métodos de esterilización
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MICROBIOLOGÍA GENERAL
CARRERA DE QUÍMICA FARMACEÚTICA
Sergio Rodrigo Quisberth Barrera M.Sc.
ser_barr@hotmail.com
La Paz – Bolivia
27 de abril del 2015
El objetivo de controlar el crecimiento microbiano es reducir la carga microbiana o el número de microorganismos viables presentes en un material, alimento o en una solución.
Introducción
Esterilización: Eliminación o muerte de todos los microorganismos. Sanitizante: Agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para la salud de la población. Desinfectante: Agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitaciones. Antiséptico: Agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patógenos sobre piel y/o mucosas.
Introducción
Criterio de muerte de un microorganismo: Pérdida irreversible de la capacidad de reproducción en un medio adecuado. También implica destrucción de la célula
Proliferación: Desarrollo y crecimiento con incremento del tamaño poblacional del microorganismo
Supervivencia: No hay muerte ni proliferación, permaneciendo los microorganismos inactivos o inhibidos.
Introducción
Introducción
Cuando una población microbiana se expone a un agente letal, la cinética de la muerte es casi siempre exponencial.
So
bre
viv
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en
100%
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Tiempo (horas)
Factores que afectan el control de los microorganismos
El número de microorganismos
El tiempo de exposición.
La concentración del agente de control
Condiciones ambientales locales
El tipo de microorganismos
La temperatura
El estado físico de el microorganismo
Introducción
El número de microorganismos
A mayor número de microorganismos o resistencia de la población se necesitará mayor tiempo de esterilización.
Para determinar el número de sobrevivientes es necesario conocer el tamaño inicial de la población.
Para establecer los procedimientos de control hay que considerar dos factores: la tasa de mortalidad y el tamaño de la población inicial
Introducción
Tiempo de reducción decimal (D)
Es el tiempo necesario para reducir la densidad de una población al 10% del original a una T° determinada
Introducción
Introducción
Tiempo Supervivientes Muertes por unidad de tiempo
Total muertes
Porcentaje total de muertes
1. 1.000.000 0 0 0
2. 100.000 900.000 900.000 90,0000%
3. 10.000 90.000 990.000 99,0000%
4. 1000 9.000 999.000 99,9000%
5. 100 900 999.900 99,9900%
6. 10 90 999.990 99,9990%
7. 1 9 999.999 99,9999%
Caso teórico de desinfección
valor-Z (Z)
El valor-Z es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.
Introducción
Efecto de la concentración del agente de control
Efecto de diferentes concentraciones de fenol sobre una población de E. coli
Introducción
Tiempo (minutos)
Condiciones Ambientales
El calor es más eficaz en un medio ácido que en uno alcalino.
La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye marcadamente en la penetración del agente.
Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan, por lo general, la resistencia térmica de los organismos.
Introducción
Condiciones Ambientales
La presencia de materia orgánica extraña reduce la eficacia de los agentes antimicrobianos :
No permite que el agente llegue al microorganismos
Se combina con el desinfectante y lo precipita
Se combina con el desinfectante y lo inactiva dejando libres concentraciones tan bajas que no logran el efecto deseado sobre la población microbiana
Introducción
La temperatura
La muerte de microorganismos como consecuencia de un tratamiento a altas temperaturas sigue una cinética exponencial.
Introducción
dN
dt = - K´N
Nº ufc
tiempo
La temperatura
Introducción
𝑿𝒇 = 𝑿𝒐𝒆−𝑲𝒕𝒇
𝑳𝒏𝑿𝒇
𝑿𝒐= −𝑲𝒕𝒇
𝑲 =𝑳𝒏 𝟏𝟎
𝑫
D =K𝒕𝒇
𝑫 =𝒕𝒇
𝑳𝒐𝒈(𝑿𝒐𝑿𝒇
)
𝒁 =Δ(𝒕𝟐 − 𝒕𝟏)
𝑳𝒐𝒈(𝑫𝒕𝟏𝑫𝒕𝟐
)
La temperatura
Problema
Determinar el valor del tiempo de reducción decimal a 116 ºC (D116) de un microorganismo a partir de los siguientes datos de supervivencia al tratamiento
Introducción
Duración del tratamiento (min)
Número de viables (UFC/ml)
5 340.0
10 65.0
15 19.0
20 4.5
25 1.3
min27,8116 D
La temperatura
Problema
Se ha determinado que para esporas de Clostridium botulinum suspendidas en buffer fosfato el D121 = 0.204 min, ¿Cuánto tiempo llevaría reducir una población de 1012 esporas de C. botulinum en buffer fosfato a 1 espora a 121°C?
