xenotrasplante de islotes pancreaticos y cel de sertoli de porcino dr rafael valdes
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7/25/2019 Xenotrasplante de Islotes Pancreaticos y Cel de Sertoli de Porcino Dr Rafael Valdes
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AntecedentesAntecedentes
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AntecedentesAntecedentes
Diabetes en Mxico.
Evolucin del trataiento
convencional. Evolucin del es!uea intensivo
"ras#lante de islotes $alo%nico&.
"ras#lante de islotes $xeno%nico&.
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JustifcacinJustifcacin
'(n con el es!uea intensivo lasco#licaciones a#arecern.
En trans#lantes alo%nicos)
* Escasez de donadores cadavricos.* Ma+or ries%o de transisin de enferedades.
* ,o#licaciones !uir(r%icas
* Dao e#tico
* 'lto costo del trataiento inunosu#resor* 'lto ries%o de co#licaciones secundarias
*"ie#o de sobrevida corto
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XenotrasplanteXenotrasplante
Ries%o de infeccin #or RetrovirusEnd%eno /orcino $/ERV&
0tras zoonosis
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Retos del XenotrasplanteRetos del Xenotrasplante
Su#ervivencia de las clulasi#lantadas)
* Recazo inunol%ico
* 1actores no inunol%icos
,o#atibilidad funcional de lasclulas i#lantadas
* De la insulina #orcina + otras oronas
* De los sisteas re%uladores uanos
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Diseo ExperimentalDiseo Experimental
a& ,reacin de un sitioinunol%icaente #rivile%iado)
Dis#ositivo
1oracin de col%ena autlo%a
2nunoodulacin #or clulas deSertoli
b& "ras#lante 2slotes 3 Sertoli
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DispositioDispositio
Usamos un dispositivo diseado enUsamos un dispositivo diseado en
nuestro laboratorio, que consiste en unnuestro laboratorio, que consiste en un
cilindro de malla metlica de 6 cm de largo,cilindro de malla metlica de 6 cm de largo,
con dos tapones de polipropileno, uno decon dos tapones de polipropileno, uno de
ellos con un mbolo que llena el cilindro.ellos con un mbolo que llena el cilindro.
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!mplante del dispositio!mplante del dispositioDos meses antes del xenotrasplante,Dos meses antes del xenotrasplante,
dos a cuatro dispositivos fuerondos a cuatro dispositivos fueronimplantados subcutneamente en laimplantados subcutneamente en la
pared abdominal anterior.pared abdominal anterior.
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"rocesamiento de !slotes y"rocesamiento de !slotes ySertolisSertolis
El p"ncreas # los test$c%los sonEl p"ncreas # los test$c%los sonmacerados # di&eridos con %namacerados # di&eridos con %na
sol%cin de Liberasa HI.sol%cin de Liberasa HI.
'e %tilizan'e %tilizancerdos de (cerdos de (d$as de )idad$as de )ida
El p"ncreas esEl p"ncreas esremo)idoremo)idoinmediatamentinmediatamente desp%s dee desp%s dee%tanasia pore%tanasia por
exan&%inacin.exan&%inacin.
Los islotes # las 'ertolisLos islotes # las 'ertolisson c%lti)adosson c%lti)ados
separadamente a *(+separadamente a *(+
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#ontrol de calidad#ontrol de calidadLa p%reza de los islotesLa p%reza de los islotes
es de -es de -on tincin de Ditizona.on tincin de Ditizona.
%reza de 'ertoli /*.0-1%reza de 'ertoli /*.0-1por MI' # sox/.por MI' # sox/.
