Finalidad . Sistema enzimático para determinación del ácido úrico porreacción del punto final en muestras de sangre, orina y líquidos(amniótico y sinovial).

[Sol para uso diagnóstico in vitro]amente

Principio . El ácido úrico es determinado de acuerdo con lassiguientes reacciones:

UricasaÁcido úrico + O + H O Alantoína + CO + H O2 2 2 2 2

Peroxidasa2H O + DHBS + 4-aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4 H O2 2 2

El ácido úrico es oxidado por la uricasa, la alantoína y el peróxido dehidrógeno. El peróxido de hidrógeno, en la presencia de la peroxidasa,reacciona con el DHBS y con 4-aminoantipirina, que forman elcromógeno antipirilquinonimina. La intensidad del color rojo formado esdirectamente proporcional a la concentración del ácido úrico en lamuestra.

Características del sistema . La dosificación del ácido úrico queutiliza la reacción de Trinder se caracteriza por ser un método directo, defácil aplicación en sistemas automáticos, que tiene la especificidad de lauricasa. Muchos productos utilizan fenol como reactivo de acoplamiento.Sin embargo, la baja sensibilidad de fenol y la incompatibilidad del pHóptimo entre la uricasa de origen animal y la peroxidasa generan seriosobstáculos para la fiabilidad del método.

Labtest, como sistema Ácido Úrico Liquiform, supera estas dificultadesmediante la sustitución del fenol por el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzeno sulfonato (DHBS), que es 4 veces más sensible, lo quepermite una relación apropiada entre las muestras e los reactivos,asimismo permite obtener una sensibilidad óptima con relación a unabaja concentración de analito.

El reactivo se suministra bajo la forma líquida y se distribuye en dosreactivos, que permiten su utilización en sistemas automáticos, y facilitala eliminación de la acción de interferentes.

La metodología monorreactiva puede aplicarse con la utilización de unReactivo de Trabajo, que es estable hasta la fecha de caducidad de losreactivos que lo conforman, si se mantiene entre 2 y 8 ºC. El Reactivo deTrabajo obtiene un rendimiento adecuado mismo en situaciones de bajasdemanda de la prueba. El sistema permite aún preparar el volumen delReactivo de Trabajo necesario para una medición de la concentración delácido úrico.

La linealidad del método es de 20 mg/dL, lo que disminuye la necesidadde efectuar diluciones en un número significativo de muestras.

Se ha desarrollado el reactivo con un conjunto especial de surfactantesque promueven la clarificación de la turbidez causada por lípidos, lo quereduce significativamente la interferencia causada por la hiperlipemia enla determinación de la concentración de ácido úrico.

El método propuesto es de fácil aplicación en gran parte de losanalizadores automáticos y semiautomáticos capaces de mensurar unareacción de punto final entre 490 y 540 nm.

Metodología . Enzimático- Trinder

Reactivos

1. - Reactivo 1 - Almacenar entre 2 - 8 ºC

Contiene tampón 155 mM, 4-aminoantipirina 0,1 mM, peroxidasa³

³1000 U/L, azida sódica 0,02% y agentes tensioactivos.

2. - Reactivo 2 - Almacenar entre 2 - 8 ºC

Contiene tampón 155 mM, DHBS 2,5 mM, uricasa 300 U/L, azida³ ³

sódica 0,02% y agentes tensioactivos.

3. - Estándar - Almacenar entre 2 - 8 ºC

Contiene ácido úrico 6,0 mg/dL. Almacenar bien sellado para evitar laevaporación.

Los reactivos no abiertos, si se almacenan en las condicionesespecificadas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en laetiqueta. Durante el manejo, los reactivos están sujetos a lascontaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causarreducción de la estabilidad.

Preparo del reactivo de trabajo . El conjunto de un envase deReactivo 1 y un envase de Reactivo 2 permite preparar el Reactivo deTrabajo. Transferir el contenido de un envase de Reactivo 2 para unenvase de Reactivo 1 y homogeneizar suavemente. Identificar el envasedel Reactivo de Trabajo y apuntar la fecha de caducidad.

El reactivo de trabajo es estable por 14 días a condición de que semantengan entre 2 y 8 ºC, en un recipiente cerrado y cuando no haycontaminación química o microbiana. El desarrollo de coloraciónligeramente rosado en el Reactivo de Trabajo es normal y no afecta surendimiento.

Opcionalmente, puede prepararse menor volumen del Reactivo deTrabajo utilizando la proporción de 4 volúmenes del Reactivo 1 y 1(un)volumen del Reactivo 2. Para preparar el volumen de reactivo necesariopara llevar a cabo la prueba, mezcle 0,8 mL del Reactivo 1 y 0,2 mL delReactivo 2.

