el lactico como fijador cromosomico abs-ácido

Boletín de lâ Sociedad Argentina de Botánica

Volumen XV, Xo 2-3 (Diciembre 1973), págs. 287-290

EL ACIDO LACTICO COMO FIJADOR CROMOSOMICO

POR AVELIANO FERNANDEZ

Al reemplazar el ácido acético por el ácido láctico en el fijador Farmer( alcohol abs-ácido acético 3:1), pude comprobar que la coloración conorceína acética se puede mejorar.

Según la bibliografía consultada, el ácido láctico no es utilizado comofijador y sólo figura como integrante de algunas técnicas de coloración, talcomo orceína lacto-propiónica.

Para poner a prueba el ácido láctico como fijador, he realizado la expe¬riencia que se detalla a continuación.

MATERIAL Y METODOS

El material elegido para este trabajo es la cebolla (Allium cepa), porsu fácil enraizamiento y por ser el material clásico para estos estudios.

Con el fin de determinar la mezcla óptima, como así también el efectode cada droga por separado, he seguido los siguientes pasos:

1) Pretratamiento: paclosol ( paradiclorobenceno ) .2) Fijador: con las variantes que figuran en el Cuadro I.3) Conservación: en alcohol 70°, en refrigerador.4) Coloración: con las variantes que figuran en el Cuadro I.5) Preparados permanentes: con euparal.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

Con los resultados obtenidos se confecciona el Cuadro I, en el quefiguran las variantes ensayadas.

'Facultad de Agronomía y Veterinaria, Corrientes. Becario (de Iniciación) delConsejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas.

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Fig. 1-6. — 1 y 2, fijado con alcohol absoluto-ácido láctico 5:1, coloreado con Feulgen,

1.500 y 1.150 aumentos ; 3 y 4, fijado con ácido acético, coloreado con orceína

acética, 2.800 y 1550 aumerttos ; 5, fijado con alcohol absoluto-ácido láctico 5:1,

coloreado con Feulgen, 1.300 aumentos; 6, fijado con Farmer, coloreado con

Feulgen, 1750 aumentos. 5, Arachis batizocoi X 4. hypogaea y el resto Allium cepa.

A. FERNáNDEZ, El ácido láctico como fijador cromosómico 289

CUADRO I

Orceína acética Fig.Fijador Feulgen Fig.

I. a) alcohol abs.-ác. láctico 5 :1

4 : 1

3 :1

2 : 1

1 : 1

1 y 2 5+ +») » »

<0 » »

d) » »

e) » »

II. Farmer

III. ácido láctico

IV. ácido acético

V. alcohol absoluto

6+solo

solo

solo

3 y 4+

El signo “ + ” indica los mejores resultados obtenidos.

El ácido láctico, el ácido acético y el alcohol absoluto utilizados porseparado como fijadores, muestran que el láctico y el alcohol actúan enforma más o menos similar. En cuanto al ácido acético presenta una ven¬taja para el estudio de la estructura çromosómica, cuando se colorea con•orceína acética, permitiendo observar las subcromátidas (Fig. 3).

Cuando se colorea con orceína acética el material fijado en alcohol ab¬soluto- ácido láctico 5 : 1 ( Fig. 1 y 2), se logra una buena diferenciaciónde los cromosomas, dado que el citoplasma no se tiñe. De esta manera loscromosomas aparecen bien contrastados, hecho que no se da con fre¬cuencia fijando con Farmer. Al comparar ambos fijadores, coloreando conFeulgen no se aprecia diferencia entre ellos, dada la especificidad delreactivo de Schiff por el ADN.

Cualquiera sea el fijador utilizado los resultados varían según se useorceína acética o Feulgen en la coloración: con la primera los cromosomasmuestran los bordes bien nítidos, sin embargo con Feulgen parecería quelos cromosomas están un poco erosionados. Esto podría ser por la accióndel ácido clorhídrico normal, , ya que el material -debe permanecer en dicholíquido por ocho minutos a 60°.

La mezcla para el Farmer debe prepararse momentos antes de utilizarla,debido a que se esterifica, lo que dificulta una buena fijación, en cambioel ácido láctico y el alcohol absoluto pueden estar mezclados durantedos meses aproximadamente, a temperatura ambiente, sin que se modi¬fique. Esto es de importancia para fijar materiales en los viajes de reco¬lección debido a que se puede realizar previamente la mezcla con la segu¬ridad de que la misma no se alterará. Esta ventaja, sumada al hecho deque la coloración es algo superior al usar orceína acética, sugiere que elfijador ensayado (5:1) puede usarse con la misma o con mayor eficaciaque el Farmer.

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Después de haber ensayado durante un tiempo el ácido láctico comofijador en raicillas de cebolla, comencé a aplicarlo con buenos resultadosen especies pertenecientes a la familia de Malváceas, como así tambiénen un híbrido interespecífico de Arachis, A. batizocoi X A. hypogaea(Fig. 5).

BIBLIOGRAFIA

DYER, A. F., 1963. The Use of Lacto-Propionic Orcein in Rapid Squash Methods forChromosome Preparations. Stain Tech., 38 (5): 85-90.

JOHANSEN, D. A., 1940. Plant Microtechnique. ' Me Graw-Hill. New York.