La )iabilidad es determinada porLa )iabilidad es determinada portincin de iod%ro de propidiotincin de iod%ro de propidio
2Islotes1/3-, 'ertoli /4-52Islotes1/3-, 'ertoli /4-5
6poptosis 2Islotes1 3.-,6poptosis 2Islotes1 3.-,'ertoli 78.4-5'ertoli 78.4-5
#tometr$a de fl%9o contra#tometr$a de fl%9o contra
6nnexina6nnexina
F%ncionalidad1F%ncionalidad1
:ndices de:ndices deestim%lacin deestim%lacin de
Islotes ;77.4Islotes ;77.4
'ertoli1'ertoli1deteccin dedeteccin de
losterinaslosterinas
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Diseo ExperimentalDiseo Experimental
* ReclutaientoReclutaientototalente voluntariototalente voluntario
* /ronstico con/ronstico con
trataientos actualestrataientos actuales* /rocediiento/rocediiento
Ex#erientalEx#eriental* 0b4etivos0b4etivos
* MetasMetas* Ries%osRies%os*
,osto econico,osto econico
* 0bli%aciones del0bli%aciones delvoluntariovoluntario
* 0bli%aciones del 5os#ital0bli%aciones del 5os#ital
ipo 77= adolescentes con Diabetes >ipo 7
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$iotica$iotica
2nstituciones revisoras)
* ,oisin 6acional de 7iotica
*1acultad de Medicina8 96'M* 5os#ital 2nfantil de Mxico 1edericoGez
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$iotica$iotica
,u#liiento de la declaracin de 5elsin:i* ;'rt. caces en la atencin de un enfero8el dico8 con el consentiiento inforado del#aciente8 #uede #eritirse usar #rocediientos
#reventivos8 dia%nsticos + tera#uticos nuevos ono #robados8 si8 a su 4uicio8 ello da al%unaes#eranza de salvar la vida8 restituir la salud oaliviar el sufriiento. Sie#re !ue sea #osible8tales edidas deben ser investi%adas a >n deevaluar su se%uridad + e>cacia. En todos los
casos8 esa inforacin nueva debe ser re%istrada+8 cuando sea o#ortuno8 #ublicada. Se debense%uir todas las otras noras #ertinentes de estaDeclaracin..?
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Diseo ExperimentalDiseo Experimental Monitoreo)
* Re!ueriientos de insulina ex%ena* 5eo%lobina %licosilada* 2nsulina #orcina circulante* 'nt@%enos 'nti -Gal + eol@ticos de cerdo* /ERV $inclu+endo failiares coabitantes&
A dis#ositivo reovido
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Se%uridadSe%uridad
Medidas de se%uridad de los aniales enla %ran4a)* Gran4a cerrada + aislada $B:&.
* Red contra aves.* 7arreras contra roedores.
* /ro%raa extensivo de vacunacin
* ,uarentena estricta $7ao de entrada * 7ao
de salida&.* Monitoreo de salud aleatorio.
* Re%istro e identi>cacin detallada de cadaanial.
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Se%uridadSe%uridad
Medidad de se%uridad de los anialesdonadores.
"aiz icrobiol%ico #ara)* 'u4esz:+ $elisa&
* Erisi#ela $elisa&
* Salonella s#.$elisa&
* Salonella s#.$cultivo de @%ado + vlvula ileocecal&
* 7rucella a. $a%lutinacin&.
* 2nFuenza /orcina $inibicin de a%lutinacin&
* e#tos#ira $icroa%lutinacin AH es#ecies&.* M+co#lasa +o#neuoniae $elisa&
* ,oronavirus $elisa&
* "oxo#lasosis $elisa&
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#ontin%encias#ontin%enciasObserv. Clnica oObserv. Clnica o
de !abde !ab
sospec"osasospec"osa
#euni$n#euni$n
dede
%ersona%ersona
ll
Diagn$sticoDiagn$stico
&ratamiento&ratamiento
especficoespecfico
'eguimiento'eguimiento &ratamiento&ratamiento
(ospital(ospitalO)'O)'
*ran+a*ran+a
%roductora%roductora
)anual de)anual de
bioseguridad debioseguridad de
la gran+ala gran+a
nstitucionesnstituciones
-xterna-xterna
ContactarContactar
familias familias
%ersonas%ersonas
cercanascercanas
'ecretara'ecretarade 'aludde 'alud
CuarentenaCuarentena
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Retroirus End%eno "orcinoRetroirus End%eno "orcino
=8*0
70*0
787
480*/0
7 = * 3
E?@ 73 bp
arriles1
7. Marcadores de tamaAo=. ontrol Be&ati)o
*. DB6 porcino
3. DB6 de acientes
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ResultadosResultados
'nticuer#os 'nti -Gal
8
4887888
7488
=888
=488*888
*488
3888
3488
re>x D$a ( D$a 73 7mes *mes 0mes D$a ( 7mes
ttulos
7aAo
Tiempo Post trasplante
=nd>x=+ >x
/0/0
/0/0
/0/0
11
////
22
1133
/0/0
n cuerpos en e ensayon cuerpos en e ensayo
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n cuerpos en e ensayon cuerpos en e ensayo&exicano '()))*())1+ s. El Sueco&exicano '()))*())1+ s. El Sueco
'1,,)*1,,-+'1,,)*1,,-+
>$t%los de Cema&l%tininas I&M contra eritrocitos porcinos replicando>$t%los de Cema&l%tininas I&M contra eritrocitos porcinos replicandoexactamente el mtodo de Lindebor& E. Xenotransplantation =8871exactamente el mtodo de Lindebor& E. Xenotransplantation =8871 =(*=*. =(*=*.