ÁCIDO ÚRICO LiquiformInstrucciones de Uso

01 Espanhol - Ref.: 140

1

2

Ref.: 140

No se puede utilizar el reactivo cuando su absorbancia medida contraagua en 505 nm es igual o superior a 0,300, o si se muestra turbio y consignos de contaminación.

Los cuidados habituales de seguridad deben aplicarse en el manejo de losreactivos. Los reactivos contienen azida sódica que es tóxica. No beba y,en caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantementecon agua y acúdase a un médico. La azida puede formar compuestosaltamente explosivos con tuberías de plomo o cobre. Por lo tanto, utilicegrande volumen de agua para desechar los reactivos.

Cuidados con el tiempo de reacción, temperatura de trabajo y pipeteadoson extremadamente importantes para la obtención de resultadoscorrectos.

Los reactivos se deben manejarse siguiendo las buenas prácticas delaboratorio que incluyen evitar la ingestión y el contacto con la piel,mucosas y ojos.

Material necesario y no fornecido

1. Baño maría o incubadora mantenido a una temperatura constante de(37 ºC).

2. Fotómetro capaz de mensurar con precisión la absorbancia entre490 y 540 nm.

3. Pipetas para medir las muestras y los reactivos.

4. Cronómetro.

Influencias preanalíticas . El ácido úrico se incrementa en las 24horas que siguen a la ingestión de alcohol.

Las concentraciones séricas de ácido úrico presentan grandesvariaciones en el día a día y estacional en el mismo individuo. El ácidoúrico se eleva con el estrese, estados de ayuno prologando y aumento delpeso corporal.

El ácido ascórbico (vitamina C), por ser una sustancia reductora,consume el peróxido de hidrógeno, y conduce a la obtención deresultados falsamente reducidos. Se debe orientar al paciente a no ingeriralimentos o utilizar fármacos que contienen ácido ascórbico hasta 48

horas antes de la realización del análisis .12

Usar suero, plasma (EDTA Heparina), orina y líquidos (amniótico ysinovial). El analito es estable 3 días entre 2 a 8 ºC y 6 meses a 10 ºCnegativos.

Debe generarse un Procedimiento Operativo Estándar (POP) para larecogida, preparación y almacenaje de la muestra. Se destaca que loserrores debido a la muestra, pueden ser superiores a los errores que hanocurrido durante el procedimiento analítico.

Puesto que ninguna prueba conocida puede asegurar que las muestras desangre no transmiten infecciones, todas ellas se deben considerar comopotencialmente infecciosos. Por lo tanto, al manejarlas, se deben cumplirlas normas establecidas para la bioseguridad.

Para desechar los reactivos y el material biológico, se sugiere laaplicación de las normas locales, estaduales o federales de protecciónambiental.

La utilización de plasma con fluoruro conduce a la obtención deresultados falsamente reducidos. El fluoruro actúa como inhibidor de lauricasa.

En la metodología birreactiva se debe considerar los siguientes valorespara interferentes.Valores de bilirrubina hasta 5 mg/dL y hemoglobina hasta 200 mg/dL ymuestras con triglicéridos hasta 1200 mg/dL, no producen interferenciassignificativas.

En la metodología monorreactiva debe considerarse los siguientesvalores para interferentes:Valores de bilirrubina hasta 5 mg/dL y hemoglobina hasta 50 mg/dL ymuestras con triglicéridos hasta 1200 mg/dL, no producen interferenciassignificativas.

Para valorar la concentración de la hemoglobina en una muestrahemolizada puede llevarse a cabo de la siguiente forma: Disolver 0,04 mLde la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y medir laabsorbancia entre 405 o 415 nm y ajustar el cero con agua desionizada odestilada.

Hemoglobina (mg/dL) Absorbancia x 601@ 405

Hemoglobina (mg/dL) Absorbancia x 467@ 415

Muestras: Suero, plasma (EDTA Heparina), orina y líquidos (amniótico ysinovial).

Orina . Homogeneizar la orina, separar 10 mL, ajustar el pH entre 7,0 y 9,0con NaOH 5% y calentar 10 minutos a 56 ºC para disolver los cristales deurato y ácido úrico. Diluir la orina 1:10 (0,1 mL de orina + 0,9 mL de aguadestilada). Multiplicar el resultado obtenido por 10.

Procedimientos para la realización del ensayo

Tome 3 tubos de ensayo y proceda de la siguiente manera:

Mezclar e incubar en baño maría a 37 ºC durante 5 minutos. El nivel deagua en el baño debe ser superior al nivel del reactivo en los tubos deensayo. Determinar las absorbancias de la prueba y estándar en 505 nm ofiltro verde (490-540 nm) y ajustar el cero con el blanco. El color esestable durante 30 min.

