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Protocolo

PROTOCOLO DE PROCEDIMIENTOS DE QUIMICA SANGUINEA DEL HOSPITAL LA MARIA

Área de Laboratorio Clínico

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Tabla de contenido

1. Introducción y alcance________________________________________________52. Objetivo_____________________________________________________________53. Roles y Responsabilidades___________________________________________54. QUIMICA SANGUINEA________________________________________________6

Equipo analizador: Cobas c311________________________________________________6

Especificaciones técnicas___________________________________________________6

Cobas Link_________________________________________________________________8

Muestras con y sin código de barras________________________________________10

Operación de rutina previa_________________________________________________12

Control de Calidad_________________________________________________________13

Solicitud de mediciones de CC_______________________________________________16

5. DETERMINACIONES DE QUIMICA SANGUINEA________________________16Ácido úrico________________________________________________________________16

Alanino Aminotransferasa (ALT/GPT)_______________________________________22

Aspartato Aminotransferasa (AST/GOT)_____________________________________26

Albúmina__________________________________________________________________28

Albúmina en Suero_________________________________________________________28

Albúmina en orina (microalbuminuria)_______________________________________32

Amilasa___________________________________________________________________36

Bilirrubina Directa_________________________________________________________41

Bilirrubina Total___________________________________________________________45

Calcio_____________________________________________________________________48

2

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Complemento C3__________________________________________________________52

2.10 Complemento C4_______________________________________________________55

2.11 Colesterol_____________________________________________________________58

2.12 Creatinina_____________________________________________________________62

2.13 Creatinkinasa (CK)_____________________________________________________68

CreatinKinasa Fracción MB__________________________________________________72

Dimero D__________________________________________________________________79

Factor Reumatoide__________________________________________________________83

Fosfatasa Alcalina__________________________________________________________86

Fósforo____________________________________________________________________90

Gamma Glutamiltransferasa (GGT)___________________________________________95

Glucosa___________________________________________________________________98

Hemoglobina Glicosilada____________________________________________________102

HDL Colesterol____________________________________________________________109

Hierro____________________________________________________________________114

Lactato___________________________________________________________________118

2.25 Lactato Deshidrogenasa (LDH)__________________________________________122

Lipasa____________________________________________________________________125

Magnesio_________________________________________________________________128

Prealbúmina______________________________________________________________133

Proteína C Reactiva (PCR)__________________________________________________136

Proteínas Totales en Suero y Plasma_________________________________________139

Proteínas Totales en Orina y LCR____________________________________________143

Triglicéridos_______________________________________________________________149

Otras Lipoproteínas (Perfil Lípidico)__________________________________________152

Urea/BUN_________________________________________________________________155

Osmorlaridad sérica________________________________________________________159

Química de Líquidos Estériles_________________________________________________160

Líquido Cefalorraquídeo LCR________________________________________________160

Glicemia__________________________________________________________________161

Cloruros__________________________________________________________________161

3

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Proteínas totales___________________________________________________________162

Lactato___________________________________________________________________162

Líquido Sinovial (Articular)__________________________________________________162

Glucosa__________________________________________________________________163

Ácido úrico________________________________________________________________163

Proteínas totales___________________________________________________________163

Líquidos de Cavidades Serosas_____________________________________________163

Gradiente de albúmina plasmática-albúmina de líquido ascítico (GASA)___________165

Glucosa__________________________________________________________________166

Amilasa___________________________________________________________________166

Triglicéridos_______________________________________________________________167

Panel Cardíaco (Troponina I, Mioglobina)_______________________________________167

Cobas b 121 (BEG). GASES ARTERIALES Y ELECTROLITOS____________________178

6. ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE________________________________1807. ANEXOS___________________________________________________________2048. REFERENCIAS_____________________________________________________2069. Historial de versiones_______________________________________________208

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1. Introducción y alcance

El laboratorio clínico E.S.E la María ha aumentado su participación en el apoyo al

diagnóstico, seguimiento y tratamiento de las enfermedades, las decisiones

clínicas basadas en los resultados de los exámenes de laboratorio se toman

adecuadamente cuando las condiciones bajo las cuales se ha recogido la sangre u

otras muestras, están adecuadamente identificadas y estandarizadas.

Aplica al personal de laboratorio encargado de la toma y procesamiento de

muestras del área de química sanguínea y de la gestión de la calidad para la

validación de sus resultados; aplicable a las muestras procedentes de los distintos

servicios hospitalarios, y de los usuarios que acceden al laboratorio por consulta

externa.

2. ObjetivoEstandarizar los procedimientos en el área de química clínica como herramienta

del sistema de gestión de calidad del laboratorio Clínico para unificar conceptos,

minimizar los riesgos asociados al proceso y entregar resultados confiables y

basados en la evidencia científica disponible.

3. Roles y Responsabilidades

Área: Rol:

Responsabilidades:

5

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4. QUIMICA SANGUINEA

Equipo analizador: Cobas c311

Especificaciones técnicas

El analizador cobas c 311 es un analizador automático controlado por software

para el análisis de química clínica. Está concebido para determinaciones in vitro

tanto cuantitativas como cualitativas usando una gran variedad de tests para

análisis. El analizador cobas c 311 lleva a cabo ensayos fotométricos y

mediciones por iónselectivo y utiliza suero/plasma, orina, LCR y sobrenadante

como tipos de muestra.

Sistema

Analizador completamente automatizado de

acceso aleatorio para Química clínica, Electrolítos

e inmunoensayos homogéneos (HIA)

Rendimiento de pruebas Hasta 300 pruebas por hora por técnica de

fotometría

Concepto de reactivos Reactivos cobas c con códigos de barras y listos

para usar

Capacidad de reactivos a

bordo

Hasta 45 ensayos (42 posiciones para cartucho

frio y 3 canales para ISE)

Parámetros

programables

Hasta 117 fotométricos, 3 pruebas ISE, 8

parámetros calculados y 3 índices séricos

Tipos de muestra Suero, plasma, orina, LCR y sangre total

Capacidad de muestras a

bordo

108 posiciones con acceso continuo y capacidad

de interrupción STAT

Tipos de contenedores Tubos primarios: 5-10 mL

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de muestra

Copas de muestra: 2.5 mL

Micro copa: 1.5 mL

Volumen de la muestra 1.0 a 35 µL en pasos de 0.1 µL

Detección de coágulos

en la muestra

Si

Base de datos de la

muestra

10.000 muestras de rutina/STAT

Métodos de prueba 1 punto + verificación de prozona, 2 puntos,

cinética de 2 puntos, 2 puntos + verificación de

prozona, 3 puntos, 1 punto + cinética A, Cinética A

+ índice sérico, cinética A con blanco, Cinética B

Métodos de calibración Lineal, no lineal de puntos múltiples, calibración de

2 puntos, factor K hasta 100 calibradores pre

programables, almacenamiento de hasta 180

curvas, calibración preventiva de los cartuchos en

stand-by

Métodos de control de

calidad

Tiempo real, control individual y acumulativo, auto

QC, hasta 100 diferentes controles pre

programables, control de calidad preventivo

después de la calibración de los cartuchos en

stand by

Nueva corrida/repetición/

confirmatoria

Nueva corrida automática/ nueva corrida manual,

se soporta repetición y confirmatoria (espejo)

automática

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Exactitud/Precisión de los resultados medidos

Un resultado incorrecto puede ser motivo de un error de diagnóstico,

representando en consecuencia un riesgo para el paciente.

Para asegurar el uso debido del instrumento, mida muestras de control y

monitoree el instrumento durante la operación.

No utilice reactivos, calibradores o controles que hayan caducado. Tenga

en cuenta las condiciones de almacenamiento especificadas. De lo

contrario, pueden obtenerse resultados inexactos.

Para tareas de diagnóstico, los resultados siempre se deben evaluar junto

con el historial del paciente, el examen médico y otros datos.

Áreas y componentes del analizador

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Cobas Link

Plataforma cobas link La plataforma cobas link es la puerta de enlace para

recuperar y distribuir información (por ejemplo, instrucciones de uso, hojas de

valores, notas importantes, y configuraciones del analizador específicas para tests

y lotes) desde la red Roche

Tele Service-Net hasta los analizadores cobas en el laboratorio. Cobas link es una

parte integral y obligatoria de los analizadores de plataforma modular de cobas.

Tele Service-Net (TSN) TeleService-Net es la infraestructura técnica que ofrece a

los analizadores cobas y a los operadores información importante sobre los

productos de Roche.

Tele Service-Net ofrece varias aplicaciones con las que es posible administrar y

visualizar datos e información de instrumentos conectados remotamente.

Estación de datos cobas link La estación de datos cobas link es un ordenador de

escritorio exclusivo con teclado, ratón, monitor e impresora.

Biblioteca electrónica de cobas La biblioteca electrónica de cobas (e-library) es la

interfaz de usuario para trabajar con cobas link en la estación de datos cobas link.

La aplicación principal de cobas link para el operador es la biblioteca electrónica

de cobas, que consta de boletines técnicos (insertos de reactivo) electrónicos y

códigos de barras electrónicos. Esta aplicación se utiliza para buscar, revisar e

imprimir los boletines técnicos (insertos de reactivo) en formato electrónico.

Hay disponible un manual del operador independiente de la biblioteca electrónica

de cobas.

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Utilizar los códigos de barras electrónicos a través de la descarga

El operador puede descargar los códigos de barras electrónicos que necesite

desde la estación de datos de cobas link hasta el analizador.

Hay disponibles los siguientes tipos de códigos de barras electrónicos:

Datos de aplicaciones

Datos de calibradores

Datos de controles

Si los datos de una aplicación concreta (parámetros de la aplicación, datos de

calibradores y datos de controles) no están disponibles en el analizador, esta

información se debe descargar desde cobas link.

Para iniciar la biblioteca electrónica

1 Inicie una sesión en la estación de datos de cobas link con el nombre de usuario

y la clave correspondientes de la biblioteca electrónica.

La clave correspondiente es RemoteRemos, y la Contraseña someRetomeR

2 Confirme con OK.

Aparecerá la pantalla de inicio de la biblioteca electrónica (Nuevas entradas).

Para obtener la información completa del uso de la aplicación Cobas Link

consultar en el Manual del Operador, disponible en el computador del área de

Química Clínica.

Muestras con y sin código de barras

Identificación de las muestras Cuando el sistema se utiliza en el modo de código

de barras, las etiquetas de cada muestra son leídas con el lector de códigos de

barras del disco de muestras. La etiqueta de código de barras de la muestra

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|

contiene el ID de muestra que se utiliza para identificar la muestra y con fines de

selección de tests.

El número de ID de muestra permite que el sistema realice un seguimiento de las

muestras. Para realizar el seguimiento de las muestras con el software, seleccione

Seguimiento Muestras en la pantalla Panorámica del Sistema.

Cuando se trabaja con muestras con código de barras, en el software sólo se

deben definir posiciones de urgencia.

Cuando se trabaja con ID de pacientes, se deben asignar posiciones al software

para muestras de rutina y urgentes para todos los tipos de muestras.

Modo sin código de barras Si el sistema se utiliza en el modo sin código de barras,

las muestras se identifican mediante un número de secuencia y su posición en el

disco de muestras. Esta asignación debe realizarse en la pantalla Trabajo >Sel.

Tests.

Cuando se trabaja con muestras sin código de barras, se debe definir la posición

de cada categoría de muestra (controles, calibradores y posiciones de urgencia)

en el software.

Compartimento de reactivos

Los reactivos para las aplicaciones fotométricas se almacenan en un

compartimento cerrado a temperatura controlada (5-15C) que contiene dos

anillos concéntricos con un total de 42 posiciones para los cobas c pack. Hay 14

posiciones en el anillo interior y 28 posiciones en el anillo exterior.

Para evitar la evaporación de los reactivos, este compartimento cuenta con una

tapa.

Gracias a su diseño, esta tapa no se puede abrir ni quitar. Los cobas c pack se

introducen y se extraen del compartimento mediante un tipo de puerta (con acceso

controlado por el software).

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Sistema de gestión de reactivos

Los reactivos para todas las aplicaciones de Roche se suministran en cobas c

packs. Estos casetes contienen de una a tres botellas de reactivos especialmente

diseñados y disponen de etiquetas con código de barras con información detallada

sobre el reactivo y el test.

El sistema de gestión de reactivos consta de los siguientes componentes:

Disco de reactivos (dentro del compartimento de reactivos)

Estación de carga de reactivos

Lector de códigos de barras

Perforador

Estación de carga de reactivos

Utilice la estación de carga de reactivos para cargar y descargar los cobas c

packs.

Ambos procesos se deben iniciar mediante el software

Tras hacer clic en el botón Cargar, el analizador gira el disco de reactivos hasta

una posición libre. La estación de carga de reactivos está diseñada de forma que

un pack cobas c se puede cargar en sólo una posición del disco de reactivos. Así

se descarta la posibilidad de colocar un casete en una posición incorrecta del

disco de reactivos o de utilizar reactivos inadecuados.

Operación de rutina previa

Antes de iniciar la operación de rutina debe preparar primero el sistema para

operación. La operación de rutina previa comprende las siguientes tareas:

Realizar intervenciones de mantenimiento

Borrar los datos y hacer una copia de seguridad de los mismos, si es

necesario

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|

Preparar los reactivos, detergentes y diluyentes

Realizar una calibración (De ser necesaria)

Medir los controles de calidad

Descargar parámetros, si es necesario

El área Flujo Trabajo en la parte superior de la pantalla Panorámica del Sistema

guía al operador a través de la operación de rutina previa.

Botón Mantenimiento DiarioEl botón Mantenimiento Diario indica cuándo están a punto de caducar los

intervalos de mantenimiento.

Al seleccionar Mantenimiento Diario en el área Flujo Trabajo aparece la pantalla

Mantenimiento. Utilice la pantalla Mantenimiento para ejecutar intervenciones de

mantenimiento.

Se deben Realizar también mantenimientos semanales y mensuales, que se

indican claramente en el manual del operador disponible en el computador de la

sección de química sanguínea.

Control de Calidad

Efectúe con regularidad mediciones de CC para monitorear constantemente el

rendimiento del equipo. Tras la medición de muestras de CC, los resultados se

pueden transferir a un Host o validar en el Host o se pueden validar en el

analizador.

Los siguientes métodos de CC están disponibles en un analizador cobas c 311:

CCdiario (intradía), CC acumulado (largo plazo) y CC en tiempo real.

CC diario y acumulado Todos los resultados de las mediciones de CC se pueden

ver en la pantalla CC >Estado serie y en la pantalla CC >Diario. Se recomienda

transferir los datos CC al final del día desde CC diario a CC acumulado. En el CC

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acumulado se encuentra toda la información sobre control de calidad a largo plazo

almacenada en el analizador.

CC Tiempo Real Con independencia del CC diario y acumulado, la función CC en

tiempo real permite la evaluación de la medición del CC inmediatamente después

de que los resultados estén disponibles (tiempo real) utilizando el algoritmo

Westgard.

El CC en tiempo real correspondiente a un test siempre utiliza dos clases de

controles y compara los resultados del CC con los valores de la media y la

desviación estándar (DS) conocidos de los controles.

CC Rutina Cada test tiene uno o varios controles asignados. Además, no sólo se

debe asignar un test a un control, sino que también se debe activar para ese

control con el fin de posibilitar la medición de CC. El CC Rutina comprende todos

los tests activados de todos los controles instalados. Se puede solicitar una

medición de CC de todos estos tests (por ejemplo, al inicio de un turno de trabajo)

con un único comando (Panorámica del Sistema >Selección Calibración y CC >CC Rutina).

CC Reactivo en Standby Es posible solicitar mediciones de CC individuales para

cobas c packs en modo Standby. Los cobas c packs en Standby son los packs ya

cargados en el equipo, pero que no están en uso actualmente.

CC tras calibración Para esta clase de mediciones de CC, no se precisa ninguna

configuración especial.

Las mediciones de CC se llevan a cabo para todos los tests calibrados sin

peticiones explícitas del operador, cuando el control se ha activado y está

cargado.

CC Manual Esta función permite medir los CC de cualquier test según su propio

criterio.

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Al finalizar la operación diaria, los resultados de medición del CC se deben

acumular.

Al acumular resultados de CC, los datos correspondientes a los

resultadosacumulados se borran de la pantalla CC >Diario y se transfieren a la

pantalla CC >Acumulado.

Asignar CC Rutina El botón Asignar CC Rutina selecciona todos los tests de CC

Rutina (sólo reactivos activos) para una medición de control. Los tests de CC de

rutina comprenden todos los tests activados de todos los controles instalados.

Los tests que no se van a medir se pueden deseleccionar en la pantalla

Estado: seleccione los tests en la lista de estado y, a continuación, pulse el botón

Deselecc

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CC Rutina Para mostrar una lista de todos los tests de CC de rutina actualmente

activados,

Seleccione CC Rutina.

CC Botella Stand By Utilice este botón para seleccionar cobas c packs para CC

en stand by.

Solicitud de mediciones de CC

Es posible solicitar mediciones de CC individuales para cobas c packs activos y

en Standby cobas c packs activos actualmente en uso. Los cobas c packs en

Standby son los packs ya cargados en el equipo, pero que no están en uso

actualmente.

Para ejecutar controles de reactivos activos1. Seleccione CC >Estado.

2. Si se va a realizar CC de rutina, seleccione CC Rutina para seleccionar todos

los tests actualmente cargados y activados en el analizador para un CC. Si desea

seleccionar tests individuales, vaya al paso 3.

3 Seleccione el test y control apropiados. Puede marcar varios tests y controles.

4 Pulse Selecc. En la columna Selección aparece una barra de color verde. En la

columna Causa aparece Manual. El botón Selecc. Se convierte en Deselecc.

5 Seleccione Guardar para solicitar la medición de los controles seleccionados.

.

Para ejecutar controles de reactivos en Standby1 En CC >Estado, seleccione CC Botella Stand By para abrir la ventana CCBotella Stand By.

Elija Selecc. Para seleccionar todos los tests y controles resaltados. En la

columna

Selección aparece una barra de color verde. El botón Selecc. Se convierte en

Deselecc.

4 Seleccione OK para solicitar la medición de los controles seleccionados.

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5. DETERMINACIONES DE QUIMICA SANGUINEA

Ácido úricoCaracterísticasEl ácido úrico es el producto final del metabolismo de la purina en el organismo

humano. El ácido úrico se determina en el diagnóstico y el tratamiento de

numerosos trastornos renales y metabólicos, tales como la insuficiencia renal, la

gota, la leucemia, la psoriasis, la inanición y otros trastornos nutricionales, así

como en pacientes bajo tratamiento con citostáticos.

Existen dos procedimientos para la determinación cuantitativa del metabolito de la

purina que se basan en la oxidación del ácido úrico. Uno de ellos consiste en la

reducción, en solución alcalina, de ácido fosfotúngstico a azul de tungsteno que es

medido fotométricamente. Sin embargo, este método está sujeto a interferencias

debidas a fármacos y a otras sustancias reductoras, no sólo al ácido úrico.

El otro procedimiento, descrito por Praetorius y Poulsen, emplea la enzima uricasa

para oxidar el ácido úrico, eliminando así las interferencias intrínsecas del proceso

químico de oxidación. La uricasa puede emplearse en métodos que determinan el

consumo del ácido úrico por mediciones UV o, en combinación con otras enzimas,

en un test colorimétrico.

Otro método colorimétrico ha sido desarrollado por Town et al. La muestra se

incuba con un reactivo que contiene ascorbato-oxidasa y un sistema de

aclaramiento. En una reacción preliminar, el ácido ascórbico presente en la

muestra es eliminado para que no interfiera en la reacción indicadora de POD.

Una vez que se añade el reactivo iniciador, la uricasa comienza a oxidar el ácido

úrico.

El presente test de Roche consiste en el método colorimétrico descrito más arriba

con ligeras modificaciones. En esta reacción, el peróxido reacciona en presencia

de la peroxidasa (POD),

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N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-metilanilina (TOOS) y la 4-aminofenazona para

formar un colorante quinona-diimina. La intensidad cromática del colorante rojo

formado es proporcional a la concentración del ácido úrico y se mide

fotométricamente.

Principio del testTest enzimático colorimétrico.

El ácido úrico es desdoblado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno.

La intensidad cromática de la quinona-diimina formada es directamente

proporcional a la concentración del ácido úrico y es determinada midiendo el

aumento de la absorbancia.

a) N-etill-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-metilanilina

Medidas de precaución y advertencias

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Obtención y preparación de las muestrasEmplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las

muestras.

Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí

mencionados.

Suero.

Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.

Los valores de muestras de plasma tratado con EDTA son inferiores a los valores

obtenidos en suero en aproximadamente un 7 %.

Orina: Determinar el ácido úrico en orina lo antes posible. No refrigerar.

Para prevenir la precipitación de ureato en muestras de orina, añadir hidróxido de

sodio para mantener la orina en estado alcalino (pH > 8.0).

Para obtener la estabilidad de ácido úrico indicada, añadir NaOH antes de recoger

la muestra. Las muestras de orina se diluyen de 1 + 10 con agua destilada o

desionizada o con una solución de NaCl al 0.9 %. La dilución se toma en cuenta al

calcular los resultados.

Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar elensayo.

Estabilidad en suero/plasma: 15 5 días a 2-8 °C

6 meses a (-15) -(-25) °C

Estabilidad en orina16 (tras adición de NaOH): 4 días a 15-25 °C

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Calibración

Calibradores S1: H2O

S2: C.f.a.s.

Modo de calibración Lineal

Intervalo de calibraciones Calibración a 2 puntos

- tras cambiar de lote de reactivos

- si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad

Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a DI/EM.17

Factores de conversión: mg/dL x 59.5 = μmol/L mg/dL x 10 = mg/L

Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración del

ácido úrico de 7 mg/dL (417 μmol/L).

Suero/plasma

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 40 para la bilirrubina

conjugada y sin conjugar (concentración de la bilirrubina conjugada y sin conjugar:

aproximadamente 684 μmol/L o 40 mg/dL).

Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1000

(concentración de hemoglobina: aproximadamente 621 μmol/L o 1000 mg/dL).

Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 1500. No

existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la

turbidez) y la concentración de triglicéridos.

El ácido ascórbico < 0.17 mmol/L (< 3 mg/dL) no interfiere en el test.

Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso

común en concentraciones terapéuticas. Excepciones: El dobesilato de calcio

provoca valores artificialmente bajos de ácido úrico.

La uricasa reacciona de forma específica con el ácido úrico. Otros derivados de la

purina pueden inhibir la reacción de ácido úrico.

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En concentraciones terapéuticas, Dicynone (etamsilato) puede provocar valores

falsamente bajos.

Las intoxicaciones por paracetamol suelen tratarse con N-acetilcisteína.

Tanto la N-acetilcisteína, usada en concentraciones terapéuticas como antídoto,

como el metabolito de paracetamol, la N-acetil-p-benzoquinona imina (NAPQI),

pueden causar valores falsamente bajos.

La venopunción debe efectuarse antes de administrar metamizol. Si la

venopunción se realiza inmediatamente después o durante la administración de

metamizol, pueden obtenerse resultados falsamente bajos.

En casos muy raros pueden obtenerse resultados falsos debidos a la gammapatía,

particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenström).

OrinaFármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos de uso

común en concentraciones terapéuticas.20 Excepciones: El dobesilato de calcio,

la levodopa y la metildopa pueden provocar valores artificialmente bajos de ácido

úrico.

En muestras de orina, altas concentraciones de ácido homogentísico provocan

resultados falsos.

En concentraciones terapéuticas, Dicynone (etamsilato) puede provocar valores

falsamente bajos.

Debido a que el acetaminofén, la acetilcisteína y el metamizol se metabolizan

rápidamente, no es probable que interfieran en el test (aunque no se puede

excluir).

Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo

en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de

otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de medición

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Suero/plasma

0.2-25.0 mg/dL (11.9-1487 μmol/L)

Determinar las muestras con concentraciones superiores a través de la función de

repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2.5. Los

resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición del ciclo se

multiplican automáticamente por el factor 2.5.

Orina

2.2-275 mg/dL (131-16362 μmol/L)


repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2.5. Los

resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición del ciclo se

multiplican automáticamente por el factor 2.5.

Valores teóricosSuero/plasma

Hombres: 3.4-7.0 mg/dL (202.3-416.5 μmol/L)

Mujeres: 2.4-5.7 mg/dL (142.8-339.2 μmol/L)

Orina (intervalo de referencia según Krieg y Colombo)

1ª orina de la mañana 37-92 mg/dL (2200-5475 μmol/L)

Orina de 24 horas 200-1000 mg/día (1200-5900 μmol/día) correspondiente a

13-67 mg/dL (773-3986 μmol/L) (partiendo de un volumen de orina de 1.5 L/24 h)

Orina (intervalo de referencia según Tietz)

Dieta normal 250-750 mg/24 horas

Nutrición baja en purinas

Mujeres < 400 mg/24 horas

Hombres < 480 mg/24 horas

Nutrición alta en

Purinas < 1000 mg/24 horas

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Alanino Aminotransferasa (ALT/GPT)

Generalidades

La presencia de la enzima alanina aminotransferasa (ALT) se registra en tejidos

de varios tipos. La ALT se encuentra especialmente en el hígado, razón por la cual

su actividad se determina en el diagnóstico de hepatopatías. Concentraciones

séricas elevadas de ALT acompañan la hepatitis, la cirrosis, la ictericia obstructiva,

el hepatocarcinoma y el alcoholismo. Concentraciones levemente elevadas de

ALT se determinan en pacientes que han sufrido un infarto de miocardio sin

complicaciones.

Si bien tanto la aspartato aminotransferasa sérica (AST) como la ALT aumentan

en procesos patológicos que afectan la integridad de los hepatocitos, la ALT es de

ambas la enzima más específica del hígado.

