11:00 a.m. comienza lc/ms triple cuadrupolo: agilent … · agilent 6490 con tecnología...
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“ i ” NUEVA TECNOLOGÍA EN“e‐seminar” NUEVA TECNOLOGÍA EN LC/MS TRIPLE CUADRUPOLO:
Í
26 Abril del 2011 11:00 a.m. Comienzaen UN Minuto.
AGILENT 6490 CON TECNOLOGÍA iFUNNEL.
en UN Minuto.
SENSIBILIDAD SIN PRECEDENTES, ZEPTOMOLES.ZEPTOMOLES.
Para recibir el sonido siga las instrucciones de registro recibidas hoy
por e-mail: “FW: eSeminario: INSTRUCCIONES ASISTENCIA ” en enlace:INSTRUCCIONES ASISTENCIA … en enlace:https://eventreg1.conferencing.com/webportal3/r
eg.html?Acc=007778&Conf=178195se le facilitará un teléfono local a dónde llamar
para acceder al sonido.En unos días recibirán un e mail para
Isidro MasanaEspecialista Productos LC/MS
6490 Triple Quad LC/MS JET STREAM iFUNNEL
- En unos días recibirán un e-mail para descargarse la presentación.
Agilent TechnologiesJET STREAM + iFUNNEL
Para Maximizar la Pantalla /Activar Paneles
“Vi /F ll S ” M i i“View/Full Screen”: Maximiza Pantalla Presentación y oculta Paneles (Preguntas / Teléfonos de Contacto/...). En la parte inferior derecha se activará:p
Reduce Tamaño Pantalla Presentación y Muestra Paneles para Preguntas vía “Chat”
Muestra Panel para Preguntas vía “Chat”
Ventana Independiente
Chat
“Reenter Meeting”: si por error cierra la ventana de la presentación permite desde la
Ventana Independiente de la Presentación
ventana de la presentación, permite desde la otra ventana de “internet”, que queda abierta al iniciar la presentación, volver a conectarse
Teléfonos acceso audio: 900 801 890 / 917 889 896 / (00)800 098 018
Página: 4
Para Preguntar Vía Chat
Para preguntar vía “Chat” en cualquier momento de la presentación. Escriba su pregunta y pulse SEND
• Durante las sesiones deCierra el panel Durante las sesiones de preguntas también será posible preguntar vía
pdel chat
teléfono.• En unos días recibirán un e-mail para poder descargarse la presentación.
1
Las preguntas técnicas se responderán durante las sesiones de “Preguntas/Respuestas”
Teléfonos acceso audio: 900 801 890 / 917 889 896 / (00)800 098 018Teléfonos acceso audio: 900 801 890 / 917 889 896 / (00)800 098 018
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Agendag1. La Importancia de la Resolución y Velocidad
en UHPLC/MS.
2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.
3. El Arte de la Emulación.
4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:
Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.
5.‐Conclusiones.
En unos días recibirán un e‐mail para poder descargarse l P ió
Página: 6
la Presentación.
Agendag1. La Importancia de la Resolución y Velocidad
en UHPLC/MS.
2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.
3. El Arte de la Emulación.
4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:
Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.
5.‐Conclusiones
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Página: 7
la Presentación.
La Importancia de una Buena Separación incluso con LC/MS Altamente Selectivoscon LC/MS Altamente Selectivos
Ketoprofenom/z 255 10
4.2e5
4.8e5
Intensi
Difenhidraminam/z 256.17
m/z 255.10
3.0e5
3.6e5
ity, cps
1.2e5
1.8e5
2.4e5Difenhidramina
m/z 256.17
4.2e5
4.8e5
Time min
0.0
6.0e4
0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.403.0e5
3.6e5
Inten
1/7 resp esta ( 85%)30:70 agua/metanol, 0.2 % ácido acético
Time, min
1.2e5
1.8e5
2.4e5
nsity, cps
K t f
1/7 respuesta (-85%)
Una buena cromatografía
0.0
6.0e4
0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00Time, min
Ketoprofeno
m/z 255.10
gpuede mejorar
considerablemente la sensibilidad y robustez de
5:95 agua/metanol, 0.2 % ácido acético los resultados por LC/MS
Página: 8
¿Porqué es Importante la Velocidad en UHPLC/MS?El poder de separación de elevadas velocidades linealesEl poder de separación de elevadas velocidades lineales
Columna: ZORBAX RRHD SB-C18 2.1 x 100mm 1.8 µmGradiente: ACN/H2O 30/70 a 100/0 a 40ºC Cromatogr. A: 0.5mL/min en 3.0min // B: 0.833mL/min en 1.8minInyección: 1µL (Uracilo, Fenol, Metil/Etil/Propil/Butil/Heptil-parabens).