Introducción
min448,2ft
La temperatura
Problema
Para un microorganismo determinado el valor D104.4 es 113.0 min. y D121.1 es 2.3 min. Calcular el valor z.
Introducción
CZ o9,9
Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes
Provocan pérdida de la viabilidad en los microorganismos Físicos (calor, radiaciones) Químicos (óxido de etileno, formaldehído, agentes oxidantes,
soluciones antisépticas.)
Provocan una separación de los microorganismos de la
sustancia líquida Filtración (se eliminan los microorganismos presentes en un
fluido).
Introducción
Los agentes físicos más empleados para destruir o eliminar microorganismos no deseables son el calor y la radiación.
Esterilización por calor
Esterilización mediante radiaciones
Agentes físicos
Calor:
Los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor.
Provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de membranas y procesos oxidativos.
La efectividad del calor como método de esterilización depende de: Temperatura
Tiempo de exposición
Agentes físicos
Calor Húmedo
El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se debe principalmente a dos razones:
El efecto del agua a altas temperaturas, ya que produce reacciones de hidrólisis y desestabilización de puentes de hidrógeno.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.
Agentes físicos
El autoclave es el equipo más utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100°C.
Agentes físicos
Los autoclaves de laboratorio :
El tiempo de exposición depende del volumen del líquido, de tal manera que para volúmenes pequeños (hasta unos 3 litros) se utilizan 20 minutos a 120° C; si los volúmenes son mayores debe alargarse el tiempo de tratamiento.
Usualmente 15 minutos a 121°C
Agentes físicos
Los autoclaves de laboratorio :
Agentes físicos
Condiciones :
121ºC durante 15 minutos, con cargas iniciales bajas
121ºC durante 30 minutos, con cargas iniciales altas
Indicadores:
Físicos: Temperatura y/o presión
Químicos: Tira reactiva.
Indicador biológico: Geobacillus stearotermophilus o Bacillus stearotermophilus
(D 121ºC=1.5 minutos) Tamaño del inóculo: 104 esporas
Pasteurización
LHT (low temperature holding)
30 minutos a 62.8ºC
HTST (high temperature short time)
15 segundos a 71.6ºC
UHT (ultra high temperature)
2 a 4 segundos a una temperatura que oscila entre 130 y 150ºC, seguido de un rápido enfriamiento, no superior a 32 °C
Agentes físicos
Pasteurización
Solo destruye patógenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium tuberculosis, etc.) y reduce flora de deterioro.
NO ES UN PROCESO DE ESTERILIZACIÓN
Usos: leche, lácteos, jugos de fruta.
Agentes físicos
Tindalización
100 ºC 30 min, 3 días sucesivos
Proceso discontinuo con períodos de incubación intercalados
Usos: Esterilización de productos de baja resistencia térmica, cuando no existe otra opción.
Agentes físicos
Ventajas Rápido calentamiento y penetración. Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo. No deja residuos tóxicos. Hay un bajo deterioro del material expuesto. Económico.
Desventajas No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones
con el agua. Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.
Agentes físicos
Calor Seco
El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de membranas.
La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.
Agentes físicos
Calor Seco
Agentes físicos
Indicadores:
Indicadores físicos y químicos
Indicador biológico esporas de Bacillus subtilis var. niger
(D 160ºC = 0.3 a 1.8 min, Z=20ºC, tamaño del inóculo: =105
esporas)
Existen otras formas de calor seco.
La incineración se utiliza para destruir material descartable contaminado.
La acción directa de la llama cuando se lleva al rojo el material de metal.
Agentes físicos
Ventajas
No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.
Desventajas
Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.
Agentes físicos
Radiaciones
Agentes físicos
Actividad antimicrobiana
Alta energía
Baja energía
Dos tipos: Radiaciones ionizantes Radiaciones no ionizantes
Radiaciones LUV
La radiación ultravioleta ha sido utilizada por su actividad germicida esterilizante por más de 30 años.
La acción de los rayos ultravioleta se debe a la producción de ozono que logra la asepsia, ya que este gas conserva su acción inhibidora hasta una dilución de 1 x 40.000.
Agentes físicos
Radiaciones LUV
Los aminoácidos aromáticos de las proteínas y las bases puricas y primidinicas, en particular la timina del DNA, son los principales compuesto blancos afectados por la acción bactericida de la acción ultravioleta.
