PROYECTO INTEGRADO DE LABORATORIO

CURSO 4º ESO

DEPARTAMENTO BIOLOGÍA-GEOLOGÍA

BLOQUE ITÉCNICAS GENERALES

PRÁCTICA 3 MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

MATERIAL

Microscopio ÓPTICO

Porta y cubre

Papel de periódico y fotocopia en la que aparezcan las partes del microscopio.

Pan de molde y placa de cultivo (para preparar la práctica siguiente.)

Nota. Este día se preparará la siguiente práctica (observación del moho del pan) por lo que el alumnado deberá coger un trozo de pan de molde y humedecerlo. Después exponerlo durante varios minutos al aire, colocarlo en el interior de una placa de cultivo cerrada y sitúar la placa en un lugar cálido y oscuro donde permanecerá hasta la semana siguiente.

REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA

1-Identifica en tu microscopio las partes que aparecen en el esquema y aprende sus nombres para que te resulten conocidas cuando más adelante nos refiramos a ellas.

2-Montaje de una preparación ficticia:

Corta un trozo de periódico (más o menos cuadrado de 1 cm de lado) en el que se encuentre alguna letra.

Echa un par de gotas de agua en el centro del porta y sobre ellas deposita el trozo de periódico sin que se arrugue.

Coloca el cubre sobre la muestra poniendo cuidado de que no se formen burbujas. Para ello debemos bajarlo gradualmente.

3-Observación de la preparación (enfoque del microscopio):

Mover el espejo, diafragma y condensador hasta conseguir una iluminación adecuada.

Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas y observando que la letra esté derecha.

Elegir el objetivo de MENOR AUMENTO girando el revólver.

Mirando lateralmente (no por el ocular) gira el macrométrico para subir la platina lo más posible; pero sin que llegue a tocar la preparación al objetivo.

Observando por el ocular, mover el mismo tornillo MUY DESPACIO y en sentido contrario, hasta obtener una visión suficientemente destacada de la muestra.

Una vez realizado éste enfoque aproximado, utilizar el tornillo micrométrico para un ajuste perfecto del enfoque.

¿En qué posición se ve la letra?............................................................................ Mueve la preparación hacia la derecha. ¿Hacia qué lado se mueve la letra? ………………. Y si mueves

la preparación hacia la izquierda ¿hacia dónde se mueve la letra?................

Este fenómeno puedes observarlo moviendo la preparación hacia adelante y hacia atrás.

Gira el revólver para cambiar a un objetivo de MAYOR AUMENTO (notarás que lo has colocado en el lugar debido cuando llegues a un ligero tope y además se veas el campo totalmente iluminado). Ajusta el enfoque con el micrométrico.

¿Cambia la letra de posición con respecto a la visión con el objetivo anterior?............... Por consiguiente: “LA IMAGEN AL MICROSCOPIO ÓPTICO SIEMPRE SE VE …………….”

Con este segundo objetivo ¿ves la letra entera o por el contrario ves parte de ella?................................................ En éste caso ¿cómo es el área de observación mayor o menor?..................................... Por tanto:

“A MÁS AUMENTO LA IMAGEN SE VE ………………………..GRANDE PERO EL CAMPO VISUAL ES……………………………”

Anota lo siguiente:

El ocular del microscopio utilizado tiene……………………..aumentos.

El primer objetivo tiene……………. aumentos y el segundo……………..aumentos.

Por lo tanto:

En la primera observación la letra se vio con ………………………aumentos.

En la segunda observación la letra se vio con ………………..aumentos.

Utiliza de la misma forma, otro objetivo mayor.

ACTIVIDAD

Nombra cada una de las partes del microscopio óptico.

PRÁCTICA 4.

MANEJO DE LA LUPA. OBSERVACIÓN DE HONGOS CON LUPA BINOCULAR.

ESTUDIO DEL MOHO DEL PAN. OBSERVACIÓN DE UN CHAMPIÑON

MATERIAL

Lupa BINOCULAR y fotocopia en la que aparezcan las partes de la lupa.

Pan de molde, agua y champiñones.

Placa de cultivo y lancetas.

Cuchilla o cuchillos.

Material para la próxima práctica: lechuga, espinacas, hortalizas, hojarasca marchitas y sucias.

Se llena un vaso con agua corriente. Agregar unas hojas de hortalizas, lechugas, acelgas, hojarasca, marchitas y sucias. Se dejará hasta la próxima semana. Se debe evitar los rayos directos del sol y temperaturas demasiado altas o bajas. El recipiente no se debe cerrar herméticamente.

REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: OBSERVACIÓN DEL MOHO DEL PAN

Observación del moho del pan. El punto 1 deberán hacerlo la semana anterior.

