.
-Añadir una gota de agua, colocar cubreobjeto.
-Colocar gota 0.1% rojo neutral, dejar difundir.
Reposar 10 min.
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TINCIÒN CON AZUL DE METILENO
-Tiñe de azul oscuro restos de ácidos nucleicos, y los proteoglicanos ácidos en
varios tonos de violeta.
CATÀFILO DE CEBOLLA: lamela media, plasmodesmo.
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CUESTIONARIO 1
1. Realizar esquemas necesarios
CONSTITUYENTE REACTIVO MATERIAL COLORACION
Citoplasma EosinaCélulas epiteliales
de la mucosa bucalRosácea
Núcleo y citoplasmaEosina y
HematoxilinaCélulas epiteliales
de la mucosa bucalPúrpura( núcleo)
citoplasma(rosáceo)
Núcleo Wright sangre Violeta
Haces vasculares(xilema,floema)
Safranina Tallo del GeranioFucsia
Esquema:
2. ¿Cuáles son las diferencias principales entre las células vegetales y
animales?
CÉLULA ANIMAL CÉLULA VEGETAL
Pared Celular Presenta No presenta
Plastidios(cloroplastos) No presenta Presenta
Nutrición Heterótrofa Autótrofa
Vacuolas Pequeña y en número son reducidas
Grandes y son numerosas
Lisosomas Presenta No presenta
Centrosoma Presenta No presenta
Reproducción Sexual Asexual
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CÉLULA VEGETAL CÉLULA ANIMAL
3. Realice un cuadro comparativo entre todos los tipos de células
observados.
LOCALIZACIÓN CARACTERÍSTICAS
CÉLULAS DEL
EPITELIO BUCAL
En la superficie interna
de la boca
Se reproducen
rápidamente, se
encuentran juntas por su
alta división no tienen
suministro de sangre
pero tienen
terminaciones nerviosas.
CÉLULAS DE LAS
HACES VASCULARES
En el mesófilo del
geranio.
Xilema: transporta agua
e iones. En el tejido
maduro está formado de
células muertas que
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carecen de membrana
plasmática.
Floema: es un tejido
vascular que conduce
azúcares y otros
nutrientes sintetizados
desde los órganos que
los producen hacia
aquéllos en que se
consumen y almacenan
(en forma ascendente y
descendente).
CÉLULAS SANGUÍNEAS
-Neutrófilo
-Linfocitos
-Eosinófilo
-Basófilo
En la sangre
-Neutrófilo: Tiene
núcleo segmentado en
forma de bastoncitos.Se
encuentra en mayor
cantidad.
-Linfocitos: Su núcleo
es redondo y grande.
-Eosinófilos: Presenta
dos lóbulos o dos lentes
(núcleo en forma de
anteojo) y tiene gránulos
pequeños.
-Basófilo : Posee núcleo
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-Monocito
en forma de glóbulo y
gránulos más grandes
en el citoplasma.
-Monocito: Es el más
grande, es agranulado y
se encuentra en menor
cantidad.
CUESTIONARIO 2
1.-Explicar el mecanismo de tinción de los colorantes en los tejidos.
La coloración de células y tejidos son una combinación de fenómenos físicos
y químicos de absorción: los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y
ósmosis participan en cierto grado.
La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican
que hay reacción química.
El colorante posee tres componentes: un esqueleto incoloro (anillo aromático
de benceno), al cual se le unen dos tipos de radicales: cromóforo (que aporta
el color), auxócromo (que posibilita la unión a elementos del tejido. Al conjunto
de estos tres elementos unidos en una molécula se denomina cromógeno.
2.-De qué depende la unión de los colorantes.
De que los colorantes al ser ácidos (eosina, fucsina ácida) tienen afinidad a
estructuras básicas (tiñen el citoplasma).
Los colorantes básicos (hematoxilina) tiene afinidad por estructuras
ácidas( tiñen núcleo, retículo endoplasmático rugoso y ADN ribosomal.
3.- ¿Cómo favorece el pH ácido en la tinción con colorantes aniónicos?
Para que no afecte el tono de nuestra muestra y no deje restos salinos, frenando
así la afinidad (hematoxilina).
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VI. CONCLUSIONES
Una de las tinciones más comúnmente usada en histología es la
hematoxilina-eosina sobre cortes de parafina. Como vemos se usa un
colorante básico y otro ácido para teñir de diferente color a las
estructuras ácidas y básicas de la célula. Antes de proceder a la tinción,
si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a cabo unos
tratamientos previos sobre las secciones como es el desaparafinado,
puesto que estos cortes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de
criostato esto no se lleva a cabo.
Cuando un colorante se une al tejido y refleja un color diferente al que
tiene en solución se dice que ha ocurrido un fenómeno
de metacromasia. Esto se debe a que las propiedades de absorción de
la luz del colorante cambian al unirse a componentes celulares. Por
ejemplo, el azul de toluidina se vuelve púrpura cuando se une a ciertos
gránulos de los mastocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene el
mismo color que en solución se denomina ortocromasia.
VI. REFERENCIAS BIBLIÓGRÁFICAS
http://www.diferencia-entre.com/diferencia-entre-celula-animal-y-vegetal/
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/celula_animal_y_vegetal.htm
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/5-general.php
http://bibmed.ucla.edu.ve/edocs_bmucla/materialdidactico/celular/TecHistol.pdf
VII. ANEXOS
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MUESTRAS CON COLORANTES FIJADOS
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ESQUEMA DE CÓMO HACER UN FROTIS
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