00
4411
/6/6
5050
6464
/01/01
036036
aldes et al.aldes et al. *rot" et al.*rot" et al.
77
p89.999/, )ann:;"itne U testp89.999/, )ann:;"itne U test
&iter
&iter
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Reuerimientos de !nsulinaReuerimientos de !nsulina
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ResultadosResultadosEl #rier %ru#o de A= #acientes tras#lantados al #rier ao deltras#lante8
H no tuvieron reducciones8 H ostraron reduccionesvariadas.
/aciente $I Reduccin&
A
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ResultadosResultados
Deteccin de insulina #orcina ensuero #or 5/,
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ResultadosResultados
9n dis#ositivo fue reovido de cada unode los #acientes8 #ara #oder serretras#lantados + #osibleente lle%ar a lainde#endencia de insulina.
os dis#ositivos reovidos fueronanalizados #or inunoisto!u@ica #arainsulina8 %luca%on8 M2S $un arcador declulas de Sertoli&8 + ,D
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!nsulina!nsulina
11 11
22 22
33 334444
(-(-
/l/l
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/luca%on/luca%on
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Sustancia !n0ibidoraSustancia !n0ibidora&ulleriana '&!S+&ulleriana '&!S+
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ResultadosResultados
11
11
22
22
33
33
44
44
55
55
66
66
CD3 HumanoCD3 Humano
InsulinaInsulina
Q-03-164-5Q-03-164-5
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ResultadosResultados
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#onclusiones#onclusiones
6o a abido seales de zoonosis
6o a+ co#licaciones etablicas
6o a+ intolerancia al dis#ositivo o al#rocediiento.
El sistea inune de los #acientes
se antiene intacto8 edido #orreacciones intradricas.
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#onclusiones#onclusiones
Res#uesta 2nune* /ersistencia de insulina $AKKI de los
dis#ositivos reovidos& + clulas #ositivas
a %luca%on $KI& en cantidades variablesdes#us de B aos8 + de anerasor#rendente8 coexistiendo con linfocitos "
* 6o a+ correlacin entre los niveles deanticuer#o + su#ervivencia de las clulas.
* 6o a+ una res#uesta t@#ica des#us delretras#lante
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#onclusiones#onclusiones
Modi>caciones en los re!ueriientos deinsulina ex%ena
* En BKI de los casos ubo reducciones8 en
al%unos casos cerca de AKKI #or varios eses.* El otro BKI #udiera no aber tenido su>cientesclulas su#ervivientes8 o una enorsensibilidad a la insulina.
a #resencia de insulina #orcina se a#odido detectar en la circulacin #or ediode 5/,
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"asos !nmediatos"asos !nmediatos
2denti>car los sisteas anti%nicosen el cerdo !ue sean i#ortantes#ara el xenotras#lante a uano* Res#uesta uoral
'nticuer#os 'nti -Gal Gru#os san%u@neos ti#o '70 1eneno de 'coodaiento en los dis#ositivos /ruebas de reactividad cruzada #ara ant@%enos
#roteicos en islotes + Sertolis contra anticuer#osuanos #reforados.
* Res#uesta celular ,aracterizacin de los linfocitos " en los dis#ositivos.
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"asos !nmediatos"asos !nmediatos
,uanti>cacin de la co#osicincelular dentro de los dis#ositivos.
ospital !n2antil de &xicoospital !n2antil de &xico
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ospital !n2antil de &xicoospital !n2antil de &xico34ederico /me5634ederico /me56
#olaboracin con otras#olaboracin con otras
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#olaboracin con otras#olaboracin con otras!nstituciones.!nstituciones.
Dr amillo ?icordi, Dr L%ca In)erardi
Diabetes ?esearcC Instit%te,ni)ersit# of Miami
Dr Da)id Cite,?obarts ?esearcC Instit%te,ni)ersit# of estern !ntario
Dr Gordon eir,oslin Diabetes enter.
oston, M6Dr ?obert Elliott,
Diatranz Ltd, BeJ Kealand
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