P á d A 590b B 905 b K‘ = (87 x F x T ) / ( % x V x S)P máx. grad. A= 590bars. B= 905 bars
A 0.5mL/m gr.. 3.0min
K = (87 x F x Tg) / ( % x V0 x S)
FxTg = 0.5x3 = 0.833x1.8 = 1.5
B 0 833mL/m
3min Si el producto de Flujo x Tgrad se mantiene constante el poder de separación no variará (utlizando la misma columna y sin variar los % solvente orgánico)
B 0.833mL/m
gr. 1.8min
1.8min A 0.5mL/m gr.. 3.0min
↑Flujo: Reduce tiempo análisis y mejora capacidad de separación en gradientes
B 0.833mL/m
gr. 1.8minColumnas RRHD & RRHT permiten subir el flujo SIN reducir resolución para:- Reducir tiempos (subiendo flujo)- Aumentar resolución (sin sacrificar tiempo)
Cromatogramas con escala de tiempo alineada a primer y último picoI.D. & I.M - Waldbronn 5/2009
( p )
Página: 9
1200 Infinity Series: Aumentado los Estándares y Compatibilidad en HPLC y UHPLCCompatibilidad en HPLC y UHPLC
bar1290 Infinity le permitirá la máxima reducción de sus tiempos de análisis y/o aumento de la resolución de sus aplicaciones
1000
1200
1290 Infinity1200
800
Vendor A1.7µm columns
Vendor D
600Agilent RRLC: 1220 & 1260
Infinity Series Vendor B1 9µm columns RRLC
600
200
400
yColumnas 1.8µm
1.9µm columns
Vendor C
HPLC Estándar Agilent 1100 y
0
200
0 1 2 3 4 5 l/ i
Standard LC
52
g y1200
0 1 2 3 4 5 ml/min52
Página: 10
Agendag1. La Importancia de la Resolución y Velocidad
en UHPLC/MS.
2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.
3. El Arte de la Emulación.
4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:
Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.
5.‐Conclusiones
En unos días recibirán un e‐mail para poder descargarse l P ió
Página: 11
la Presentación.
Agilent 1290 InfinityEl más Versátil UHPLC:El más Versátil UHPLC:
• Cualquier tipo de columnas:q pUHPLC, LC, Solid Core, Monolitics,…
• Columnas de 1 a 8 mm d.i..• Longitudes hasta 25cm x1.8µm.
• UHPLC & UFLC con CH3OH.• ….• ..••.
El equipo Ideal en UHPLC/MS:El equipo Ideal en UHPLC/MS: Infinitas Posibilidades !!
1290 Infinity – ¿Qué aporta al mundo del UHPLC?
1290 Infinity NO solo es un equipo capaz de proporcionar unos rangos mayores de Flujo y de Presiónunos rangos mayores de Flujo y de Presión…
1290 Infinity es un equipo INNOVADOR1290 Infinity es un equipo INNOVADOR
1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus módulos, que una vez más, marca la diferencia tecnológica.
Bomba Binaria UHPLC‐1290 InfinityLa siguiente generación en Tecnología de Bombas UHPLC
Alta velocidad y resolución
1200 bar @ 2.0 mL/min
Desgasificador Válvula de selección de 4 disolventes
Gradientes binarios
1000bar @ 3.5ml/min
800 bar @ 5.0 mL/min
Volumen muerto: 10 µl / 45 µl
Mezclador“Jet Weaver“
Amortiguador electrónico de pulsos
Procesador de doble nucleodedicado al control de pulsosp
Motores de 300 picolitros porpaso
Largos intervalos de mantenimientoBombas de alta Largos intervalos de mantenimiento
“Automatic Leak-Correction“
> 150 Litros de disolvente
AutomatismoVálvula de
CanalB
CanalPistones de Carburo de
resolución
Automatismo
Purga automática
Válvula dePurga
automáticaA
Carburo de Silicio
1290 Infinity UHPLC: Precisión del Tiempo de Retenciónen modalidad UFLC
RT RSD = 0.005% !!!