Agentes físicos
Radiaciones Ionizantes
Características: Alta energía, baja longitud de onda
Gran poder de penetración
Ionizan átomos y moléculas
No requieren altas temperaturas
Tipos: Rayos gamma (60Co o 137Cs)
Rayos catódicos (electrones acelerados)
Agentes físicos
Radiaciones Ionizantes Desventajas: Equipo especial, personal entrenado No todos los materiales resisten el tratamiento Reacciones no deseadas en alimentos
Agentes físicos
Antisépticos Alcoholes
Iodo
Peroxido de hidrogeno
Órgano-Mercuriales
Colorantes
Bifenoles
Diamidinas
Anilinas
Compuestos de Aminas Cuaternaria
Halofenoles
Agentes químicos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan proteínas. Desorganizan la estructura fosfolipídica de la membrana.
No destruyen esporas y tienen una acción germicida lenta.
Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%.
Los más utilizados son el etanol e isopropílico.
Agentes químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Iodo Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de
proteínas y ácidos nucleicos. Inactiva proteínas y enzimas por oxidación de los grupos -
SH a S-S. Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo:
yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), es irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentración de 1600 ppm de iodo libre.
A 0,25% presenta un valor D = 6,7 min para Bacillus subtilis y D = 4,0 min para Staphylococcus aureus.
Agentes químicos
Amer, Mady, Yusef y Sabry. (2013) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospitals for killing airborne isolated bacteria. Afr. J. Microbiol. Res. 7(26):3321.
Peróxido de Hidrógeno
Es un antiséptico débil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.
El peróxido de hidrógeno gaseoso se utiliza como desinfectante de superficies o decontaminante de gabinetes biológicos debido a que no posee las propiedades tóxicas y cancerigenas del óxido de etileno y formaldehído.
A 1,5% y pH=3,3 presenta un valor D = 55,2 min para Bacillus subtilis y D = 3,4 min para Staphylococcus aureus.
Agentes químicos
Mazzola, Vessoni y S. Martins. (2003) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospitals for disinfection purposes. BMC Infectious Diseases. 3(24):10.
Órgano-Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las proteínas, inactivando enzimas.
Dentro de los mercuriales orgánicos se encuentran el metafen y el mertiolate.
Agentes químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Colorantes
Los derivados del trifenilmetano bloquean la conversión del ácido UDP-acetilmurámico en UDP-acetilmuramil-péptido.
Agentes químicos
R = HSO4- Verde Brillante
R = Cl- Verde de Malaquita Violeta de Genciana
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Bifenoles
Los derivados de compuestos derivados de dos fenoles unidos por diferentes puentes.
Aparentemente actuan a nivel de la membrana celular, se vio que el triclosan desestabiliza la membrana celular y el hexaclorofeno inhibe la cadena de transporte de electrones
Agentes químicos
Triclosan
Hexaclorofeno McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Diamidinas
Son compuestos que vienen en forma de Isetionato, su mecanismo de acción esta relacionado con el ingreso de oxigeno en la bacteria pero no esta descrito del todo.
Clínicamente son empleados en el tratamiento tópico de heridas superficiales.
Agentes químicos
Dibromo propamidina
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Anilidas
Son compuestos que destruyen el carácter semipermeable de las membranas, generalmente se usan en Javoncillos y desodorantes.
El compuesto mas empleado es el Triclocarban (3, 4, 4’ – Triclorocarbanilida) o TCC
Agentes químicos
Triclocarban
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Compuestos de Aminas Cuaternaria
Son detergentes que producen daño a nivel de la membrana celular de las bacterias.
Entre los más empleados se encuentra el CTAB, cetrimida y sales de Benzalkonium.
Agentes químicos
Cetrimida CTAB Cloruro de Benzalkonium
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Desinfectantes y/o Esterilizantes
Cloro y Compuestos clorados
Aldehídos
Oxido de Etileno
Compuestos Fenólicos
Biguanidinas
Agentes químicos
Cloro y sus derivados
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actúan sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos.
Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado más utilizado es el hipoclorito de sodio (lavandina), su actividad bactericida se debe al ácido hipocloroso (HClO) y el Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua.
Agentes químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Cloro y sus derivados El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones
concentradas (50-100 g/l de Cloro activo) y Generalmente, se utilizan soluciones con una concentración del 0.1-0.5% de Cloro activo.
Su actividad está influida por la presencia de materia orgánica.
A 0,025% presenta un valor D = 20,6 min para Bacillus subtilis y D = 4,7 min para Staphylococcus aureus
Agentes químicos
Mazzola, Vessoni y S. Martins. (2003) Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospitals for disinfection purposes. BMC Infectious Diseases. 3(24):10.