Además, un aumento en la actividad de la ALT es más persistente que un

aumento en la actividad de la AST.

En pacientes con deficiencia de vitamina B6, la actividad sérica de la

aminotransferasa puede disminuir. Una reducción aparente de la actividad de la

aminotransferasa puede estar relacionada con valores disminuidos de fosfato de

piridoxal, el grupo prostético de las aminotransferasas, obteniendo así un aumento

de la relación apoenzima-holoenzima.

Principio del testEl presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC, si bien su

estabilidad y funcionamiento han sido mejorados. La ALT cataliza la reacción entre

la L-alanina y el 2-oxoglutarato. El piruvato formado es reducido por NADH en una

reacción catalizada por la lactato deshidrogenasa (LDH) para formar L-lactato y

NAD+.

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muestras.

Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí indicados.

– Suero (sin hemólisis).

– Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico.

Separar el suero o el plasma inmediatamente del coágulo o de las células.

Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.

Estabilidad: 3 días a 15-25 °C

7 días a 2-8 °C

> 7 días a (-60) - (-80) °C6

CalibraciónCalibradores S1: H2O

S2: C.f.a.s.


Intervalo de calibraciones

Calibración a dos puntos

- con cada lote de reactivos


Trazabilidad: El presente método fue estandarizado frente a la fórmula original de

la IFCC pero sin activación por PYP, utilizando pipetas calibradas con un

fotómetro manual que proporciona valores absolutos y la absorptividad específica

del substrato.

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Factor de conversión: U/L x 0.0167 = μkat/L

Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de ALT

de 30 U/L (0.5 μkat/L).

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 par bilirrubina

conjugada y sin conjugar (concentración de bilirrubina conjugada y sin conjugar:


Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 90 (concentración

de hemoglobina: aproximadamente 56 μmol/L o 90 mg/dL).

La contaminación con eritrocitos provoca resultados aumentados, ya que el nivel

de analito en los eritrocitos es mayor que en los sueros normales. La magnitud de

la interferencia depende del contenido de analito en los eritrocitos lisados.

Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta el índice L de 150. No



Las muestras lipémicas pueden causar alarmas debido a valores de absorbancia

elevados (> Abs). Seleccionar el tratamiento de muestra diluida para el

reprocesamiento automático.


común en concentraciones terapéuticas. Excepciones: En concentraciones

fisiológicas, la sulfasalazina y la sulfapiridina plasmáticas pueden llevar a

resultados falsos.

En concentraciones terapéuticas, el dobesilato de calcio y la isoniazida provocan

valores artificialmente bajos y la furosemida valores artificialmente altos de la ALT.

El fármaco Cyanokit (hidroxocobalamina) puede causar interferencias con los

resultados.



25

|



otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de medición5-700 U/L (0.08-11.7 μkat/L)

Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición.

La dilución de las muestras por la función de repetición es de 1:10. Los resultados

de las muestras diluidas por la función de repetición se multiplican

automáticamente por el factor 10.

Valores teóricosDe acuerdo al método estándar optimizado (comparable con el método IFCC sin

activación por fosfato de piridoxal13):

Hombres hasta 41 U/L (hasta 0.68 μkat/L)

Mujeres hasta 33 U/L (hasta 0.55 μkat/L)

Valores calculados: Para convertir de 25 °C a 37 °C, se empleó el factor

1.85.

Aspartato Aminotransferasa (AST/GOT)GeneralidadesLa enzima aspartato-aminotransferasa (AST) se encuentra ampliamente

distribuida en los tejidos del organismo, principalmente en el tejido hepático,

cardíaco, muscular y renal. Los niveles séricos de la enzima aumentan en caso de

enfermedades que afectan estos tejidos. Asimismo las afecciones hepatobiliares

tales como la cirrosis, el carcinoma metastásico y la hepatitis viral producen

niveles séricos elevados de AST. Como consecuencia de un infarto de miocardio,

la AST sérica se encuentra aumentada y alcanza su valor máximo 2 días después

de ocurrido.

26

|

Los valores séricos de AST pueden estar disminuidos en pacientes en diálisis

renal o con una deficiencia de la vitamina B6. La reducción aparente de la AST

puede estar relacionada con la disminución del nivel de fosfato de piridoxal, el

grupo prostético de AST, que trae como consecuencia un incremento en la

relación entre la apoenzima y la holoenzima.

Se han aislado 2 isoenzimas de la AST, la citoplasmática y la mitocondrial.

En el suero normal sólo se halla la isoenzima citoplasmática, mientras que en el

suero de pacientes con enfermedades coronarias y hepatobiliares, pueden

detectarse tanto la citoplasmática como la mitocondrial.

Principio de testEl presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC, si bien su

estabilidad y funcionamiento han sido mejorados.La AST de la muestra cataliza la

transferencia de un grupo amino entre L-aspartato y 2-oxoglutarato para obtener

oxaloacetato y L-glutamato.

A continuación y en presencia de la malato deshidrogenasa (MDH), el

oxaloacetato reacciona con NADH para formar NAD+.

La velocidad de oxidación de NADH es directamente proporcional a la actividad

catalítica de la AST. Se determina midiendo la reducción de la absorbancia.


muestras.

Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas.

Suero.

Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.

Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test.

27

|

Estabilidad: 24 horas a 15-25 °C5

7 días a 2-8 °C


S2: C.f.a.s.


Frecuencia de calibración calibración a 2 puntos


- si lo fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.


la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que proporciona

valores absolutos y la absorptividad específica del substrato.



Determinar las muestras con actividades superiores por la función de repetición

del ciclo. La dilución de las muestras por la función de repetición del ciclo es de

1:10. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de repetición del

ciclo se multiplican automáticamente por el factor 10.

Valores teóricosDe acuerdo al método estándar optimizado (comparable con el método IFCC sin

activación por fosfato de piridoxal):

Hombres: hasta 40 U/L (hasta 0.67 μkat/L)

Mujeres: hasta 32 U/L (hasta 0.53 μkat/L)

Valores calculados: Se ha empleado el factor 2.13 para la conversión de 25 °C a

37 °C.

28

|

Albúmina

Albúmina en Suero

La albúmina es una proteína carente de carbohidratos que constituye

aproximadamente el 55-65 % de la totalidad de las proteínas plasmáticas. Sirve

para mantener la presión oncótica en el plasma, está involucrada en el transporte

y almacenamiento de numerosos ligandos y constituye una fuente endógena de

aminoácidos. La albúmina fija y desdobla varios compuestos, como la bilirrubina,

el calcio y ácidos grasos de cadena larga. La albúmina se une asimismo a iones

tóxicos de metales pesados y a múltiples fármacos, razón por la cual la

disminución de la albúmina en sangre puede tener importantes consecuencias

farmacocinéticas.

Excepto en caso de deshidratación, la hiperalbuminemia no reviste gran

importancia diagnóstica. La hipoalbuminemia que acompaña numerosas

enfermedades y se debe a diversos factores: a una síntesis reducida como

consecuencia de una hepatopatía o por absorción disminuida de proteínas, aun

aumento en el catabolismo originado por una lesión tisular (quemaduras graves) o

una inflamación, a la malabsorción de aminoácidos (enfermedad de Crohn), a la

proteinuria debida a un síndrome nefrótico o a la pérdida de proteínas a través de

las heces (por neoplasia). En casos graves de hipoalbuminemia, la concentración

plasmática de la albúmina máxima alcanza 2,5 g/dL (380 μmol/L). Debido a la baja

presión osmótica en el plasma, el líquido pasa de los capilares sanguíneos al

tejido (edema). La determinación de la albúmina permite supervisar a pacientes

bajo dieta controlada y constituye un test excelente del funcionamiento hepático.

Principio del testTest colorimétrico.

29

|

Con un pH de 4,1 la albúmina tiene un carácter suficientemente catiónico como

para formar un compuesto con el verde de bromocresol (BCG), colorante aniónico,

formando un complejo azul verdoso.


muestras.


Suero.


No emplear plasma con fluoruro.


Estabilidad: 2-5 meses a 15-25 °C

5 meses a 2-8 °C

4 meses a (-15)-(-25) °C

CalibraciónCalibradores S1: H2OS2: C.f.a.s.


Frecuencia de calibraciones calibración a 2 puntos

- en el analizador, tras 4 semanas


- y según lo requiera el control de calidad

Factores de conversión:

g/L x 15,2 = μmol/L

μmol/L x 0,0658 = g/L

g/L x 0, 1 = g/dL

30

|

Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una

concentración de albúmina de 35 g/L (532 μmol/L).Ictericia: Sin interferencias

significativas hasta un índice I de 60 (concentración de la bilirrubina conjugada y

no conjugada: aprox. 1.026 μmol/L ó 60 mg/dL).

Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un índice H de 1.000

(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1.000 mg/dL).

Lipemia: Sin interferencia significativa hasta un índice L de 550. No existe una

concordancia satisfactoria entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la

concentración de triglicéridos.


común en concentraciones terapéuticas.


particularmente del tipo IgM (macroglobulinemia de Waldenstroem).



otros exámenes.

En pacientes con insuficiencia renal, los métodos colorimétricos empleados para la

determinación de albúmina pueden llevar a resultados de test falsamente elevados

debido a interferencias con otras proteínas. Los métodos inmunoturbidimétricos

son menos afectados.

Límites e intervalos

Intervalo de medición2-60 g/L (30,4-912 μmol/L, 0,2-6 g/dL) Determinar las muestras con

concentraciones superiores a través de la función de repetición del ciclo. La

dilución automática de las muestras por la función de repetición del ciclo es de 1:5.

Los resultados de las muestras diluidas por la función de repetición del ciclo se

multiplican automáticamente por el factor 5.

31

|

Límites inferiores de mediciónLímite inferior de detección del test 2 g/L (30,4 μmol/L, 0,2 g/dL)

Valores teóricosEstudio del intervalo de referencia

Adultos 3,97-4,94 g/dL 39,7-49,4 g/L 603-751 μmol/L

Valores de consenso:

Adultos 3,5-5,2 g/dL 35-52 g/L 532-790 μmol/L

Intervalos de referencia según Tietz11

Neonatos 0-4 días 2,8-4,4 g/dL 28-44 g/L 426-669 μmol/L

Niños 4 días-14 años 3,8-5,4 g/dL 38-54 g/L 578-821 μmol/L

14-18 años 3,2-4,5 g/dL 32-45 g/L 486-684 μmol/L

Albúmina en orina (microalbuminuria)

La albúmina es una proteína no glicosilada de un peso molecular de 66000

daltons. Su síntesis, que tiene lugar en las células del parénquima hepático,

alcanza 14 g por día. Desde el punto de vista cuantitativo, constituye el

componente proteico más importante (> 50 %) del plasma, el líquido

cefalorraquídeo y la orina. La excreción baja pero anormal de albúmina es

denominada microalbuminuria. Según sus causas se distingue en glomerular (p.ej.

microangiopatía diabética, hipertensión, lesión glomerular mínima), tubular

(resorción inhibida) o posrenal. La albúmina sirve también como proteína

marcadora de diferentes formas de proteinuria. En la proteinuria glomerular

selectiva se excretan a la orina entre 100 y 3000 mg de albúmina por g de

creatinina. Una proteinuria glomerular no selectiva se caracteriza por la excreción

elevada de proteínas con un peso molecular más alto (IgG superior al 10 % de la

albúmina). La proteinuria prerrenal se reconoce por la discrepancia entre la

albúmina y las proteínas totales (albúmina inferior al 30 % con aumento

simultáneo de las proteínas totales). Un aumento simultáneo de los niveles de

32

|

albúmina y microproteínas se registra en las proteinurias glomérulo-tubulares que

aparecen por sobrecarga de la resorción tubular en glomerulopatías (p. ej.

síndrome nefrótico), en nefropatías glomerulares túbulo-intersticiales combinadas

o en insuficiencia renal debida a nefropatía diabética u otras causas (proteinuria

por rebosamiento). En el plasma, la albúmina tiene dos funciones principales:

mantener la presión oncótica (80 % debida a la albúmina plasmática) y el

transporte. Es la proteína transportadora de mayor importancia para sustancias

poco hidrosolubles como ácidos grasos libres, bilirrubina, iones metálicos,

hormonas y fármacos.

La concentración de albúmina está disminuida en caso de hiperhidratación,

insuficiencia de síntesis hepatocelular, trastornos de la secreción al espacio

intravascular, trastornos en la distribución entre el espacio intra y extravascular,

catabolismo y pérdida de albúmina, en la reacción de fase aguda y analbuminemia

congénita.

Los trastornos de la barrera hematoencefálica pueden cuantificarse eficazmente

mediante el cociente de albúmina en LCR/suero. Cocientes elevados de albúmina

indican un trastorno de la barrera hematoencefálica.

Si se determinan simultáneamente la IgG en LCR y suero, tomando en cuenta los

cocientes individuales de albúmina, se puede diferenciar entre la IgG sanguínea y

la sintetizada por el SNC. En casos de esclerosis múltiple, encefalitis crónica por el

VIH, neurosífilis y la encefalitis por herpes simple, predomina la existencia de IgG.

Para determinar la albúmina se dispone de varios métodos tales como la

inmunodifusión radial, la nefelometría y la turbidimetría.

Principio de testPrueba inmunoturbidimétrica.

Los anticuerpos anti-albúmina reaccionan con el antígeno de la muestra formando

un complejo antígeno-anticuerpo que se mide turbidimétricamente después de la

aglutinación.


33

|

S2-6: C.f.a.s. PUC

Modo de calibración: RCM

Frecuencia de calibraciones

Calibración completa




muestras.

Sólo se han analizado y encontrado aptos los siguientes tipos de muestra:

Orina

Suero

Plasma tratado con heparina de litio o EDTA bipotásico.

LCR


LCR

Estabilidad: hasta 3 días a 2-8 °C

6 meses a (-15)-(-25) °C indefinidamente a (-60)-(-80) °C

Suero, plasma

Estabilidad: 10 semanas a 15-25 °C

5 meses a 2-8 °C

4 meses a (-15)-(-25) °C

Orina

Orina espontánea, de 24 horas o la segunda orina de la mañana.


1 mes a 2-8 °C

6 meses a (-15)-(-25) °C

Limitaciones del análisis - interferenciasOrina

34

|

Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

albúmina de 20 mg/L (0.30 μmol/L; 2 mg/dL).

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de bilirrubina

conjugada de 855 μmol/L (50 mg/dL).

Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta una concentración de

hemoglobina de 248 μmol/L (400 mg/dL).

No se registraron interferencias por acetona ≤ 60 mmol/L, cloruro amónico≤ 0.11

mol/L, calcio ≤ 40 mmol/L, creatinina ≤ 0.18 mol/L, γ-globulina ≤ 500 mg/L, glucosa

≤ 0.19 mol/L, urea ≤ 0.8 mol/L, ácido úrico≤ 5.95 mmol/L ni con urobilinógeno≤ 378

μmol/L.



Efecto prozona (high-dosehook): Aplicando la verificación cinética, no se

produjeron resultados falsos sin aviso con concentraciones de albúmina hasta

40000 mg/L (608 μmol/L, 4000 mg/dL).

Suero/plasmaCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

albúmina de 35 g/L (532 μmol/L; 3500 mg/dL).

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración

aproximada de bilirrubina conjugada y no conjugada: aprox. 1026 μmol/L ó 60

mg/dL).


(concentración aproximada de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1000 mg/dL).

Lipemia (Intralipid):18 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1500. La

correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la concentración de

triglicéridos no es concluyente.

Los factores reumatoides ≤ 1200 UI/mL no interfieren en el test.


extendido en concentraciones terapéuticas.

35

|



LCRCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

albúmina de 240 mg/L (3.65 μmol/L; 24 mg/dL).



Efecto prozona (high-dosehook): Aplicando la verificación cinética, no se

produjeron resultados falsos sin aviso con concentraciones de albúmina hasta

30000 mg/L (456 μmol/L, 3000 mg/dL).



otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de mediciónOrina

Cobas c 311: 3–200 mg/L (0.05–3.04 μmol/L, 0.3–20 mg/dL)

Valores teóricosOrina

2a orina de la mañana:

Adultos: < 20 mg de albúmina/g de creatinina o bien

< 2.26 g (34.35 μmol) de albúmina/mol de creatinina

Niños (3-5 años):20 < 20 mg/L (0.304 μmol/L, 2 mg/dL) de albúmina < 37 mg de

albúmina/g de creatinina

Orina de 24 horas: < 20 mg/L (0.304 μmol/L, 2 mg/dL) < 30 mg/24 h (0.456

μmol/24 h)

36

|

AmilasaLas α-amilasas (1,4-α-D-glucanohidrolasas, EC 3.2.1.1) catalizan la hidrólisis de

carbohidratos polímeros tales como la amilosa, la amilopectina y el glucógeno por

desdoblamiento de los enlaces 1,4-α-glucosídicos. En los poli y oligosacáridos,

algunos enlaces glucosídicos se hidrolizan simultáneamente. La maltotriosa, la

unidad más pequeña de este grupo, se convierte a maltosa y glucosa, si bien muy

lentamente. Se distinguen dos tipos de α-amilasas: el tipo pancreático (tipo P) y el

tipo salival (tipo S). El tipo P se forma casi exclusivamente en el páncreas y es, por

lo tanto, organoespecífico, mientras que el tipo S se sintetiza en diferentes

órganos.

Este último se encuentra en las glándulas salivales, las lágrimas, el sudor, la leche

materna, el líquido amniótico, los pulmones, los testículos y el epitelio de las

trompas uterinas.

La determinación de la α-amilasa juega un papel importante en el diagnóstico de

las enfermedades del páncreas ya que éstas presentan síntomas clínicos poco

específicos. La α-amilasa se emplea sobre todo en el diagnóstico y seguimiento

de la pancreatitis aguda. La hiperamilasemia no sólo puede producirse en la

pancreatitis aguda o en la fase inflamatoria de la pancreatitis crónica, sino también

en la insuficiencia renal por filtración glomerular reducida, los tumores pulmonares

u ováricos, la neumonía, las afecciones de las glándulas salivales, la cetoacidosis

diabética, el trauma cerebral así como en intervenciones quirúrgicas o en caso de

una macroamilasemia. Para confirmar la especificidad pancreática, se recomienda

determinar adicionalmente otra enzima específica del páncreas, como la lipasa o

la α-amilasa pancreática.

Los numerosos métodos descritos para la determinación de la α-amilasa miden la

reducción del sustrato de forma viscosimétrica, turbidimétrica, nefelométrica o

amiloclástica o bien registran la formación de productos de degradación por

sacarimetría o cinéticamente por reacciones sucesivas catalizadas por enzimas. El

presente método se basa en el probado proceso de degradación del sustrato

4,6-etilideno-(G7)-1,4-nitrofenil-(G1)-α,D-maltoheptaósido (Ethylidene

37

|

ProtectedSubstrate = EPS) por la α-amilasa y la consecuente hidrólisis de todos

los productos de degradación a p-nitrofenol por la acción de la α-glucosidasa

(liberación del cromóforo del 100 %). Los resultados del presente método

correlacionan con los obtenidos por CLAR (cromatografía de líquidos de alta

resolución). El presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC, si bien

su estabilidad y funcionamiento han sido mejorados.

Principio del testPrueba enzimática colorimétrica conforme con lo estipulado por la IFCC Los

oligosacáridos definidos tales como el 4,6-etilideno-(G7)

p-nitrofenil-(G1)-α,D-maltoheptaósido (etilideno-G7PNP) se desdoblan bajo la

acción catalítica de la α-amilasa. La -glucosidasa actúa sobre los fragmentos

G2PNP, G3PNP y G4PNP así formados que se hidrolizan entonces

completamente a p-nitrofenol y glucosa.

La intensidad cromática del p-nitrofenol formado es directamente proporcional a la

actividad de la α-amilasa. Se determinamidiendo el aumento de la absorbancia.


muestras.


Suero

Plasma tratado con heparina de litio.

38

|


Orina: Recoger la orina sin aditivos. La α-amilasa es inestable en orina ácida.

Realizar el test imediatamente o alcalizar las muestras para su almacenamiento

(apenas sobre pH 7).

Estabilidad en suero o plasma: 7 días a 15-25 °C

1 mes a 2-8 °C

Estabilidad en orina: 2 días a 15-25 °C

10 días a 2-8 °C


S2: C.f.a.s.


Intervalo de calibraciones Calibración a dos puntos

• Con cada lote de reactivos

•si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad

Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a un reactivo del

sistema Roche utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que

proporciona valores absolutos y la absorptividad específica del substrato.

CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la actividad de

analito de cada muestra.


Limitaciones del análisis - interferenciasUna ligera modificación de la coloración amarilla de la solución 2 no influye en el

funcionamiento del test.

No pipetear con la boca y evitar el contacto del reactivo con la piel porque La

saliva y el sudor contienen α-amilasa!

39

|

Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la

amilasa de 100 U/L (1.67 μkat/L).

Suero/plasma

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 para bilirrubina





Lipemia (Intralipid):15 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1500.

No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la


En algunos casos, las muestras que presentan elevada turbidez (índice L) y al

mismo tiempo una alta actividad de amilasa pueden causar la alarma >React o

>Abs.

Las muestras lipémicas muy turbias pueden causar alarmas debido a valores de

absorbancia elevados.

EDTA.Glucosa: Sin interferencias por glucosa hasta 111 mmol/L (2000 mg/dL). La

recuperación aumenta en aprox. el 10 % si la concentración de glucosa equivale a

250 mmol/L (4500 mg/dL).

Ácido ascórbico: Sin interferencias por ácido ascórbico hasta 5.68 mmol/L (100

mg/dL).



Excepción: Los fármacos basados en icodextrina pueden provocar valores de

amilasa disminuidos.



Orina

40

|

Ácido ascórbico: Sin interferencias por ácido ascórbico hasta 2.27 mmol/L (40

mg/dL). Con concentraciones de ácido ascórbico de 22.7 mmol/L (400 mg/dL) se

registra una recuperación reducida en un 15 %.





otros examines.

Valores teóricosSuero/plasma Hombres/ mujeres

0.47-1.67 μkat/L 28-100 U/L

Orina espontánea Hombres mujeres

0.27-8.20 μkat/L

0.35-7.46 μkat/L

16-491 U/L

21-447 U/L

Cociente de α-amilasa/creatinina

Hombres mujeres

0.97-4.73 μkat/g

1.25-6.51 μkat/g

58-283 U/g

75-390 U/g

Bilirrubina DirectaLa bilirrubina se forma en el sistema reticuloendotelial por la degradación de los

eritrocitos viejos. El grupo hemo procedente de la hemoglobina y de otras

hemoproteínas es eliminado, metabolizado a bilirrubina y transportado al hígado

en forma de complejo con la albúmina sérica. En el hígado, la bilirrubina se

solubiliza por conjugación con el ácido glucurónico para ser transportada por el

41

|

conducto biliar y eliminada por el tracto digestivo. El incremento de los niveles de

bilirrubina sin conjugar (indirecta) en el torrente sanguíneo se debe a

enfermedades o circunstancias en las cuales, a causa de procesos hemolíticos, se

produce más bilirrubina de la que el hígado es capaz de metabolizar. La

inmadurez hepática y otros numerosos trastornos en los que el mecanismo de

conjugación de la bilirrubina se encuentra afectado pueden causar aumentos

similares de la bilirrubina circulante sin conjugar. La obstrucción del conducto biliar

o el daño de la estructura hepatocelular causan un aumento en los niveles tanto

de la bilirrubina conjugada (directa) como en los de la bilirrubina sin conjugar

(indirecta) en el torrente sanguíneo.

Principio del testMétodo diazo.

En un tampón ácido, la bilirrubina conjugada y la δ-bilirrubina (bilirrubina directa)

reaccionan directamente con la sal de 3,5-diclorofenildiazonio para

formarazobilirrubina de color rojo.

La intensidad cromática del colorante azoico rojo es directamente proporcional a la

concentración de bilirrubina directa (conjugada) que se mide fotométricamente.

Nota: Bajo la influencia de la luz azul, utilizada por ejemplo en la fototerapia de

neonatos, una parte de la bilirrubina sin conjugar se transforma a un isómero

hidrosoluble denominado fotobilirrubina que es un sustrato para pruebas de

bilirrubina directa. Esta fracción es detectada por la BILD2 y puede llevar a

resultados superiores a los normales en niños sanos.

42

|


muestras.


Suero: Recoger las muestras de suero en tubos estándar.

Plasma tratado con heparina de litio, EDTA di y tripotásico.

No exponer las muestras a la luz directa.



7 días a 2-8 °C

6 meses a (-15) - (-25) °C

CalibraciónCalibrador S1: H2O

S2: Calibrador c.f.a.s.

43

|

Modo de calibración Regresión lineal





Factores de conversión: μmol/L x 0.0585 = mg/dL

mg/dL x 10 = mg/L

mg/dL x 17.1 = μmol/L


concentración de la bilirrubina directa de 34 μmol/L (2 mg/dL).


de hemoglobina: aprox. 15.5 μmol/L o 25 mg/dL).






Excepción: La fenilbutazona proporciona resultados artificialmente bajos de

bilirrubina.





otros exámenes.

En ciertos casos, cuando casi la totalidad de la bilirrubina que reacciona se

encuentra en forma directa, el valor de la bilirrubina directa puede resultar

ligeramente más elevado que el de bilirrubina total. Si es así, el resultado para la

44

|

bilirrubina total debe indicarse tanto para la bilirrubina directa como para la

bilirrubina total.

Límites e intervalosIntervalo de medición1.5-291 μmol/L (0.09-17 mg/dL)


repetición. Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2. Los

resultados de las muestras diluidas con la función de repetición se multiplican


Valores teóricosBilirrubina directa ≤ 5 μmol/L (≤ 0.30 mg/dL)

El límite superior de 10 μmol/L para la bilirrubina directa en neonatos se cita en la

literatura.