Precision Peak 1 Peak 2 Peak 3 Peak 3 Peak 5 Peak 6 Peak 7 Peak 8 Peak 9
% RSD RT 0 016 0 0077 0 0052 0 0058 0 0058 0 0054 0 0059 0 0057 0 0080% RSD RT 0.016 0.0077 0.0052 0.0058 0.0058 0.0054 0.0059 0.0057 0.0080
% RSD Area 0.5 µl
0.40 0.39 0.43 0.47 0.40 0.46 0.44 0.52 0.56Phenone Standard, 10 Consecutive Runs2.1 x 50mm RRHD SB C18, 1.8µm
1.2ml/min, 0.5ul, 40C80Hz, 245/10nm, REF 360/80nm
5 - 95% ACN in 0.5min
Página: 15
1220/1260 “versus” 1290 Infinity Binary Pumps‐ Los más bajos volumen muerto y ruido de mezclaLos más bajos volumen muerto y ruido de mezcla
1220/60 Series
Channel AChannel A
Passive Damper Passive Mixer1220/60 Series
Channel BVery Low Noise
0 - 300 µl 400 µl (opcional 200)Channel B
1290 Inifinity
~ 800 µl
1290 Inifinity
Chanel A
1290 Inifinity1290 Inifinity
Chanel BLowest Noise• min. 50% lower
1290 Infinity
+ =Active Damping
10µl
Jet Weaver Mixer
35µl
Delay Volume• 10µl / 45µl• 80x / 20x lower
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Agendag1. La Importancia de la Resolución y Velocidad
en UHPLC/MS.
2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.
3. El Arte de la Emulación.
4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:
Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.
5.‐Conclusiones
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la Presentación.
April 26Confidentialit18
Problema: Reproducción de Analisis en Gradiente con diferentes HPLC´s: ‐ Impacto del volumen muerto y de la calidaddiferentes HPLC s: Impacto del volumen muerto y de la calidad
de la mezclamAU
200
8.9
30
1200 Series LC Quatenary Pump
50
100
150
2.7
47
3.0
49 8
.12
1 8
.32
3
8.7
47
9.5
45 9
.97
5
12
.00
5 1
2.2
15
12
.39
3
2 4 6 8 10 12
0 9
mAU
200
DAD1 C, DAD1B, DAD: Signal B, 275 nm/Bw:4 nm Ref 400 nm/Bw:60 nm (B:\RIC\AGI...A\GV 1PHARMA\HPLC000001.D)
6.0
88
6.8
72
3 93
7
0.2
491290 Infinity LC
50
100
150
2.7
44 2
.88
4
6.3
28
6.6
73
48
0
7.9
2
9.
10
2 4 6 8 10 12
0
7.
Sample: 0.5% impurities in formulation (metoclopramide) El resultado:Xbridge C18, 150x3 mm, 3.5 µm dp, 0.45 ml/min, Eluent: A =0 .25 % AmAc, B = ACN, Gradient: 0-15 min; 5-57 % B
El resultado:• Diferencias en los RT y resolución• ¡Se juntan 2 picos!
Página: 19
¿La Solución?: ISET Intelligent System Emulation TechnologyEmulation Technology ‐ Dos componentes:
1.- El mejor UHPLC del mercado1290 Infinity LCyAmplio rango de potencia, el más bajo volumen muerto, superior sensibilidad, la mejor precisión de flujo -sin precedentes
2.- El revolucionario Algoritmogde Emulación ISET
Completa caracterización del LC a clonargenerando una función de emulación
FA
generando una función de emulación
Página: 20
Tecnología de Emulación Inteligenteb ( )‐ Como trabaja (1290 con un 1200)
400
mAU
350
400
Inyecctión
250
300Inyecctión
Mismas condiciones de gradientepero desplazando el gradiente y
l d l fil d l di t
150
200emulando el perfil del gradiente a clonar
Programa de gradiente
1290 gradiente50
100
1200 gradiente
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
50
min
Página: 21
Transferencia de metodos: 1290 Infinity LCl h l‐ System Emulation Technology
Conceptop
E l ió d lF Emulación del Systema A
FA
Seleccionar el equipo que quiere ser emulado con un simple click del ratón:
Agilent 1100 Series
Agilent 1200 Series LC
Agilent 1260Infinity LC
Agilent 1220Infinity LC
Other
Página: 22
PesticidasColumn: 3 x 50 mm, 2.7 µm Poroshell
mAU
800
700
800
n hlor
idaz
one
ne uron
zine
ylaz
ine
Pro
met
ryn
zine
Rs= 1.87
500
600
Met
amitr
on Ch
Sim
azin
Chl
orto
lu
Diu
ron
Pro
paz
Terb
uty P
Cya
niz
1290 Infinity LC with iSET
300
400
1290 Infinity LCRs= 1.15
100
200
Rs= 1.90 1100 Series Binary LC
min1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
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Transferencia de un método publicado
Instrumentación:1100 Series 1200 Series Alliance1100 Series, 1200 Series, Alliance, Acquity, etc
??