Debes coger un trozo de pan de molde y humedecerlo. Después exponlo durante varios minutos al aire, colócalo en el interior de una placa de cultivo cerrada y sitúa la placa en un lugar cálido y oscuro.

Primero, se depositan sobre el pan esporas microscópicas presentes en el aire. Al encontrar las condiciones de humedad apropiadas, germinan. Poco después se forman las hifas, que no poseen tabiques. El conjunto de hifas que se desarrollan se denomina micelio. Al cabo de unos días e micelio cubrirá la superficie del pan o la fruta.

Coge con una lanceta una pequeña muestra del moho y, después de colocarla sobre una placa, obsérvala con la lupa binocular.

ACTIVIDAD

¿Qué observas? Dibújalo.

Realiza dos dibujos, uno de observación directa y otro de la visión a través de la lupa.

Nota: Las hifas semejan pequeñas raíces, son los rizoides, que penetran en el interior del pan, donde absorben los nutrientes tras segregar enzimas digestivas, que son las responsables del color y olor característicos de los mohos.

Observarás la presencia de puntos negros, son los esporangios, situados en el borde de una hifa aérea, que se desarrolla por encima de los rizoides. Cuando el esporangio madura libera unas 50.000 esporas, que son transportadas por el aire hasta que encuentran un lugar apropiado para germinar.

REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: OBSERVACIÓN DE UN CHAMPIÑÓN

En las setas el micelio es subterráneo. La parte aérea, muy desarrollada, constituye el aparato reproductor del hongo. En él se distinguen dos partes: pié y sombrerillo.

Corta con la cuchilla el sombrerillo y obsérvalo bajo la lupa binocular. En la cara inferior del sombrerillo aparecen diminutos poros en las laminillas donde se forman la esporas. Separa con unas pinzas alguna laminilla y obsérvala con el binocular.

ACTIVIDAD

Dibuja una lupa binocular indicando sus partes.

Realiza dos dibujos, uno de observación directa y otro de la visión a través de la lupa.

FICHA DE TRABAJO PARA EL ALUMNADO

ACTIVIDAD

Nombra cada una de las partes del microscopio óptico.

ACTIVIDAD

Dibuja una lupa binocular indicando sus partes.

Realiza dos dibujos, uno de observación directa y otro de la visión a través de la lupa.

PRÁCTICA 5

OBSERVACIÓN Y TINCIÓN DE PROTOZOOS

MATERIAL

Microscopio óptico / Pipeta / Portas y cubres / Vaso de precipitado /Hojarasca

Azul de metileno, rojo neutro / Cuentagotas

REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA. PRIMERA PARTE: OBSERVACIÓN DE PROTOZOOS SIN TEÑIR

Se llena el vaso con agua corriente. Agregar unas hojas de hortalizas, lechugas, acelgas, hojarasca, marchitas y sucias. Se deja durante una semana en el laboratorio. (Se realizó la semana anterior). Se debe evitar los rayos directos del sol y temperaturas demasiado altas o bajas. El recipiente no se debe cerrar herméticamente.

Con la pipeta, tomar unas gotas de líquido de la infusión en las cercanías de los restos vegetales. Con las pinzas finas puede tomarse algún residuo vegetal, muy pequeño, en avanzado estado de descomposición. Se deposita el producto obtenido en un porta colocando el cubre encima dejándolo caer como se cierran las tapas de un libro, para evitar que se formen burbujas de aire. Los bordes del cubre se secan con una tira de papel de filtro.

Se toma una gota de agua de la infusión con un cuentagotas y se deposita sobre el portaobjetos. Si la gota se toma de la superficie, habrá mayor abundancia de paramecios. Si se toma del fondo, predominarán las amebas.

ACTIVIDAD

Trata de identificar todos los organismos que encuentres, haz un dibujo de ellos y anota los aumentos con que los has observado.

REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA. SEGUNDA PARTE: TINCIÓN DE PROTOZOOS.

1. Se disuelve en la infusión un colorante para microscopia.

Los más comunes son el azul de metileno, el verde de metilo acético o el lugo, pero tienen el inconveniente de mata a los infusorios y no se puede observar su movimiento. El rojo neutro los tiñe sin matarlos. (véase nota)

Se toma una gota de la infusión con un cuentagotas y se deposita en el portaobjetos.

2. Se enfoca con el microscopio aumentando sucesivamente los aumentos hasta llegar a los adecuados que permitan una visión nítida. Se busca una zona en la que haya suficiente cantidad de infusorios. ( Conviene estar observando un rato hasta que el ojo se hay acostumbrado a descubrir los portozoos).

3. ¿Se observan distintas clases de protozoos?

ACTIVIDAD

Dibújese aproximadamente lo visto.