Bilirrubina TotalLa bilirrubina se forma en el sistema reticuloendotelial por la degradación de los

eritrocitos viejos. El grupo hemo procedente de la hemoglobina y de otras

hemoproteínas es eliminado, metabolizado a bilirrubina y transportado al hígado

en forma de complejo con la albúmina sérica. En el hígado, la bilirrubina se

solubiliza por conjugación con el ácido glucurónico para ser transportada por el

conducto biliar y eliminada por el tracto digestivo.

El incremento de los niveles de bilirrubina sin conjugar (indirecta) en el torrente

sanguíneo se debe a enfermedades o circunstancias en las cuales, a causa de

procesos hemolíticos, se produce más bilirrubina de la que el hígado es capaz de

metabolizar. La inmadurez hepática y otros numerosos trastornos en los que el

mecanismo de conjugación de la bilirrubina se encuentra afectado pueden causar

aumentos similares de la bilirrubina circulante sin conjugar. La obstrucción del

conducto biliar o el daño de la estructura hepatocelular causan un aumento en los

45

|

niveles tanto de la bilirrubina conjugada (directa) como en los de la bilirrubina sin

conjugar (indirecta) en el torrente sanguíneo.

Principio del testMétodo diazo colorimétrico

En un medio fuertemente ácido y en presencia de un agente disolvente adecuado,

la bilirrubina total se acopla a 3,5-diclorofenildiazonio.

La intensidad cromática del colorante azoico rojo es directamente proporcional a la

concentración de bilirrubina total y se mide fotométricamente.

Medidas de protección y advertencias

46

|


muestras.


mencionados.

Suero

Plasma tratado con heparina de litio, EDTA di y tripotásico (El uso de plasma

EDTA con niveles elevados de hematocrito puede provocar valores ligeramente

disminuidos.) Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar

el ensayo.


7 días a 2-8 °C

6 meses a (-15) - (-25) °C

a) Si las muestras se protegen de la luz

Límites e intervalosIntervalo de medición2.5-650 μmol/L (0.146-38.0 mg/dL)


repetición. En este caso, las muestras se diluyen de 1:2. Los resultados de las

muestras diluidas con la función de repetición se multiplican automáticamente por

el factor 2.

Valores teóricosAdultos9 hasta 21 μmol/L (hasta 1.2 mg/dL)

Niños ≥ 1 mes de edad hasta 17 μmol/L (hasta 1.0 mg/dL)

Hombres hasta 24 μmol/L (hasta 1.4 mg/dL)

Mujeres hasta 15 μmol/L (hasta 0.9 mg/dL)

Alto riesgo de desarrollar una hiperbilirrubinemia clínicamente significativa:

Neonatos: a término y casi a término

Edad del neonato:

47

|

24 horas ≥ 137 μmol/L) (≥ 8.0 mg/dL))

48 horas ≥ 222 μmol/L) (≥ 13.0 mg/dL))

84 horas ≥ 290 μmol/L) (≥ 17.0 mg/dL))

Tales niveles de hiperbilirrubinemia se consideran significativos y generalmente

requieren una estrecha supervisión y posiblemente una evaluación ulterior o

incluso una intervención.

CalcioCaracterísticasEl calcio es el elemento mineral más abundante en el organismo. Aprox. Un 99 %

se encuentra en los huesos, fundamentalmente en su forma de hidroxiapatito. El

calcio restante se halla distribuido entre los diferentes tejidos y líquidos

extracelulares en los que desempeña un papel central en numerosos procesos de

sustancial importancia para la vida. Más allá de su función relacionada con el

esqueleto, el calcio también está implicado en la coagulación sanguínea, la

conducción neuromuscular, la excitabilidad del músculo esquelético y cardíaco, la

activación enzimática y la preservación de la integridad y permeabilidad de la

membrana celular.

Se cree que los niveles séricos y por tanto el contenido corporal de calcio están

controlados por la parathormona (PTH), la calcitonina y la vitamina D.

Un desequilibrio en cualquiera de estos moduladores produce alteraciones en los

niveles de calcio sérico y corporal. El incremento de los niveles de PTH sérica o de

vitamina D está generalmente asociado a la hipercalcemia. Un aumento en los

niveles de calcio sérico también puede observarse en el mieloma múltiple y en

otras afecciones neoplásicas. La hipocalcemia puede acompañar al

hipoparatiroidismo, la nefrosis y la pancreatitis.

Principio del test

48

|

Bajo condiciones alcalinas, los iones de calcio reaccionan con el

5-nitro-5’-metil-BAPTA (NM-BAPTA) para formar un complejo. En un segundo

paso, el complejo formado reacciona con EDTA.


muestras.


Suero: Se prefiere suero fresco recogido en ayunas.

Plasma: tratado con heparina de litio.

Se recomienda separar las muestras de suero o plasma inmediatamente de las

células sanguíneas, ya que el contacto prolongado con el coágulo puede causar

valores reducidos de calcio. El suero de pacientes que reciben EDTA (en el

tratamiento de la hipercalcemia) no es apto para el análisis, ya que el EDTA fija el

calcio en quelatos e impide que esté disponible para reaccionar con NM-BAPTA.

Se ha observado una coprecipitación del calcio con la fibrina (p.ej. plasma

heparinizado), los lípidos o la proteína desnaturalizada en condiciones de

almacenamiento o congelamiento.

Orina

Recoger las muestras de orina en frascos lavados con ácido. Recoger las

muestras de 24 horas en recipientes con 20-30 mL de HCl de 6 mol/L para impedir

la precipitación de sales de calcio. A veces, las sales de calcio precipitadas no se

disuelven por completo tras la adición de HCI a la orina recogida.

Estabilidad en suero/plasma: 57 días a 15-25 °C

3 semanas a 2-8 °C

8 meses a (-15) - (-25) °C

49

|


4 días a 2-8 °C

3 semanas a (-15)-(-25) °C

Antes de analizar las muestras de suero u orina que hayan estado almacenadas,

mezclarlas bien.



S2: C.f.a.s.




• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad

Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente al material de

referencia SRM 956 c, nivel 2.

Limitaciones del análisis – interferencias

Criterio: Recuperación dentro de ± 0.22 mmol/L (0.9 mg/dL) del valor inicial de las

muestras ≤ 2.2 mmol/L (8.8 mg/dL) y dentro de ± 10 % para muestras> 2.2

mmol/L.

Suero/plasma



aprox. 1026 μmol/L o 60 mg/dL).


(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L o 1000 mg/dL).

50

|


Existe una mínima correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la

concentración de triglicéridos.

Magnesio: Sin interferencias significativas hasta una concentración de 15 mmol/L.





Orina





Magnesio: Sin interferencias significativas hasta una concentración de 60 mmol/L.





otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de mediciónSuero/plasma

0.20-5.0 mmol/L (0.8-20.1 mg/dL)

Orina

0.20-7.5 mmol/L (0.8-30.1 mg/dL)

Determinar las muestras de orina con concentraciones superiores a través de la

función de repetición del ciclo. Con la función de repetición, las muestras se

51

|

diluyen 1:5. Los resultados de las muestras diluidas con la función de repetición se

multiplican automáticamente por el factor 5


Recién nacidos (0-10 días de edad): 1.90-2.60 mmol/L (7.6-10.4 mg/dL)

Niños (10 días-2 años de edad): 2.25-2.75 mmol/L (9.0-11.0 mg/dL)

Niños (2-12 años de edad): 2.20-2.70 mmol/L (8.8-10.8 mg/dL)

Niños (12-18 años de edad): 2.10-2.55 mmol/L (8.4-10.2 mg/dL)

Adultos (18-60 años de edad): 2.15-2.50 mmol/L (8.6-10.0 mg/dL)

Adultos (60-90 años de edad): 2.20-2.55 mmol/L (8.8-10.2 mg/dL)

Adultos (> 90 años de edad): 2.05-2.40 mmol/L (8.2-9.6 mg/dL)

Orina

2.5-7.5 mmol/24 h (100-300 mg/24 h) con una alimentación normal.

Complemento C3

CaracterísticasEl sistema del complemento se activa por una vía clásica y por una vía alternativa.

Ambas desembocan en una vía terminal común. Dado que el factor C3 del

complemento es el factor común de las dos vías, su concentración y la de sus

productos de degradación (incluyendo C3c) sirven para indicar el grado de

activación del sistema de complemento. Cuando los valores disminuyen, significa

que se ha producido una activación. La determinación adicional de C4 permite una

diferenciación más precisa. Si se obtienen valores normales de C4, es probable

que la activación tenga lugar por la ruta alternativa. Se observan concentraciones

disminuidas en numerosas enfermedades inflamatorias e infecciosas. Las causas

principales son el lupus eritematoso sistémico (LES), la artritis reumatoidea, la

endocarditis bacteriana subaguda, la viremia, las infecciones parasitarias o la

52

|

sepsis bacteriana. En presencia del factor nefrítico C3, los valores del factor del

complemento C3 de pacientes con lipodistrofia parcial o

glomerulonefritismembrano-proliferativa se hallan fuertemente disminuidos.

Por ser C3 una proteína de fase aguda, el organismo produce mayores cantidades

de C3 durante los procesos inflamatorios. Su concentración se incrementa en

enfermedades sistémicas, estados inflamatorios crónicos no infecciosos

(especialmente en la poliartritis crónica) y en situaciones fisiológicas especiales

(durante la gestación). En estos casos, el aumento raramente duplica el valor

normal y puede ocultar una reducción del consumo del complemento.

Para la determinación del factor C3 del complemento se dispone de varios

métodos tales como la nefelometría, la inmunodifusión radial y la turbidimetría.

Principio del testPrueba inmunoturbidimétrica.

El C3c humano forma un precipitado con un antisuero específico que se determina

por turbidimetría.


muestras.


Suero.




8 días a 2-8 °C

8 días a (-15)-(-25) °C

El grado de fragmentación de C3 a C3c depende de la fecha de extracción y las

condiciones de conservación de la muestra. Así, los valores obtenidos en

53

|

muestras frescas son hasta en un 25 % inferior a aquellos obtenido en muestras

recogidas cierto tiempo atrás según el grado de fragmentación.


S2: C.f.a.s. Proteins

Modo de calibración RCM2

Intervalo de calibraciones Calibración completa



Factores de conversión: g/L x 100 = mg/dL

mg/dL x 0.01 = g/L


concentración de C3c de 0.9 g/L.

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 par-bilirrubina





Lipemia (Intralipid):8 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 2000. No



Los factores reumatoides hasta 1200 UI/mL no interfieren en el test.

Efecto prozona (high-dosehook): No se produjeron resultados falsos hasta una

concentración de C3c de 12.5 g/L.





54

|

Límites e intervalosIntervalo de medición0.04-5.0 g/L (4-500 mg/dL)



resultados de las muestras diluidas con la función de repetición se multiplican


Valores teóricos0.9-1.8 g/L (90-180 mg/dL)

2.10 Complemento C4

Generalidades

El sistema de complemento puede activarse por la vía clásica y por la vía

alternativa. El factor de complemento C4 participa en la activación a través de la

vía clásica. Si bien la disminución de C4 es común, raras veces falta por completo.

El C4 está disminuido o falta por completo en enfermedades del inmunocomplejo,

el lupus eritematoso sistémico (LES), la tiroiditis autoinmune y la dermatomiositis

juvenil. En pacientes con deficiencia de C4, la aparición del LES muchas veces

puede comprobarse muy temprano, siendo su curso más grave en pacientes con

niveles normales de complemento. En infecciones como la meningitis bacteriana y

la vírica, sepsis por estreptococos y estafilococos así como en neumonía, el C4

está disminuido.

La determinación adicional de C4 en pacientes con valores disminuidos del factor

C3 del complemento permite una diferenciación ulterior. Si en estos casos la

concentración de C4 es normal, es probable que la activación se efectúe por la vía

alternativa. La determinación de C4 se emplea principalmente para el seguimiento

de los valores reducidos del complemento en sangre.

55

|

La formación de C4, por ser una proteína de fase aguda, se acelera durante

procesos inflamatorios. Su concentración se incrementa en enfermedades

infecciosas sistémicas, estados inflamatorios crónicos no infecciosos

(especialmente en la poliartritis crónica) y en situaciones fisiológicas especiales

(durante la gestación). En estos casos, el aumento raramente duplica el valor

normal y puede ocultar una reducción del consumo del complemento.

Para determinar el factor C4 del complemento se dispone de métodos tales como

la nefelometría, la inmunodifusión radial y la turbidimetría.

Principio de testPrueba inmunoturbidimétrica. El C4 humano forma un precipitado con un antisuero

específico que se determina por turbidimetría.


muestras.


Suero.


Centrifugue las muestras que contengan precipitado antes de efectuar la prueba.


2 días a 2-8 °C



Multiplicar el valor del calibrador C.f.a.sProteins específico del lote por los factores

indicados a continuación a fin de determinar las concentraciones estándar de la

curva de calibración de 6 puntos.

S2: 0.140 S5: 1.31

56

|

S3: 0.328 S6: 2.64

S4: 0.655







mg/dL x 0.01 = g/L

g/L x 100 = mg/dL


g/L x 5.00 = μmol/L


concentración de C4 de 0.1 g/L (0.5 μmol/L, 10 mg/dL).

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración

aproximada de bilirrubina conjugada y no conjugada: 1026 μmol/L ó 60 mg/dL).


aproximada de hemoglobina: 311 μmol/L ó 500 mg/dL).





Efecto prozona (high-dosehook): No se obtienen resultados falsos con

concentraciones de C4 de hasta 5 g/L (25 μmol/L, 500 mg/dL).





57

|

Para el diagnóstico, los resultados del ensayo siempre deben interpretarse

conjuntamente con el historial médico del paciente, el análisis clínico así como los

resultados de otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de medición0.02-1.0 g/L (0.1-5 μmol/L, 2.0-100 mg/dL)

Determinar las muestras con concentraciones superiores por la función de

repetición del ciclo. La dilución automática de las muestras por la función de

repetición del ciclo es de 1:2. Los resultados de las muestras diluidas por la

función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 2.

Valores teóricos0.1-0.4 g/L (0.5-2.0 μmol/L o 10-40 mg/dL)

Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden

aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios

valores.

2.11 Colesterol

CaracterísticasEl colesterol es un esteroide con un grupo hidroxilo secundario en la posición C3.

Se sintetiza en tejidos de varios tipos, pero especialmente en el hígado y en la

pared intestinal. Aprox. tres cuartos del colesterol se forman por síntesis, mientras

que el cuarto restante proviene de la alimentación. La determinación del colesterol

se emplea para cribar el riesgo aterosclerótico, así como para diagnosticar y tratar

enfermedades con niveles elevados de colesterol o trastornos de los

metabolismos lipídico lipoproteico. La determinación del colesterol fue descrita por

vez primera por Liebermann en 1885 y luego por Burchard en 1889. Según el

principio de Liebermann-Burchard, el colesterol forma un compuesto verde

58

|

azulado a partir de carbohidratos polímeros insaturados en un medio en el que

están presentes el ácido acético, el anhídrido acético y el ácido sulfúrico

concentrado. En el método de Abell y Kendall, que es más específico pero más

complejo desde un punto de vista técnico, se emplean también reactivos

cáusticos. En 1974, Roeschlau y Allain describieron el primer método

completamente enzimático.

Este método se basa en la determinación de la Δ4-colestenona tras el

desdoblamiento enzimático del éster de colesterol por la colesterol esterasa,

después de la transformación del colesterol por la colesterol oxidasa, así como la

medición subsiguiente del peróxido de hidrógeno formado a través de una

reacción de Trinder. La optimización del desdoblamiento de los ésteres (> 99.5 %)

permite la estandarización por estándares primarios y secundarios y una

comparación directa con los métodos de referencia de CDC y NIST. Las muestras

recogidas tras la ingestión de alimentos pueden dar resultados ligeramente

inferiores a las obtenidas en ayunas.

El test de colesterol de Roche cumple con los objetivos sentados en 1992 por los

Institutos Nacionales de la Salud de los EE.UU. (NIH) equivalentes al 3 % o aún

inferiores para la precisión y la desviación.

El presente test ha sido estandarizado frente a Abell/Kendall así como por dilución

isotópica/espectrometría de masa. Los datos de funcionamiento e informaciones

aquí presentados son independientes de la estandarización.

Principio del testMétodo enzimático colorimétrico.

Los ésteres de colesterol se desdoblan por la acción de la colesterol esterasa a

colesterol libre y ácidos grasos. La colesterol oxidasa cataliza entonces la

oxidación de colesterol a colest-4-en-3-ona y peróxido de hidrógeno. En presencia

de peroxidasa, el peróxido de hidrógeno formado produce la unión oxidativa del

fenol y la 4-aminofenazona para formar un colorante rojo de quinona-imina.

59

|

La intensidad cromática del colorante formado es directamente proporcional a la

concentración de colesterol. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.


muestras.


Suero.


No emplear plasma con citrato, oxalato o fluoruro.

Se puede emplear muestras recogidas en ayunas o después de comer.



7 días a 2-8 °C

3 meses a (-15)-(-25) °C


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado por el método de

Abell/Kendall así como por dilución isotópica/espectrometría de masa.16

Factores de conversión: mmol/L x 38.66 = mg/dL

mmol/L x 0.3866 = g/L

mg/dL x 0.0259 = mmol/L

60

|

Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor incial con una concentración de

colesterol de 5.2 mmol/L (200 mg/dL).


conjugada y de 14 para la bilirrubina sin conjugar, lo cual equivale a una

concentración aproximada de bilirrubina conjugada de 274 μmol/L ó 16 mg/dL y a

una concentración aproximada de bilirrubina sin conjugar de 239 μmol/L ó 14

mg/dL.


de hemoglobina: aprox. 435 μmol/L ó 700 mg/dL).

Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 2000. La





Para el diagnóstico, los resultados obtenidos con el test siempre deben evaluarse

junto a la anamnesis del paciente, los exámenes clínicos y los resultados de otros

análisis.

Límites e intervalosIntervalo de medición0.1-20.7 mmol/L (3.86-800 mg/dL)


repetición del ciclo. La dilución de las muestras por la función de repetición del

ciclo es de 1:10. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de

repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 10.

Valores teóricosInterpretación clínica según las recomendaciones de la Sociedad Europea de

Aterosclerosis:

61

|

mmol/L mg/dL Trastorno del metabolismo de lípidos

Colesterol < 5.2 (< 200)

Triglicéridos < 2.3 (< 200) No

Colesterol 5.2-7.8 (200-300) Sí, si el colesterol-HDL < 0.9 mmol/L (< 35 mg/dL)

Colesterol > 7.8 (> 300)

Triglicéridos > 2.3 (> 200) Sí

Umbrales de corte recomendados por el Programa Nacional Educativo sobre el

Colesterol (NCEP), panel de tratamiento de adultos, para estimar el riesgo en la

población de los EE.UU.

Nivel ideal de colesterol < 5.2 mmol/L (< 200 mg/dL)

Colesterol elevado límite 5.2-6.2 mmol/L (200-240 mg/dL)

Colesterol alto ≥ 6.2 mmol/L (≥ 240 mg/dL)

2.12 Creatinina

CaracterísticasLa insuficiencia renal crónica es un problema de salud de incidencia mundial que

conlleva un riesgo sustancial de morbilidad y mortalidad cardiovasculares.

Las normas actuales definen la insuficiencia renal crónica, independientemente de

su causa, como el daño renal o la tasa de filtración glomerular (TFG) inferior a 60

mL/min por 1.73 m2 durante un período mínimo de 3 meses.

La determinación de creatinina en suero o plasma es la prueba más común para

evaluar la función renal. La creatinina es un producto de degradación de fosfato de

creatina muscular producido constantemente por el cuerpo (dependiente de la

masa muscular). La creatinina se filtra en los glomérulos y, en condiciones

normales, no es reabsorbida por los túbulos en una cantidad apreciable. Una

pequeña pero significativa cantidad se secreta activamente.

Una subida de los niveles de creatinina en la sangre solamente es observada

cuando hay un marcado daño en los nefrones. Por lo tanto, esta prueba no puede

emplearse para la detección precoz de la insuficiencia renal.

62

|

El aclaramiento de creatinina medido a partir de la concentración de creatinina en

orina y suero o plasma y la tasa del flujo urinario constituye una prueba mucho

más sensible y con mayor capacidad de estimar la tasa de filtración glomerular

(TFG). Esta prueba requiere una muestra de orina recogida con precisión temporal

(usualmente de 24 horas) y una muestra de sangre. Sin embargo, dado que este

test está sujeto a errores debido a la recogida de orina en función del tiempo, se

intentó estimar la TFG solamente a partir del cálculo de la concentración de

creatinina en suero o plasma. Entre los numerosos métodos sugeridos, la

ecuación de Cockroft y Gault y el método basado en los resultados del estudio de

MDRD obtuvieron la mayor aceptación general. Mientras que la primera ecuación

está basada en datos obtenidos con el método de Jaffé convencional, una nueva

versión de la segunda se emplea para métodos de creatinina que pueden

rastrearse a DI-EM. Ambos métodos son aptos para adultos En niños debe

emplearse la fórmula de Bedside Schwartz.

Adicionalmente al diagnóstico y tratamiento de la insuficiencia renal y al control de

la diálisis renal, la medición de creatinina se emplea también para calcular la

excreción fraccional de otros analitos en orina (p. ej. La albúmina y la α-amilasa).

Son numerosos los métodos para determinar la creatinina. Los tests automáticos

establecidos en el laboratorio de rutina incluyen la prueba de Jaffé con picrato

alcalino en sus diferentes modificaciones y la determinación enzimática.

Principio de testEl método enzimático se basa en la conversión de la creatinina a glicina,

formaldehído y peróxido de hidrógeno por la acción de la creatininasa, la

creatinasa y la sacrosina oxidasa. Catalizado por la peroxidasa, el peróxido de

hidrógeno liberado reacciona con la 4-aminofenazona y el HTIBa para formar

cromógeno de quinonaimina. La intensidad cromática del cromógeno de

quinonaimina formado es directamente proporcional

a la concentración de creatinina en la mezcla de reacción.

63

|

Durante la incubación en R1, la creatinina de la muestra es destruida por la

creatinasa, SOD y catalasa.

a) ( ácido 2,4,6-triyodo-3-hidroxibenzoico)


muestras.


Suero.


Orina.

No emplear aditivos para recoger la orina. Pero si se requiere un conservante para

otros analitos para recoger la orina, sólo puede aceptarse el ácido clorhídrico (14-

47 mmol/L de orina, p. ej. 5 mL de HCI al 10 % ó 5 mL de HCI al 30 % por litro de

orina) o bien el ácido bórico (81 mmol/L, p. ej. 5 g por litro de orina).


7 días a 2-8 °C

3 meses a (-15)-(-25) °C

Estabilidad en orina (sin conservante):

2 días a 15-25 °C

6 días a 2-8 °C

6 meses a (-15)-(-25) °C

Estabilidad en orina (con conservante):

3 días a 15-25 °C

8 días a 2-8 °C

64

|

3 semanas a (-15)-(-25) °C



S2: C.f.a.s.


Frecuencia de calibración

- al cabo de 4 semanas dentro de laestabilidad (Calibración de blanco)

Calibración a 2 puntos



Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a ID/MS

(espectrometría de masa con dilución isotópica).

CálculoLos analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la

concentración de analito de cada muestra.


μmol/L x 0.0113 = mg/dL

μmol/L x 0.001 = mmol/L

Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

creatinina sérica de 80 μmol/L (0.9 mg/dL) y de creatinina en orina de 2500 μmol/L

(28.3 mg/dL).

Suero/plasma


conjugada y de 20 para la bilirrubina sin conjugar (concentración de la bilirrubina

conjugada: aprox. 257 μmol/L ó 15 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin

conjugar: aprox. 342 μmol/L o 20 mg/dL).

65

|



Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 2000. No

existe una correlación concluyente entre el índice L (correspondiente a la turbidez)

y la concentración de triglicéridos.

Ácido ascórbico: Valores de ácido ascórbico inferiores a 1.70 mmol/L ó 300 mg/L

no interfieren en el test.



Excepciones: La rifampicina, la levodopa y el dobesilato de calcio (p.ej. Dexium)

pueden acarrear resultados falsamente reducidos de creatinina. La N-etilglicina en

concentraciones terapéuticas y la DL-prolina en concentraciones ≥ 1 mmol/L (≥

115 mg/L) deparan valores falsos elevados.

Sin interferencias significativas hasta una concentración de creatina de 4 mmol/L

(524 mg/L).

Las muestras hemolizadas de neonatos, niños o adultos con valores de la

hemoglobina fetal ≥ 600 mg/dL interfieren en el test.

En concentraciones terapéuticas, la 2–fenil-1,3–indandiona (fenindiona) interfiere

en el test.

Si la velocidad de filtración glomerular (VFG) se estima según la fórmula de

Schwartz, se pueden obtener resultados falsos elevados.

Orina




hemoglobina conjugada de 621 μmol/L (1000 mg/dL).

El ácido ascórbico < 22.7 mmol/L (< 4000 mg/L), la glucosa < 120 mmol/L (< 2.162

mg/dL) y el urobilinógeno < 676 μmol/L (< 40 mg/dL) no interfieren en el test.



66

|

Excepciones: El dobesilato de calcio (p.ej. Dexium), Levodopa y la α-metildopa

pueden acarrear resultados falsamente reducidos de creatinina.

Altas concentraciones de ácido homogentísico en muestras de orina provocan

resultados falsos.

Intervalo de mediciónSuero/plasma

5-2700 μmol/L (0.06-30.5 mg/dL)



repetición del ciclo es de 1:4. Los resultados de las muestras diluidas usando la


Orina

100-54000 μmol/L (1.1-610 mg/dL)



repetición del ciclo es de 1:2.5. Los resultados de las muestras diluidas usando la

función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 2.5.