Metodos publicados: Scientific journals, application notes etcapplication notes, etc
Página: 24
Diagrama de Transferencia de Métodos en Entornos Regulados
CRO CMO : LaboratorioCRO
Desarrollo
CMO : Laboratorio
Regulado BPL´s
Control de Calidad
Lab ALaboratorio Regulado BPL´sLaboratorio Regulado BPL s
I+D Control de CalidadDesarrollo
Lab BLaboratorio Regulado BPL´sLaboratorio Regulado BPL s
I+D Desarrollo Control de Calidad
Página: 25
Descanso – Sesión de Preguntas Número 1
P di• Para preguntar en directo,
Marque *1 en su teléfono
o use la “Chat Box”
Cierra el panel del chat
Reduce Tamaño Pantalla Presentación y Muestra Paneles para Preguntas vía “Chat”
1
Muestra Panel para Preguntas vía “Chat”
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en UHPLC/MS.
2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.
3. El Arte de la Emulación.
4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:
Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.
5.‐Conclusiones
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la Presentación.
3 Prestaciones Clave de un Triple Cuadrupolo
• Sensibilidad
• Rapidez
• Robustez
Página: 28
3 Prestaciones Clave de un Triple Cuadrupolo
• Sensibilidad
• Rapidez
• Robustez
Página 29
E VO LU C I ÓN E S P EC I F I C AC I ON E S D E S EN S I B I L I DAD
T R I P L E C UADRUPO LO S
New Agilent 6490
T R I P L E C UADRUPO LO S
tor
on
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8000
9000
10000
Co
mp
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7000
8000
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3000
4000
5000 AB/Sciex
Agilent
nt
646
0
430
410
C
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Re
(Si
1000
2000
3000
Ag
ilen
Ag
ilen
t 64
Ag
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t 64
Bes
t C
Bes
t C
om
Bes
t
0
2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011
Página: 30
iFunnel Technology Captura x10 veces más Iones
Hexabore Capillary
• Capilar con 6 entradas.
Agilent Jet Stream
• Confinamiento térmico d l l d ESI
Dual Ion Funnel
• Elimina el gas, pero • Muestrea x10 más gas
rico en iones de la fuente.
• Captura la mayor parte del
de la pluma de ESI.• Muy eficiente
desolvatación para crear iones en fase gaseosa
captura los iones
• Elimina el ruido de neutrosCaptura la mayor parte del
gas de la región de la fuente.
iones en fase gaseosa.• Crea una zona rica en
iones.
• Prolonga la vida útil de la bomba turbo
Página 31
Agilent Jet Stream. Thermal Gradient Focusing TechnologyThermal Gradient Focusing Technology
Entrada LC
Elevada mejora en Sensibilidad.
Gas de nebulización
Mejora en la Nebulización.
Mejora en la Desolvatación. nebulizaciónSheath gas calentado (hasta 400ºC)Iones Focalizados en una zona
colimada por contención térmica y
Gas de secado
muy rica en iones.
Mejora en la Eficiencia de la Ionización y Muestreo.Ionización y Muestreo.
Página 32
Agilent Jet Stream: La máxima Sensibilidad en LC/MS
Sin calentar el “Sheath Gas”
Calentando el “Sheath Gas”Calentando el Sheath Gas
Página 33
Hexabore Sampling Capillary: Capilar de Muestreo con 6 Conductos6 Conductos
• El muestreo con un capilar de 6 conductos aumenta la eficiencia de muestreo de iones hasta x10 veces.
• Longitud capilar reducida en un 50%*:
• minimiza la pérdida de iones de alta movilidad.
• aspira más gas rico iones.
