— 1 —

Biología y Geología

Extracción de ADN de tejidos animales

ObjetivoEn esta práctica realizaremos la extracción del ADN de células animales poniendo de manifiesto su es-

tructura fibrilar y el grado de arrollamiento que permite el empaquetamiento en el núcleo celular. Tras la extrac-ción se realizará una tinción específica del ADN obtenido.

Material necesario:- Tejido animal (hígado) - Mortero o batidora - Embudo- Trozo de tela para filtrar - Arena (si se usa mortero) - Probeta- Pipeta - Varilla de vidrio - Vaso de precipitados- Alcohol 96º - Solución de NaCl 2M - Detergente tipo lavavajillas

FundamentoEl ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a proteínas para

formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogeneizar el tejido y romper las células para separar elnúcleo, romper éste para liberar el ADN, separarlo de las proteínas y precipitarlo para extraerlo de la solución.Aparecerá como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio. Por último, se puedesituar sobre un porta, teñirlo con un colorante básico y observarlo al microscopio.

Procedimiento! Tras cada paso relacionado a continuación escribe su finalidad en el espacio al efecto

1. Triturar en frío la muestra de hígado en el mortero junto con arena o mediante la batidora.2. Añadir 50 ml de agua y remover suavemente pero mezclando a fondo.

3. Filtrar varias veces el resultado a través de un pedazo de tela.

4. Añadir al filtrado resultante un volumen igual de solución de NaCl 2M.¿Qué es una solución de NaCl 2M? ¿Qué acción realiza en este procedimiento?

PRÁCTICA DE LABORATORIO 4º ESO

NOMBRE __________________________________ FECHA ________________

— 2 —

IES “El Carrascal”

5. Añadir ahora 1 ml de detergente (tipo Mistol o Woolite) y remover suavemente, mezclando bienpero evitando que se forme espuma. Repetir la mezcla varias veces dejando reposar un minuto cadavez. Si se forma espuma se puede retirar con un esquina de papel de filtro o con un cuentagotas.

6. Ahora se añaden unos 50 ml de alcohol muy frío ladeando el tubo o vaso de precipitados y dejandoresbalar muy lentamente el alcohol por la pared de aquel para formar una capa sobre la soluciónanterior. Es muy importante evitar que se mezclen ambas soluciones, pues en la interfase precipita-rá el ADN.

7. El ADN irá apareciendo poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma de grumos blancos. Sefavorece la precipitación y recolección si se va recogiendo mediante la varilla de vidrio, u otroinstrumento similar, introduciéndola ligeramente bajo la interfase y haciéndola girar suavementemientras se extrae. Así se irán pegando en la varilla unas hebras blancas que corresponden a milesde fibras de ADN.

8. Se puede ahora tomar una muestra del ADN recogido, depositarla sobre un porta y teñir con azulde metileno durante 1 a 3 minutos. Tras limpiar bien el porta, se observa al microscopio.Describe lo que observes al microscopio y haz un esquema.

9. Otra posibilidad es conservar el ADN obtenido por uno de los siguientes métodos:- en un frasco bien cerrado con alcohol etílico al 50% o 70%.- dejándolo secar al aire extendido sobre papel de filtro.