Adultos

Mujeres 45-84 μmol/L (0.51-0.95 mg/dL)

Hombres 59-104 μmol/L (0.67-1.17 mg/dL)

Niños

Neonatos (prematuros) 29-87 μmol/L (0.33-0.98 mg/dL)

Neonatos (a término) 27-77 μmol/L (0.31-0.88 mg/dL)

2-12 m 14-34 μmol/L (0.16-0.39 mg/dL)

de 1 - < 3 años 15-31 μmol/L (0.18-0.35 mg/dL)



67

|





Orina

1ra orina de la mañana

Mujeres 2.55-20.0 mmol/L (29-226 mg/dL)

Hombres 3.54-24.6 mmol/L (40-278 mg/dL)

Orina de 24 horas:

Mujeres 6-13 mmol/24 (720-1510 mg/24 h)

Hombres 9-19 mmol/24 h (980-2200 mg/24 h)

Aclaramiento de creatinina 66-143 mL/min

2.13 Creatinkinasa (CK)

CaracterísticasLa enzima CK es un dímero compuesto de subunidades procedentes del músculo

(M) o del cerebro (B). Se han identificado tres isoenzimas: MM, MB y BB. La CK

sérica normal está formada principalmente por la isoenzima CK-MM. Se observan

niveles séricos elevados de CK en las enfermedades del músculo esquelético,

especialmente en la distrofia muscular. La fracción CK-MB se encuentra sobre

todo en el tejido miocárdico y su presencia se detecta, por regla general, en las 48

horas siguientes al inicio de un infarto de miocardio. La determinación de la CK

total y la CK-MB en el diagnóstico del infarto de miocardio constituye la aplicación

individual más importante de la medición de la CK en química clínica. La actividad

de la CK sérica también está aumentada en los estados posteriores a isquemia

cerebral, enfermedades cerebrovasculares agudas y traumatismos craneales.

En 1977, la Sociedad Alemana de Química Clínica (DGKC) y en 1989 la

Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) recomendaron métodos

68

|

estandarizados para determinar la CK con reacción inversa y activación por NAC.

El presente test cumple con las recomendaciones de la IFCC y de la DGKC pero

ha sido mejorado en cuanto al rendimiento y la estabilidad.

Test UV

La velocidad de formación de NADPH es directamente proporcional a la actividad

catalítica de la CK. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.

Cantidades equimolares de NADPH y ATP se forman simultáneamente. La

velocidad de formación de NADPH medida por fotometría es directamente

proporcional a la actividad de CK.

Precauciones


muestras.

69

|


mencionados.

Suero (sin hemólisis). El suero sin hemolizar es la muestra más adecuada y

recomendada por la IFCC.

Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio.

Advertencia: Se pueden obtener resultados divergentes en suero y plasma debido

a diferentes grados de hemólisis como consecuencia del procedimiento de

obtención de muestras.




S2: C.f.a.s.






la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que proporciona



Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la

creatina quinasa de 140 U/L (2.34 μkat/L).




70

|


de hemoglobina: aproximadamente 124 μmol/L o 200 mg/dL). La magnitud de la

interferencia puede variar según el contenido exacto de eritrocitos.

Lipemia (Intralipid):8 Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000. No


turbidez) y la concentración de triglicéridos. En caso de muestras altamente

lipémicas (índice L > 1000) puede producirse un aviso de alta absorbancia.

Seleccionar el tratamiento de muestra diluida para el reprocesamiento automático.


común en concentraciones terapéuticas.9,10 Excepción: El fármaco Cyanokit

(hidroxocobalamina) puede causar interferencias con los resultados.



Valores teóricosLos intervalos de referencia dependen en gran medida del grupo de pacientes y de

la situación clínica específica.

Para individuos sanos según Klein et al.:12

CK μkat/L U/L

Hombres 0.65-5.14 39-308

Mujeres 0.43-3.21 26-192


CK μkat/L U/L

Hombres < 3.20 < 190

Mujeres < 2.85 < 170


CK-MB μkat/L U/L

Hombres/mujeres < 0.42 < 25

71

|

Infarto de miocardio: La probabilidad de lesión miocárdica es alta si se cumplen las

tres siguientes condiciones:

μkat/L U/L

1 CKhombres> 3.17 > 190

CKmujeres> 2.79 > 167

2 CK-MB > 0.40 > 24

3 La actividad de la CK-MB constituye el 6-25 % de la actividad de la CK total.

Según Tietz:

CK μkat/L U/L

Hombres > 19 años 0.33-3.34 20-200

Mujeres > 19 años 0.33-3.01 20-180

Para garantizar una alta sensibilidad en el diagnóstico de cardiopatías, se

recomienda emplear los valores indicados por Tietz. La eventual pérdida de

especificidad diagnóstica puede compensarse determinando adicionalmente la

CK-MB y/o la troponina T. Si existe la sospecha de un infarto de miocardio, se

recomienda seguir las propuestas estratégicas indicadas en el documento de

consenso de cardiólogos europeos y americanos.

Si, a pesar de la sospecha de infarto de miocardio, los valores registrados se

mantienen por debajo de los límites indicados, puede tratarse de un infarto

reciente. En tales casos deberán repetirse las determinaciones al cabo de 4 horas.

En personas sanas, los valores de CK pueden variar según el grado de ejercicio

físico y la raza.



valores

72

|

CreatinKinasa Fracción MB

CaracterísticasLa creatina quinasa (CK) aparece en forma de tres isoenzimas que son dímeros

compuestos por dos tipos de subunidades monoméricas. Las isoenzimas

comprenden las tres combinaciones posibles de los monómeros, M (derivado del

músculo esquelético) y B (derivado del cerebro), según lo representa la

denominación MM, MB y BB.

Si bien son numerosos los órganos que contienen CK, las isoenzimas se

distribuyen de forma diferente en cada uno. El músculo esquelético es muy rico en

isoenzima MM, mientras que el cerebro, el estómago, el intestino, la vesícula y los

pulmones contienen principalmente la isoenzima BB. La isoenzima MB se

determina sólo en el tejido miocárdico en cantidades considerables (del 15 al 20

%). Así, la actividad sérica total de CK se encuentra aumentada en varias

enfermedades. Esta falta de especificidad constituye una limitación de su valor

diagnóstico. Sin embargo, las notables diferencias existentes entre los patrones

isoenzimáticos en los diferentes órganos han convertido a la CK en una de las

enzimas más útiles para el diagnóstico del infarto agudo de miocardio. La CK-MB

aparece en el suero indicando de esta manera su presencia exclusiva en el tejido

miocárdico.

En el laboratorio clínico, la determinación en serie de las isoenzimas CK se aplica

con mayor frecuencia para corroborar el diagnóstico del infarto de miocardio.

Tras la inmunoinhibición de la subunidad CK-M con anticuerpos, la actividad de la

CK-B se determina mediante un método estandarizado para la determinación de

CK con reacción inversa y activación por NAC, según lo recomendado por la

Sociedad Alemana de Química Clínica (DGKC) en 1977 y por la Federación

Internacional de Química Clínica (IFCC) en 2002. El presente test cumple con las

recomendaciones de la IFCC y la DGKC pero ha sido mejorado en cuanto al

funcionamiento y la estabilidad.

Principio del testTest UV inmunológico

73

|

Las subunidades CK-M son inhibidas por anticuerpos específicos. Puesto que la

CK-BB pocas veces aparece en suero, se considera que la activida de la CK-B se

deriva de la CK-MB presente en la muestra. La actividad de las subunidades CK-B

se determina y multiplica por 2 para poder estimar la actividad de la CK-MB. La

CK es activada por la N-acetilcisteína (NAC). En una reacción primaria, la CK

activada cataliza la desfosforilación del fosfato de creatina para formar creatina y

ATP. En una reacción de acoplamiento catalizada por la hexoquinasa (HK), la

glucosa es fosforilada por ATP para formar D-glucosa-6-fosfato (G6P).

Finalmente, la glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (G6PDH) cataliza la oxidación de

G6P por NADP+ para formar el 6-fosfogluconato y NADPH.

La velocidad de formación de NADPH es directamente proporcional a la actividad

catalítica de la CK-MB. Se determina por fotometría midiendo el aumento de la

absorbancia.

Medidas de precaución y advertenciasSólo para el uso diagnóstico in vitro.

74

|


muestras.


mencionados.

Suero (sin hemólisis). El suero sin hemolizar es la muestra más adecuada y

recomendada por la IFCC.

Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio

En concentraciones normales, la heparina de litio no interfiere con el presente test

aunque la IFCC previene contra su uso.

No emplear plasma preparado con otros anticoagulantes.


Estabilidad en suero: 98 horas a 20-24 °C

8 días a 2-8 °C

4 semanas a -20 °C

Estabilidad en plasma con heparina: 98 horas a 20-24 °C

5 días a 2-8 °C

8 días a -20 °C


75

|

S2: C.f.a.s. CK-MB






Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la formulación

original de la IFCC3 con adición de anticuerpos empleando pipetas calibradas

junto con un fotómetro manual obteniendo valores absolutos y la absortividad

específica de sustratos.


Limitaciones del análisis - InterferenciasSe recomienda determinar la actividad total de la CK en la muestra antes de

efectuar el test de CK-MB. La cantidad de anticuerpos anti-subunidad CK-M

humana en el reactivo CK-MB es suficiente para inhibir completamente una

actividad de CK-MM de hasta 2000 U/L. Si la actividad total de la CK excede 2000

U/L, la muestra requiere ser diluida porque no puede garantizarse la inhibición

completa de la subunidad CK-M. El método CK-MB no determina únicamente la

CK-MB, sino también la CK-BB, la CK mitocondrial o la IgG-CK-BB presentes en

el suero de pacientes. Estas últimas fuentes de actividad de la CK-B pueden

distinguirse por la elevación persistente de la CK-MB durante un período de

tiempo prolongado. La presencia de isoenzimas CK atípicas puede confirmarse

por electroforesis.


creatina quinasa MB de 25 U/L (0.42 μkat/L).



conjugada: aproximadamente 684 μmol/L o 40 mg/dL; concentración de la

bilirrubina sin conjugar: aproximadamente 342 μmol/L o 20 mg/dL).

76

|





turbidez) y la concentración de triglicéridos. En caso de muestras lipémicas (índice

L > 100) puede producirse un aviso de alta absorbancia. Seleccionar el

tratamiento de muestra diluida para el reprocesamiento automático.

En pacientes predispuestos a formar macro-CK pueden medirse valores altos de

CK-MB no plausibles respecto del valor de la CK total, porque las macroformas se

componen en su mayoría de subunidades de CK-B. Ya que estos pacientes

generalmente no han sido víctimas de un infarto de miocardio, se requieren

medidas diagnósticas adicionales.

Adenilato quinasa: La adenilato quinasa (AK) puede causar interferencias

positivas. La AK en sangre puede provenir de los eritrocitos, los músculos y el

hígado. A fin de reducir a un mínimo la interferencia por AK, el reactivo incluye

AMP y Ap5A. Esta mezcla de AMP/Ap5A provoca que se inhiba el 97 % de la AK

proveniente de los eritrocitos y los músculos, así como el 95 % de la AK

proveniente del hígado. Una leve actividad residual de la AK no influye el análisis

de la CK total, si bien puede afectar las actividades bajas de CK-MB.


común en concentraciones terapéuticas. Excepciones: En concentraciones

fisiológicas, la sulfasalazina o la sulfapiridina plasmáticas pueden llevar a

resultados falsos.





otros exámenes.

77

|



En este caso, las muestras se diluyen de 1:1.99. Los resultados de las muestras

diluidas por la función de repetición se multiplican automáticamente por el factor

1.99.

Valores teóricosLos intervalos de referencia dependen en gran medida del grupo de pacientes y de

la situación clínica específica.

Para personas sanas: Intervalo de referencia (37 °C) según Klein et al. y valores

de consenso:

< 25 U/L (< 0.421 μkat/L)

Para el diagnóstico del infarto de miocardio mediante una combinación entre CK y

actividad de la CK-MB, con un valor consensual de CK basado en experiencias a

largo plazo:

1. CK hombres> 190 U/L (3.12 μkat/L)

CKmujeres> 167 U/L (2.87 μkat/L)

2. CK-MB > 24 U/L (0.40 μkat/L)

3. La actividad de la CK-MB constituye el 6-25 % de la actividad de la CK total.

En caso de sospechar un infarto de miocardio, proceder según las estrategias

diagnósticas propuestas en el documento de consenso de cardiólogos europeos y

estadounidenses.

Si, a pesar de la sospecha de infarto de miocardio, los valores registrados se

mantienen por debajo de los límites indicados, puede tratarse de un infarto

reciente. En este caso deberían repetirse las determinaciones al cabo de 4 horas.

78

|

Dimero D

CaracterísticasLa trombina convierte el fibrinógeno en fibrina soluble desdoblando los

fibrinopéptidos A y B. Los monómeros de fibrina se polimerizan espontáneamente.

El factor XIII activo reticula dos dominios D y genera un coágulo de fibrina sólido.

Así se forma un nuevo determinante antigénico resistente a la plasmina (el dímero

D). Por consiguiente, los fragmentos que contienen dímero D se forman cuando la

plasmina disuelve un coágulo de fibrina.

Una gran parte de los productos de degradación de la fibrina son olígomeros X de

alto peso molecular. El test Tina-quant D-Dimer tiene una alta afinidad con estos

productos de degradación de alto peso molecular. La degradación completa hasta

obtener moléculas de dímero D tiene lugar solamente in vitro o bajo terapia de

lisis.

El dímero D constituye un marcador de la activación de la coagulación altamente

sensible. Si se encuentran valores de dímero D inferiores al valor de corte, la

trombosis venosa profunda de las extremidades inferiores (TVP) o bien la embolia

pulmonar (EP) pueden excluirse con alta sensibilidad.

Se recomienda no emplear nunca el resultado de dímero D de forma aislada, sino

combinándolo siempre con una herramienta de evaluación clínica de la

probabilidad, como por ejemplo la escala de Wells. Se recomienda excluir la

TVP/EP únicamente si su probabilidad clínica es baja o moderada (no alta) y el

resultado de la prueba Tina-quant D-Dimer es normal (< 0.5 μg UEF/mL).

Es un hecho conocido que pacientes con TVP distal o EP subsegmental/periférica

pueden presentar valores normales en el test Tina-quant D-Dimer. La relevancia

clínica de este tipo de trombos de pequeño tamaño sigue sin ser elucidada. Los

buenos resultados obtenidos en aquellos estudios en los que los pacientes fueron

tratados a partir del resultado obtenido en el test Tina-quant D-Dimer con un

seguimiento trimestral hacen suponer que estos trombos de pequeño tamaño no

tienen consecuencias adversas para los pacientes.

79

|

Los productos de degradación de la fibrina constituyen un marcador sensible para

la coagulación intravasal diseminada (CID)/coagulopatía de consumo. El control

de la evolución de la concentración de los productos de degradación de la fibrina

se emplea para

• confirmar o refutar un diagnóstico de sospecha

• estimar el riesgo de pacientes con CID

• controlar un tratamiento ya iniciado

Más allá de su importancia para el diagnóstico de la TVP, EP y CID, los valores de

dímero D pueden reflejar otras causas asociadas a la formación de fibrina como el

trauma, complicaciones en el embarazo, enfermedades malignas o anomalías

vasculares. Así, los niveles elevados de dímero D deben ser interpretados en el

contexto de las posibles dolencias subyacentes y sus síntomas clínicos.

Principio del testTest inmunoturbidimétrico potenciado por partículas.

Las partículas de látex de tamaño uniforme, revestidas con anticuerpos

monoclonales (fragmentos F (ab’)2) se dirigen contra el epítopo del dímero D.

Cuando se añaden muestras que contienen dímero D se forman complejos

antígeno-anticuerpo que producen un aumento de la turbidez en la mezcla de

reacción. El cambio de la absorbancia en función del tiempo depende de la

concentración de los epítopos del dímero D contenidos en la muestra. El

precipitado se determina por turbidimetría.


muestras.


Plasma citratado

Recoger la sangre venosa en tubos estándar de muestra para análisis de

coagulación.

80

|

También puede emplearse plasma tratado con heparina de litio 2 y EDTA bi y

tripotásico. A diferencia de su comportamiento en tubos citratados, la muestra no

se diluye al emplear tubos conteniendo heparina o EDTA. Por esta razón, los

valores de dímero D obtenidos en muestras de plasma heparinizado o EDTA son,

promedialmente, en un 19 % superiores en todo el intervalo de medición. Sin

embargo, si se adaptan los valores de calibración y de control, se obtienen los

mismos valores para todo el material de muestra.

CUIDADO: Para evitar valores erróneos en muestras de pacientes, se recomienda

efectuar las determinaciones de dímero D uniformemente en plasma citratado o en

plasma con heparina/EDTA.

Descongelar las muestras congeladas a 37° C y a continuación, mezclarlas bien.

Antes de realizar el test, dejar reposar 15 minutos a temperatura ambiente y a

continuación, analizar inmediatamente. Para los análisis de coagulación, no volver

a congelar una muestra descongelada.

Emplear las muestras sin diluir.


Estabilidad: 8 horas a 15-25 °C

4 días a 2-8 °C

6 meses a (-15)-(-25) °C

CalibraciónCalibradores S1-S6: D-Dimer Gen.2 Calibrator Set

Modo de calibración Spline

Frecuencia de calibraciones Calibración completa


- cada 6 meses si se trata del mismo lote de reactivos


Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente

al método Asserachrom D-Dimer.28

Factores de conversión: μg UEF/mL = mg UEF/L

μg UEF/mL x 1000 = ng UEF/mL

81

|


concentración de dímero D de 0.5 μg de UEF/mL.



conjugada: aprox. 1026 μmol/L ó 60 mg/dL y de la bilirrubina sin conjugar: aprox.

513 μmol/L ó 30 mg/dL).



Lipemia: Sin interferencias significativas hasta el índice L de 1000.

Existe una mínima correlación entre el índice L (correspondiente a la turbidez) y la

concentración de triglicéridos. Los factores reumatoides hasta 100 UI/mL no

interfieren en el test. Las concentraciones de heparina hasta 100 UI/mL no

interfieren en el test.

Efecto prozona (high-dose hook): No se produjeron resultados falsos hasta una

concentración de dímero D de 220 μg UEF/mL.



Otros: Durante la terapia de lisis en caso de altas concentraciones de fragmentos

de dímero D se pueden obtener mediciones falsas reducidas.





análisis.

Valores teóricos< 0.5 μg de equivalente de fibrinógeno/mL (μg UEF/mL).

El equivalente de fibrinógeno indicado se basa en la cantidad de fibrinógeno

empleado en la preparación del estándar original de Asserachrom.

82

|

Límites e intervalosIntervalo de medición0.15-9.00 μg UEF/mL


repetición del ciclo. En muestras con concentraciones superiores, la función de

repetición del test disminuye el volumen de la muestra por el factor 2.4. Los

resultados son multiplicados automáticamente por este factor.

Factor Reumatoide

GeneralidadesLos factores reumatoideos son un grupo heterogéneo de autoanticuerpos dirigidos

contra los determinantes antigénicos de la región Fc de las moléculas de IgG.

Desempeñan un papel importante en el diagnóstico de la artritis reumatoidea, pero

también pueden aparecer en otras enfermedades reumáticas inflamatorias, así

como en diferentes enfermedades no reumáticas. Asimismo pueden manifestarse

en personas clínicamente sanas mayores de 60 años. A pesar de estas

consideraciones, la prueba de los factores reumatoides constituye un criterio

diagnóstico para la clasificación de la artritis reumatoide según el Colegio de

Reumatología de los EE.UU.

(American College of Rheumatology). Los autoanticuerpos se encuentran en

inmunoglobulinas de todo tipo, sin embargo, los métodos corrientes se limitan

generalmente a comprobar los factores reumatoideos del tipo IgM.

El método clásico de determinación de los factores reumatoideos es la

aglutinación con eritrocitos ovinos sensibilizados para IgG o bien con partículas de

látex. Los problemas específicos de estos métodos semicuantitativos son su

escasa precisión y reproducibilidad de laboratorio a laboratorio, así como su difícil

estandarización. Por esta razón, se han desarrollado nuevos métodos de

determinación tales como la nefelometría, la turbidimetría, los

enzimoinmunoanálisis y los radioinmunoanálisis. El test RF de Roche se basa en

83

|

el principio de aglutinación inmunológica con intensificación de la reacción por

látex.


El antígeno IgG inactivado por calor fijado a partículas de látex, reacciona con los

anticuerpos anti-FR de la muestra formando un complejo antígeno-anticuerpo que

se mide turbidimétricamente después de la aglutinación.


muestras.


Suero



Estabilidad: 24 horas a 15-25 °C

3 días a 2-8 °C

4 semanas a (-15)-(-25) C (congelar sólo una vez)


S2-6: Preciset RF

Modo de calibración RCM

Frecuencia de calibraciones Calibración completa

- después de 180 días (observe la fecha de caducidad)



Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado con el estándar 64/2 de la

OMS

Limitaciones del análisis - Interferencias

84

|

Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración del

FR de 14 UI/mL.



conjugada: aprox. 40 mg/dL ó 624 μmol/L y de la bilirrubina no conjugada: aprox.

60 mg/dL ó 1026 μmol/L).








Efecto prozona (high-dose hook): Aplicando la verificación cinética y con

concentraciones de FR hasta 6000 UI/mL, no hubo resultados erróneos sin aviso.



Existe la posibilidad de que otras sustancias y/o factores interfieran con el

presente test y causen resultados poco fiables.



análisis.

Límites e intervalosIntervalo de medición10-130 UI/mL

Determinar las muestras con concentraciones superiores por la función de




85

|

Valores teóricos< 14 UI/mL

Fosfatasa Alcalina

CaracterísticasLa fosfatasa alcalina consta de cuatro genotipos estructurales en suero: el tipo de

origen hepático, óseo y renal, el tipo intestinal, el tipo placentario y la variante de

las células germinales. La fosfatasa alcalina se encuentra en los osteoblastos, los

hepatocitos, los riñones, el bazo, la placenta, la próstata, los leucocitos y el

intestino delgado. El tipo de origen hepático, óseo y renal es de particular

importancia.

Se registran valores elevados de fosfatasa alcalina en todas las formas de la

colestasis, especialmente en la ictericia obstructiva. Su actividad también está

elevada en enfermedades del esqueleto tales como la enfermedad de Paget, el

hiperparatiroidismo, el raquitismo, la osteomalacia, así como en fracturas y

tumores malignos. En niños y adolescentes se observa frecuentemente un fuerte

incremento de la actividad de la fosfatasa alcalina, pues cuando el crecimiento

óseo se acelera, la actividad de los osteoblastos aumenta.

El método de determinación fue descrito primeramente por King y Armstrong,

modificado por Ohmori, Bessey, Lowry y Brock, y finalmente optimizado por

Hausamen y cols. En 1983, la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC)

recomendó un método estandarizado para determinar la fosfatasa alcalina con una

concentración de substrato óptima y el empleo de 2-amino-2-metil-1-propanol

como tampón y los cationes magnesio y cinc. El test aquí descrito ha sido

desarrollado a partir de estas recomendaciones y ha sido mejorado en cuanto al

rendimiento y la estabilidad. La prueba ha sido estandarizada frente a la fórmula

de referencia de la IFCC indicada más arriba.

Principio del testTest colorimétrico según un método estandarizado

86

|

En presencia de iones de magnesio y cinc, las fosfatasas desdoblan el

p-nitrofenilfosfato a fosfato y p-nitrofenol.

El p-nitrofenol liberado es directamente proporcional a la actividad catalítica de la

ALP. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.

Medidas de precaución y advertencies


muestras.


mencionados.

Suero.

87

|




7 días a 2-8 °C

2 meses a (-15) -(-25) °C


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método fue estandarizado frente a la fórmula propuesta

por la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que proporciona



Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la

fosfatasa alcalina de 100 U/L (1.67 μkat/L).










común empleando concentraciones terapéuticas.

88

|





otros exámenes.



En este caso, las muestras se diluyen de 1:5. Los resultados de las muestras

diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente por el

factor 5.

Valores teóricos(Valores medidos a 37 °C)

Adultos

Hombres (n = 221) 40-129 U/L (0.67-2.15 μkat/L)

Mujeres (n = 229) 35-104 U/L (0.58-1.74 μkat/L)

Valores de consenso

Hombres 40-130 U/L (0.67-2.17 μkat/L)

Mujeres 35-105 U/L (0.58-1.75 μkat/L)

Niños)

De 1 día de edad < 250 U/L (< 4.17 μkat/L)

De 2-5 días de edad < 231 U/L (< 3.84 μkat/L)

De 6 días-6 meses de edad < 449 U/L (< 7.49 μkat/L)

De 7 meses-1 año de edad < 462 U/L (< 7.69 μkat/L)

De 1-3 años de edad < 281 U/L (< 4.67 μkat/L)


89

|


De 13-17 años de edad

(Mujeres)

< 187 U/L (< 3.11 μkat/L)

De 13-17 años de edad

(Hombres)

< 390 U/L (< 6.51 μkat/L)

a) Calculado a partir de intervalos de referencia publicados para el método

ALP opt. (DGKC) empleando un factor de 0.417 derivado de una comparación de

métodos.

Fósforo

CaracterísticasEl 88 % del fósforo que se encuentra en el organismo se localiza en los huesos en

forma de fosfato cálcico como apatito Ca2 + [Ca3(PO4)2]32-. El calcio restante

participa en el metabolismo intermediario de los carbohidratos y se halla en

sustancias fisiológicamente importantes como los fosfolípidos, los ácidos nucleicos

y el ATP. En la sangre, el fósforo está presente en forma de fosfato inorgánico y

ácido fosfórico fijado orgánicamente. La pequeña proporción de fósforo orgánico

extracelular existente se halla casi exclusivamente en forma de fosfolípidos.

El fósforo y el calcio se encuentran en la sangre en una relación de 6 a 10.

