8/12/2019 8. Tecnicas de Recuperacin de La Inmunoreactividad.

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Tcnicas derecuperacin de la

inmunorreactividad.Prof. Laura Ochoa Martnez.

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Objetivo de larecuperacinde la

reactividad.

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Qu podemosutilizar pararecuperar losantgenosenmascarados

por lafijacin..?

Calor en un medio acuoso.

Enzimas.

Pero la mejor recuperacin parte cbuen lavado luego de la fijacin detejido.

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Digestinenzimtica.

Variables a considerar:

la eleccin de la enzima, depende deldeterminante a desenmascarar.

La utilizacin de recuperacin enzimtrealiza solo cuando la informacin delanticuerpo lo permite.

Las enzimas poseen requerimientos dide tiempo de digestin, temperatura,concentraciones optimas

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Digestinenzimtica.

Desventajas.

Slo permiten recuperacin antignica en fijaFormalina.

Necesitan mantener un control permanente Temperatura y tiempo.

Digestin Subptimas:no logran recuperaci

Digestin Sobreptimas: deterioro de la mode los epitopos.

Mayor costo.

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Algunasenzimas deuso comn

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Recomendaciones...

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Mecanismo deACCIN..

No se conoce con exactitud.

Teora de rompimiento de enlaces cruz

mediante HIDRLISIS. RENATURACIN de la protena fijada

menos la restauracin parcial de la estproteica.

El reconocimiento antignico por parte

protena requiere de la conservacin destructura de la protena especialmentdeterminantes antignicos conformac

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Factores queinfluyen..

CALOR: es el mas importante.

Variados estudios han demostrado queincubando cortes de tejido en diferentsoluciones de recuperacin a temperatambiente o a 37C provee de malos res

AGUA: Necesaria para la hidrlisis.

Abundantes lavados en agua corrientefijacin pueden revertir la prdida dereactividad.

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Fuentes decalor.

HORNO DE MICROONDAS

VAPORERA

BAO DE AGUA

AUTOCLAVE

OLLA A PRESIN

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Soluciones derecuperacin.

EDTA pH 8,0

BUFFER CITRATO pH 6,0

TBS pH 10

TBS pH 7,4

Sulfato de Zinc

Isotiocianato de plomoH2O destilada

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TAREA

Tcnicas afines y complementarias a la Inmunohistoqu

CISH,

FISH, PCR in situ.

Bases moleculares de la IF e IFI

PptApunte para el estudio, con cuestionario al final.