NOTA

Los tintes vienen normalmente en polvo o hay que hacer alguna mezcla. Conviene tener alguna orientación para el caso de que haya que prepararlos.

Azul de metileno

Si se dispone de azul de metileno en polvo, se disolverá en un tubo de ensayo con agua una punta de paleta o bisturí hasta que la disolución tenga un aspecto parecido a la tinta. (Hay que tomar poquísimo polvo de azul de metileno).

Rojo neutro y verde de metilo

Si están en polvo disolver en agua como en el caso anterior. Para el verde de metilo añadir unas gotas de ácido acético (o vinagre).

TÉCNICAS DE SEPARACIÓN

TÉCNICAS DE SEPARACIÓN

Decantación. Consiste en separar mezclas heterogéneas de líquidos o líquidos y sólidos que tengan densidades distintas. Al quedar en reposo los materiales se depositan distintas alturas.

Esta técnica está basada en una propiedad específica de los cuerpos llamada densidad que es el cociente entre la masa y el volumen.

Filtración. Consiste en separar sustancias de una suspensión. El filtro permite el paso del líquido (o gas) e impide el de las partículas sólidas.

Basado en la propiedad específica de los cuerpos llamado estado físico de la materia.

Destilación. Consiste en separar los componentes de una disolución líquida cuyos puntos de ebullición sean distintos. Al hervir se evapora la sustancia con el punto de ebullición más bajo.

Basada en el punto de ebullición.

Extracción. Consiste en separar mezclas heterogéneas. Basad en la solubilidad en un disolvente.

Cromatografía. Consiste en arrastrar cada sustancia de la mezcal por un disolvente a lo largo de una sustancia absorbente (papel de filtro) a una velocidad distinta.

Basado en la propiedad específica de los cuerpos llamada solubilidad.

PRACTICA 6

CÁLCULO DE VOLUMEN EN UNA MEZCLA

RECUERDA:

A diferencia de los compuestos, una mezcla está formada por la unión de sustancias en cantidades variables y que no se encuentran químicamente combinadas. Por lo tanto, una mezcla no tiene un conjunto de propiedades únicas, sino que cada una de las sustancias constituyentes aporta al todo sus propiedades.Las mezclas están compuestas por una sustancia, que es el medio, en el que se encuentran una o más sustancias en menor proporción. Se llama fase dispersante al medio y fase dispersa a las sustancias que están en él.

De acuerdo al tamaño de las partículas de la fase dispersa, las mezclas pueden ser homogéneas (las disoluciones) o heterogéneas (emulsiones, suspensiones y coloides).

ACTIVIDAD 1

Seguro que conoces muchos ejemplos de mezclas, nombra diez y clasifícalas en homogéneas o heterogéneas.

EJEMPLOS: la sangre, el agua del mar, el aire,…..

Homogéneas Heterogéneas

ACTIVIDAD 2

PRÁCTICA 7

SEPARACIÓN DE COMPONENTES DE UNA MEZCAL POR FILTRACIÓN

RECUERDA:

Independiente del tipo de mezcla, los componentes de la misma, pueden ser separados con cierta facilidad a través de las técnicas de laboratorio, sin que cambien las propiedades físicas y químicas que estos tienen.

Filtración: A través de materiales porosos como el papel filtro, algodón o arena se puede separar un sólido que se encuentra suspendido en un líquido. Estos materiales permiten solamente el paso del líquido reteniendo el sólido. ACTIVIDAD 1: Cómo hacer un filtro sencillo

Materiales: Papel del filtro, tijeras, embudo

ACTIVIDAD 2: Cómo hacer un filtro de agua

Materiales:

Dos vasos de yogur con orificios pequeños en la base, grava gruesa, grava fina, arena, dos vasos de precipitado, dos embudos.

Procedimiento:

ACTIVIDAD 3

Remueve agua lodosa y pon 100 cc en una probeta. Échalos a través de los distintos tipos de filtros.

a) ¿Cuál de los filtros es mejor?b) ¿En qué te has basado para decidir cuál es el mejor filtro?

PRÁCTICA 8

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE UNA MEZCA: DECANTACIÓN

INTRODUCCIÓN

La decantación sirve para separar una mezcla heterogénea y de componentes de distintas densidades. En nuestro experimento usaremos dos componentes líquidos de distintas densidades, agua y aceite, evidentemente el aceite es más denso que el agua y debido a ello el aceite queda arriba cuando se separan en el embudo de decantación.

MATERIALES

Embudo de decantación 3 Vasos de precipitado Probeta graduada

Soporte universal Agua y aceite Varilla de vidrio

Nuez doble. Se coloca en el palo vertical del soporte universal y así sostiene la pinza inmóvil.

Pinza metálica. Se coloca en la nuez doble y sirve para sujetar el embudo de decantación.