Aldehídos
Agentes alquilantes que actúan sobre proteínas, produce modificación irreversible de enzimas e inhibición de la actividad enzimática.
Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas.
Agentes químicos
Glutaraldehido Paraformaldehido Formaldehido
Aldehídos
El glutaraldehído es el único esterilizante efectivo en frío.
El formaldehído como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes, etc.
El formaldehído gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehído, tiene la desventaja de ser muy irritante, ser cancerigeno y perder actividad en ambientes refrigerados.
Agentes químicos
Oxido de Etileno
Agente alquilante se une a compuestos con hidrógenos lábiles como grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Utilizado en la esterilización gaseosa, generalmente en industria farmacéutica. Sirve para esterilizar material termosensibles. Es muy peligroso
Agentes químicos
Compuestos Fenólicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmática porque desordenan la disposición de las proteínas y fosfolípidos.
El fenol no es usado a menudo como desinfectante por ser muy irritante, por ser cancerígeno y por el resido que queda luego de tratar las superficies.
Agentes químicos
Compuestos Fenólicos
Los derivados del fenol más utilizados son el hexaclorofeno y los cresoles.
Son efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias.
No son efectivos contra esporas.
Agentes químicos
Biguanidinas Son compuestos que a bajas concentraciones afectan
la integridad de la membrana, y que a altas concentraciones producen congelamiento del citoplasma.
Entre los mas usados están: Clorhexidina, Alexidina.
Agentes químicos
Clorhexidina
Agentes químicos
Compuesto Químico
Espectro de Actividad
Bacteria Hongos y Levaduras Virus Gram + Gram - Esporas
Amonio cuaternario +++ +/- +/- +/- -
Aldehídos +/- ++ ++ ++ ++
Cloro +++ +++ + ++ +
Iodo +++ +++ ++ ++ +
Tenso activos + + - + -
Alcoholes + + - + -
Mercuriales + +/- - + -
Fenoles +++ +/- +/- ++ +/-
Resistencia Agentes Químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Resistencia Agentes Químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Resistencia Agentes Químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
Resistencia Agentes Químicos
McDonnell y Russell. (1999) Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. Clin. Microbiol. 12(1):147.
EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS
Existen varios métodos para determinar la actividad antimicrobiana de los compuestos.
Técnica de dilución en tubo.
Técnica de la placa de agar.
Agentes químicos
Técnica de dilución en tubo
Primero se realizan diferentes diluciones del agente químico.
El mismo volumen de cada dilución se dispensa en tubos estériles.
A cada tubo se le añade la misma cantidad de una suspensión del microorganismo utilizado como prueba (0.5 de la escala de Mac Farland).
Estos tubos inoculados se incuban a la temperatura óptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante 24 a 48 horas.
Agentes químicos
Técnica de dilución en tubo
Al cabo del tiempo se examina el crecimiento por presencia o ausencia de turbidez en el tubo
Crecimiento (+) turbidez
No crecimiento (-) ausencia de turbidez.
Existen diferente metodologías estandarizadas para determinar la eficiencia de un desinfectante en tubo.
Concentración inhibitoria mínima CIM.
Medición de la turbidez a 580 o 530nm de λ.
Agentes químicos
Técnica de la placa de agar
Se inocula una placa que contenga medio de cultivo sólido con el microorganismo utilizado como prueba.
El agente químico se coloca en el centro de la placa, en un cilindro o impregnado en un disco de papel.
Estas cajas se incuban a la temperatura óptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante 24 a 48 horas.
Agentes químicos
Técnica de la placa de agar
Al cabo del tiempo se examina el crecimiento y se mide el halo de inhibición del crecimiento.
Sensible con halo de inhibición alto.
Resistente con halo de inhibición pequeño.
Existen diferente metodologías estandarizadas para determinar la eficiencia de un desinfectante en tubo.
Concentración inhibitoria mínima CBM.
Bauer-Kirby.
Agentes químicos
Cepas control
Los controles biológicos mas empleados son cepas de la colección americana (ATCC)
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Bacillus subtilis ATCC 6633
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Agentes químicos
Filtración
La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a través de una membrana capaz de retener los microorganismos presentes.
Se emplea para materiales sensibles al calor, como ciertos medios de cultivo, azúcares, soluciones de antibióticos y otros medicamentos.
Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeño tamaño de los poros y en parte por adsorción a las paredes del poro durante su paso a través del filtro debido a la carga eléctrica.