El aumento de la concentración de fósforo provoca una disminución del nivel de

calcio, mecanismo que se ve influido por una interacción entre la parathormona y

la vitamina D. Así, el hipoparatiroidismo, la intoxicación con vitamina D y la

insuficiencia renal con escasa filtración glomerular de fósforo provocan

hiperfosfatemia. La hipofosfatemia acompaña el raquitismo, el hiperparatiroidismo

y el síndrome de Fanconi.

El fósforo inorgánico se determina preferentemente a partir de la formación de

fosfomolibdato de amonio con posterior reducción a azul de molibdeno.

90

|

Este método tiene el inconveniente que la estabilidad de los reactivos suele ser

problemática. El método aquí presentado se basa en la reacción del fosfato con

molibdato de amonio para formar fosfomolibdato de amonio sin reducción. La

adición de un acelerador permite obtener una reacción más rápida y la aplicación

de un blanco de muestra proporciona resultados más precisos.

Principio del testMétodo por radiación ultravioleta con molibdato.

En presencia de ácido sulfúrico, el fosfato inorgánico forma un complejo de

fosfomolibdato de amonio con el molibdato de amonio que se expresa con la

fórmula (NH4)3[PO4(MoO3)12].

La concentración del fosfomolibdato formado es directamente proporcional a la

concentración de fosfato inorgánico y se mide fotométricamente.

Obtención y preparación de las muestras

91

|

Emplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las

muestras.


mencionados.

Suero


Orina

Recoger la orina en recipientes sin detergente. Una vez recogida la orina,

acidificar con ácido clorhídrico (pH < 3).

Estabilidad en suero/plasma: 24 horas a 15-25 °C

4 días a 2-8 °C

1 año a (-15)-(-25) °C

Estabilidad en orina:

Orina de 24 horas: 6 meses a 2-8 °C (muestras acificadas)

Guardar en el refrigerador mientras se recoge.

Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el Ensayo


S2: C.f.a.s.



• Tras cambiar de lote de reactivos


Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente al material primario

de referencia NERL.


mmol/L x 31 = mg/L

mg/L x 0.0323 = mmol/L

92

|

Limitaciones del análisis - interferencias6Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

fosfato de 0.87 mmol/L (2.7 mg/dL).

Suero/plasma





Hemólisis: Se produce una interferencia positiva significativa a un índice H > 300


Nota: Esta interferencia se debe al fosfato inorgánico producido por acción de la

fosfatasa sobre el fosfato orgánico, ambos liberados de los eritrocitos tras

hemólisis.





común empleando concentraciones terapéuticas.

Excepción: Los fosfolípidos contenidos en diversas formulaciones farmacéuticas

liposomales (p.ej. AmBisome) pueden ser hidrolizados por el pH ácido del test

llevando a valores elevados de fosfato.

Orina





otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de medición

93

|

Suero/plasma

0.10-6.46 mmol/L (0.31-20.0 mg/dL)



muestras diluidas por la función de repetición se multiplican automáticamente por

el factor 2.

Orina

1.1-92 mmol/L (3.4-285 mg/dL)



muestras diluidas por la función de repetición se multiplican automáticamente por

el factor 2.


Adultos

0.81-1.45 mmol/L (2.5-4.5 mg/dL)

Niños:

Edad Hombres Mujeres

mmol/L (mg/dL) mmol/L (mg/dL)

1-30 días 1.25–2.25 (3.9–6.9) 1.40–2.50 (4.3–7.7)

1–12 m 1.15–2.15 (3.5–6.6) 1.20–2.10 (3.7–6.5)

1–3 años 1.00–1.95 (3.1–6.0) 1.10–1.95 (3.4–6.0)

4–6 años 1.05–1.80 (3.3–5.6) 1.05–1.80 (3.2–5.5)

7–9 años 0.95–1.75 (3.0–5.4) 1.00–1.80 (3.1–5.5)

10–12 años 1.05–1.85 (3.2–5.7) 1.05–1.70 (3.3–5.3)

13–15 años 0.95–1.65 (2.9–5.1) 0.90–1.55 (2.8–4.8)

16–18 años 0.85–1.60 (2.7–4.9) 0.80–1.55 (2.5–4.8)

Orina

94

|

1a orina de la mañana: 13-44 mmol/L (40-136 mg/dL)

Orina de 24 horas: 13-42 mmol/d (0.4-1.3 g/d

Gamma Glutamiltransferasa (GGT)

CaracterísticasLa γ-glutamiltransferasa contribuye al diagnóstico y seguimiento de las

enfermedades hepatobiliares. La actividad enzimática de la GGT constituye

frecuentemente el único parámetro cuyos valores aumentan en este tipo de

enfermedades y es considerado como uno de los indicadores más sensibles.

Además, la prueba de la γ-glutamiltransferasa es un test sensible para cribar el

alcoholismo encubierto. En el suero de pacientes bajo medicación a largo plazo

con fenobarbital y fenitoína también se detectan actividades aumentadas de GGT.

En 1969, Szasz describió la primera determinación cinética de la GGT en suero

empleando la γ-glutamil-p-nitroanilida como substrato y la glicilglicina como

aceptor. A fin de sortear el problema presentado por la escasa solubilidad de

la-γ-glutamil-p-nitroanilida, Persijn y van der Slik investigaron varios derivados del

compuesto para hallar que la estabilidad y solubilidad del sustrato soluble en agua

L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida son superiores. Los resultados del test se

correlacionan con los obtenidos con el sustrato original.

En 2002, la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) recomendó el

procedimiento estandarizado para determinar la GGT, que incluyen una

concentración de sustrato optimizada, el empleo de NaOH, el tampón de

glicilglicina y una muestra iniciadora de la reacción. El reactivo GGT líquido

cumple con la formulación recomendada por Szasz, si bien su estabilidad y

funcionamiento han sido mejorados. El test ha sido estandarizado de forma

opcional frente al método original de la IFCC y de

Szasz. Los datos de funcionamiento e informaciones aquí presentados son

independientes de la estandarización.

95

|

Principio del test Método enzimático, colorimétrico La γ-glutamiltransferasa transfiere el grupo

γ-glutamílico de L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida a la glicilglicina.

La cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoato liberada es proporcional a la actividad de

la GGT en la muestra. Se determina por fotometría midiendo el aumento de la

absorbancia.


muestras.


Suero: Recoger las muestras de suero en tubos estándar.

Plasma tratado con heparina de litio y EDTA dipotásico



7 días a 2-8 °C

1 año a (-15)-(-25) °C


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente test ha sido estandarizado tanto frente a la formulación

original de la IFCC (de 2002)5 como frente al método GGT publicado por Persijn y

van der Slik (de1976).

96

|

Utilizar el valor apropiado del calibrador para la aplicación correspondiente.


Limitaciones del análisis – interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una actividad de la

γ-glutamiltransferasa de 40 U/L (0.67 μkat/L).


conjugada y de 20 para la bilirrubina no conjugada (concentración de la bilirrubina

conjugada: aprox. 855 μmol/L o 50 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin

conjugar: aproximadamente 342 μmol/L o 20 mg/dL).




No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que corresponde a la




Para el diagnótico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo en

cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de

otros exámenes.




de las muestras diluidas usando la función de repetición del ciclo se multiplican


Valores teóricosEstandarización frente a Szasz (Persijn, van der Slik)

97

|

Hombres 8-61 U/L 0.13-1.02 μkat/L

Mujeres 5-36 U/L 0.08-0.60 μkat/L

Estandarización frente al método IFCC

Estudio del intervalo de referencia a 37 °C (corregido en 2005)

Hombres (n = 216) 10-71 U/L 0.17-1.19 μkat/L

Mujeres (n = 228) 6-42 U/L 0.10-0.70 μkat/L

Valores consensuales (IFCC)16

Hombres < 60 U/L < 1.00 μkat/L

Mujeres < 40 U/L < 0.67 μkat/L

Glucosa

CaracterísticasLa glucosa es el carbohidrato más importante de la sangre periférica que, al

oxidarse, constituye la mayor fuente de energía celular en el organismo.

La glucosa proveniente de la alimentación se convierte a glucógeno para ser

almacenada en el hígado o a ácidos grasos para ser almacenada en el tejido

adiposo. El estrecho intervalo de concentración de la glucosa en sangre

(glucemia) es controlado por numerosas hormonas, siendo las más importantes

las sintetizadas en el páncreas.

La causa más frecuente de hiperglucemia es la diabetes mellitus, producida por

una deficiencia en la secreción o en la acción de la insulina.

Además, existen numerosos factores secundarios que contribuyen a elevar los

niveles de glucemia, incluyendo la pancreatitis, la disfunción tiroidea, la

insuficiencia renal y las hepatopatías.

La hipoglucemia se observa con menor frecuencia. Está causada por estados

tales como el insulinoma, el hipopituitarismo o el exceso de insulina. La

determinación de la glucosa en orina (glucosuria) se utiliza como procedimiento de

cribado de la diabetes y constituye un auxiliar en la evaluación de la glucosuria, la

detección de defectos en los túbulos renales y la gestión de la diabetes mellitus.

La determinación de la glucosa en el líquido cefalorraquídeo se utiliza en la

98

|

evaluación de la meningitis, la implicación neoplásica de las meninges y trastornos

neurológicos.

Principio del testTest por radiación ultravioleta

Método enzimático de referencia empleando hexoquinasa.

La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa a glucosa-6-fosfato por ATP.

En presencia de NADP, la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa oxida el

glucosa-6-fosfato a gluconato-6-fosfato. No se oxidan otros hidratos de carbono.

La velocidad de formación de NADPH durante la reacción es directamente

proporcional a la concentración de glucosa y se determina fotométricamente.


muestras.


Suero.

Plasma tratado con heparina de litio, EDTA dipotásico, EDTA con fluoruro

sódico/disódico, EDTA con fluoruro potásico/disódico, oxalato con fluoruro

sódico/potásico y EDTA con fluoruro sódico/citrato/disódico.

Recoger la sangre por punción venosa con un sistema de tubos al vacío en

individuos que estén en ayunas. La estabilidad de la glucosa en las muestras

depende de la temperatura de almacenamiento, la contaminación bacteriana y la

glucólisis. Separar las muestras de plasma o suero sin conservante (NaF) de las

células o del coágulo dentro del lapso de media hora tras su extracción. Si la

sangre se deja coagular tras su extracción y reposar sin ser centrifugada a

temperatura ambiente, la glucosa en suero disminuye en una tasa promedio de 7

99

|

% por hora (0.28-0.56 mmol/L o 5-10 mg/dL). Esta reducción se debe a la

glucólisis. Ésta puede ser inhibida recogiendo las muestras en tubos que

contienen fluoruro sódico.

Estabilidad (sin hemólisis): 8 horas a 15-25 °C 72 horas a 2-8 °C

Estabilidad en plasma con fluoruro: 6- 3 días a 15-25 °C

Orina.

Utilizar un frasco pardo para recoger la orina. Antes de recoger orina de 24 horas,

añadir 5 mL de ácido acético glacial al frasco para conservar la glucosa. Si las

muestras de orina no se conservan adecuadamente pierden, conservadas a

temperatura ambiente durante 24 horas, hasta el 40 % de su contenido de

glucosa.3 Por esta razón, conservar las muestras en hielo mientras se recogen.

LCR.

El líquido cefalorraquídeo puede contener bacterias u otros componentes

celulares. Por esta razón, las muestras de LCR destinadas a la determinación de

glucosa deben analizarse inmediatamente o conservarse a 4 °C o a -20 °C.



S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a DI/EM.


mmol/L x 0.1802 = g/L



glucosa de 3.9 mmol/L (70.3 mg/dL).

100

|

Suero/plasma











Orina





otros exámenes.

Intervalo de mediciónSuero, plasma, orina y LCR

0.11-41.6 mmol/L (2-750 mg/dL)



muestras diluidas usando la función de repetición se multiplican automáticamente

por el factor 2.

Valores teóricosPlasma

En ayunas 4.11-6.05 mmol/L (74-109 mg/dL)

Orina

1ra orina de la mañana 0.3-1.1 mmol/L (6-20 mg/dL)

101

|

Orina de 24 horas 0.3-0.96 mmol/L (6-17 mg/dL) (orina promedio de 1350 mL/24

h)

Suero, plasma

Adultos 4.11-5.89 mmol/L (74-106 mg/dL)

60-90 años 4.56-6.38 mmol/L (82-115 mg/dL)

> 90 años 4.16-6.72 mmol/L (75-121 mg/dL)

Niños 3.33-5.55 mmol/L (60-100 mg/dL)

Neonatos (1 día) 2.22-3.33 mmol/L (40-60 mg/dL)

Neonatos (> 1 día) 2.78-4.44 mmol/L (50-80 mg/dL)

Orina

Orina de 24 horas < 2.78 mmol/24 h (< 0.5 g/24 h)

Orina aleatoria 0.06-0.83 mmol/L (1-15 mg/dL)

LCR

Niños 3.33-4.44 mmol/L (60-80 mg/dL)

Adultos 2.22-3.89 mmol/L (40-70 mg/dL)

Los valores de glucosa en LCR deberían equivaler al aproximadamente

60 % de los valores en plasma. Para una interpretación clínica adecuada,

compararlos siempre con los valores de plasma obtenidos paralelamente.

Hemoglobina Glicosilada

Características La hemoglobina (Hb), un componente de los eritrocitos, es una proteína de color

rojo formada por cuatro subunidades proteicas de las cuales cada una contiene

una porción hemo. Su función principal es el transporte de oxígeno y de dióxido de

carbono en la sangre. Cada molécula de Hb es capaz de fijar cuatro moléculas de

oxígeno. La Hb consiste en una serie de subfracciones y derivados. Dentro de

este grupo heterogéneo de hemoglobinas, la HbA1c constituye una de las

hemoglobinas glucosiladas, una subfracción formada por la adición de varios

azúcares a la molécula Hb. La HbA1c se forma en dos pasos por la reacción no

enzimática de la glucosa con el grupo amino N-terminal de la cadena β de la

102

|

hemoglobina de adultos normales (HbA). El primer paso es reversible y resulta en

la HbA1c lábil que se reordena en el segundo paso de la reacción para generar la

HbA1c estable.

En los eritrocitos aumenta la cantidad relativa de HbA transformada en HbA1c

estable según la concentración promedio de glucosa en sangre. La conversión a

HbA1c estable se encuentra limitada por la duración de la vida media de los

eritrocitos, de aproximadamente 100 a 120 días. En consecuencia, la

concentración de HbA1c determinada refleja el nivel promedio de glucemia en los

2 a 3 meses previos a la medición. Por eso, la HbA1c permite controlar los niveles

de glucemia a largo plazo en individuos con diabetes mellitus. Las

concentraciones de glucosa más recientes influyen más fuertemente en el nivel de

HbA1c.

La relación aproximada entre la HbA1c y el valor medio de glucemia durante los 2

a 3 meses previos ha sido analizada en numerosos estudios.

En un estudio reciente se obtuvo la siguiente correlación:

Estandarización IFCC

• Glucosa media estimada [mmol/L] = 0.146 x HbA1c (mmol/mol) + 0.834 o

• Glucosa media estimada [mg/dL] = 2.64 x HbA1c (mmol/mol) + 15.03

Estandarización según el DCCT/NGSP7

• Glucosa media estimada [mmol/L] = 1.59 x HbA1c (%) - 2.59 o

• Glucosa media estimada [mg/dL] = 28.7 x HbA1c (%) - 46.7

Si el metabolismo del diabético no se controla adecuadamente, aumenta el riesgo

que sufra complicaciones tales como la nefropatía y la retinopatía diabéticas. Por

indicar el nivel medio de glucemia, la HbA1c proporciona para diabéticos un

pronóstico de la evolución de las complicaciones propias de la enfermedad.

Para el control a largo plazo de la glucemia, generalmente resulta suficiente

determinar la HbA1c cada 3 ó 4 meses. En ciertas situaciones clínicas, como en la

diabetes gestacional o al modificar el tratamiento de forma relevante, puede ser

conveniente medir la HbA1c en intervalos de 2 a 4 semanas.

103

|

Principio del testEl presente método utiliza TTABa) como detergente en el reactivo hemolizante

para eliminar la interferencia producida por los leucocitos (TTAB no lisa los

leucocitos). La muestra no requiere ser pretratada para eliminar la HbA1c lábil.

El ensayo determina todas las variantes de la hemoglobina glucosiladas en el

término N de la cadena ß cuyas regiones reconocibles por anticuerpos sean

idénticas a las de la HbA1c. De este modo, el test puede emplearse para averiguar

tanto el estado metabólico de pacientes con uremia como las hemoglobinopatías

más frecuentes (HbAS, HbAC, HbAE).

a) TTAB = bromuro de tetradeciltrimetilamonio

Hemoglobina A1c

La determinación de HbA1c se basa en el inmunoensayo turbidimétrico de

inhibición (TINIA) para sangre total hemolizada.

▪ Muestra y adición de R1 (tampón/anticuerpo)

La glucohemoglobina (HbA1c) en la muestra reacciona con el anticuerpo anti-

HbA1c para formar complejos solubles antígeno anticuerpo.

Debido a que existe un único punto específico de fijación para el anticuerpo anti-

HbA1c en la molécula de HbA1c, no pueden formarse complejos insolubles.

▪ Adición de R2 (tampón/polihapteno) e inicio de la reacción:

Los polihaptenos reaccionan con los anticuerpos anti-HbA1c excesivos y forman

un complejo anticuerpo-polihapteno insoluble que puede ser determinado

turbidimétricamente.

Hemoglobina

La hemoglobina liberada de la muestra hemolizada es transformada a un derivado

con un espectro de absorción característico y se mide bicromáticamente durante la

fase de preincubación (muestra + R1) de la reacción inmunológica descrita. Por

consiguiente no se requiere un reactivo Hb por separado.

El resultado final se expresa como HbA1 en mmol/mol o HbA1c en % y se calcula

a partir del cociente HbA1c/Hb de la manera siguiente:

Protocolo 1 (HbA1c en mmol/mol según la IFCC):

104

|

HbA1c (mmol/mol) = (HbA1c/Hb) × 1000

Protocolo 2 (HbA1c porcentual según el DCCT/NGSP):HbA1c (%) = (HbA1c/Hb) × 91.5 + 2.15


muestras.


mencionados.

Sangre venosa o capilar anticoagulada o hemolizado.

Los únicos anticoagulantes aceptables son la heparina de litio, el EDTA di y

tripotásico, el fluoruro/EDTA disódico, la heparina sódica y el fluoruro/oxalato

potásico.


7 días a 2-8 °C

6 meses a (-15)-(-25) °C

Congelar sólo una vez. Mezclar la muestra cuidadosamente antes del uso.

Preparación de hemolizado para la aplicación en hemolizado (Este punto del

proceso se realiza automáticamente al interior del equipo Cobas c311)

Calibración de las aplicaciones en sangre total y hemolizado

HbCalibradores S1-S2: C.f.a.s. HbA1c


HbA1cCalibradores S1-S6: C.f.a.s. HbA1c

Modo de calibración Spline

Intervalo de calibraciones Hb y HbA1c: se recomienda efectuar una calibración

completa

- después de 29 días (observe la fecha de caducidad)

105

|



Siempre calibrar las pruebas Hb y HbA1c al mismo tiempo. Desactivar la

calibración automática en caso de control de calidad no exitoso.

Trazabilidad: Este método ha sido estandarizado frente al método de referencia

aprobado por la IFCC para la medición de la HbA1c en sangre humana y puede

transferirse a resultados que pueden rastrearse hasta el método DCCT/NGSP

mediante cálculo.

Nota relativa a las aplicaciones en sangre total y hemolizadoPara estas aplicaciones, los valores de calibrador C.f.a.s. HbA1c concuerdan con

el lote de reactivos. En la respectiva hoja de valores electrónicamente disponible

se indican los valores de calibrador exactos para cada aplicación y cada

combinación de lote de calibrador C.f.a.s. HbA1c y reactivo Tina-quant HbA1c

Gen.3. Introducir el valor asignado al calibrador específico del lote y de la

aplicación. Emplear únicamente el calibrador C.f.a.s. HbA1c apropiado.

La calibración sólo puede efectuarse si el analizador está equipado con el pack de

reactivo cobas c Hemolyzing Reagent Gen.2, 51 mL, Ref. 04528182 190

Cálculo del cociente de la HbA1c

Para calcular el valor de la HbA1c en mmol/mol (IFCC) y el valor de la

HbA1c en % (DCCT/NGSP)

Limitaciones – interferencia para la aplicación en sangre total y hemolizado1. Para el diagnóstico, los valores de la HbA1c en mmol/mol (IFCC) y los valores

de la HbA1c en % (DCCT/NGSP) deben emplearse conjuntamente con la

información obtenida por otros procedimientos diagnósticos y evaluaciones

clínicas.

2. El test está concebido exclusivamente para la medición exacta y precisa de la

HbA1c en mmol/mol (IFCC) y en % (DCCT/NGSP). Por ello, no deben darse a

conocer los resultados individualmente obtenidos para Hb total y HbA1c.

3. Interpretar siempre con gran cautela cualquier tipo de resultado de pacientes

con variantes de Hb. Las hemoglobinas anormales pueden afectar la vida media

106

|

de los eritrocitos o la velocidad de glucosilación en vivo. En estos casos, aun

obteniendo resultados analíticamente correctos, no se dispone de un control del

nivel glucémico equivalente al de personas con hemoglobina normal. No emplear

la HbA1c para diagnosticar la diabetes cuando se sospecha que la presencia de

variantes de Hb (p. ej. HbSS, HbCC o HbSC) influye en la correlación entre el

valor de HbA1c y el control glucémico.

4. Toda causa de disminución de la supervivencia eritrocitaria o de la vida media

de los eritrocitos reducirá la exposición de éstos a la glucosa disminuyéndose el

valor de HbA1c en mmol/mol (IFCC) y en % (DCCT/NGSP) aun cuando el nivel

promedio de glucemia sea elevado en función del tiempo. La reducción de la vida

media de los eritrocitos puede deberse, entre otros, a la anemia hemolítica u otras

enfermedades hemolíticas, a células falciformes de carácter homocigoto, al

embarazo o a hemorragias crónicas o recientes de gran magnitud. Asimismo, las

transfusiones de sangre recientes pueden alterar los valores de HbA1c en

mmol/mol (IFCC) y en % (DCCT/NGSP). Se recomienda interpretar los resultados

de HbA1c de los respectivos pacientes con cautela y no considerarlos para el

diagnóstico de la diabetes mellitus.

5. Este test no detecta la HbF glucosilada, ya que no contiene la cadena beta

glucosilada característica de la HbA1c. Sin embargo, la HbF se mide en el test de

Hb total y por consiguiente, las muestras con altas concentraciones de HbF (> 10

%) pueden producir resultados de HbA1c en mmol/mol (IFCC) y en %

(DCCT/NGSP) inferiores a los previstos.

6. Los valores de la HbA1c en mmol/mol (IFCC) y los valores de la HbA1c en %

(DCCT/NGSP) no son aptos para el diagnóstico de la diabetes gestacional.

7. En casos muy raros de diabetes tipo 1 de evolución rápida, los valores de la

HbA1c aumentan con retraso en comparación con los valores de la glucosa. En

tales casos, la diabetes mellitus debe diagnosticarse en base a las

concentraciones plasmáticas de la glucosa y/o los síntomas clínicos típicos.

Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial.

107

|




Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas con una concentración de

Intralipid de hasta 600 mg/dL. No existe ninguna correlación satisfactoria entre la

concentración de triglicéridos y turbidez.

Glucemia: Sin interferencias significativas hasta una concentración de glucosa de

55.5 mmol/L (1000 mg/dL). No se requieren muestras recogidas en ayunas.

Factores reumatoides: Sin interferencias significativas hasta un nivel de factor

reumatoide de 750 UI/mL.



Otros: Los anticuerpos anti-HbA1c empleados en el presente estuche no producen

reacciones cruzadas con HbA0, HbA1a, HbA1b, hemoglobina acetilada,

hemoglobina carbamilada, albúmina glucosilada ni con HbA1c lábil.



otros exámenes.

Valores teóricosProtocolo 1 (HbA1c en mmol/mol según la IFCC): 29-42 mmol/mol de HbA1c

Protocolo 2 (HbA1c porcentual según el DCCT/NGSP): 4.8-5.9 % de HbA1c

Según las recomendaciones de la

Asociación Americana de Diabetes, los valores superiores a 48 mmol/mol de

HbA1c (IFCC) o 6.5 % de HbA1c (DCCT/NGSP) pueden emplearse para el

diagnóstico de la diabetes mellitus.25,29 Los pacientes con valores de HbA1c

dentro del intervalo de 39-46 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o 5.7-6.4 % de HbA1c

(DCCT/NGSP) corren el riesgo de desarrollar una diabetes.

Si la diabetes no se controla adecuadamente, las concentraciones de HbA1c

pueden alcanzar e incluso superar 195 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o los 20 % de

HbA1c (DCCT/NGSP). Se recomienda la intervención terapéutica a partir de

108

|

niveles de 64 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o 8 % de HbA1c (DCCT/NGSP). Los

diabéticos con niveles de HbA1c inferiores a 53 mmol/mol de HbA1c (IFCC) o del

7 % de HbA1c (DCCT/NGSP) cumplen con los objetivos fijados por la Asociación

Americana de Diabetes.

Los niveles de HbA1c inferiores al intervalo de referencia establecido pueden

indicar un episodio reciente de hipoglucemina, la presencia de variantes de Hb o

bien la reducción de la vida media de los eritrocitos.

