preparacion de tejidos para examen microscopico
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PREPARACION DE TEJIDOS PARA
EXAMEN MICROSCOPICO
PATOLOGIA
INTEGRANTES:
-MIRANDA ANDRADE PAOLA IVONNE
-MORA RODRÍGUEZ LIZBETH
-DOMINGUEZ LÓPEZ ANA LUISA
-LÓPEZ MONTIEL RAFAEL MARTÍN
UNIVERSIDAD VERACRUZANAFACULTAD DE MEDICINA-REGIÓN
VERCARUZ
1.- FIJACION
A. FIJACION1.Proposito2.VENTAJAS Y LIMITACIONESa) Fijacion quimicab) congelamiento.3.PROCEDIMIENTOS QUIMICOSa)Inmersionb)Perfusion4.FIJADORES QUIMICOSa)Aldehidosb)Oxidantesc)Desnaturalizantes de proteinas5.MEZCLAS DE FIJADORES6.PROCEDIMIENTOS FISICOS
FIJACION
QUIIMICA
VENTAJAS
Evita la digestion bacteriana y enzimatica
Vuelven insolubles a los componentes
tisulares
DESVENTAJAS
Puedecausar cambios en la composicion
quimica
CONGELAMIENTO
VENTAJAS
Mas rapido
Evita la disolucion de lipidos y la
desnaturalizacion de proteinas
DESVENTAJAS
No duran mucho tiempo
PROCEDIMIENTOS QUIMICOS
INMERSION PERFUSION
Figura 9. Corte semifino de piel de rata teñido con Azul de Toluidina tras su fijación por inmersión con COMPLUCAD para tejidos y órganos. Notar la presencia de un estrato córneo delgado (CS). La dermis contiene numerosos folículos pilosos (P) asociados a las glándulas sebáceas (SG). La escala representa 88.7 µm.
Figura 8. Corte semifino de lengua de rata fijada por perfusión con COMPLUCAD para tejidos y órganos, teñida con Azul de Toluidina. (E= Epitelio, LCT= Tejido conectivo laxo, SMT= Tejido musculat esquelético). La barra de la escala representa 113.6 µm.
PROCEDIMIENTOS QUÍMICOS
FIJADORES QUIMICOS
Aldehidos
Reaccionan con grupos
aminos
Forman enlaces
cruzados con proteinas
Coagulan proteinas tisulares
FORMALINA
Microscopia de luz
GUTARALDEHIDO
Microscopia electronica
OXIDANTES
Precipitan los lipidos no saturados
TETROXIDO DE OSMIO
Reacciona con los lipidos y
forma un precipitado
negro
Colorante de las
membranas celulares
DESNATURALIZANTES DE
PROTEINAS
ACIDO ACETICO
ALCOHOL METILICO
ALCOHOL ETILICO
Desnaturaizan a las proteinas
quitando moleculas de
H2O
MEZCLAS DE FIJADORES
Liquido de Bouin
Microscopia de luz
Acido picrico, formalina, acido acetico y agua.
Formalina de Zenker
Microscopia de luz
Formalina, dicromato de
potasio, cloruro de mercurio y
agua.
Fijador de Karnovsky
Microscopia electronica
Parafolmaldehido y glutaraldehido en una solucion
salina amortiguada.
Corte de médula osea fijada en liquido de Bouin. Tinción de hematoxilina-eosina.
TEJIDO Se conserva Microscopia de luz o electronica
Introduccion previa en un crioprotector
(glicerina)
Congelamiento rapidoNitrogeno Liquido
El congelamiento permite cortar el tejido sin fijacion
quimica, deshidratacion o
aclaramiento
PROCEDIMIENTOS FISICOS
2.-DESHIDRATACIÓN
Agua tisular solvente orgánico (alcohol etílico)
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Nota: Las proteínas se pueden desnaturalizar y hay encogimiento por la salida del agua.
3.- ACLARAMIENTO
Xileno o propilenglicol
Solventes del medio de inclusión
ACLARAMIENTO
Parafina o Resina plástica
Medio de inclusión que evita la
formación burbujas en el tejido
INFILTRADO
4.- INCLUSIÓN
Parte del proceso que da firmeza a los tejidos.