La ganancia en muestreo de iones es más dramática con la combinación de
las tecnologías de Agilent Jet Stream y el “Hexabore Capillary”.
Página: 34
Ion Funnel de 2 Etapas Desalineadas
1ª Etapa: 8-12 Torr2ª Etapa: 1-3 Torrp
• Elimina una elevada carga de gas
• Reduce neutros• Transmite iones muy
• Reduce neutros
• Mejora la robustezeficientemente hacia óptica de Q1
2 etapas desalineadas : favorece la transmisión de sólo iones2 etapas desalineadas -----: favorece la transmisión de sólo iones
Página 35
¿Cómo Funciona el Ion Funnel?
The RF Voltage focuses the ions to
the center.
RF Drive
UnfocusedIons and Gas
Enter
FocusedIons Out
The DC Voltage accelerates the ions
to the exit La tecnología iFunnelto the exit.
DC Drivedel 6490 permite una
muy rápida conmutación (30ms) de
polaridad + / -
Página 36
Innovaciones Instrumentales Triple CuadrupolosLC/MS: 6460 vs 6490LC/MS: 6460 vs 6490
6460 LC/MS (Skimmer Configuration)
Skimmer
Ion Detector
C G í d Q1 C ld Q3
AJSSkimmer
Ion Detector
Cap Guía de Q1 Celda Q3Iones Colisión
por RF conAceleración
Lineal
6490 LC/MS (iF l C fi ti )
Q3
Axial
6490 LC/MS (iFunnel Configuration)
Curved Collision cellAJS
con
HB Cap Dual Ion Guía de Q1Funnel Iones
por RF
conAceleración
LinealAxial
Página 37
Nueva celda de colisión Curvada, Cerrada y Convergente con
Aceleración Lineal Axial Efficient Ion Transmission over wide mass range. Reduces
transmission of ionized generated noise
RF & DCVoltages Set
Confinement and Axial Acceleration:
SIN efecto “Cross Talk”
MayorApertura(5 mm) de
MenorApertura
(3.5mm) de
l d(5 mm) de
EntradaAccepta más
Iones
SalidaFocalizamejor los
I d t IonesIonss dentrodeMS2
Página 38
Frecuencia Electrónica Cuadrupolo 6490: 1.4 MHzp
• Una frecuencia más alta produce más ciclos de movimiento de iones en el cuadrupolocuadrupolo
• Más ciclos de movimiento de iones dan una mayor resolucióniones dan una mayor resolución de masas – el 6490 se puede sintonizar automáticamente desde 0 4 m / zdesde 0,4 m / z
• Una frecuencia más alta unidad reduce rango de masas hasta 1400 m / z
Página 39
Límites de Detección Zeptomolares:¿Qué es un Zeptomol?
¿¿¿¿ Zepto ???FACTOR POR EL QUE HAY QUE MULTIPLICAR LA UNIDAD MULTIPLO PREFIJO ABREVIATURA
¿Qué es un Zeptomol?
¿¿¿¿ Zepto ???FACTOR POR EL QUE HAY QUE MULTIPLICAR LA UNIDAD MULTIPLO PREFIJO ABREVIATURA
0,1 mol 10‐1 mol decimol dM
0,01 mol 10‐2 mol centimol cM
0,0001 mol 10‐3 mol milimol mM
0,0000001 mol 10‐6 mol micromol μM
0,0000000001 mol 10‐9 mol nanomol nM0,0000000001 mol 10 mol nanomol nM
0,0000000000001 mol 10‐12 mol picomol pM
0,0000000000000001 mol 10‐15 mol femtomol fM
0 0000000000000000001 mol 10‐18mol attomol aM0,0000000000000000001 mol 10 18 mol attomol aM
0,0000000000000000000001 mol 10‐21 mol zeptomol zM
0,0000000000000000000000001 mol 10‐24 mol yoctomol yMPage 40
602 moleculas
< 1molécula
Página 40
Triple Cuadrupolo 6490 Proporciona Limites Detección Zeptomolares
+ MRM (455.3 -> 164.9)
Limites Detección Zeptomolares
1x10
200 zeptomoles
4.5 90 atogramos
Verapamil
4.4 Injectados en‐columna
4.3
Acquisition Time (min)0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
4.2
Página 41
6 Órdenes de magnitud de rango dinámico lineal