HDL Colesterol

CaracterísticasLas lipoproteínas de alta densidad (High Density Lipoproteins, HDL) son

responsables del transporte inverso del colesterol de las células periféricas al

hígado. En el hígado, el colesterol es transformado a ácidos biliares que son

excretados al intestino a través de las vías biliares. El seguimiento del colesterol

HDL en suero es de importancia clínica porque existe una correlación inversa

entre la concentración sérica del colesterol HDL y el riesgo de sufrir

arteriosclerosis. Concentraciones elevadas del colesterol

HDL protegen contra cardiopatías coronarias mientras que concentraciones

disminuidas del colesterol HDL, especialmente en combinación con valores

elevados de triglicéridos, implican un elevado riesgo cardiovascular. Se han

creado estrategias para aumentar el nivel de colesterol HDL con el objeto de tratar

las enfermedades cardiovasculares.

Se dispone de diversos métodos para determinar el colesterol HDL, incluyendo la

ultracentrifugación, la electroforesis y la cromatografía líquida de alta presión

(CLAP), que están basados tanto en la precipitación como en la determinación

directa. Este último método se emplea en la rutina. La determinación directa del

colesterol HDL en muestras de suero ha sido abordada desde numerosas

perspectivas que incluyen el uso de partículas de respuesta magnética como

109

|

combinaciones de polianiones y metales, así como el uso de polietilenglicol (PEG)

con anticuerpos anti-apoproteína B y

anti-apoproteína CIII.

Este método automatizado destinado a la determinación directa del colesterol HDL

en suero y plasma utiliza enzimas modificadas por PEG y sulfato de dextrano. Las

enzimas colesterol esterasa y colesterol oxidasa modificadas por PEG presentan

actividades catalíticas selectivas frente a las fracciones de lipoproteínas

aumentándose la reactividad en el orden siguiente: LDL < VLDL ≈ quilomicrones <

HDL.

Los resultados obtenidos con muestras recogidas después de comer son

ligeramente inferiores a los obtenidos en ayunas. Con el método betaquant se

obtuvieron resultados postprandiales comparables.

El test directo de Roche para la determinación del colesterol HDL cumple con los

objetivos sentados en 1998 por el National Institute of Health (NIH) y del National

Cholesterol Education Program (NCEP) en lo relativo a un funcionamiento

analítico aceptable. Los resultados obtenidos con este método se correlacionan

con aquellos obtenidos por métodos basados en la precipitación y en la

ultracentrifugación.

Principio del test Test colorimétrico enzimático homogéneo.

En presencia de iones de magnesio, el sulfato de dextrano forma complejos

hidrosolubles, selectivamente con LDL, VLDL y quilomicrones resistentes contra

las enzimas modificadas por PEG.

La concentración del colesterol HDL se determina enzimáticamente por la

colesterol esterasa y colesterol oxidasa acopladas con PEG a los grupos amínicos

(aprox. 40 %).

La colesterol esterasa provoca el desdoblamiento de los ésteres de colesterol a

colesterol libre y ácidos grasos.

110

|

En presencia de la peroxidasa, el peróxido de hidrógeno formado reacciona con 4-

aminoantipirina y HSDA para formar un colorante purpúreo azul. La intensidad del

colorante es directamente proporcional a la concentración de colesterol que se

mide fotométricamente.


muestras.


Suero.


El plasma con EDTA produce valores disminuidos.

Es posible emplear muestras recogidas en ayunas o después de comer.

Recoger la sangre empleando un tubo o una jeringa de vacío. Se recomienda

analizar las muestras el mismo día en que fueron recogidas.



30 días a (-60) -(-80) °C

Se comunica que EDTA estabiliza las lipoproteínas.


111

|

S2: C.f.a.s. Lipids





Trazabilidad: Este método ha sido estandarizado frente al método de referencia

definido por el CDC (método de comparación designado).


mmol/L x 0.3866 = g/L


Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

colesterol de 1 mmol/L (38.7 mg/dL).







Lipemia (Intralipid): Sin interferencias significativas hasta un índice L de 1800. Sin

interferencias por triglicéridos nativos hasta 13.7 mmol/L

(1200 mg/dL). No existe una correlación satisfactoria entre el índice L (que

corresponde a la turbidez) y la concentración de triglicéridos.

Otros: Las concentraciones elevadas de ácidos grasos libres y de proteínas

desnaturalizadas pueden causar valores falsos elevados de colesterol HDL.

En casos aislados, concentraciones elevadas de inmunoglobulinas pueden

proporcionar resultados falsos elevados de colesterol HDL.

Las concentraciones de ácido ascórbico de hasta 2.84 mmol/L (50 mg/dL) no

interfieren con el test.

Una función hepática anormal afecta el metabolismo de lípidos; en estos casos, el

valor diagnóstico de los resultados de colesterol HDL y LDL es limitado. En ciertos

112

|

pacientes con una función hepática patológica, los resultados de colesterol HDL

pueden diferir considerablemente respecto de los obtenidos por el método de

comparación designado.



Las intoxicaciones por paracetamol suelen tratarse con N-acetilcisteína. Tanto la

N-acetilcisteína, usada en concentraciones terapéuticas como antídoto, como el

metabolito de paracetamol, la N-acetil-p-benzoquinona imina (NAPQI), pueden

causar valores falsamente bajos.

La venopunción debe efectuarse antes de administrar metamizol. Si la

venopunción se realiza inmediatamente después o durante la administración de

metamizol, pueden obtenerse resultados falsamente bajos.



otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de medición0.08-3.12 mmol/L (3-121 mg/dL)




el factor 2.

Valores teóricosSin riesgo Riesgo moderado Alto riesgo

Mujeres: > 1.68 mmol/L 1.15-1.68 mmol/L < 1.15 mmol/L

(> 65 mg/dL) (45-65 mg/dL) (< 45 mg/dL)

Hombres: > 1.45 mmol/L 0.90-1.45 mmol/L < 0.90 mmol/L

113

|

(> 55 mg/dL) (35-55 mg/dL) (< 35 mg/dL)

Directivas del Programa Educativo del Colesterol de los EstadosUnidos (NCEP):31

< 40 mg/dL: Colesterol HDL bajo (principal factor de riesgo para enfermedades

cardiovasculares)

≥ 60 mg/dL: Colesterol HDL alto (factor "negativo" de riesgo para enfermedades

cardiovasculares)

El colesterol HDL se ve afectado por una serie de factores como el tabaquismo, el

deporte, las hormonas, el sexo y la edad.



valores.

Hierro

CaracterísticasEl hierro ingerido es absorbido principalmente como Fe2+ en el duodeno y el

yeyuno superior. La forma trivalente y el componente Fe3+ unido al grupo hemo

del hierro de la alimentación requieren para su reducción vitamina C.

La asimilación diaria de hierro es de aprox. 1 mg. Los iones de Fe2+ que penetran

en las células de la mucosa se unen a sustancias de transporte.

Antes de pasar al plasma, la ceruloplasmina los oxida a Fe3+, ligándose entonces

en esta forma a la transferrina. Los iones de hierro se transportan en el plasma

sanguíneo en forma de complejos de transferrina-hierro, siendo la capacidad

máxima de transporte de cada molécula de proteína de 2 iones de Fe3+. El hierro

sérico se encuentra fijado casi por completo a la transferrina.

La determinación del hierro (no hemínico) sirve para el diagnóstico y el tratamiento

de anemias ferropénicas, hemocromatosis (una enfermedad en la que los dos

pigmentos férricos, la hemosiderina y la hemofuscina, forman depósitos tisulares

que se manifiestan por pigmentación cutánea) y nefropatías crónicas. El hierro se

determina en el diagnóstico y el seguimiento de anemias microcíticas (debidas por

114

|

ejemplo a trastornos del metabolismo férrico y hemoglobinopatías), anemias

macrocíticas (debidas por ejemplo a la deficiencia de vitamina B12 o de ácido

fólico y a trastornos metabólicos de origen desconocido inducidos por fármacos),

así como de anemias normocíticas y renales (deficiencia de eritropoyetina),

anemias hemolíticas, hemoglobinopatías, enfermedades de la médula ósea y

daños tóxicos de la médula ósea.

Son numerosos los métodos fotométricos destinados a la determinación del hierro.

Todos siguen los siguientes pasos:

▪ Liberación de los iones de Fe3+ del complejo de transferrina por medio de ácidos

o detergentes,

▪ Reducción de los iones de Fe3+ a iones de Fe2+,

▪ Eeacción de los iones de Fe2+ para formar un complejo cromático.

El presente método se basa en el método FerroZine sin desproteinización.


115

|


muestras.


mencionados.

Suero (sin hemólisis).

Plasma (sin hemólisis) tratado con heparina de litio. No usar plasma con EDTA u

oxalato.

116

|

Separar el suero o el plasma de las células o del coágulo dentro de 1 hora.



3 semanas a 2-8 °C

Varios años a (-15) - (-25) °C


S2: C.f.a.s.



• Después de cambiar el cobas c pack

• Tras 7 días en el analizador

• Si fuera necesario según los procedimientos de control de calidad.

Intervalo de medición0.90-179 μmol/L (5.00-1000 μg/dL, 0.05-10.0 mg/L)


repetición. En muestras con concentraciones superiores, la función de repetición

del test disminuye el volumen de la muestra por el factor 2.1. Los resultados son

multiplicados automáticamente por este factor.

Límites inferiores de mediciónLímite de detección inferior del test

0.90 μmol/L (5.00 μg/dL, 0.05 mg/L)

Valores teóricosAdultos: 5.83-34.5 μmol/L (33-193 μg/dL)

La concentración de hierro en suero y plasma depende de la ingestión de hierro y

está sujeta a variaciones circadianas.

117

|

Lactato

CaracterísticasLa glucólisis anaeróbica aumenta marcadamente el lactato en la sangre,

provocando un aumento de los niveles de piruvato, especialmente bajo esfuerzo

prolongado. La causa común de niveles incrementados de piruvato y lactato

sanguíneos es la anoxia secundaria a condiciones como el choque, la neumonía y

la insuficiencia cardíaca congestiva. También puede haber acidosis láctica en la

insuficiencia renal y la leucemia.

La deficiencia de tiamina y la cetoacidosis diabética están asimismo asociadas a

niveles incrementados de lactato y piruvato.

En la meningitis bacteriana, se observa un aumento de los niveles de lactato en el

líquido cefalorraquídeo (LCR). Asimismo se observan niveles elevados de LCR en

la hipocapnia, el hidrocefalo, los abscesos cerebrales, la isquemia cerebral y

cualquier condición clínica asociada a una oxigenación reducida del cerebro y/o

una presión intracraneal incrementada.

En el diagnóstico y el tratamiento de la acidosis láctica (acidez anormalmente

elevada en la sangre) se emplean mediciones de lactato que evalúan el estado

acidobásico.

Desde hace algunos años, se van imponiendo en la determinación del lactato los

métodos enzimáticos frente a los métodos colorimétricos y de valoración. Por lo

general, los métodos enzimáticos son más sencillos, ofreciendo mayor

especificidad, exactitud y reproducibilidad.

El primer método enzimático descrito para la determinación del lactato se basó en

la transferencia de hidrógeno del lactato al ferricianuro potásico mediante lactato

deshidrogenasa. Pero este método tenía el inconveniente de ser bastante

laborioso por lo que no fue bien aceptado.

Los métodos posteriores se referían a la medición ultravioleta de la formación de

la NADH. En 1974, Gutmann y Wahlefeld1 describieron un procedimiento de

lactato que mide la NADH formada por oxidación de lactato catalizado por LD,

empleando la hidracina como agente de captación del piruvato.

118

|

Un método descrito por Noll2 se basa asimismo en la acción catalítica de la LD,

pero incluye ALT en la mezcla de reacción para eliminar más rápidamente el

piruvato formado por la conversión del lactato.

El método aquí presentado emplea una reacción enzimática para transformar el

lactato en piruvato. El peróxido de hidrógeno producido por esta reacción se

emplea después en una reacción enzimática para generar un colorante. Este

método ofrece una mayor estabilidad del reactivo que los métodos enzimáticos

ultravioletos anteriores.

Principio de testTest colorimétrico.

El L-lactato es oxidado a piruvato por la enzima específica lactato oxidasa

(LOD). La peroxidasa (POD) se emplea para generar un colorante utilizando el

peróxido de hidrógeno producido en la primera reacción.

La intensidad cromática del complejo formado es directamente proporcional a la

concentración de L-lactato. Se determina midiendo el aumento de la absorbancia.


muestras.


Suero: No emplear muestras de suero.Plasma tratado con fluoruro sódico/oxalato potásico y fluoruro sódico/heparina

sódica.

Centrifugar dentro de los 15 minutos después de obtener la muestra.

LCR: El LCR puede usarse en la forma obtenida.


119

|

Nota1. El nivel de lactato aumenta rápidamente bajo actividades físicas. El tiempo

requerido para volver a valores normales de lactato depende del estado físico

individual. Generalmente bastan 30 minutos de reposo.

2. Las muestras de sangre deben extraerse de una vena libre de estasis, si bien

una hemostasis mínima (inferior a 30 segundos) no afecta el nivel de lactato. Evite

en lo posible el uso de un torniquete.

3. Una vez activado el proceso de glucólisis en muestras de sangre, su nivel de

lactato puede aumentar rápidamente. Ya que la presencia de las células favorece

el proceso de glucólisis, resulta fundamental separarlas rápidamente de la muestra

a fin de obtener resultados exactos de lactato. El plasma heparinizado es

aceptable, si se inhibe la glucólisis conservando la sangre completa en hielo y

separando el plasma de las células en el plazo de 15 minutos tras la recogida.

Estabilidad en plasma (separado): 8 horas a 15-25 °C 14 días a 2-8 °C

Estabilidad en LCR: 3 horas a 15-25 °C 24 horas a 2-8 °C 2 meses a (-15)-(-25) °C


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a un estándar

primario.


mmol/L x 90.09 = mg/L



lactato de 2.2 mmol/L (19.8 mg/dL).

120

|

Plasma


conjugada y de 60 para la bilirrubina no conjugada (concentración de la bilirrubina

conjugada: aprox. 479 μmol/L ó 28 mg/dL y de la bilirrubina no conjugada: aprox.

1026 μmol/L ó 60 mg/dL).


(concentración de hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1000 mg/dL).



Excepción: El dobesilato de calcio provoca valores falsamente bajos de lactato.

Fluctuando de lote a lote de reactivo, se registran interferencias positivas con el

glucolato, un metabolito del etilenglicol.

LCR

Sin interferencias conocidas.

Con fines diagnósticos, los resultados obtenidos con el test siempre deben

evaluarse junto al historial del paciente, los exámenes clínicos y los resultados de

otros análisis.




ciclo es de 1:10. Los resultados de las muestras diluidas usando la función de

repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 10.

Valores teóricosPlasma 0.5-2.2 mmol/L (4.5-19.8 mg/dL) Venoso

LCR: 1.1-6.7 mmol/L (10-60 mg/dL) Neonatos

1.1-4.4 mmol/L (10-40 mg/dL) de 3-10 días

1.1-2.8 mmol/L (10-25 mg/dL) > 10 días de edad

121

|

1.1-2.4 mmol/L (10-22 mg/dL) Adultos

2.25 Lactato Deshidrogenasa (LDH)

CaracterísticasLa enzima lactato deshidrogenasa (LDH) se halla ampliamente distribuida en los

tejidos, especialmente en el corazón, el hígado, los músculos y los riñones. La

LDH sérica puede dividirse en cinco isoenzimas diferentes, discernibles a partir de

su movilidad electroforética. Cada isoenzima es un tetrámero compuesto de dos

subunidades diferentes. Estas subunidades corresponden al corazón y músculo,

de acuerdo a sus cadenas de polipéptidos. Existen dos homotetrámeros, la LDH-1

(corazón) y la LDH-5 (músculos), así como tres isoenzimas híbridas.

Niveles elevados de LDH sérica acompañan diversos cuadros patológicos.

La actividad más alta se observa en pacientes con anemia megaloblástica,

carcinoma diseminado y choque. Un aumento moderado se produce en los

trastornos musculares, el síndrome nefrótico y la cirrosis. En caso de infarto de

miocardio o pulmonar, leucemia, anemia hemolítica y hepatitis no vírica, la

actividad de la LDH sólo está ligeramente elevada. El presente método se deriva

de la formulación recomendada por la IFCC, y ha sido mejorado en cuanto al

rendimiento y la estabilidad.

Principio del testAnálisis por radiación ultravioleta.

La enzima lactato deshidrogenasa cataliza la conversión de L-lactato a piruvato.

En este proceso, el NAD se reduce a NADH.

La tasa inicial de formación de NADH es directamente proporcional a la actividad

catalítica de la LDH. Se determina por fotometría midiendo el aumento de la

absorbancia

122

|


muestras. Sólo se han analizado y considerado aptos los tipos de muestra aquí

Indicados:

Suero (sin hemólisis).

Plasma tratado con heparina de litio. El plasma debe estar exento de hemólisis y

de células.

Separar el suero o el plasma inmediatamente del coágulo o de las células.



La muestra puede conservarse durante 4 días a 2-8 °C o durante 6 semanas a -20

°C. En algunas enfermedades (p. ej., hepatopatías, afecciones

musculoesqueléticas, tumores malignos), las isoenzimas LDH-4 y LDH-5 se

encuentran aumentadas e inestables en muestra refrigeradas y congeladas.

Así pues, las muestras de los pacientes que padecen estas enfermedades pueden

dar un valor erróneo de LDH.


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la formulación

original de la IFCC utilizando pipetas calibradas con un fotómetro manual que

proporciona valores absolutos y la absortividad ε específica del substrato.


Limitaciones del análisis - interferencias

123

|


lactato deshidrogenasa de 200 U/L (3.34 μkat/L).




Hemólisis Sin interferencias significativas hasta un índice H de 15 (concentración

de hemoglobina: aproximadamente 9.6 μmol/L o 15 mg/dL).

La contaminación con eritrocitos provoca resultados aumentados, ya que el nivel

de analito en los eritrocitos es mayor que en los sueros normales. La magnitud de

la interferencia depende del contenido de analito en los eritrocitos lisados.





Con la función de repetición, las muestras se diluyen 1:2.5. Los resultados de las


el factor 2.5.

Valores teóricos: Según la IFCC, medidos a 37 °C:

Mujeres 135-214 U/L (2.25-3.55 μkat/L)

Hombres 135-225 U/L (2.25-3.75 μkat/L)

Niños (2-15 años) 120-300 U/L (2.00-5.00 μkat/L)

Recién nacidos (4-20 días) 225-600 U/L (3.75-10.0 μkat/L)


Hombres y mujeres hasta 250 U/L (hasta 4.2 μkat/L)

124

|

Lipasa

CaracterísticasLas lipasas son glucoproteínas con un peso molecular de 47000 daltons.

Se definen como hidrolasas de triglicéridos que catalizan el desdoblamiento de

triglicéridos a diglicéridos con formación subsiguiente de monoglicéridos y ácidos

grasos. Junto con la α-amilasa, la lipasa pancreática constituye indudablemente el

parámetro químico-clínico más importante en el diagnóstico diferencial de

enfermedades pancreáticas. A nivel internacional, la determinación de la actividad

de la lipasa ha adquirido mayor importancia gracias a su alta especificidad y su

liberación rápida. Después de una pancreatitis aguda, la actividad de la lipasa

aumenta en el plazo de 4 a 8 horas, alcanza su máximo a las 24 horas y vuelve a

disminuir tras 8 a 14 días. Sin embargo, no existe correlación alguna entre la

actividad de la lipasa determinada en suero y el grado de la lesión pancreática.

Se han descrito numerosos métodos para determinar la lipasa en los que la

disminución del substrato se mide por turbidimetría o nefelometría o se

comprueban los productos de degradación formados.

El presente método se basa en el desdoblamiento de un substrato cromático

específico para la lipasa emulsionado con ácidos biliares, el éster

1,2-O-dilauril-rac-glícero-3-ácido glutárico- (6-metilresorufina). El presente test

comprueba específicamente la actividad de la enzima pancreática combinando el

ácido biliar con la colipasa. En caso de ausencia de colipasa, la actividad de la

lipasa es prácticamente inexistente.

La colipasa activa solamente la lipasa pancreática y no las otras enzimas

Lipolíticas presentes en el suero. La alta proporción de colatos garantiza que las

esterasas presentes en el suero no pueden reaccionar con el substrato cromático

debido a la alta tensión negativa de su superficie.

Principio del test

125

|

Test enzimático colorimétrico con éster de 1,2-O-dilauril-rac-glícero-3-ácido

glutárico-(6-metilresorufina) como substrato.

El sustrato cromático de lipasa, el éster de 1,2-O-dilauril-rac-glícero-3-ácido

glutárico- (6-metilresorufina) es desdoblado bajo la acción catalítica de la solución

de lipasa alcalina formando 1,2-O-dilauril-rac-glicerol y un producto intermedio

inestable, el éster de ácido glutárico-(6-metilresorufina). En una solución alcalina,

éste se descompone espontáneamente para formar ácido glutárico y

metilresorufina. La adición de detergente y colipasa aumenta la especificidad

analítica para la lipasa pancreática.

La intensidad cromática del colorante rojo formado es directamente proporcional a

la actividad de la lipasa y puede ser determinada fotométricamente.


muestras.


Suero.



Estabilidad: 1 semana a 15-25 °C

1 semana a 2-8 °C

1 año a (-15)-(-25) °C

Calibración

126

|


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado manualmente frente a un

reactivo del sistema Roche utilizando pipetas calibradas y un fotómetro manual

que proporciona valores absolutos y la absorptividad ε específica del substrato.


Limitaciones del análisis - interferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % de los valores iniciales con una actividad

de la lipasa de 60 U/L (1.00 μkat/L).






Fármacos: No se han registrado interferencias con paneles de fármacos deuso




otros exámenes.




127

|

de las muestras diluidas por la función de repetición se multiplican


Magnesio

CaracterísticasEl magnesio constituye, junto con el potasio, uno de los cationes intracelulares

más importante. El Mg2+ es cofactor de numerosos sistemas enzimáticos. Así que

todas las reacciones enzimáticas dependientes del ATP requieren Mg2+ como

cofactor en el complejo ATP-magnesio.

Aproximadamente el 69 % de los iones de magnesio se encuentra depositado en

los huesos. El resto participa en el metabolismo intermediario, alrededor del 70 %

se halla en forma libre, mientras que el otro 30 % está fijado a proteínas

(especialmente a la albúmina), citratos, fosfato y a otros formadores de complejos.

El nivel sérico de Mg2+ permanece constante dentro de un intervalo muy estrecho

(0.65-1.05 mmol/L). La regulación de la concentración de magnesio se produce

mayormente mediante los riñones, en particular a través de la rama ascendente

del asa de Henle.

El presente test se emplea para el diagnóstico y el control del curso de la

hipomagnesemia (falta de magnesio) y de la hipermagnesemia (exceso de

magnesio). Son numerosos los estudios que demuestran la existencia de una

correlación entre la falta de magnesio y alteraciones de la homeostasis del calcio,

potasio y fosfato relacionadas con trastornos cardíacos tales como las arritmias

ventriculares que no responden a una terapia convencional, la sensibilidad

aumentada contra la digoxina, los espasmos de las arterias coronarias y la muerte

súbita. Otros síntomas concomitantes adicionales consisten en diversos trastornos

neuromusculares y

neuropsiquiátricos. La hipermagnesemia acompaña a la insuficiencia renal aguda

y crónica, al suministro excesivo de magnesio y su liberación a partir del espacio

intracelular.

128

|

La determinación de magnesio se lleva a cabo a través de la espectrometría de

absorción atómica (AAS), así como mediante métodos complexométricos.

El método aquí descrito se basa en la reacción del magnesio con el azul de xilidil

en una solución alcalina que contiene EGTA a fin de enmascarar el calcio

presente en la muestra.

Los niveles urinarios de magnesio se determinan por pruebas de depleción de

magnesio.

Principio del testMétodo colorimétrico con determinación del punto final.

▪ Muestra y adición de R1

▪ Adición de R2 e inicio de la reacción:

En solución alcalina, el magnesio forma un complejo purpúreo con azul de xilidil, el

sal de diazonio. La concentración de magnesio se mide fotométricamente por la

disminución de la absorbancia del azul de xilidil.

Precauciones y advertencias

129

|


muestras.


Suero


No emplear anticoagulantes que forman complejos tales como EDTA, fluoruro y

oxalato.

Los sistemas de recogida de muestras de diversos fabricantes pueden contener

diferentes materiales que, en ciertos casos, pueden llegar a afectar los resultados

de los análisis. Si las muestras se procesan en tubos primarios (sistemas de

recogida de muestras), seguir las instrucciones del fabricante de los tubos.



7 días a 2-8 °C

1 año a (-15)-(-25) °C

Orina:

130

|

Acidificar las muestras de orina a un pH 1 empleando HCl concentrado a fin de

prevenir la precipitación de fosfato amónico-magnésico. Recoger las muestras de

orina en un recipiente que no sea de metal. El instrumento prediluye

automáticamente las muestras de orina con NaCl al 0.9 %.


3 días a 2-8 °C

1 año a (-15)-(-25) °C


S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido calibrado frente a espectrometría de

absorción atómica.





mval/L x 0.5 = mmol/L

mval/L x 1.22 = mg/dL

mval/L = mEq/L

InterferenciasSuero/plasma

131

|



aproximadamente 60 mg/dL o 1026 μmol/L).



La hemólisis produce resultados aumentados según el contenido exacto del

analito en los eritrocitos lisados.





Orina





otros exámenes.


0.10-2.0 mmol/L (0.243-4.86 mg/dL)




por el factor 2.

Orina

0.56-11.0 mmol/L (1.36-26.7 mg/dL)



132

|


por el factor 2.