Esterilización por Filtración
Filtración
Debido al pequeño tamaño de los virus, nunca es posible tener certeza de que por métodos de filtración que dejan libre de bacterias, eliminan también los virus.
Según el tamaño del poro se puede lograr esterilidad o reducción de los microorganismos.
En las plantas de tratamiento de agua se logra remover hasta el 90-99% de los microorganismos filtrando el agua previamente floculada y sedimentada.
Esterilización por Filtración
La filtración se utiliza para
Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos de pomadas.
Soluciones termolábiles: líquidos biológicos (suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y antibióticos).
Esterilizar soluciones oftálmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibióticos y vitaminas.
Esterilización por Filtración
La filtración se puede ser a través de:
Filtros profundos o Filtros de profundidad.
Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air).
Membranas filtrantes.
Esterilización por Filtración
Filtros profundos o Filtros de profundidad
Están elaborados de un material fibroso (papel, asbesto o fibra de vidrio) dispuesto al azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean vías tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayoría de los contaminantes presentes.
En este tipo de filtros la retención de las partículas se produce por una combinación de absorción y de retención mecánica en la matriz.
Esterilización por Filtración
Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) Compuesto por pliegues de acetato de celulosa que
retienen las partículas (incluídos los microorganismos) del aire que sale de una campana de flujo laminar o ambiente.
Remoción hasta el 99.97% de partículas mayores de 0.3 micrones de diámetro.
Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar (Industria de Alimentos o Farmaceutica).
Esterilización por Filtración
Filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)
Esterilización por Filtración
Entrada de aire
Salida de aire
Protege la muestra, el
operador y el medio ambiente
Filtración de ambientes (Salas Blancas)
Esterilización por Filtración
Las salas blancas, llamadas también salas limpias o de ambiente controlado son un instrumento imprescindible en determinados procesos de producción e investigación.
En la industria alimentaria la contención de partículas y la contención bacteriológica son requisitos imprescindibles para la garantía de calidad del producto.
En el ámbito de la industria farmacéutica, su función es garantizar la calidad en operaciones de fabricación y control.
Filtración de ambientes (Salas Blancas)
Esterilización por Filtración
Numero máximo de partículas permitidas x m³ “iguales a” o “sobre”
Grado En descanso En operación >=0.5µm >=5.0µm >=0.5µm >=5.0µm
A 350 0 3500 0 B 3500 0 350000 2000 C 350000 2000 3500000 20000 D 3500000 20000 No definido No definido
OMS. (2002) Clasificación del Aire en la Unión Europea, guía para Buenas Prácticas de Fabricación.
Grado A y B corresponde a clase 100, M 3.5, ISO 5 Grado C corresponde a clase 10000, M 5.5, ISO 7 Grado D corresponde a clase 100000, M 6.5, ISO 8
Filtración de ambientes (Salas Blancas)
Esterilización por Filtración
OMS. (2002) Clasificación del Aire en la Unión Europea, guía para Buenas Prácticas de Fabricación.
Grado Tipos de Operaciones para preparaciones asépticas.
A Preparación aséptica y relleno
B Condiciones ambientales para actividades requeridas en el Grado A
C Preparación de Soluciones para ser filtradas
D Manipulación de componentes después del lavado
Filtración de ambientes (Salas Blancas)
Esterilización por Filtración
OMS. (2002) Clasificación del Aire en la Unión Europea, guía para Buenas Prácticas de Fabricación.
ISO Clase
Controles Velocidad del Aire a nivel
mesa en FPM Cambios de Aire
por Hora
1 Riguroso 70 - 130 >750
2 Riguroso 70 - 130 >750
3 Riguroso 70 - 130 >750
4 Riguroso 70 - 110 500 - 600
5 Riguroso 70 - 90 150 - 400
6 Intermedio 25 - 40 60 - 100
7 Intermedio 10 - 15 25 - 40
8 Menos riguroso 3 - 5 10 - 15
Membranas filtrantes
Filtros elaborados generalmente de acetato o nitrato de celulosa con poros de tamaño uniforme.
Tiene como ventaja que, al conocer exactamente el tamaño de poro que presentan, se pueden seleccionar filtros capaces de retener la totalidad de los microorganismos presentes en una solución.
Sin embargo, se saturan rápidamente y la velocidad de filtración a través de ellos es lenta.
Esterilización por Filtración
Membranas filtrantes
La mayor parte de los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y manipular asépticamente al ensamblar el equipo
Los filtros de membrana se utilizan en:
La esterilización de líquidos.
En el análisis microbiológico de aguas.
Esterilización por Filtración
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