preparacion de tejidos para examen microscopico

PREPARACION DE TEJIDOS PARA

EXAMEN MICROSCOPICO

PATOLOGIA

INTEGRANTES:

-MIRANDA ANDRADE PAOLA IVONNE

-MORA RODRÍGUEZ LIZBETH

-DOMINGUEZ LÓPEZ ANA LUISA

-LÓPEZ MONTIEL RAFAEL MARTÍN

UNIVERSIDAD VERACRUZANAFACULTAD DE MEDICINA-REGIÓN

VERCARUZ

1.- FIJACION

A. FIJACION1.Proposito2.VENTAJAS Y LIMITACIONESa) Fijacion quimicab) congelamiento.3.PROCEDIMIENTOS QUIMICOSa)Inmersionb)Perfusion4.FIJADORES QUIMICOSa)Aldehidosb)Oxidantesc)Desnaturalizantes de proteinas5.MEZCLAS DE FIJADORES6.PROCEDIMIENTOS FISICOS

FIJACION

QUIIMICA

VENTAJAS

Evita la digestion bacteriana y enzimatica

Vuelven insolubles a los componentes

tisulares

DESVENTAJAS

Puedecausar cambios en la composicion

quimica

CONGELAMIENTO

VENTAJAS

Mas rapido

Evita la disolucion de lipidos y la

desnaturalizacion de proteinas

DESVENTAJAS

No duran mucho tiempo

PROCEDIMIENTOS QUIMICOS

INMERSION PERFUSION

Figura 9. Corte semifino de piel de rata teñido con Azul de Toluidina tras su fijación por inmersión con COMPLUCAD para tejidos y órganos. Notar la presencia de un estrato córneo delgado (CS). La dermis contiene numerosos folículos pilosos (P) asociados a las glándulas sebáceas (SG). La escala representa 88.7 µm.

Figura 8. Corte semifino de lengua de rata fijada por perfusión con COMPLUCAD para tejidos y órganos, teñida con Azul de Toluidina. (E= Epitelio, LCT= Tejido conectivo laxo, SMT= Tejido musculat esquelético). La barra de la escala representa 113.6 µm.

PROCEDIMIENTOS QUÍMICOS

FIJADORES QUIMICOS

Aldehidos

Reaccionan con grupos

aminos

Forman enlaces

cruzados con proteinas

Coagulan proteinas tisulares

FORMALINA

Microscopia de luz

GUTARALDEHIDO

Microscopia electronica

OXIDANTES

Precipitan los lipidos no saturados

TETROXIDO DE OSMIO

Reacciona con los lipidos y

forma un precipitado

negro

Colorante de las

membranas celulares

DESNATURALIZANTES DE

PROTEINAS

ACIDO ACETICO

ALCOHOL METILICO

ALCOHOL ETILICO

Desnaturaizan a las proteinas

quitando moleculas de

H2O

MEZCLAS DE FIJADORES

Liquido de Bouin

Microscopia de luz

Acido picrico, formalina, acido acetico y agua.

Formalina de Zenker

Microscopia de luz

Formalina, dicromato de

potasio, cloruro de mercurio y

agua.

Fijador de Karnovsky

Microscopia electronica

Parafolmaldehido y glutaraldehido en una solucion

salina amortiguada.

Corte de médula osea fijada en liquido de Bouin. Tinción de hematoxilina-eosina.

TEJIDO Se conserva Microscopia de luz o electronica

Introduccion previa en un crioprotector

(glicerina)

Congelamiento rapidoNitrogeno Liquido

El congelamiento permite cortar el tejido sin fijacion

quimica, deshidratacion o

aclaramiento

PROCEDIMIENTOS FISICOS

2.-DESHIDRATACIÓN

Agua tisular solvente orgánico (alcohol etílico)

50%

60%

70%

80%

90%

100%

Nota: Las proteínas se pueden desnaturalizar y hay encogimiento por la salida del agua.

3.- ACLARAMIENTO

Xileno o propilenglicol

Solventes del medio de inclusión

ACLARAMIENTO

Parafina o Resina plástica

Medio de inclusión que evita la

formación burbujas en el tejido

INFILTRADO

4.- INCLUSIÓN

Parte del proceso que da firmeza a los tejidos.