El montaje debe quedar como aparece en las fotografías siguientes:

METODOLOGÍA

1. Primero montaremos el embudo como se indica en la fotografía.2. Si el embudo que vamos a utilizar es de 250 ml debemos medir 100ml de cada componente con la probeta, pero si el embudo es

pequeño y su capacidad es de 150ml, la cantidad de los líquidos será solo de 50ml cada uno. Dichos líquidos se añaden en un vaso de precipitado y se mezclan bien con una varilla de vidrio.

3. Añadimos la mezcla al embudo de decantación y esperamos a que ambos líquidos se separen.4. Una vez separados, vamos a vaciar el embudo. Para ello colocamos un vaso de precipitado debajo del embudo y con mucho

cuidado abrimos la llave del embudo para que caiga el primer líquido y una vez que haya terminado de caer cerramos la llave para que no se cuele ni un milímetro del otro líquido. Una vez que tenemos el agua en nuestro vaso de precipitado, ahora hacemos lo mismo para el aceite, colocamos el otro vaso debajo del embudo de decantación y abrimos la llave para que el aceite caiga.

ACTIVIDADES

1. Observa que las medidas de agua y aceite ¿cuántos mililitros obtienes de cada líquido? 2. ¿Por qué ambos líquidos no se mezclan?3. Dibuja un embudo de decantación.

PRÁCTICA 8. SEGUNDA PARTE

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE UNA MEZCA: FILTRACIÓN II

INTRODUCCIÓN

La mezcla está formada por sal y arena, es una mezcla heterogénea, se pueden distinguir sus dos componentes. La arena no es soluble en agua, la sal si lo es.

MATERIALES

Embudo

Vaso de precipitado

Base y soporte

Varilla de vidrio para agitar

Papel para fabricar el vidrio

METODOLOGÍA

1. Se prepara un papel de filtro y se elabora un filtro que se coloca en el embudo

2. El embudo se coloca en el soporte vertical.

3. Se echa la mezcla de sal y arena en un vaso de precipitado y mezclamos.

4. Se añade agua a la mezcla (la sal se disuelve en agua y la arena permanece en el fondo). Con la ayuda de una varilla de vidrio removeremos la nueva mezcla hasta que la sal quede completamente disuelta en el agua.

5. Para separar la disolución de sal en agua se recurre a la filtración donde la arena queda retenida en el papel de filtro y la sal puede separarse del agua por evaporación del disolvente.

Si disponemos de cristalizador haremos lo siguiente:

a) Colocaremos el embudo en el soporte y debajo colocaremos el cristalizador. Se echa la mezcla y se espera a que caiga todo el agua al cristalizador. Esto ocurre porque las disoluciones no pueden ser separadas mediante el método de filtración.

b) Dejamos el cristalizador a temperatura ambiente y se espera a que el agua se evapore, quedando en el cristalizador la sal.

c) Mediante estos dos métodos (filtración y cristalización) es posible separar la mezcla de sal y arena.

PRÁCTICA Nº9

EXTRACCIÓN DE YODO CON GASOLINA

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE MEZCAS HOMOGÉNEAS

La solubilidad de una sustancia es una propiedad que depende del disolvente que interviene. La distinta solubilidad que una sustancia presenta según el disolvente, es la base del proceso de separación de sustancias que se llama extracción. Mediante esta técnica se extraen las esencias y perfumes de las plantas y flores, el café y en general las infusiones.

OBJETIVO

Extraer el yodo disuelto en el agua utilizando la propiedad de que el yodo es más soluble en gasolina que en agua. Después bastará dejar evaporar la gasolina para obtener el yodo puro.

MATERIAL

Dos tubos de ensayo Un vidrio de reloj Yodo sólido Gasolina Agua

MÉTODO

1. Disuelve unos cristalitos de yodo en agua en un tubo de ensayo. ¿Qué color tiene la disolución? 2. Añade gasolina a la disolución anterior y agita la mezcla.3. Deja reposar y observa que quedan dos capas. ¿Cuál queda arriba? ¿De qué color son cada una?4. Separa la capa superior y recógela con cuidado en otro tubo de ensayo5. Coloca una porción del líquido extraído en un vidrio de reloj y déjalo evaporar a temperatura ambiente. Se

observará como se forman cristales de yodo

ACTIVIDAD

Escribe brevemente en tú cuaderno lo que has realizado y dibuja lo que has obtenido.

PRÁCTICA Nº 10

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE LA CLOROFILA POR CROMATOGRAFÍA

OBJETIVO

Separar las sustancias componentes de la clorofila: xantofila, clorofila A, clorofila B y caroteno utilizando la propiedad de que los componentes tienen diferente velocidad de difusión en el papel de filtro.