Valores teóricos:Suero/plasma:

Neonatos: 0.62-0.91 mmol/L (1.5-2.2 mg/dL)

5 meses-6 años: 0.70-0.95 mmol/L (1.7-2.3 mg/dL)

6-12 años: 0.70-0.86 mmol/L (1.7-2.1 mg/dL)

12-20 años: 0.70-0.91 mmol/L (1.7-2.2 mg/dL)

Adultos: 0.66-1.07 mmol/L (1.6-2.6 mg/dL)

60-90 años: 0.66-0.99 mmol/L (1.6-2.4 mg/dL)

> 90 años: 0.70-0.95 mmol/L (1.7-2.3 mg/dL)

Orina (24 h):

3.0-5.0 mmol/d (72.9-121.5 mg/d)

Prealbúmina

CaracterísticasLa prealbúmina es una proteína rica en triptófano que tiene una masa molar de

55000 daltons y que se sintetiza en los hepatocitos. En la electroforesis a un pH

de 8.6, precede a la albúmina gracias a su mayor velocidad de migración anódica

y representa una cantidad relativa de < 2.5 %. Su función consiste en unir y

transportar las proteínas fijadoras del retinol (con un peso molecular inferior a

21000 daltons) impidiendo su filtración glomerular. El 30 al 50 % de la prealbúmina

circulante forma un complejo con la proteína fijadora de retinol. Además, fija y

transporta la tiroxina (T4), aunque su afinidad con esta hormona es inferior a la de

la globulina fijadora de tiroxina.

Debido a que la prealbúmina tiene una corta vida media de apenas 2 días, su

concentración sérica disminuye muy rápidamente en caso de que la síntesis

hepatocelular sea insuficiente debido a lesiones hepáticas agudas o a una

alimentación deficiente en proteínas. Se ha publicado que la prealbúmina puede

133

|

actuar como reactante negativo de fase aguda, con concentraciones que

disminuyen muy rápidamente durante inflamaciones agudas.

Para la determinación de la prealbúmina se dispone de diferentes métodos tales

como la inmunodifusión radial, la nefelometría y la turbidimetría.


La prealbúmina humana forma un precipitado con un antisuero específico que se

determina por turbidimetría.


muestras.


mencionados.

Suero.


El uso de plasma tratado con heparina de litio puede provocar valores disminuidos

en unos 6 %. El uso de plasma tratado con EDTA dipotásico puede provocar

valores disminuidos en aproximadamente 5 %.



6 meses a (-15) - (-25) °C


S2-S6: C.f.a.s. PAC

Multiplicar el valor del calibrador C.f.a.s PAC específico del lote por los factores

indicados a continuación a fin de determinar las concentraciones estándar de la

curva de calibración de 6 puntos.

S2: 0.200 S5: 1.75

134

|

S3: 0.400 S6: 2.75

S4: 0.800




• Tras cambiar de lote de reactivos


Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la preparación de

referencia certificada ERM-DA470k/IFCC en suero humano del Instituto de

materiales y medidas de referencia (IRMM, por sus siglas en inglés).



Factores de conversión: mg/dL x 0.01 = g/L

g/L x 100 = mg/dL

g/L x 18.2 = μmol/L



prealbúmina de 0.4 g/L (7.28 μmol/L; 40 mg/dL).







Efecto prozona (high-dose hook): No se obtienen resultados falsos con

concentraciones de prealbúmina de hasta 2.5 g/L (45.5 μmol/L, 250 mg/dL).

135

|

Límites e intervalosIntervalo de medición0.03-0.8 g/L (0.55-14.6 μmol/L, 3-80 mg/dL)



ciclo es de 1:3. Los resultados de las muestras diluidas por la función de repetición

del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 3.

Valores teóricos0.2-0.4 g/L (3.64-7.28 μmol/L o 20.0-40.0 mg/dL)

Proteína C Reactiva (PCR)

GeneralidadesLa proteína C-reactiva es la proteína de fase aguda clásica de las reacciones

inflamatorias. Se sintetiza en el hígado y se compone de cinco cadenas

polipeptídicas idénticas en forma de un anillo de cinco eslabones con un peso

molecular de 105000 daltons. La CRP es el reactante de fase aguda más sensible

y su concentración aumenta muy rápidamente en procesos inflamatorios. La CRP

en complejo activa la vía clásica del complemento.

La respuesta de la CRP frecuentemente precede a los síntomas clínicos,

incluyendo la fiebre. En individuos normales sanos, sólo se detectan vestigios de

CRP con niveles de hasta 5 mg/L. Al iniciarse la respuesta de fase aguda, la

concentración sérica de la CRP aumenta rápida y acentuadamente.

Este aumento puede detectarse tras 6 a 12 horas alcanzando el valor máximo

pasadas 24 a 48 horas. Los niveles superiores a 100 mg/L son consecuencia de

serios estímulos tales como traumatismos de gran magnitud e infecciones severas

(sepsis). La respuesta de la CRP puede ser menos acentuada en pacientes con

hepatopatías. La determinación de CRP sirve para reconocer procesos

136

|

inflamatorios sistémicos, para evaluar el éxito del tratamiento de infecciones

bacterianas con antibióticos, para reconocer infecciones intrauterinas en caso de

amniorrexis prematura, para diferenciar entre las formas activa e inactiva de

enfermedades con infecciones concomitantes, como p.ej. en pacientes con lupus

eritematoso sistémico y colitis ulcerosa, para evaluar la actividad de enfermedades

reumáticas y la eficacia del tratamiento antiinflamatorio, para el reconocimiento

precoz de complicaciones postoperatorias (heridas infectadas, trombosis,

neumonía) y para distinguir entre una infección y una reacción de rechazo tras el

trasplante de médula ósea. El seguimiento postoperatorio de los niveles de

CRP permite comprobar si el paciente se recupera normalmente (los niveles

disminuyen hasta ser normales) o si sufre complicaciones inesperadas (losniveles

permanecen altos). La medición de los cambios en la concentración de CRP

proporciona informaciones útiles para diagnosticar el grado de agudeza y seriedad

de la enfermedad. Asimismo permite establecer hipótesis acerca de su origen.

Generalmente, la persistencia de una concentración sérica elevada de CRP

significa un pronóstico grave que suele indicar la presencia de una infección fuera

de control.

Principio del testPrueba inmunoturbidimétrica potenciada con partículas. La CRP humana se

aglutina con las partículas de látex recubiertas con anticuerpos monoclonales anti-

CRP. El precipitado se determina por turbidimetría.


muestras.


Suero.

Plasma tratado con heparina de litio, EDTA bi- o tripotásico.



137

|

2 meses a 2-8 °C

3 años a (-15)-(-25) °C



Multiplicar los valores del calibrador C.f.a.s. Proteins específicos del lote por los

factores indicados a continuación a fin de determinar las concentraciones estándar

de la curva de calibración de 6 puntos.

S2: 0.10000 S5: 2.0000

S3: 0.3325 (c 501/502)

0.3500 (c 311)

S6: 4.0000

S4: 1.0000

Modo de calibración spline 6 puntos





CálculoLos analizadores calculan automáticamente la concentraciónde analito de cada

muestra.

Factores de conversión: mg/L x 9.52 = nmol/L mg/dL x 95.2 = nmol/L

Mg/L x 0.1 = mg/dL mg/dL x 10 = mg/L

Mg/dL x 0.01 = g/L g/L x 100 = mg/Dl

Limitaciones del análisis - InterferenciasCriterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial con una concentración de

CRP de 5.0 mg/L (47.6 nmol/L).

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración de

la bilirrubina conjugada y sin conjugar: aprox. 60 mg/dL o 1026 μmol/L).

138

|


(concentración de hemoglobina: aprox. 622 μmol/L ó 1000 mg/dL).


Efecto prozona (high-dose hook): No se obtienen resultados falsos con

concentraciones de CRP de hasta 1200 mg/L (11424 nmol/L).

Fármacos: Pueden obtenerse valores de CRP falsamente disminuidos obtenidos

de muestras de pacientes tratados con carboxipenicilinas.

Límites e intervalosIntervalo de medición0.3-350 mg/L (2.9-3333 nmol/L)





Valores teóricosIntervalo de referencia consensual para adultos:16 < 5 mg/L (< 47.6 nmol/L)

Proteínas Totales en Suero y Plasma

CaracterísticasLas proteínas plasmáticas se sintetizan principalmente en el hígado, las células

plasmáticas, los ganglios linfáticos, el bazo y la médula espinal. En caso de

enfermedad, tanto la concentración de las proteínas totales como sus fracciones

individuales pueden divergir considerablemente de los valores normales. La

hipoproteinemia puede deberse a enfermedades y alteraciones como la

hemorragia, el esprue, el síndrome nefrótico, quemaduras graves, el síndrome de

retención de sales y Kwashiorkor (carencia aguda de proteínas).

La hiperproteinemia puede observarse en casos de deshidratación severa y en

enfermedades como el mieloma múltiple. El porcentaje relativo de las proteínas

139

|

plasmáticas puede modificarse al cambiar el porcentaje de una sola fracción de

estas proteínas. En este caso, la cantidad total de proteína frecuentemente queda

inalterada. La relación entre albúmina y globulina se utiliza frecuentemente como

índice de la distribución entre las fracciones de albúmina y globulina. Esta relación

sufre grandes alteraciones frente a afecciones tales como la cirrosis hepática, la

glomerulonefritis, el síndrome nefrótico, la hepatitis aguda, el lupus eritematoso,

así como en algunas infecciones agudas y crónicas. La medición de la proteína

total se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de una variedad de enfermedades

hepáticas, renales, de la médula ósea así como de otros trastornos metabólicos o

nutricionales.


En solución alcalina, el cobre divalente reacciona con los enlaces peptídicos de las

proteínas formando el color púrpura característico del complejo biuret.

El tartrato sódico potásico impide la precipitación de hidróxido de cobre, mientras

que el yoduro potásico inhibe la autorreducción del cobre.

La intensidad cromática es directamente proporcional a la concentración de

proteína que puede determinarse fotométricamente.

Medidas de precaución y advertencias

140

|


muestras.


Suero.



Estabilidad: 1 mes a 2-8 °C

6 meses a (-15)-(-25) °C

Separar el suero o el plasma del coágulo o de las células dentro de las 4 horas

después de haber recogido la muestra.

Si la muestra se recoge estando el paciente acostado, la concentración de las

proteínas totales disminuye en 4 a 8 g/L, en comparación con los valores

obtenidos si el paciente está de pie.


S2: C.f.a.s.





141

|

Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a SRM 927c.



Factor de conversión:g/L x 0.1 = g/dL


la proteína total de 66 g/L (6.6 g/dL).


conjugada y sin conjugar (concentración de la bilirrubina conjugada: 20 mg/dL o

342 μmol/L, concentración de la bilirrubina sin conjugar: aprox. 20 mg/dL o 342

μmol/L).

Hemólisis: Sin interferencias significativas

Límites e intervalosIntervalo de medición2.0-120 g/L (0.2-12 g/dL)





Valores teóricosValores teóricos según Tietz

Cordón umbilical 48-80 g/L (4.8-8.0 g/dL)

Prematuro 36-60 g/L (3.6-6.0 g/dL)

Neonatos 46-70 g/L (4.6-7.0 g/dL)

1 semana 44-76 g/L (4.4-7.6 g/dL)

7 meses-1 año 51-73 g/L (5.1-7.3 g/dL)

1-2 años 56-75 g/L (5.6-7.5 g/dL)

> 3 años 60-80 g/L (6.0-8.0 g/dL)

142

|

Adultos (ambulatorios) 64-83 g/L (6.4-8.3 g/dL)

Proteínas Totales en Orina y LCR

CaracterísticasLa medición de proteínas en orina se emplea en el diagnóstico y el tratamiento de

enfermedades renales, cardíacas así como de trastornos tiroideos, caracterizados

por proteinuria o albuminuria. La medición de las proteínas en el líquido

cefalorraquídeo (LCR) se emplea en el diagnóstico y el tratamiento de

enfermedades como la meningitis, los tumores cerebrales y las infecciones del

sistema nervioso central.

La orina se forma por ultrafiltración del plasma a través de la pared capilar

glomerular. Las proteínas con una masa molecular relativa superior a 40000 son

retenidas casi completamente, mientras que las sustancias más pequeñas pasan

con facilidad al filtrado glomerular. La mayor parte de las proteínas del LCR se

origina por la difusión del plasma a través de la barrera hematoencefálica. Las

concentraciones aumentan como consecuencia de un incremento en la

permeabilidad de la barrera hematoencefálica o bien debido al aumento en la

síntesis local de inmunoglobulinas.

Los métodos turbidimétricos que emplean el ácido tricloroacético (TCA) o el ácido

sulfosalicílico (SSA) precipitan las proteínas en la muestra según sea su tamaño,

lo cual puede dar lugar a una turbidez inestable y flocular. Los reactivos de los

métodos colorimétricos como el azul de Coomassie y el rojo de pirogalol-molibdato

reaccionan con las proteínas según la composición de sus aminoácidos, pudiendo

teñir los recipientes de vidrio y plástico. Debido a sus mecanismos de reacción, la

sensibilidad tanto de los métodos turbidimétricos como colorimétricos varía

respecto de diversas proteínas, especialmente frente a fragmentos proteicos como

las proteínas

Bence Jones y a las proteínas de pequeño tamaño como la α1-microglobulina.

El ensayo Urinary/CSF Protein de Roche Diagnostics se basa en el método

descrito por Iwata y Nishikaze3 y modificado posteriormente por Luxton, Patel,

143

|

Keir y Thompson.4 En este método, el cloruro de bencetonio reacciona con

proteínas en un medio básico produciendo una turbidez más estable y

uniformemente distribuida que la observada con los métodos con SSA o TCA. En

el presente test, la recuperación de la γ-globulina respecto de la albúmina es

inferior en unos 30 %5 mientras que la adición de EDTA permite neutralizar las

interferencias por iones de magnesio.

Principio del testMétodo turbidimétrico.

La muestra se preincuba en una solución alcalina con EDTA, que desnaturaliza las

proteínas, eliminando así las interferencias por iones de magnesio. Al agregar

cloruro de bencetonio se produce turbidez.

Medidad de protección y advertencias

144

|

145

|


muestras. Sólo se han analizado y encontrado aptos los tipos de muestras aquí

mencionados.

Orina

Utilizar muestras de orina espontánea o de 24 horas. No emplear conservantes.

Refrigerar la muestra durante la recolección.

LCR

No se requieren aditivos especiales. Si la muestra de LCR está contaminada con

sangre, el resultado del test de proteína no tiene validez.

Se recomienda recoger las muestras para el test de proteína en orina o LCR antes

de suministrar fluoresceína o bien, como mínimo, 24 horas después.

Nota: Para no obstruir los canales del instrumento, no determinar con el presente

test aquellas muestras de orina, LCR o de control cuyas concentraciones de

proteínas superan los 7000 mg/L.

Estabilidad:

Orina: 1 día a 15-25 °C

7 días a 2-8 °C

1 mes a (-15) - (-25) °C

LCR: 1 día a 15-25 °C

6 días a 2-8 °C

> 1 año a (-15)-(-25) °C


Las muestras sin centrifugar pueden producir resultados elevados.


S2-S6: C.f.a.s. PUC

Multiplicar el valor del calibrador C.f.a.s.

146

|

PUC específico del lote por los factores indicados a continuación a fin de

determinar las concentraciones estándar de la curva de calibración de 6 puntos.

S2: 0.025

S3: 0.050

S4: 0.125

S5: 0.250

S6: 1.0

Modo de calibración RCM

Intervalo de calibraciones Calibración completa



Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a un estándar

primario que puede rastrearse hasta NIST (National Institute of Standards and

Technology).


concentración de analito de cada muestra. Factores de conversión: mg/L x 0.1 =

mg/dL mg/L x 0.001 = g/L

Cálculo de la excreción proteica en la orina de 24 horas: mg/L x volumen total

(litros por 24 horas) = mg/día


la proteína total de 120 mg/L (12 mg/dL; 0.12 g/L). Efecto prozona (high-dose

hook): Los resultados de las muestras con altas concentraciones de proteína total

superiores al intervalo de medición de 100000 mg/L serán indicados mediante

alarmas del sistema como > TEST o > ABS.

Orina



147

|

Hemólisis: La hemoglobina interfiere en el test.



Excepción: La levodopa, la metildopa y la cefoxitina disódica causan valores de

proteína total falsamente altos mientras que el dobesilato de calcio provoca

valores de proteína falsamente disminuidos.

Otros: Las muestras que contienen más de 8 g/L de yodo fijado orgánicamente de

medios radiopacos (p. ej. Hexabrix) pueden tener resultados falsamente altos.

En pacientes con la enfermedad genética rara alcaptonuria pueden encontrarse

altas concentraciones de ácido homogentísico. Las concentraciones de ácido

homogentísico > 0.6 mmol/L pueden falsificar los resultados de muestras de orina.

En pacientes bajo tratamiento con sustitutos del plasma basados en gelatina

pueden obtenerse valores aumentados de proteína en orina.

LCR

Hemólisis: La hemoglobina interfiere en el test.



otros exámenes.

Límites e intervalosIntervalo de medición40-2000 mg/L (4-200 mg/dL; 0.04-2 g/L)



resultados de las muestras diluidas por la función de repetición del ciclo se

multiplican automáticamente por el factor 3.

Valores teóricos

148

|

Orina: 24 h: < 140 mg/24 h*

Espontánea: < 150 mg/L*

Valores obtenidos de muestrascentrifugadas

LCR: Intervalo de referencia según Tietz:

150-450 mg/L (15-45 mg/dL)

Intervalo de referencia según Thomas:

200-400 mg/L (20-40 mg/dL)

Triglicéridos

CaracterísticasLos triglicéridos son ésteres del glicerol, un alcohol trivalente con 3 ácidos grasos

de cadenas largas. En parte son sintetizados en el hígado, en parte se ingieren

con la alimentación.

La determinación de los triglicéridos se emplea para diagnosticar y tratar pacientes

con diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción hepática, trastornos del metabolismo

lipídico y otras numerosas enfermedades endocrinas.

La determinación enzimática de triglicéridos descrita por Eggstein y Kreutz aún

requería la saponificación con hidróxido de potasio. Posteriormente se realizaron

varios experimentos para sustituir la saponificación alcalina por una hidrólisis

enzimática con lipasa. Así, Bucolo y David experimentaron con una mezcla de

lipasa y una proteasa, mientras Wahlefeld empleaba para la hidrólisis una

esterasa hepática combinada con una lipasa particularmente efectiva obtenida de

Rhizopus arrhizus.

El presente método se basa en el trabajo de Wahlefeld y utiliza una lipasa

lipoproteica obtenida de microorganismos para hidrolizar completa y rápidamente

triglicéridos a glicerol, con la oxidación posterior a dihidroxiacetonafosfato y

peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado reacciona bajo la acción

catalítica de la peroxidasa con la 4-aminofenazona y 4-clorofenol para formar un

colorante rojo en una reacción de punto final según Trinder. La intensidad

149

|

cromática del colorante rojo formado es directamente proporcional a la

concentración de triglicéridos y puede medirse fotométricamente.

Principio del testTest enzimático colorimétrico.


muestras.


Suero. Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico.



S2: C.f.a.s.





Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a espectrometría de

masa por dilución de isótopo.

Cálculo

150

|

Los analizadores Roche/Hitachi cobas c calculan automáticamente la



mmol/L x 88.5 = mg/dL



concentración de triglicéridos de 2.3 mmol/L (203 mg/dL).



conjugada: aprox. 171 μmol/L ó 10 mg/dL; concentración de la bilirrubina sin

conjugar: aprox. 599 μmol/L ó 35 mg/dL).


hemoglobina: aprox. 434 μmol/L ó 700 mg/dL

Lím. Prozona: El aviso > Kin indica concentraciones de triglicéridos

extremadamente altas en la muestra. Los resultados normales falsos se deben a

la depleción de oxígeno durante la reacción analítica.

El glicerol endógeno sin esterificar en la muestra puede producir valores séricos

de triglicéridos falsamente elevados.



Excepción: El ácido ascórbico y el dobesilato de calcio causan resultados de

triglicéridos artificialmente bajos


151

|





Valores teóricos según el NCEP (programa de educación nacional delColesterol)Intervalo normal: < 2.26 mmol/L (< 200 mg/dL)

Interpretación clínica según las recomendaciones de la Sociedad

Europea de Aterosclerosis:

Nota: Si se desea tomar en cuenta el glicerol libre, substraer 0.11 mmol/L

(10 mg/dL) del valor de triglicéridos obtenido.

Otras Lipoproteínas (Perfil Lípidico)

Lipoproteínas de muy baja densidad Las lipoproteínas de muy baja densidad, que

suelen denominarse por sus iniciales en inglés, VLDL, son también partículas

grandes, poco densas (d < 1,006 g/ml) y muy ricas en triglicéridos. También tienen

una composición apolipoproteica similar a los quilomicrones, salvo en 2 aspectos

esenciales: no contienen apo A-I y presentan la forma completa de apo B (apo B-

100) porque en el hígado, lugar de síntesis de VLDL, no se expresa la enzima

editora de la apo B. La apo B-100 es la proteína estructural de VLDL y de las

ipoproteínas que se sintetizan en buena parte a partir de su catabolismo: IDL y

LDL y Lp(a). El principal estímulo para la síntesis de VLDL parece ser la captación

y el catabolismo de quilomicrones residuales por parte del hígado. La principal

152

|

función de las VLDL es, de forma análoga a la de los quilomicrones, el transporte

de triglicéridos y su suministro (en forma de ácidos grasos) a los tejidos muscular y

adiposo. El proceso por el cual se generan los ácidos grasos a partir de los

triglicéridos es básicamente idéntico al ya explicado en el caso de los

quilomicrones y, por tanto, depende fundamentalmente de la actividad de la

enzima LPL y de su cofactor apo C-II. El resultado de esta acción es que las VLDL

se hacen más pequenas, ˜ con una relación más pareja en su contenido en

colesterol y triglicéridos y con una mayor densidad, flotando en la

ultracentrifugación como IDL. También, a semejanza de lo que ocurre en el

catabolismo de los quilomicrones, el catabolismo de las VLDL es una de las vías

de síntesis de HDL.

Lipoproteínas de baja densidad (Para más información, ver referencias 4,5.) Las

lipoproteínas de baja densidad, o LDL (d < 1,063 g/ml, > 1,019 g/ml), se

caracterizan por su contenido en apo B-100 y tienen como componente lipídico

mayoritario los ésteres de colesterol. La función de las LDL es el transporte y

entrega de colesterol a las células, incluyendo tejidos periféricos e hígado. Las

LDL son reconocidas por los receptores de LDL situados en la membrana

plasmática que reconocen apo B-100 y apo E (fig. 1). El receptor de LDL es

sintetizado por múltiples estirpes celulares y viaja hacia la membrana plasmática

quedando fijado por una proteína, denominada clatrina, en unas zonas específicas

que se denominan hoyos revestidos. Aproximadamente cada 5 min, hayan unido o

no LDL, estos hoyos revestidos experimentan endocitosis y son transportados

hacia el citoplasma en forma de endosomas. En el caso de que contengan LDL

unidas al receptor, el contenido proteico y lipídico de las mismas es hidrolizado

hasta formar aminoácidos y colesterol no esterificado. El colesterol no esterificado

es tóxico para las células por encima de una cierta concentración y, por tanto,

debe ser o bien utilizado (para síntesis de membranas o de hormonas esteroideas,

por ejemplo), o bien convertido por enzimas del tipo acil: colesterol aciltransferasa

(ACAT) en ésteres de colesterol, forma en que pueden ser guardados como

reservorio celular de colesterol. El receptor de LDL, una vez completado su ciclo

celular, puede ser degradado por la PCSK9 o bien reciclado para volver a

153

|

comenzar el ciclo. Las células pueden también sintetizar de novo colesterol a

través de una larga vía de síntesis (endógena) que tiene como punto crítico de

regulación el paso de hidroximetilglutaril CoA (HM CoA) a mevalonato, paso

catalizado por la HMGCoA reductasa. Sin embargo, la mayor eficiencia de la vía

de síntesis del receptor de LDL hace que predomine sobre la activación de la vía

de síntesis endógena de colesterol, ya que mediante la síntesis de menos

proteínas consiguen acceso a un mayor número de moléculas de colesterol. Los

niveles de colesterol no esterificado intracelular regulan de forma coordinada los 2

sistemas de síntesis de colesterol, asegurando así su coordinación y evitando un

exceso de colesterol intracelular. La expresión y la funcionalidad adecuadas de los

receptores de LDL son un determinante importante de la concentración de LDL

sérico. Como prueba, la hipercolesterolemia familiar, que es una enfermedad

autosómica dominante causada por mutaciones en el gen del receptor de LDL o,

menos frecuentemente, del dominio de ligando de apo B-100 o de PCSK9,

presenta concentraciones séricas elevadas de LDL. En este contexto es

importante conocer que el tipo de medicamentos hipocolesterolemiantes más

usados en clínica, las estatinas, funcionan inhibiendo la HMGCoA reductasa, ya

que de esta forma se consigue un aumento de la síntesis de receptor de LDL

celular, lo que disminuye la concentración sérica de LDL y, por tanto, de colesterol.

Cálculo

Colesterol VLDL

Colesterol total - HDL - LDL = VLDL

Colesterol LDL

LDLc = CT - (HDLc + TG/5) en mg/dl

Existe, no obstante, una limitación a la utilización de esta fórmula y es cuando los

triglicéridos superan los 400 mg/dl situación que como conocemos no es

excepcional. También, aunque es mucho menos frecuente, cuando existe una

disbetalipoproteinemia, ya que las beta- VLDL contienen más colesterol que las

VLDL normales ó si el paciente es homocigoto para la apo E.

154

|

Nota: El Software del laboratorio calcula automáticamente estos valores, si se

ingresa el perfil lipídico.

Urea/BUN

CaracterísticasLa urea es el principal producto terminal del metabolismo proteico que contiene

nitrógeno. Se sintetiza en el hígado en el ciclo de la urea a partir del amoníaco

derivado de la desaminación de los aminoácidos. Los riñones excretan la mayor

parte de la urea, si bien también se excreta, en cantidades mínimas, a través de la

transpiración y se degrada en los intestinos por acción bacteriana.