Interferencias

02 Espanhol - Ref.: 140

Procedimiento

Blanco

1,0 mL 1,0 mL

Test

0,02 mL0,02 mL

Estándar

1,0 mLEstándar (N° 3)Reactivo del Trabajo

Muestra

Muestra

Precauciones y cuidados especiales

Calibrador: usar calibrador de proteína. La concentración de ácido úricoen el calibrador Calibra H - Labtest es trazable al SRM 913 del NIST.

Intervalo de calibracionesCuando indica el control interno de la calidad;Si se utiliza un nuevo lote de reactivos;Si se utiliza nuevos envases de reactivos de un mismo lote, y en caso deque se realice una nueva calibración durante la utilización del envaseanterior.

El resultado de la medición es lineal 20 mg/dL. Cuando se obtienehastaun valor igual o mayor que 20 mg/dL, disolver la muestra con NaCl150 mmol/L (0,85%), realizar nueva medición y multiplicar el resultadopor el factor de dilución.

Orina . Disolver la muestra (con pH entre 7,0 y 9,0 y calentada 10 minutosa 56 ºC) 1:20 o 1:40 con agua destilada o desionizada y repetir lamedición. Multiplicar el resultado obtenido por 20 (veinte) o 40(cuarenta), según dilución previamente utilizada.

Control interno de calidad . El laboratorio debe mantener unprograma de control interno de calidad que defina claramente losreglamentos aplicables, objetivos, procedimientos y criterios para lospliegos de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registrode las actividades. Los materiales de control deben utilizarse para evaluarla inexactitud y desviaciones de la calibración.

Se sugiere que los pliegos para el coeficiente de variación y el error totalse basen en los componentes de la variación biológica (VB) .9,10

Se recomienda utilizar las preparaciones estabilizadas de la líneaQualitrol H - Labtest para el control interno de calidad en los ensayos dequímica clínica.

Intervalo de referencia . Los intervalos se deben usar apenascomo guía. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propiosintervalos de referencia en la población atendida.

Orina . 250 a 750 mg/24 horas

Conversión . Unidades convencionales (mg/dL) x 59,5 = Unidades SI( mol/L)m .

Características del desempeño13

Estudios de recuperación . En dos muestras con concentraciónde ácido úrico iguales a 5,9 y 6,3 mg/dL, se han añadido cantidadesdistintas del analito, así se obtiene recuperaciones entre el 99,6 y el100,2%.

El procedimiento sugerido para la medición es adecuados parafotómetros cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual omenor que 1,0 mL. Se debe efectuar una verificación sobre la necesidadde ajuste del volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de lasmuestras y reactivos pueden modificarse proporcionalmente sin afectarel rendimiento de la prueba, además el procedimiento del cálculopermanece sin cambio. En el caso de reducción de los volúmenes esfundamental que se observe el volumen mínimo requerido para la lecturafotométrica. Volúmenes de muestra menores que 0,01 mL son críticos enaplicaciones manuales y se deben usar con precaución, ya que aumentanla inexactitud de la medición.

Cálculos

Absorbancia de la PruebaÁcido Úrico (mg/dL) = x 6

Absorbancia del Estándar

Ejemplo

Absorbancia de la Prueba = 0,214Absorbancia del Estándar = 0,163

0,214Ácido Úrico (mg/dL) = x 6 = 7,9

0,163

El resultado también puede obtenerse con la utilización del factor decalibración.

6Factor de Calibración =

Absorbancia del Estándar

Ejemplo

6Factor de Calibración = = 36,8

0,163

Ácido Úrico (mg/dL) = 0,214 x = 7,936,8

mg/dL x volumen urinario (mL)Orina (mg/24 horas) =

100

Calibración

Trazabilidad del sistemaEl estándar es trazable al Standard Reference Material (SRM) 913 delNational Institute of Standards and Technology (NIST).

Calibraciones manualesObtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos, o si seindica el control interno de la calidad.

Sistemas automáticosBlanco de reactivo: agua desionizada o solución de cloruro de sodio150 mmol/L (0,85%);

03 Espanhol - Ref.: 140

Linealidad

Suero (mg/dL)

Niños11

Adultos

HombreMujer

HombreMujer

2,5 a 7,00,5 a 5,01,5 a 6,0

1,5 a 6,0

El error sistemático total medio obtenido en una muestra con valor deácido úrico de 8,0 mg/dL fue igual 0,01 mg/dL o el 0,15%. El errorsistemático total obtenido es inferior al error sistemático total de laespecificación deseable basada en los componentes de la VariaciónBiológica que es 4,9%.£±

Estudios contrastivos de métodos . El método propuesto hasido contrastado con otro producto de metodología análoga, y se hanobtenido los siguientes resultados:

El error sistemático total verificado en los niveles de decisión 2,0; 8,0 y10,7 mg/dL fueron iguales a 0,02; 0,17 y 0,26 o 1,00; 2,17 y el 2,43%,respectivamente.