Y = 65283 x – 0.39041210000000
100 Attogram to 100 Picogram verapamil on column
Y 65283 x 0.390412R2 = 0.9976
e 100000
1000000
esp
on
se
10000
100000
Are
a R
e
100
1000
1
10
Femtograms
1
0,1 1 10 100 1000 10000 100000
Página 42
Ventajas del iFunnel
Skimmer Config. iFunnel Config Gain
A 737 9 4566 5 6 2
Data in table are an average of 10 injections
Area 737.9 4566.5 6.2Height 401.2 2184.2 5.4S/N 1182:1 15183:1 12.8
• Aumenta nº iones
• Reduce ruído
2
+ MRM (309.20001 -> 281.10156) AprazolamCheckout…Noise (RMS) = 0 34; SNR (1 596min) = 1157 2
+ MRM (309.20001 -> 281.10156) AprazDIF-r008.d Smo…Noise (RMS) = 0 19; SNR (1 601min) = 11640 4
12.8 Reduce ruído
Alprazolam
2x10
3
3.5
4
Noise (RMS) = 0.34; SNR (1.596min) = 1157.2
1.5960.030
13x10
1 4
1.6
1.8
2
Noise (RMS) = 0.19; SNR (1.601min) = 11640.4
1.6010.034
1 1x100 x1000
Alprazolam
(C17H13N4Cl)
1pg/uL, 1uL inj.1
1.5
2
2.5
0 4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
pg , j
0
0.5
Counts vs. Acquisition Time (min)0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2
0
0.2
0.4
Counts vs. Acquisition Time (min)0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4
Counts vs acquisition time (min) Counts vs acquisition time (min)
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PPCPs Límites de Detección de 6490 con InyecciónDirecta de 40 μL Muestra de Agua.Directa de 40 μL Muestra de Agua. Compound in On Column LODWater sample (fg)
Acetaminophen 1000 25 pptAlbuterol 40 1 pptAtenolol 200 5 pptC ff i 2000 50 t
Carbamazepina
Caffeine 2000 50 pptCarbamazepine 40 1 pptCotinine 400 10 pptDehydronifedipine 40 1 ppt
ng/LDehydronifedipine 40 1 pptDiltiazem 200 5 ppt…..…..
Datos generados porE. Michael Thurman and
Albuterol (Bronquidilatador)
/L Imma FerrerDept of Civil, Environmental, and Architectural EngineeringCenter for Environmental Mass Spectrometry (CEMS),University of
5ng/L
Colorado, Boulder, CO, USA
Página 44
Ultra Trazas: ppq’s de Pesticidas en Agua Potable
Triazine herbicides analyzed at 50 parts per quadrillion
Atraton S/N = 819
Simazine S/N = 18
6490 Triple Quad with on-line enrichment
Simetryn S/N = 9
Simazine S/N = 18
y
Secbumeton S/N = 51
Prometon S/N = 40
Atrazine S/N = 28
Página 45
Cuantificación de Péptidos en Plasma mediante UHPLC‐1290/QqQ‐6490 y columna de 2.1mm d.i.UHPLC 1290/QqQ 6490 y columna de 2.1mm d.i.
Cromatograma MRM de:
LVNEVTEFAK
10 pmol/µL
LVNEVTEFAK
100 l
1 pmol/µL0.5% RSD
amolen
columna
5 amol/µL12% RSD
• UHPLC-1290/QqQ-6490
(con iFunnel + AJS)
•Poroshell 120 2 1 x 150 mm
Con la nano-cromatografía: HPLC-Chip/QqQ-6490La sensibilidad aún se podría mejorar
•Poroshell 120 2.1 x 150 mm
a 0.5 mL/min
• Cal curve: 100 amol 25 pmol
considerablemente.
Página 46
3 Prestaciones Clave de un Triple Cuadrupolo
• Sensibilidad
Herramientas para Mejorar la Cuantificación y Confirmación en Muestras Complejas:
• Dynamic MRM (dMRM)
• Rapidez
• Dynamic MRM (dMRM)
• Triggered MRM (tMRM)
• Robustez
Página 47
dMRM: “Dynamic Multiple Reaction Monitoring” Mayor Sensibilidad, Rapidez y Robustez
dMRM
dMRM:
• MRM Dinámico con ventanas de monitorización individuales creadas automáticamente a partir del tiempo de cada compuesto.