Molde Medio de inclusión
Enfriamiento
Endurecimiento (bloque)ExtracciónFijación al
mandril
MEDIOS DE INCLUSIÓN
PARAFINA Celoidina Pláticos
(metacrilato) Cera de polietilglicol
(es HS)
PLÁSTICOS Resinas epóxicas
Epon Araldite
Nota: requieren un catalizador para la polimerizar
Para microscopio de luzPara microscopio electrónico
5.- CORTE
MICROTOMO
CRIOSTATO
ULTRAMICROTOMO
MICROSCOPIO DE LUZ
MICROSCOPIO ELECTRONICO
3-8 µm
1-5 µm
0.02 - 0.1 µm
1-5 µm
plástico
Vidrio o diamant
e
Vidrio o diamant
e
6.- MONTAJE
MICROSCOPIO DE LUZ
MICROSCOPIO ELECTRONICO
REJILLAS DE COBRE
ALBUMINA, GELATINA O POLILISINA.
PORTAOBJETOS
7.- TINCIÓN
TINCION TIPO AFINIDAD
Hematoxilina Colorante Básico Componentes tisulares basofilos. (DNA;RNA)Azul de toluidina
Azul de metileno
Azul de Alsacia
Eosina Colorante Acido Componentes tisulares Acidofilos.
Orange G
Fucsina acida
Aceite rojo O Liposolubles. Grasas, aceites.
Negro Sudan
Tinciones mas comunes.
Tinción de Hematoxilina y eosina.
Tinción mas útil para el estudio de material biológico.
Hematoxilina: VioláceoEosina: Sonrosado.
Tinción de Van Gieson
Es el método más simple para diferenciar colágeno de otros tejidos conectivos.
Acido Pícrico-Fucsina acida y hematoxilina férrica de Weirgert.
Núcleos celulares: Color marrón a negro. Colágeno (tejido conectivo fibroso): Color rosa o rojo. Músculo y Citoplasma: Color amarillo.
Tricrómico de Masson
Permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces.
Fibras colágenas: AzulNúcleo celular: Marrón, LilaQueratina, glóbulos rojos, tejido muscular.: Rojas.
May Grünwald Giemsa
Estudio de frotis de sangre y medula ósea.
Se basa en la afinidad de los elementos celulares, Acidofilos y basofilos.
Tinciones con plata.
Demuestran un gran numero de estructuras, principalmente fibras de reticulina.
Depósitos de plata: Negro.
Tinción de PAS
Acido peryodico de Schiff (fucsina acido sulfuroso).
Utilizado para demostrar carbohidratos complejos (glucosaminoglucanos, glucógeno).
ESQUEMA GENERAL DEL PROCESO
Deshidratación (etanol)
Fijación química (ME glutaraldehído
y tetróxido de osmio)
Rehidratación
Eliminación de la parafina
Montaje (portaobjetos)
Muestra
Corte (micrótomo)
Inclusión (parafina)
Infiltración (xileno/parafina)
Aclaramiento (xileno)
CongelamientoFijación química (ML formalina)
Deshidratación (etanol)
Corte(criostato)
Tinción (H&E)
Microscopio de luz
Corte
(ultramicrótomo)
Inclusión (plástico)
Infiltración(propilenglícol /
plástico)
Aclaramiento (propilenglicol)
Montaje (rejilla de cobre)
Microscopio electrónico de transmisión)
Tinción (citrato de
plomo)
BIBLIOGRAFIA Paulsen D. Preparación de tejidos para examen
microscópico. En: Histología Básica. Edit. Manual Moderno. México. D.F; 1991. P. 3-11.
Stevens A. Lowe J. Técnicas empleadas en histología y en biología celular. En: Histología Humana. Elsevier Mosby. Madrid, España; 2006.P. 4-8.
Gartner L., Hiatt J. Introducción a la histología y a las técnicas histológicas básicas. En: Histología Texto y Atlas. Edit.McGraw- Hill Interamericana.Mexico;1997. P. 1-3.