actuales fronteras del diagnóstico de tb (el verdadero aporte de las herramientas moleculares)

CURSO TALLER “TUBERCULOSIS: ENFERMEDAD DE MUCHOS, LUCHA DE

TODOS”

Actuales fronteras del diagnóstico de TB (el verdadero aporte de las

herramientas moleculares)

Juan Carlos Rozo A

Contenido

Contenido

• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Contenido

• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Toma de muestras: esputo de calidad

Antes de tomar la muestra

– Utilizar la palabra que lo identifica en cada lugar (gallo, pollo, gargajo, del fondo del pecho, etc)

Envase• Boca ancha• Capacidad entre 30 y 50 ml• Cierre hermético de rosca• Material plástico

transparente, resistente a roturas

Indicaciones al SR

• Enjuagar la boca con agua únicamente • Inspirar profundamente• Retener el aire• Expulsar la expectoración tratando de

arrastrar las secreciones• Recoger la muestra en el envase• Repetir la operación• Tapar y limpiar el exterior• Lavar las manos

• La muestra

Salival Mucopurulenta Hemoptoica MucosaAFB Microscopy training. Akiko Fujiki. RIT, UICTER, USAID. Chapter II. pag 47.

Contenido

• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

The Handbook: Laboratory diagnosis of tuberculosis by sputum microscopy. The handbook. Global edition. StopTB Partnership

Baciloscopia

Ventajas Desventajas

Sencilla

Bajo costo

Resultados rápidos

No requiere equipo especial

Ampliar cobertura

Número de muestras

1a.

80%

2a.

10%

3a.

5%

Ziehl-Neelsen Auramina O

The Handbook: Laboratory diagnosis of tuberculosis by sputum microscopy. The handbook. Global edition. StopTB Partnership

Cattamanchi, Huang, Worodria, et al. 2011. Integrated Strategies to Optimize Sputum Smear Microscopy A Prospective Observational Study. Am J Respir Crit Care Med Vol 183. pp 547–551.

Ziehl-Neelsen Auramina

Fluorescencia

Manel Marzouk, Asma Ferjani, Mohamed Dhaou, Moufida Haj Ali, Naila Hannachi, Jalel Boukadida . 2013. Comparison of LED and conventionalfluorescence microscopy for detection of acid-fast bacilli in an area with high tuberculosis incidence . Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, Volume 76, Issue 3, July, Pages 306-308

Sharon L. Reed, Girmachew Mamo, Elias Gossa, Michele Jasura, Muluwork Getahun, Eshetu Lemma, Christopher Mathews, J. Allen McCutchan. 2011. Improved tuberculosis smear detection in resource-limited settings: Combined bleach concentration and LED fluorescence microscopy. International Health, Volume 3, Issue 3, September , Pages 160-164

Concentración de la muestra

Farhana Runa, Mahmuda Yasmin, Mohammad Mozammel Hoq, Jahanara Begum, Abu Sadeque Mohammed Matiur Rahman, Chowdhury Rafiqul Ahsan. 2011. Molecular versus conventional methods: Clinical evaluation of different methods for the diagnosis of tuberculosis in Bangladesh. Journal of Microbiology, Immunology and Infection, Volume 44, Issue 2, April, Pages 101-105

Concentración de la muestra

Concentración de muestras paucibacilares

Ramachandran Vignesh, Chinnambedu R. Swathirajan, Suniti Solomon, Greer Waldrop, Sunil S. Solomon, Chandrasekaran Ezhilarasi, Pachamuthu Balakrishnan. 2013. Could concentrating single sputum improve the performance of smear microscopy in detecting TB among HIV patients?. Journal of Infection, Volume 66, Issue 4, April , Pages 388-390.

Karen R Steingart, Vivienne Ng, Megan Henry, Philip C Hopewell, Andrew Ramsay, Jane Cunningham, Richard Urbanczik, Mark D Perkins, Mohamed Abdel Aziz, Madhukar Pai. 2006. Sputum processing methods to improve the sensitivity of smear microscopy for tuberculosis: a systematic review. The Lancet Infectious Diseases, Volume 6, Issue 10, October , Pages 664-674

Métodos de concentración

Contenido

• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Culti

voEn caso de que las dos baciloscopias

iniciales sean negativas, se deberá cultivar la segunda muestra de esputo

Todas las muestras de origen extrapulmonar

Para diagnóstico de TB infantil

Población de alto riesgo

Todo paciente que haya sido diagnosticado por cultivo

Circular externa 00058 de 2009

Medios de cultivo

Medio a base de huevo:

—Ogawa—Lowestein-Jensen (LJ)—ATS—Stonebrink—Coletsos

Medios- agar—Middlebrook

7H10/7H11—HSTB

Medios líquidos—Middlebrook 7H9/7H12—Sistemas

automatizados

Cultivo tradicional Cultivo Automatizado

PARIMANGO RODRIGUEZ, Diana, CHAVEZ CASTILLO, Milciades, LUJAN VELASQUEZ, Manuela et al. Comparación de los medios Ogawa y Löwenstein-Jensen en el aislamiento de Mycobacterium tuberculosis de pacientes con tuberculosis pulmonar. Hospital Regional Docente de Trujillo, Perú. Rev. Med. Vallejiana, 2007, vol.4, no.1, p.24-31. ISSN 1817-2075.

Comparación LJ-Ogawa

Alonso Soto, Juan Agapito, Carlos Acuña-Villaorduña, Lely Solari, Frine Samalvides, Eduardo Gotuzzo. 2009. Evaluation of the performance of two liquid-phase culture media for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in a national hospital in Lima, Peru. International Journal of Infectious Diseases 13, 40—45.

Comparación Ogawa-MGIT

Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis. Normas y guía técnica. Parte II Cultivo. 2008. OPS. Pag 22

Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis. Normas y guía técnica. Parte II Cultivo. 2008. OPS. Pag 22

Procesamiento de la muestra para el cultivo

BKEspecificidad 98%Sensibilidad 60%Detección: 10.000 bacilos/c.c.

CultivoEspecificidad 99%Sensibilidad 90%Detección: 10 bacilos/c.c.

Cultivo con crecimiento

– Coloración para verificar (ZN / KY)– Tasa de crecimiento– Morfología– Detección de Niacina

– Reducción de Nitratos

– Actividad CatalasaTemperatura ambiente68°C

Identificación de micobacterias

Alternativas

Contenido

• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Det

ecci

ón d

e re

sist

enci

a en

TB

Todos los casos sospechosos de ser resistentes a los fármacos anti TB

Muestras de los pacientes con diagnóstico de VIH

Contactos de un caso indice de TB resistente o multiresistente

Pacientes en tratamiento cuya baciloscopia de control de segundo mes

sea positiva

Pacientes de reingreso por abandono, recaída o fracaso Circular externa 00058 de

2009

Detección de resistencia en TB

Detección

Molecular Fenotípico

Detección

Molecular

GeneXpert GenoType MTBDRplus GenoType MTBDRsl

GeneXpert

Rifampicina

96%rpoB

Detección Molecular

GenoType MTBDRplus

Rifampicina

rpoB

Isoniacida

katGinhA

10-20 %ahpCkasAndhceoAmabAoxyRacpMfurA

Detección Molecular

Diagnóstico MolecularGenoType

MTBDRsl

Fluoroquinolonas

gyrA75-94%

gyrB

Aminoglucósidos y péptidos cíclicosEstreptomicina-Amikacina-Kanamicina-Capreomicina

rrsS 10-15% - KAN: 65-84%AMK: 92% - CAP: 86%

rpsL 56-60% StlyA 5% CAP

Etambutol

embB47-65%

embA embC

Deborah A. Williamson , Indira Basu, James Bower, Joshua T. Freeman, Gillian Henderson, Sally A. Roberts. 2012. ⁎ An evaluation of the Xpert MTB/RIF assay and detection of false-positive rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 74 (2012) 207–209

Riesgos del mal uso de GeneXpert

Bunsow E, et al., Evaluation of GeneXpert MTB/RIF for the detection of Mycobacterium tuberculosis and resistance to rifampin in clinical specimens, J Infect (2013), http://dx.doi.org/10.1016/j.jinf.2013.11.012

Fenotípico

Detección

Fenotípico

Directas Indirectas

PRUEBAS DE ÓXIDO - REDUCCIÓN

MICROSCOPIC OBSERVATION DRUG

SUSCEPTIBI-LITY (MODS)

Bactec MGIT

Método de proporciones

múltiples en agar

Detección

FenotípicoDiagnóstico

Diferencias entre los métodos fenotípicos

Susceptibility testing of Mycobacteria, Nocardia, and other aerobic Actinomicetes; approved standard – Second edition. M24-A2. Vol 31. No 5. CLSI.

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Genotipificación

Epidemiología molecular

Complementando la epidemiología clásica

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