MATERIAL

Un vaso de precipitado Una pajita Un mortero Papel de filtro (fase sólida) Alcohol etílico (eluyente)

Hojas verdes

MÉTODO

1. Toma unas hojas verdes (de yedra o espinacas), tritúralas en un mortero y añade una pequeña cantidad de alcohol etílico. Vierte un poco de esta disolución en una cápsula de petri y coloca un trozo de papel de filtro. Dóblalo de forma que quede vertical.

2. Deja pasar un día y observa lo que ocurre. Comprobarás que se han separado cuatro bandas de diferente color que corresponden en orden descendente a : xantofilas (color amarilla), clorofila B (color verde oscuro), clorofila A (color verde claro) y carotenos (amarillo anaranjado)

3. El montaje quedará de la siguiente forma:

ACTIVIDADDescribe lo que has realizado y dibuja lo que has obtenido.

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE LA CLOROFILA POR CROMATOGRAFÍA II

SEPARACIÓN DE LOS DIFERENTES COMPONENTES DE LA TINTA DE UNA ROTULADOR POR CROMATOGRAFÍA

INTRODUCCIÓN

La tinta está compuesta por la mezcla de varios compuestos de diferentes colores. Cada uno de ellos tiene una solubilidad diferente en el etanol que vamos a utilizar.

MATERIALES

Papel de filtro

Vaso de precipitado.

Etanol

METODOLOGÍA

Hacemos una mancha con un rotulador en el papel de filtro.

Sujetamos la tira de papel con un lápiz y la colocamos sobre la boca de un vaso de precipitado e introducimos su extremo en el etanol que hay en el fondo del mismo

El disolvente comienza a subir por el papel (capilaridad) y arrastra a cada componente de la mezcla a diferente velocidad debido a la solubilidad diferente en cada caso, separando los colores.

BLOQUE IICITOLOGÍA

PRÁCTICA NÚMERO 11

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS DE LA EPIDERMIS DE CEBOLLA ( Allium cepa )

Introducción

Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de cebollas, son de forma alargada y bastante grandes. La membrana celular celulósica se destaca muy clara. Los núcleos son grandes y muy visibles, en su interior se perciben granulaciones , son los nucléolos. El citoplasma tiene aspecto bastante claro, en el que se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas

Material

Microscopio Frasco lavador Papel de filtro Cubreobjetos Portaobjetos Bisturí Pinzas de disección Trozo de cebolla

Cuentagotas Caja de Petri Colorante: verde metilo

Procedimiento

1. -Toma un trozo de cebolla y marca con incisiones del bisturí una pequeña cuadrícula en la parte interior

del trozo de cebolla.

2.- Extrae con ayuda de la pinza un trozo de la fina película que hay entre las hojas de la cebolla.

3.- Pon una gota de agua en el portaobjetos y coloca encima la fina piel extraída. Procura que no se arrugue. Ponle un cubreobjetos encima.

4.- Coloca el portaobjetos en el microscopio.

¡Recuerda! Debes empezar siempre enfocando el mínimo aumento.

5.- Gira el revólver del microscopio al aumento medio y dibuja lo observado.

6.- Saca el portaobjetos del microscopio, levanta el cubreobjetos y coloca el portaobjetos encima de una placa de Petri.

7.- Añade unas gotas de verde de metilo. Espera 5 minutos. (Se muestra en las fotografías anteriores)

8.- Con unas pinzas sujeta el porta y retira el exceso de colorante vertiendo agua con el frasco lavador encima de la muestra. Seca los alrededores de la muestra con papel filtro.

9.- Añade unas gotas de agua y procura que no se formen burbujas de aire.

10.- Coloca el cubre sobre el portaobjetos y coloca la preparación en el

microscopio a unos 200-400 aumentos para observar bien el resultado.

Actividades

Dibuja lo que ves y contesta las siguientes cuestiones:

1.-Indica qué dibujo representa mejor la imagen que has observado en el microscopio.

2.- ¿Cuáles son las partes de la célula que has observado claramente?

3.- ¿Por qué no se observan otros componentes de la célula?

 

PRÁCTICA NÚMERO 12

OBSERVACIÓN DE LA EPIDERMIS DE LA HOJA DE LIRIO ( Iris germanica )

Introducción

Las células de la epidermis de la hoja de lirio son alargadas e incoloras, tienen núcleos bien visibles. Cada estoma está formado por dos células simétricas arriñonadas, células estomáticas, éstas son las únicas de la epidermis que contienen granos de clorofila. Entre estas dos células se percibe un orificio de forma oval, el ostiolo. Si aparecen granos de cloroplastos en las células de la epidermis pertenecen al parénquima clorofílico de la célula.