El error sistemático total obtenido es inferior al error sistemático total de laespecificación deseable basada en los componentes de la VariaciónBiológica que es 4,9%.£ ±

Estudios de precisión . Se han realizado los estudios de precisióncon la utilización de 40 muestras con un promedio de concentracionesiguales a 2,1, 8,6 y 11,7 mg/dL.

El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado enconcentraciones iguales a 2,0, 8,0 y 10,7 mg/dL son iguales al 3,45%,4,04% y al 4,32%, respectivamente.Los resultados señalan que el método cumple con la especificacióndeseable para el error total ( 12,4%) basada en los componentes£ ±

deseables de la Variación Biológica.

Sensibilidad metodológica . Se ha utilizado una muestra que nocontenía ácido úrico para calcular el límite de detección del ensayo, en lacual se ha encontrado un valor igual a 0,02 mg/dL, equivalente alpromedio de 10 ensayos más tres desviaciones estándar.

Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valoresiguales a 24,9 y 23,2 mg/dL se han utilizado para evaluar la respuesta delsistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Conla utilización de los factores de dilución que variaron de 2 a 16, se hanencontrado un promedio de recuperaciones del 101%. El errorsistemático total obtenido es inferior al error sistemático total de laespecificación deseable basada en los componentes de la VariaciónBiológica que es 4,9%.£ ±

Significado clínico . Numerosas enfermedades, condicionesfisiológicas, alteraciones bioquímicas, factores sociales y ambientalesestán asociados a elevaciones en la concentración úrico plasmático.Entre las etiologías de la hiperuricemia están: insuficiencia renal, cetosis,exceso de lactato, uso de diuréticos y en todas las patologías en las que ladestrucción de está aumentada. El aumento del ácidonucleoproteínasúrico está positivamente relacionado a la hiperlipemia, obesidad,ar teriosclerosis, diabetes mellitus e hiper tensión, aunque losmecanismos de estas alteraciones todavía no se entiendan muy bien.

La gota, manifestación clínica de la hiperuricemia, es clasificada comoprimaria, secundaria o idiopática. Es importante recordar que la gotasecundaria es una complicación poco común cuando relacionada a lafrecuencia de la hiperuricemia. Se destaca que la colchicina, utilizada enlos casos de gota aguda, no modifica los valores de ácido úrico. Son pocofrecuentes las causas de hipouricemia: ocurre en la síndrome de Fanconi,enfermedades malignas como linfoma de Hodgkin y carcinomabroncogénico.

Observaciones

1. La limpieza y secado adecuadas del material utilizado son factoresfundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención deresultados correctos.

2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada acada aplicación. Por lo cual, para preparar reactivos y usarla en lasmediciones debe tener resistividad 1 megaohm o conductividad³

£1 microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/L (agua tipo II).Para el enjuague de la vidriería, el agua puede ser del tipo III conresistividad 0,1 megaohms o conductividad 10 microsiemens. En el³ £

enjuague final utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora estácon su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberación devarios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación oreducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas,alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual, esfundamental establecer un programa de control de la calidad del agua.

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4. Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Clin Chem 1973;19:522.

04 Espanhol - Ref.: 140

Repetitividad - imprecisión intra-ensayo

Media

2,39,5

11,1

DE

0,020,070,09

CV (%)

0,970,850,82

N

404040

Muestra 2Muestra 3

Muestra 1

Reproducibilidad - imprecisión total

Media

2,39,5

11,1

DE

0,030,090,09

CV (%)

1,481,141,14

N

404040

Muestra 2Muestra 2

Muestra 1

Número de muestraIntervalo de concentraciones(mg/dL)

MétodoComparativo

40 40

1,92 - 15,79 1,99 - 16,27

MétodoLabtest

Ecuación da regresión

Coeficiente de correlación

Método Labtest (mg/dL) = x1,0322- 0,0844contrastivo

0,9995

5. Kageyama N. Clin Chem Acta 1971;31:421.

6. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Wanner-ChilcottLaboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,1972.

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13. Labtest: Datos de Archivo.

El número de tests en aplicaciones automáticas depende de los

parámetros de programación.

Informaciones al consumidor

[Términos y Condiciones de Garantía]

Labtest garantiza la correcta performance del equipo hasta su fecha devencimento se ha sido conservado de acuerdo a las instrucciones quefiguram en el rótulo.

05 Espanhol - Ref.: 140

Edición: Abril, 2013Ref.: 051015

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Presentación

Producto Referencia Contenido

140-1/100

Ácido ÚricoLiquiform

140-1/250

1 x 20 mL1 x 5 mL

1 x 80 mL1

2

1 x 50 mL1 x 5 mL

1 x 200 mL1

2

06 Espanhol - Ref.: 140