9.- inmunogenética - 2008
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Biología molecular
DNA RNAm proteinastranscripsión traducción
Dr. Carlos Huanqui G.
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Biología molecular
Ligandos
Receptor
Vias de señalización
Factores de transcripsión (a)
Promotor de gens
Transcripsión: RNAm
Codificación: síntesis proteica
Rac Ras DAGPI3
Ap-1, NFk-B
Rib. proteina
RNAm
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Ingienería genética: tecnología del DNA recombinante
----
DNA
fragmentos DNA
DNA
recombinanate
vector
(plásmido)
DNA genomico o
cromosómico
Bacteria: E. coli
plàsmido
(DNA-desnudo)
(DNA-plásmido)
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Terapia Génica
”Técnica terapéutica mediante la cual se inserta
un gen funcional en las células de un pacientehumano para corregir un defecto genético o para
dotar a las células de una nueva función".
Corregir gen defectuoso
Nueva función a la célula
Plásmido DNA Célula anormal
Célula normal
Proteina corregida
Proteina nueva
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TÉCNICAS DE INSERCIÓN GÉNICA Métodos físicos Microinyección
Electroporación
Microproyectiles
Métodos químicos Fosfato cálcico
Policationes
Lípidos
Liposomas
Membranas derivadas de eritrocitos
Vectores virales Retrovirus
Adenovirus o virus asociados (AAV)
É Ó É
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TÉCNICAS DE INSERCIÓN GÉNICA DNA- plásmido
•Ventajas: fácil de manipular, es estable, se produce a bajo costo y
con un gran nivel de pureza, no tiene riesgo de replicación viral, no
se inserta en el genoma celular.
•Es muy pobremente inmunogénico y puede ser administrado
repetidamente a sujetos inmunocompetentes. Sin embargo, el
número y proporción de proteinas que pueden ser transducidas por
plásmido es bajo
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Terapia Génica (TG): Métodos
Ex-vivo:
Se extrae las células del paciente, en medios de cultivo apropiado se lesintroduce el gen de ínterés, son reintegradas dentro del organismo .Ej.el síndrome de inmunodeficiencia combinada severa producida pordeficiencia de ADA
In vivo:
Se hace llegar en vectores adecuados los genes terapéuticos a lascélulas defectuosas a corregir a través del torrente circulatorio (ej. EV).
In-situ:
Introduciendo los genes terapéuticos directamente en el propio órganodefectuoso Ejs La distrofia muscular de Duchenne: se introduce el gende la distrofina.
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Terapia genica - ex vivo protocolos de inmunoterapia genética se basan en
la transferencia, ex vivo, directamente a las células
dendríticas, con genes que codifican antígenos
tumorales (CEA y otros) o incluso ARN total de
las células tumorales; la reinfusión de las células
dendríticas modificadas causa la activación delinfocitos T citotóxicos contra los tumores. utilizar ARN
total, tiene la ventaja de permitir la expresión en las células dendríticas de numerosas
proteínas específicas de las células tumorales, con lo que se previene en buena parte el
posible efecto negativo debido a la heterogeneidad de la expresión de antígenos tumorales
en las células cancerosas.
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Terapia Génica: En cáncer
Perforinas
granenzima-A
1990: 1er experimento
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Terapia Génica: En cáncer
La idea consiste en modificar genéticamente ya sea
las células tumorales, los linfocitos T o las células
dendríticas introduciéndoles genes apropiados,
cuya expresión resulte en un incremento de larespuesta inmune.
Uno de los métodos empleados más frecuentemente consiste en la administración
a los pacientes de células tumorales a las que se han transferido genes que
codifican determinadas citoquinas (IL-2, IL-4, IL-7, IL-12, TNFa, IFN-g o GM-CSF) u otros genes como los que codifican ciertas moléculas que tienen función
co-estimuladora de la respuesta inmune, La combinación de citoquinas y moléculas co-estimuladoras ha generado
resultados esperanzadores. En particular, el uso simultáneo de IL-2 y de B7aumenta la activación de las células T
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Terapia Génica: En cáncer
Transfección de genes
sinérgicos del CMH-II
directamente a CPA la ptac. de péptidos
tumorales a LTh,
facilitando la
activación del LTc.
IL2
IFNg
Gen CMH-II
Celula
cáncer
Perforinas, granenzima
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Terapia Génica: En cáncer
Transfección de genesque fabrican moléculas
coestimuladoras B7-1 y
B7-2 dentro de c.
Tumorales, que activanCD28 de LTc e inhiben
su apoptosis.apoptosis
Genes de B7
Apoptosis
lisis osmótica
activación
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Terapia Génica: En cáncer
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Terapia Génica: En cáncer
Transfección conplásmidos copn
insertos del gen P53
dentro de células del
hepatocarcinomacelular resulta en
inducción de apoptosis
(fase I de pruebas
clínicas)
P53
apoptosis
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Transferencia de genes de citoquinas a
(TILs).TILs son recuperados de los mismos tumores
después en medios de cultivo se les introduce
genes de citocinas , despues se los reinyecta.
Inconveniente : los linfocitos son resistentes a neomicina ha puesto
en duda la noción de que los TILs viajan predominantemente a lostumores.
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Terapia Génica en enfermedad
autoinmune: A reumatoidea
PRUEBAS CLINICAS: (trasfección de genes ex
vivo-local). Sinoviocitos son removidos de pac con AR, se lesinyecta el gen, se reintroduce a la articulación
Transfección de genes inhibitorios del FNT-R1p55
Transfección del gen inhibitorio de IL-1
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Proteina inhibitoria de IL-1
producción proteinas
inflamatorios
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Proteina inhibitoria del FNT-r
producción proteinas
inflamatorios
FNT-r
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No sobreproliferación de LTh 2
producción proteinas
IL-4, Il-10
LTh2
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Terapia Génica en cardiología
Resultados preclínicos : en los individuosque recibieron el gen VEGF165 (vascular endotelial growth factor ) aparecieron nuevos
vasos sanguíneos y arteriolas funcionales, seestimuló la mitosis y la multiplicación celula,estimula la replicación de las células muscularesadultas del corazón."
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Terapia Génica en cardiología
Administración de un plásmido con el genVEGF (Argentina).
Estudio multicéntrico:14 países probar laeficacia y seguridad del Ad5FGF-4,
modificación del gen VEGF, en pacientes conangina debida a la enfermedad coronaria
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terapia genética combinada
: se ha demostrado un claro sinergismo
combinando la terapia basada en la transferenciadel gen supresor de tumores p53 y el cisplatino
(CDDP) en el tratamiento de tumores humanos de
pulmón implantados en ratones desnudos,
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terapia genética : problemas
Se conocen muy pocos antígenos tumorales
específicos cuyo reconocimiento por el SI se haya
demostrado, el repertorio de que se pueden utilizar
en inmunoterapia es muy reducido.
A pesar de que el desarrollo futuro de técnicas
como la transferencia de RNA tumoral a células
dendríticas podrá disminuir considerablemente lamagnitud de este problema,,
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Terapia Génica
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Terapia Génica
3,500 pacientes participan en 600 protocolos de TG en el mundo.
Mayoría en fase I, II, pocos en fase III.
Riesgo: desarrollo de tumores (inactivación de genes supresores,
o activación de oncogenes.
Firmas biotecnólogicas
Clinical Immunology,2002;104:104-204
T i Gé i