Material

Microscopio Frasco lavador Papel de filtro Cubreobjetos

Portaobjetos Bisturí Pinzas de disección Trozo de epidermis de lirio

Cuentagotas Caja de Petri Colorante: verde metilo

Preparación

1. Hacer una incisión transversal, con una cuchilla, de medio centímetro de longitud, en el tercio superior de la hoja. Con las pinzas tirar de uno de los bordes del corte rasgando en sentido longitudinal de la hoja. Se desprenderá fácilmente una fina membrana, que es la epidermis de la hoja.

2. Se recortan pequeños fragmentos 3. Colocarla sobre el porta con un par de gotas de agua y taparla con el cubre presionando con

cuidado.

4. Observar al microscopio, primero con los mínimos aumentos, luego pasar a aumentos mayores.

Actividades

Dibuja lo que has observado indicando los aumentos.

PRÁCTICA NÚMERO 13

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS DE LA MUCOSA BUCAL HUMANA

Introducción

La mucosa bucal constituye un tejido epitelial o de revestimiento. Es de tipo pluriestratificado de descamación, por lo que es sencillo obtener muestras de sus células. Al microscopio se observan con facilidad tras teñirlas, ya que son transparentes, y destaca su núcleo redondeado y central.

Materiales

Microscopio Cubeta Mechero Porta y cubreobjetos

Pocillo de montar Cuentagotas Aguja enmangada

Soporte tinciones Azul de metileno

Técnica de la preparación

Introducir un dedo en la cavidad bucal. Paspar suavemente con la uña la car interna del carrillo. Limpiar el producto obtenido, del borde interno de la uña, con una aguja. Deposítese sobre una gotita de agua en un portaobjetos. Hacer suavemente una extensión frotando con la aguja sobre el porta. Calentar hasta la desecación, a la llama del mechero, sin que llegue a quemar el porta sobre el dorso de la mano. Colocar el porta sobre el soporte de tinción encima de la cubeta.

Agregar unas gotas de azul de metileno sobre toda el área de extensión realizada. Déjese actuar el colorante un par de minutos. Inclinando el porta verter el colorante en la cubeta. Irrigar con el cuenta gotas unas gotas de agua para lavar la preparación hasta que no suelte color. Poner unas gotas de agua limpia en el centro de la preparación. Poner un cubreobjetos, de forma que este caiga como se cierran las tapas d un libro; dejando caer suavemente el cubre se evita que queden burbujas de aire entre el porta y el cubre.

Observación al microscopio

Fijar la preparación sobre la platina haciendo uso de las pinzas de presión. Empleando aumentos débiles localizar el área de la preparación más idónea para la observación (enfocar las células aisladas que son las que mejor se observan. Cambiar a otro objetivo con aumento más fuerte.

El material observado procede de la capa superficial del epitelio de la mucosa bucal. En su mayoría son células muertas o células en degeneración. El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo, y con menos color el citoplasma, que suele ser algo granuloso.

Actividades

Dibuja en tu cuaderno de actividades lo que observes en el microscopio anotando el número de aumentos que has utilizado.

Debes ver una imagen similar a la que se muestra a continuación, donde se observan claramente los núcleos, la membrana y el citoplasma.

Nota: además de células de la mucosa es posible observar bacterias de la mucosa bucal (Streptococos).

PRÁCTICA 14:OBSERVACIÓN DE BACTERIAS FIJADAS Y TEÑIDAS POR TINCIÓN SIMPLE

PROCEDIMIENTO

A) BACTERIAS DEL YOGUREl yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.

1. Después de encender el mechero, esteriliza el asa de siembra con la llama del mechero, toma una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua y realiza un frotis (extenderla sobre todo el portaobjetos.).

2. Pasar el portaobjeto por la llama del mechero para fijar la muestra, sin dejar de moverlo para impedir la fractura del cristal.

3. Añadir una gota de azul de metileno al 1 % obre la preparación durante 1-2 minutos.

4. Lavar la muestra con el frasco lavador, cuidadosamente, para eliminar el exceso de colorante.

5. Dejar evaporar el agua sobrante moviendo la preparación en abanico.

6. Añadir una gota de aceite de inmersión a la muestra, colocarlo sobre el microscopio y observar al máximo aumento del microscopio.

A) BACTERIAS DEL VINAGRE

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también

OBJETIVOS1. Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.

2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.

3. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.

4. Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión

MATERIAL

Material de Laboratorio

Mechero Bunsen o de alcohol

Asa de siembra o aguja enmangada

Pinzas

3 Portaobjetos

Cubeta de tinción

Microscopio y aceite de inmersión

Reactivos Azul de metileno al 1%

Material biológico Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, etc.

Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.1. Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la

telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriados.2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.