• Maximiza la Sensibilidad del proceso de medida en
∆Rt
del proceso de medida en MRM.
x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1
Cycle time= nº Concurrent dMRM
RSD% requerido
Ptos./piconecesarios
1% 15<1% 15
1-3% 12
10-12% 8
Página 48
Herramientas para Mejorar la Cuantificación y Confirmación en Muestras Complejas: Triggered MRMp j gg
Trigered MRM (tMRM):Una/s transición/es primaria/s de cuantificación/analito ACTIVA (/dispara) hasta 9 transiciones de confirmación/péptido y construye su “espectro de MS/MS en MRM” permite cuantificarde confirmación/péptido y construye su espectro de MS/MS en MRM permite cuantificar y confirmar el analito con la sensibilidad y rapidez de la modalidad MRM.
tMRM permite
tMRM
poptimitzar
CE/transición +sensibilidad
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Triggered MRM (tMRM): Cuantifica y Confirma con la Sensibilidad y Rapidez de la modalidad MRM.
Secundaria
Primaria Cuantificar
Secundaria
Secundaria
Secundaria
Primaria Cuantificar
Secundaria
Composite MRM SpectrumEspectro MS/MSp
específicoEspectro de MS/MScon la sensibilidad y rapidez de MRM
Página 50
3 Prestaciones Clave de un Triple Cuadrupolo
• Sensibilidad
• Rapidez
• Robustez
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Test de Robustez: 2000 inyecciones de 20 fg VerapamilPl H d t 4 dí d ti den Plasma Humano durante 4 días de uso continuado
Ab l t A (2000 i j ti / 4 d )
1000
Absolute Area (2000 injections / ~4 days) Area RSD = 5.3% Constant response
1000
•100 µL of human plasma spiked with verapamil precipitated with ACN (300 µL) t i i 1% f f i id d th ISTD i
500
Abu
ndan
ce
containing 1% of formic acid and the ISTD reserpine
• Centrifugation for 15 minutes at 13200 rpm
• Supernatant (200 µL) diluted with 3 parts of water (e.g. 600 µL)
A • 1 µL injected into the LC/MS system, corresponding to approx. 20 fg injected on column
• LC/MS Method using C18, water/acetonitrile.
• LC/MS Run Time = 3 min
0
500 1,000 1,500 2,000
• LC/MS Run Time = 3 min
Number of Injections
Página 52
Agendag1. La Importancia de la Resolución y Velocidad
en UHPLC/MS.
2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.
3. El Arte de la Emulación.
4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:
Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.
5.‐Conclusiones
En unos días recibirán un e‐mail para poder descargarse l P ió
Página: 53
la Presentación.
Conclusiones
• La combinación de las tecnologías JetStream e iFunnel convierte• La combinación de las tecnologías JetStream e iFunnel convierte al Triple Cuadrupolo LC/MS – Agilent 6490 en el más sensible del mercado.de e cado.
• La nueva modalidad trigered‐MRM permite cuantificar y confirmar con la sensibilidad y rapidez de la modalidad MRMconfirmar con la sensibilidad y rapidez de la modalidad MRM
mediante un “Espectro MS/MS Especifico” con la Sensibilidad y Rapidez de un MRM para screening y cuantificación masiva de analitos.
• La combinación de Sensibilidad, Rapidez y Robustez , p ydel Triple Cuadrupolo 6490 le permite abordar con éxito los análisis más exigentes.
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Próximo e-seminar:
• Proteómica Cuantitativa: Aportaciones de las Tecnologías HPLC-Chip y QqQ en la Validación de Biomarcadores. Jaume Morales 27 de Abril 2011 11:00am ECT
• Registro e-seminars:https://agilententerprise.webex.com/agilententerprise/onstage//agilententerprise/onstage/g.php?d=924055614&t=a
Mass Spec/tacular
¿Preguntas?
Estamos a su disposición en:http://www chem agilent com/es
I id M
http://www.chem.agilent.com/[email protected]
Tel. 901.11.6890
Isidre Masana Especialista de Productos LC/MS AGILENT TECHNOLOGIES 901.11.68.90 [email protected]
• Registro e-seminars:https://agilententerprise.webex.com/agilententerprise/onstage/
Mass Spec/tacular
g p gg.php?d=923212946&t=a para e-seminar QqQ-6490
g.php?d=924055614&t=ae-seminar Proteómica Cuantitativa.