Molde Medio de inclusión

Enfriamiento

Endurecimiento (bloque)ExtracciónFijación al

mandril

MEDIOS DE INCLUSIÓN

PARAFINA Celoidina Pláticos

(metacrilato) Cera de polietilglicol

(es HS)

PLÁSTICOS Resinas epóxicas

Epon Araldite

Nota: requieren un catalizador para la polimerizar

Para microscopio de luzPara microscopio electrónico

5.- CORTE

MICROTOMO

CRIOSTATO

ULTRAMICROTOMO

MICROSCOPIO DE LUZ

MICROSCOPIO ELECTRONICO

3-8 µm

1-5 µm

0.02 - 0.1 µm

1-5 µm

plástico

Vidrio o diamant

e

Vidrio o diamant

e

6.- MONTAJE

MICROSCOPIO DE LUZ

MICROSCOPIO ELECTRONICO

REJILLAS DE COBRE

ALBUMINA, GELATINA O POLILISINA.

PORTAOBJETOS

7.- TINCIÓN

TINCION TIPO AFINIDAD

Hematoxilina Colorante Básico Componentes tisulares basofilos. (DNA;RNA)Azul de toluidina

Azul de metileno

Azul de Alsacia

Eosina Colorante Acido Componentes tisulares Acidofilos.

Orange G

Fucsina acida

Aceite rojo O Liposolubles. Grasas, aceites.

Negro Sudan

Tinciones mas comunes.

Tinción de Hematoxilina y eosina.

Tinción mas útil para el estudio de material biológico.

Hematoxilina: VioláceoEosina: Sonrosado.

Tinción de Van Gieson

Es el método más simple para diferenciar colágeno de otros tejidos conectivos.

Acido Pícrico-Fucsina acida y hematoxilina férrica de Weirgert.

Núcleos celulares: Color marrón a negro. Colágeno (tejido conectivo fibroso): Color rosa o rojo. Músculo y Citoplasma: Color amarillo.

Tricrómico de Masson

Permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces.

Fibras colágenas: AzulNúcleo celular: Marrón, LilaQueratina, glóbulos rojos, tejido muscular.: Rojas.

May Grünwald Giemsa

Estudio de frotis de sangre y medula ósea.

Se basa en la afinidad de los elementos celulares, Acidofilos y basofilos.

Tinciones con plata.

Demuestran un gran numero de estructuras, principalmente fibras de reticulina.

Depósitos de plata: Negro.

Tinción de PAS

Acido peryodico de Schiff (fucsina acido sulfuroso).

Utilizado para demostrar carbohidratos complejos (glucosaminoglucanos, glucógeno).

ESQUEMA GENERAL DEL PROCESO

Deshidratación (etanol)

Fijación química (ME glutaraldehído

y tetróxido de osmio)

Rehidratación

Eliminación de la parafina

Montaje (portaobjetos)

Muestra

Corte (micrótomo)

Inclusión (parafina)

Infiltración (xileno/parafina)

Aclaramiento (xileno)

CongelamientoFijación química (ML formalina)

Deshidratación (etanol)

Corte(criostato)

Tinción (H&E)

Microscopio de luz

Corte

(ultramicrótomo)

Inclusión (plástico)

Infiltración(propilenglícol /

plástico)

Aclaramiento (propilenglicol)

Montaje (rejilla de cobre)

Microscopio electrónico de transmisión)

Tinción (citrato de

plomo)

BIBLIOGRAFIA Paulsen D. Preparación de tejidos para examen

microscópico. En: Histología Básica. Edit. Manual Moderno. México. D.F; 1991. P. 3-11.

Stevens A. Lowe J. Técnicas empleadas en histología y en biología celular. En: Histología Humana. Elsevier Mosby. Madrid, España; 2006.P. 4-8.

Gartner L., Hiatt J. Introducción a la histología y a las técnicas histológicas básicas. En: Histología Texto y Atlas. Edit.McGraw- Hill Interamericana.Mexico;1997. P. 1-3.