3. Fijar con calor y secar al aire moviendo en abanico.

4. Teñir 5 minutos con azul de metileno, lavar el exceso de colorante y secar.

5. El montaje puede hacerse con una gota de glicerina o de agua antes de colocar el cubre; también puede observarse sin cubre mediante la técnica de inmersión.

B) BACTERIAS DEL SARRO DENTAL

El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

1. Con un palillo de dientes extrae una muestra del sarro dental, raspando la punta sobre los dientes y disolver la muestra en una gota de agua que previamente se ha colocado sobre el portaobjetos.

2. Dejar secar y fijar con calor.

3. Teñir 2-3 minutos con azul de metileno, lavar el exceso de colorante y secar.

4. Observar al microscopio con aceite inmersión.

Guarda las preparaciones, para poder compararlas con la tinción de gram que vas a realizar en la siguiente práctica.

CUESTIONES1. Haz un esquema de la preparación del yogurt localiza los dos tipos de bacterias que producen el yogur (relaciona

el nombre científico con la forma de la bacteria) Haz un esquema de la preparación del vinagre y compara la forma de las bacterias Acetobacter con las observadas en la preparacióndel yogurt.

2. Dibuja lo que ves en el microscopio en cada una de las preparaciones.3. ¿De qué color aparecen teñidas las bacterias?4. Identifica los tipos de bacterias presentes en las muestras.5. ¿Qué forma tienen?¿aparecen aisladas o agrupadas?. Tipo de asociación6. Haz un recuento de cada uno de los tipos bacterianos de cada una de las preparaciones y exprésalo en forma de

porcentaje. ¿Cuál es la bacteria mayoritaria en cada caso?.

PRÁCTICA 15 PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO

PROCEDIMIENTO

a) Preparación del medio

1.- Monta la rejilla, el mechero y el vaso de precipitado como se indica la figura. Se añaden todas las sustancias constituyentes del medio en el vaso de precipitado, exceptuando la gelatina o el agar, y se pone en el fuego hasta la ebullición.

Material de Laboratorio

Papel de aluminio.

Algodón hidrófilo.

Papel de filtro.

Tres placas de Petri.

Tres tubos de ensayo.

Mechero Bunsen o de alcohol

Trípode y rejilla

Embudo.

Vaso de precipitado.

Asa de siembra o aguja enmangada

Esterilizador ( puede ser una olla a presión)

Estufa

Sustancias constituyentes del medio

60 cc de agua. 0.6 g de glucosa. 1,5 g de pastillas de caldo de pollo ( lípidos y proteínas) 3 hojas de gelatina o 3 g de agar. Bicarbonato.

PRÁCTICA 16 ¿POR QUÉ DEBEMOS LAVARNOS LAS MANOS?

INTRODUCCIÓN

Como sabes, lavarse las manos, sobre todo antes de comer o de tocar zonas de la piel con heridas, es muy importante pero ¿cuál es la razón?. Con esta sencilla investigación podrás deducirla fácilmente.

MATERIALES

Rotulador indeleble. Tres placas de Petri con medio de cultivo

Servilletas de papel.

Las placas de Petri son unas cajas transparentes con tapadera, dentro de las cuales se coloca una sustancia (medio de cultivo) que sirve para alimentar a los microorganismos. Gracias a este medio de cultivo los microorganismos pueden desarrollarse y reproducirse hasta aumentar enormemente su número y formar colonias observables a simple vista.

1. Rotula las placas de Petri del uno al tres.

2. Destapa la placa 1 y pasa la yema de los dedos sobre el medio de cultivo. Después cierra la placa.

3. Lávate las manos solo con agua y sécalas con una servilleta de papel. Toca el medio de cultivo de la placa 2 como en el punto anterior y luego ciérrala.

4. Lávate ahora las manos con agua y jabón, y repite todo el proceso con la placa 3.

5. Coloca las tres placas boca abajo en una estufa de cultivo a 28-32ºC. para evitar confusiones anota con un rotulador en la base de cada placa las condiciones en las que estaban los dedos correspondientes (sin lavar, lavados con agua, lavados con agua y jabón)

6. Pasadas 48 horas observa las placas de Petri.

ACTIVIDADES

1. ¿Qué observas en las placas? ¿A qué es debido?

2. Analiza los resultados de las tres placas y extrae conclusiones que puedan tener aplicación en la vida cotidiana.

3. ¿Te parece adecuado que los organismos encargados de la Sanidad Pública exijan el cumplimiento de normas muy estrictas para manipular alimentos? ¿Por qué?

4. Cita algunas situaciones en las que resulte imprescindible adoptar medidas higiénicas.

BLOQUE IIIGENÉTICA

PRÁCTICA 17 OBSEVACIÓN DE MITOSIS DE CÉLULAS VEGETALES EN DIVISIÓN

INTRODUCCIÓN

Para observar la mitosis en células vegetales se utilizan tejidos meristemáticos, en los que las células se multiplican constantemente, por lo que será fácil “sorprender” algunas células en distintas fases mitóticas.

