control calidad banco tejidos tumorales

CONTROL DE CALIDAD EN EL BTT

DIEGO ESPINOZA ORTIZ (Estudiante Biologia)Rotante Instituto Nacional de Enfermedades Neoplasicas

iquestQueacute es control de calidad El control de calidad es el sistema de

actividades teacutecnicas de medicioacuten de los atributos y el rendimiento de un proceso o tema en contra de determinadas normas para verificar si los requisitos establecidos se cumplen (ISBER 2005)

Gestioacuten de calidad en BT Cada BT debe tener un sistema de

gestioacuten de calidad que debe considerar procedimientos de

Mantenimiento y reparacioacuten de los equipos Registro de entrenamiento del personal Gestioacuten de datos El mantenimiento de registros Protocolos La calidad de material bioloacutegico

Control de calidad del material bioloacutegico

1 Calidad del material tisular

Diagnoacutestico histopatoloacutegico Representatividad del material Proceso de congelacioacuten y

sistemas de seguridad Mantenimiento de la

antigenicidad tisular Preservacioacuten de la integridad de

los aacutecidos nucleicos Enviacuteo de muestras en

condiciones que aseguren el estado de congelacioacuten

Roa I amp C Artigas 2008

Control de calidad del material bioloacutegico

Roa I amp C Artigas 2008

2 Calidad de la informacioacuten asociada a las muestras

ndash Adecuada identificacioacuten de eacutestas (coacutedigos de barras o numeacutericos indelebles)

ndash Introduccioacuten correcta de datos en la base informaacutetica

ndash Mantenimiento de anonimato ndash Acceso restringido a los datos

Calidad del material tisular en BTs

Proceso de congelacioacuten y seguridad Rapidez en la obtencioacuten de

la muestra

Periacuteodo de prefijacioacuten

Periacuteodo de isquemia desde

la oclusioacuten de los vasos

sanguiacuteneos hasta la

extraccioacuten del oacutergano

Factores ambientales (Tdeg

pH faacutermacos etc)

Calidad del material tisular en BTs

Mantenimiento de la antigenicidad tisular

TECNICAS DEINMUNOHISTOQUIMICA (IHQ)

Pasos de una Preparacioacuten HistoloacutegicaObtencioacuten

Fijacioacuten Inclusioacuten (OCT)

Corte Coloracioacuten

(IHQ)

Montaje

Preparacioacuten IHQ para tejidos en BT

Secciones en OCT de 3-4 micras Fijadas en acetona (refrigerada 5 ndash 10

minutos) Hidratacioacuten por bateria de alcohol No requiere recuperacioacuten antigenica

ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg

BLOQUEO PEROXIDASA 1ER ANTICUERPO POLIMERO (ENVISION) (2DO ANTICUERPO +

ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo

Sistema de Streptoavidina - Biotina

Sistema Flex-EnVision

No olvidar quehellip Anticuerpos primarios

Los marcadores sugeridos

Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios

Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal

p53 regulador de expresioacuten geacutenica en el ciclo celular en el paso de G1 a S

HiacutegadoAmiacutegdala

Vimentina

Ki - 67

p53

Calidad del material tisular en BTs

INTEGRIDAD DE LOS ACIDOS NUCLEICOS

PROCEDIMIENTOS PARA CONTROL DE CALIDAD EN TEJIDO SOLIDO

bull RNA and DNA integrity mechanisms should be implemented to monitor RNA and DNA integrity and correlate with other features including time to freezing of original specimen storage conditions length of storage etc

bull DNA fingerprinting Random samples should be DNA fingerprinted and compared with matched blood samples to verify tissue identity

INTEGRIDAD DE DNA Y RNA

La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer

10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)

Fuente Morente et al (2006)