MATERIALES

Raíces de cebolla/Alubias, garbanzos o lentejas Vaso de precipitado Palillos de dientes

Placa de petri Papel de filtro Estufa Cuchilla Vidrio reloj Aguja enmangada

Orceína acética ClH 1N Mechero Portaobjetos Cubreobjetos

PROCEDIMIENTO

1. Empezaremos observando el proceso de división celular o mitosis. Se emplearán como material biológico raicillas de cebolla, aunque también se podrían utilizar las raíces obtenidas a partir de otros bulbos (ajos, puerros, jacintos, tulipanes, etc). Para conseguir raíces en crecimiento se coloca el bulbo de cebolla (al que previamente se habrán eliminado las raíces secas) sobre un vaso de precipitado ( si es necesario se sujeta mediante unos palillos). Se llena el vaso con agua hasta que toque superficialmente la zona donde van a crecer las raicillas. Al cabo de 2 o 3 días empezarán a crecer las raíces.

2. Por otro lado, se utilizará como material biológico semillas de diversas especies: alubias, garbanzos, lentejas, etc. Para la germinación de las semillas, se ponen en una placa de petri con unos discos de papel de filtro empapado de agua. Las placas se introducen en la estufa a 23-25ºC hasta que se produzca la germinación. En caso de no disponer de estufa en el laboratorio del instituto, se procederá de la siguiente manera: una vez están las semillas en la placa de petri las meteremos en el frigorífico 48 horas y después las dejaremos a temperatura ambiente. Gracias al choque térmico aceleraremos el proceso de germinación. Cuando las raíces tengan 1 cm se retiran de la placa y se eligen las semillas no contaminadas por hongos.

3. Elige una raíz joven (de unos 2 cm), lávala con agua y corta la punta a 5 mm del extremo.

4. Coloca la punta de la raíz en un vidrio de reloj. Para ablandar los tejidos e iniciar la tinción, se cubre la raíz con orceína acética y clorhídrico 1N en la proporción de 9:1, es

decir, 9 gotas de orceína por cada gota de HCl. Si estas realizando la tinción en raíces de semillas también se podrían utilizar los colorantes: carmín acético o hematoxilina.

5. La hidrólisis debe hacerse en caliente, a unos 60º. Para ello, calienta el vidrio de reloj a la llama del mechero, justo hasta que empiecen a desprenderse tenues vapores, teniendo mucho cuidado de que no hierva. Retíralo para que se enfríe durante 8 minutos y repite esta operación 3 veces, añadiendo más orceína si hiciera falta, de modo que el líquido cubra en todo momento la punta de la raíz.

6. Saca la raicilla con la aguja enmangada y colócala sobre el portaobjetos. Con la cuchilla corta el ápice a unos 2 mm. El resto se descarta ya que las células meristemáticas se encuentran en el extremo, bajo la cofia.

7. Añade unas gotas de ácido acético al 45% (orceínaB) para terminar de ablandar los tejidos.

8. Limpia con papel de filtro los posibles residuos del colorante. Coloca el cubreobjetos y realiza un squash o aplastamiento. Para ello sitúa la preparación en un papel de filtro doblado y presiona con el dedo pulgar para aplastar el tejido y eliminar el exceso de colorante. Si al retirar el papel de filtro se ve que la muestra no queda suficientemente aplastada, se puede presionar el cubre en la zona donde está la raicilla con la parte posterior de la aguja enmangada. En cualquier caso hay que evitar que el cubreobjetos se deslice sobre el portaobjetos en el curso de la presión, y se debe conseguir una monocapa de células a través de la que pase la luz.

9. Observa al microscopio. Al principio con un aumento pequeño, para localizar las células meristemáticas mejor teñidas y en un solo plano. Luego, con mayor aumento, tratar de identificar células en cada una de las fases mitóticas.

Actividades

1. Dibuja con cierto detalle, una célula en cada una de las fases de la mitosis: profase, metafase, anafase y telofase.

2. Contesta a las siguientes cuestiones:

a. ¿Por qué es más fácil encontrar mitosis en las células que se encuentran en el extremo de las raicillas y no aparecen en las zonas más alejadas?

b. ¿En qué momento de la mitosis se identifican mejor los cromosomas para su recuento?

MATERIAL ELENA UD 4

PRÁCTICA 17 OBSEVACIÓN DE MEIOSIS DE CÉLULAS VEGETALES EN DIVISIÓN

INTRODUCCIÓN

Para ver células en meiosis habrá que recurrir a los órganos reproductores: estambres o carpelos, donde se producen los gametos.