La determinación del nitrógeno de urea en sangre es la prueba más utilizada para

el cribado de la función renal. Su utilización combinada con la determinación de la

creatinina sérica contribuye al diagnóstico diferencial entre los tres tipos de

azoemia: la azoemia prerrenal, renal y la posrenal.

Se observan aumentos de la concentración del nitrógeno ureico en sangre en caso

de perfusión renal inadecuada, shock, hipovolemia (por causas prerrenales),

nefritis crónica, nefroesclerosis, necrosis tubular, glomerulonefritis (por causas

renales) y la obstrucción de las vías urinarias (por causas posrenales). También se

aprecian incrementos pasajeros durante períodos de alta ingestión proteica. En

presencia de hepatopatías, los niveles de urea son imprevisibles.

Principio de testTest cinético con ureasa y glutamato deshidrogenasa.

La urea es hidrolizada por la ureasa a amonio y carbonato.

155

|

La velocidad con que la concentración de NADH disminuye es directamente

proporcional a la concentración de urea en la muestra y se mide fotométricamente.


muestras.


Suero Plasma tratado con heparina de litio y EDTA bipotásico. No emplear la

heparina de amonio.

Orina

La proliferación bacteriana en la muestra y la alta concentración atmosférica del

amoníaco, así como la contaminación por iones de amonio pueden causar

resultados falsos elevados.


7 días a 2-8 °C

1 año a (-15)-(-25) °C

Estabilidad en orina:6 2 días a 15-25 °C

7 días a 2-8 °C

1 mes a (-15) - (-25) °C



S2: C.f.a.s.



- en el analizador, tras 4 semanas



Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a SRM 909b.

156

|



Factores d conversión:

mmol/L de urea x 6.006 = mg/dL de urea

mmol/L de urea x 0.06006 = g/L de urea

mmol/L de nitrógeno ureico × 2.801 = mg/dL de nitrógeno ureico

mmol/L de nitrógeno ureico x 0.02801 = g/L de nitrógeno ureico

mg/dL de urea × 0.467 = mg/dL de nitrógeno ureico

Al emplear orina de 24 horas como muestra, multiplicar el resultado por el volumen

de 24 horas para obtener valores en g o mmol/24 horas.


urea de 8.3 mmol/L (49.8 mg/dL de urea y 23.2 mg/dL de nitrógeno ureico).

Suero/plasma

Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un índice I de 60 (concentración de

la bilirrubina conjugada y no conjugada: aprox. 60 mg/dL o 1026 μmol/L).


hemoglobina: aprox. 621 μmol/L ó 1.000 mg/dL.

Los iones de amonio pueden causar resultados erróneamente elevados.

Orina




0.5-40 mmol/L (3.0-240 mg/dL de urea, 1.4-112 mg/dL de nitrógeno ureico)

157

|





Orina

1-2000 mmol/L (6-12000 mg/dL de urea, 2.8-5600 mg/dL de nitrógeno ureico)



repetición del ciclo es de 1:1.8. Los resultados de las muestras diluidas por la

función de repetición del ciclo se multiplican automáticamente por el factor 1.8.

Determinar las muestras con concentraciones inferiores al límite técnico de 40

mmol/L (240 mg/dL de urea y 112 mg/dL de nitrógeno ureico) a través de la

función de repetición del ciclo. Las muestras se miden sin diluir.

Valores teóricosUrea:

Suero/plasma

Adultos 2.76-8.07 mmol/L (16.6-48.5 mg/dL)

Orina

Orina de 24 horas < 580 mmol/24 h (< 35 g/24 h)

1ra orina de la mañana 150-500 mmol/L (0.9-3.0 g/dL)

Nitrógeno ureico (BUN):

Suero/plasma

Adultos (18-60 años) 6-20 mg/dL

Adultos (60-90 años) 8-23 mg/dL

Lactantes (< 1 año) 4-19 mg/dL

Lactantes/niños 5-18 mg/dL

Orina

Orina de 24 horas: 800-1666 mg/dL (12-20 g/24 h)

a) Basado en una excreción media de orina de 1.2 a 1.5 L/24 h.

158

|

Osmorlaridad sérica

El intercambio de solutos y agua entre el ultrafiltrado y el plasma se lleva a cabo

por medio de complejos mecanismos de transporte en las diferentes porciones de

la nefrona y dependiendo del exceso o déficit de alguno de éstos en la sangre o en

el líquido intersticial, se producirá su mayor o menor eliminación renal, logrando

así una concentración normal para mantener una homeostasis permanente. La

concentración plasmática de los electrólitos depende de la cantidad que se

administre por vía oral (en la dieta) o por vía parenteral (intravenosa) y del ingreso

neto del agua. Como la ingesta no se realiza a un ritmo constante a largo del día,

se producen permanentemente cambios en dichas concentraciones que son

manejados de una manera muy precisa por parte del riñón. Los líquidos que

ingresan al organismo pueden ser hipo, iso o hiperosmolares con respecto al

plasma.

La administración intravenosa (compartimiento plasmático) de altos volúmenes de

líquido, modifica de manera importante el volumen de los demás compartimientos,

sin embargo, dichos cambios se presentan de manera diferente dependiendo de la

osmolaridad del fluido inyectado.

Los cambios de osmolaridad se manejan de forma distinta de acuerdo a la

composición del líquido administrado, pero incluyen en general modificación del

balance de sodio, glucosa y agua (ADH). El balance entre los compartimientos,

particularmente en el plasmático influye además en la función cardiovascular, y

ésta a su vez es importante para mantener un aporte de oxígeno adecuado al

riñón. Compartimentos Corporales. En el cuerpo humano los fluidos se encuentran

distribuidos en dos compartimentos: El compartimiento extracelular (LEC) y el

intracelular (LIC). Aproximadamente un tercio del agua corporal total se halla en el

LEC y dos tercios en el LIC; y el agua corporal total constituye entre el 50-60% del

peso corporal total de un individuo adulto. Los iones constituyen el 95% de los

solutos suspendidos en los fluidos orgánicos, la suma de las concentraciones de

cationes equivalen a la de los aniones en cada compartimiento y así el fluido de

159

|

cada uno de los espacios es eléctricamente neutral y químicamente isosmolar. El

principal catión del líquido extracelular es el Na+ y el principal anión el Cl-. El

bicarbonato (HCO3-) es un anión predominante y también se encuentran otros en

cantidades menores como urea, proteínas y glucosa. Estos aniones y cationes

determinan la osmolaridad del plasma (Su valor normal es 290 +/- 10 mosmol/l),

que se calcula teniendo en cuenta la concentración de estos y otras sustancias en

sangre como la glucosa y el BUN (nitrógeno ureico en sangre). El Na+ es el

principal determinante de este valor es situaciones fisiológicas. La fórmula para

hallar la osmolaridad plasmática es:

La osmolaridad plasmática oscila normalmente entre 280 y 290 mOsm/l; cuando

se calcula mediante la fórmula anterior, las cifras son normalmente 6-8 mOsm/l

más bajas.

Química de Líquidos Estériles

Líquido Cefalorraquídeo LCR

Es un líquido claro, incoloro, formado dentro de las cavidades o ventriculares del

cerebro, por los plexos coroideos y el plasma sanguíneo. Se forman

aproximadamente 500 cc de líquido cefalorraquídeo cada día, aunque solo hay de

120 a 150 ml en el sistema en cualquier momento. El LCR es reemplazado

completamente unas 3 veces al día. Su función es amortiguar la masa cefálica y

absorber las fuerzas que se transmiten a través de la bóveda craneana hacia el

cerebro. También ayuda a regular la presión intracraneal, la cual puede cambiar

con el flujo sanguíneo, el transporte de nutrientes y el nivel de productos de

desecho. Se considera además que este líquido influye en otros mecanismos de

control como las concentraciones de glucosa en el hipotálamo, las sensaciones de

hambre y el comportamiento en el comer. La mayor parte de los componentes del

LCR existen en mayor o menor concentración que en el plasma, sin embargo las

2 Na+ + K+ + Glicemia (mg/dl)/18 + BUN (mg/dl)/2.8

160

|

enfermedades pueden hacer que algunos elementos que normalmente son

retenidos por la barrera hematoencefálica, penetren al líquido, tales como los

leucocitos y eritrocitos, que pueden entrar a través de los vasos sanguíneos. El

LCR se obtiene por punción lumbar. Esta se realiza cuando hay sospecha de una

meningitis, cuando se requiere valorar la presión del líquido o para introducir

anestésicos, fármacos o medios de contraste radiográficos.

A nivel químico se realizan al LCR pruebas como:

Glicemia

La concentración varía con los niveles de glucosa en sangre. En el LCR suele ser

de 60 a 70% de la concentración total en sangre. Esta medición es de ayuda para

estimar algún impedimento en el transporte de glucosa del plasma al LCR y un

uso elevado de glucosa por el S.N.C, leucocitos o microorganismos. Puede estar

disminuida en casos de infecciones piógenas, micóticas, tuberculosis, linfomas

con extensión meníngea, leucemia con extensión meníngea, meningoencefalitis e

hipoglicemia. Casi todos los organismos superiores e inferiores consumen

glucosa, y en casi todos los casos en que se presenta la glucosa disminuida, se

puede deber a una actividad bacteriana. En la mayoría de los casos el aumento es

debido a una diabetes. Las concentraciones de la glucosa en el LCR suelen ser

normales en el caso de algunas clases de infecciones virales cerebrales y

meníngeas, así como en la meningitis aséptica.

Cloruros

Cualquier situación que aumente la cantidad de cloruros en el plasma afectará

también el cloro en el LCR. La medición de cloro en LCR es útil en el diagnóstico

de la meningitis tuberculosa, en la cual se verá disminuido. La administración de

cloruros invalida los resultados de la prueba. Los valores de la prueba no son

válidos si como consecuencia de un golpe traumático, la sangre se mezcla con la

muestra.

161

|

Proteínas totales

El LCR contiene muy pocas proteínas, ya que las proteínas en el suero sanguíneo

están en forma de grandes moléculas que no atraviesan la barrera

hematoencefálica. No obstante, la proporción de albúmina/globulinas, es superior

en el LCR ya que la molécula de albúmina es significativamente menor y puede

atravesar con más facilidad la barrera. En las infecciones se da un incremento en

la permeabilidad de la barrera hematoencefálica. Los aumentos moderados o

notorios en las concentraciones de proteínas totales y alteraciones en la

proporción de albúmina/globulina, son originados por el aumento en la

permeabilidad de la barrera, así como por las obstrucciones en la circulación de

los sistemas de conducción de LCR, aumento en la síntesis de proteínas en el

S.N.C por degeneración tisular y los tumores cerebrales. Se pueden encontrar

aumentadas en meningitis purulenta, tuberculosa o aséptica, en sífilis y

neurosífilis, abscesos cerebrales, hemorragia y hematomas subaracnoideos,

poliomielitis, síndrome de Guillan-Barré. Se pueden encontrar disminuidas por

aumento de la presión intracraneal o hipertiroidismo.

Los valores de referencia se encuentran en las técnicas de glucosa y proteínas

urinarias/LCR.

Lactato

En la meningitis bacteriana, se observa un aumento de los niveles de lactato en el

líquido cefalorraquídeo (LCR). Asimismo se observan niveles elevados de LCR en

la hipocapnia, el hidrocefalo, los abscesos cerebrales, la isquemia cerebral y

cualquier condición clínica asociada a una oxigenación reducida del cerebro y/o

una presión intracraneal incrementada.

Valores de referencia: LCR: 1.1-6.7 mmol/L (10-60 mg/dL) Neonatos

1.1-4.4 mmol/L (10-40 mg/dL) de 3-10 días

1.1-2.8 mmol/L (10-25 mg/dL) > 10 días de edad

1.1-2.4 mmol/L (10-22 mg/dL) Adultos

162

|

Líquido Sinovial (Articular)

Es uno de los principales componentes de las articulaciones. Este se halla en el

interior de las cápsulas articulares presentes entre las extremidades móviles y su

función principal es proveer protección a las superficies óseas que tiene movilidad.

El valor diagnóstico de este líquido, radica en la diferenciación entre enfermedad

inducida por aposición de cristales y artritis infecciosa. La concentración de

inmunoglobulinas y proteínas totales corresponde a 1/4 parte de la concentración

en suero; los valores de electrolitos, glucosa y ácido úrico son iguales que en el

suero.

Glucosa

Es indicador valioso para el caso de las infecciones bacterianas, ya que existe una

diferencia de hasta 60 mg/dl menos que el valor hallado de glucosa en suero; por

lo tanto los niveles muy bajos de glucosa son sugestivos de infección bacteriana.

Ácido úrico

Se evalúa con relación a los niveles de ácido úrico en suero y la observación

microscópica de la formación de cristales de dicho ácido.

Proteínas totales

En el líquido sinovial el valor es ligeramente menor que en el suero; en estados

patológicos se puede hallar elevado, correspondiendo en este caso a procesos

inflamatorios y/o bacterianos.

Líquidos de Cavidades Serosas

Los líquidos de cavidades serosas derivan del plasma y se encuentran en las

cavidades pleural, pericárdica y peritoneal.

Los procesos de formación de éstos líquidos son dinámicos y están controlados

por la permeabilidad de los capilares en la membrana parietal, la presión

163

|

hidrostática en estos capilares, la presión oncótica (o coloide osmótica) producida

por las proteínas plasmáticas dentro de los capilares y la absorción de líquidos por

el sistema linfático. La presión hidrostática de la sangre fuerza al plasma a

ultrafiltrarse hacia las cavidades, mientras que las proteínas ejercen una presión

inversa a esta filtración. La permeabilidad del endotelio capilar regula la velocidad

de formación del ultrafiltrado y de su composición proteica. Si se incrementa la

permeabilidad endotelial provoca un desplazamiento de las proteínas sanguíneas

hacia las cavidades. Estos fluidos vasculares ricos en proteínas aumentarán la

acumulación de líquido en las cavidades. Esta acumulación de líquido en las

cavidades se denomina derrame e indica un proceso patológico.

Transudados y Exudados

Clásicamente, según su contenido proteico, los líquidos serosos se diferencian

en transudados y exudados. Esta distinción es fundamental para su clasificación

etiopatogénica y para la selección de las magnitudes bioquímicas cuyo estudio

aportará una mayor eficacia diagnóstica.

Los transudados son líquidos no inflamatorios que se originan por alteración de

factores sistémicos que afectan a la formación o reabsorción del líquido (presión

hidrostática o coloidosmótica). Frecuentemente están asociados con insuficiencia

cardíaca congestiva, cirrosis hepática y síndrome nefrótico, los dos últimos se

asocian con hipoproteinemia.

Los derrames de líquido en la cavidad pleural, pueden formarse como un

ultrafiltrado del plasma. Se puede clasificar como transudado (formado por

factores mecánicos que influyen en la formación y reabsorción de líquidos. Ej:

disminución de albúmina o aumento de la presión venosa), o exudado (derrame

provocado por una lesión de los recubrimientos del mesotelio. Ej: Tuberculosis,

infecciones bacterianas, Lupus Eritematoso Sistémico).

Los exudados son líquidos inflamatorios cuya formación depende de un

aumento de la permeabilidad capilar debido a alteraciones que implican

164

|

directamente a estructuras de la superficie de determinadas cavidades corporales

(mesotelio, vasos linfáticos y capilares). Algunas infecciones pueden producir

exudados, así como también, neoplasias, desordenes sistémicos, traumatismos o

condiciones inflamatorias. Los exudados requieren un mayor número de pruebas

de laboratorio que los transudados, tales como estudios microbiológicos o estudios

citológicos.

La diferencia entre transudados y exudados se basa en niveles arbitrarios de

decisión clínica que ha sido determinada empíricamente. Uno de los criterios

ampliamente utilizados es el criterio de Light, publicado en el año 1972, el cual

considera los niveles proteicos en el líquido pleural versus los niveles de proteínas

en suero, al igual que los niveles de lactato deshidrogena (LDH) pleural versus

LDH plasmática. Esto se describe mas adelante, en la sección de exámenes

químicos de los líquidos serosos.

Las pruebas útiles para la clasificación de transudados y exudados son las

mediciones simultáneas de proteína total (PT) y lactato deshidrogenasa (LDH),

tanto en el suero como en el líquido seroso. A partir de estas mediciones se

establecen cocientes de concentración de proteína y LDH:

Estos cocientes proporcionan medios confiables para distinguir entre

transudados y exudados. Si el cociente PT es < 0,5 y el cociente LDH es < 0,6, el

líquido se clasifica como un transudado. En contraste, los exudados son aquellos

líquidos con un cociente PT > 0,5 y un cociente LDH > 0,6.

En transudados el nivel de LDH es < 2/3 del nivel de LDH sérica y en exudados el

nivel de LDH es > 2/3 de los niveles de LDH sérica.

165

|

Gradiente de albúmina plasmática-albúmina de líquido ascítico (GASA)

Cuando el líquido peritoneal excede de 25 mL y además aumenta

progresivamente se denomina ascitis. La relación entre la concentración de

albúmina en suero y la de albúmina en líquido ascítico proporciona una mejor

clasificación diagnóstica de la ascitis que la concentración de proteínas, por lo que

algunos expertos reemplazan los términos transudados y exudados en la

descripción de la ascitis, por el de gradiente de albúmina elevado y gradiente de

albúmina disminuido.

El gradiente de albúmina se obtiene sustrayendo la concentración de albúmina en

líquido ascítico a la concentración de albúmina en suero. Para lo anterior, las

muestras de suero y líquido ascítico deben obtenerse simultáneamente.

La utilidad del gradiente de albúmina se basa en el concepto de equilibrio

oncótico-hidrostático. La diferencia entre albúmina sérica y en líquido ascítico es

muy grande en pacientes con hipertensión portal. Si esta diferencia es mayor o

igual a 1,1 g/dL, sugiere la presencia de hipertensión portal, como se puede

encontrar en cirrosis hepática, metástasis hepáticas y síndrome nefrótico,

enfermedad pancreática y otras. El gradiente de albúmina nos permite clasificar,

con una eficacia del 95%, la ascitis como asociada o no a hipertensión portal. Los

laboratorios deben informar el primer decimal.

Glucosa

La medición simultanea de glucosa sérica y en el líquido seroso tiene un valor

limitado. Si en el líquido seroso la glucosa es inferior a 60 mg/dL o la diferencia

entre glucosa sérica y glucosa del líquido seroso es superior a 30 mg/dL, se

identifica un proceso exudativo. Solo tienen relevancia clínica los niveles bajos de

glucosa ante la sospecha diagnóstica de artritis reumatoide.

Amilasa

La medición simultanea de amilasa en suero y líquido seroso es clínicamente de

utilidad para líquido pleural y peritoneal, siendo un examen de rutina en muchos

166

|

laboratorios. Un valor de amilasa en el líquido que excede el valor normal a nivel

sérico, o es superior 1,5 a 3 veces, se considera como anormalmente aumentado.

Estos niveles elevados de amilasa en los líquidos se presentan en derrames

provocados por pancreatitis, ruptura esofágica, perforación gastroduodenal y

neoplasias.

Triglicéridos

El nivel de los triglicéridos en líquidos serosos es de utilidad especialmente

cuando estos son de aspecto lechoso o quiloso. Cuando los niveles de triglicéridos

exceden los 110 mg/dL indican un derrame quiloso, mientras que si estos son

inferiores a 60 mg/dL lo descartan. Si los niveles de triglicéridos están entre 60 y

110 mg/dL, se puede efectuar adicionalmente una electroforesis de lipoproteínas.

La presencia de quilomicrones identifica al derrame como quiloso, mientras que su

ausencia la identifica como pseudoquiloso. El contenido de colesterol del derrame

quiloso y pseudoquiloso es de utilidad clínica. La efusión quilosa se asocia con

obstrucción o daño al sistema linfático. Neoplasias (por ejemplo linfoma), traumas,

tuberculosis y procedimientos quirúrgicos a menudo provocan derrames quilosos;

mientras que los pseudoquilosos se presentan más a menudo en inflamaciones

crónicas como ocurre en artritis reumatoide.

Panel Cardíaco (Troponina I, Mioglobina)

La prueba de enzimas cardíacas Triage® Cardiac Panel es un

fluoroinmunoanálisis que se utiliza con el lector Triage Meter para la determinación

cuantitativa de creatina-cinasa MB (CK-MB), mioglobina y troponina I en muestras

de sangre entera y plasma recogidas con EDTA. La prueba se utiliza como ayuda

en el diagnóstico del infarto de miocardio (lesión).

Características En muchos casos, el diagnóstico del infarto agudo de miocardio (IAM) en

pacientes que presentan dolor torácico es difícil. Los tres criterios principales

indicados por la Organización Mundial de la Salud para diferenciar el dolor torácico

167

|

asociado a IAM del dolor torácico debido a otras razones son: 1) anamnesis y

exploración física del paciente, 2) datos electrocardiográficos y 3) cambios en los

marcadores de proteínas séricas asociados al infarto de miocardio. Para

diagnosticar adecuadamente un IAM se deben cumplir al menos dos de estos

criterios.

A menudo, la exploración física no puede diferenciar el IAM de otras anomalías

cardíacas. El electrocardiograma es útil en el diagnóstico del IAM, pero está

limitado, porque sólo es concluyente en aproximadamente el 50% de los pacientes

con IAM. Por lo general, la formación de ondas Q y los cambios en el segmento

ST, elevación o depresión, son indicativos de IAM. No obstante, los resultados del

electrocardiograma deben considerarse junto con la anamnesis yla exploración

física del paciente. El electrocardiograma puede ser inicialmente normal aunque el

paciente tenga realmente un IAM.

Los marcadores de proteínas sanguíneas desempeñan un papel importante en el

diagnóstico diferencial del IAM cuando otros indicadores pueden ser negativos o

cuestionables. Los marcadores utilizados en el diagnóstico del infarto de miocardio

son: creatina-cinasa (CK), la isoenzima MB de la creatina-cinasa (CK-MB),

mioglobina y las proteínas estructurales delcomplejo troponina, es decir, troponina

T y troponina I.

Después de un IAM, la aparición de marcadores de proteínas en la sangrese

produce a consecuencia de la necrosis celular iniciada por un episodioisquémico.

Las proteínas presentes en concentraciones más altas y las mássolubles son las

que primero aparecen en la sangre, por ejemplo, la mioglobina.

Las proteínas estructurales y mitocondriales de los miocitos aparecen mástarde,

como por ejemplo la CK-MB y las proteínas del complejo troponina,incluida la

troponina I.La mioglobina es una hemoproteína citoplasmática soluble, con un

pesomolecular de aproximadamente 17 kDa, presente en las células

musculares.Considerando su tamaño relativamente pequeño, su alta

concentración celular ysu localización citoplasmática, la mioglobina se libera antes

que otros marcadorescardíacos después de una necrosis o una lesión celulares.

Las concentracionessanguíneas de mioglobina aumentan por encima del intervalo

168

|

de referencia enlas dos primeras horas después de la lesión, y alcanzan el

máximo entre seis yocho horas después de la aparición de los síntomas. La

mioglobina vuelve aconcentraciones iniciales o normales entre 20 y 36 horas

después de la lesióntisular. La mioglobina está presente en todos los tipos de

células musculares.

Por lo tanto, su presencia en la sangre no se asocia necesariamente a

lesiónmiocárdica. Las concentraciones sanguíneas de mioglobina pueden

aumentar como resultado de distintas situaciones que producen lesión muscular.

Entre ellas están traumatismos, isquemia, cirugía, ejercicio y una serie de

enfermedades musculares degenerativas. Con respecto a esto, la mioglobina

tiene su mayor valor en la exclusión del infarto de miocardio en las primeras horas

después del dolor torácico. Debido al rápido aumento de las concentraciones

sanguíneas de mioglobina, seguido por un aclaramiento moderadamente

sostenido, la utilidad de la mioglobina está limitada a las 2-30 horas siguientes a la

lesión tisular. No obstante, la mioglobina es particularmente útil cuando se

conocen los antecedentes clínicos del paciente. La creatina-cinasa MB (CK-MB)

es una enzima citosólica de 82 kDa que está presente en altas concentraciones en

el miocardio. Esta isoenzima de la creatina-cinasa se utiliza frecuentemente en el

diagnóstico del infarto agudo de miocardio. Por lo general, las concentraciones de

CK-MB suben por encima de lo normal entre las cuatro y las ocho horas siguientes

al infarto agudo de miocardio, alcanzan concentraciones máximas entre las 12 y

las 24 horas y vuelven a sus valores normales en aproximadamente tres días. La

CK-MB, como la mioglobina, no se localiza específicamente en el músculo

cardíaco. Las concentraciones sanguíneas de CK-MB pueden aumentar como

resultado de lesiones musculares agudas o crónicas, incluido el ejercicio intenso y

los traumatismos. Aun así, la determinación de la concentración sanguínea de CK-

MB es muy fiable para el diagnóstico y tratamiento de los pacientes con IAM.

Las proteínas contráctiles de las miofibrillas se han hecho populares como

marcadores cardíacos específicos del infarto agudo de miocardio y de la lesión

miocárdica. Entre ellas están dos proteínas específicas del complejo regulador de

la contracción: la troponina I y la troponina T. La troponina I y la troponina T

169

|

aisladas del músculo cardíaco tienen secuencias específicas de aminoácidos que

permiten el desarrollo de anticuerpos específicos antiproteínas cardíacas.

La secuencia de aminoácidos amino terminal del isotipo cardíaco de la troponina I

tiene 31 residuos aminoacídicos que no están presentes en ninguno de los dos

isotipos de la troponina I del músculo esquelético. Por lo tanto, los inmunoanálisis

específicos para la troponina I cardíaca se utilizan en la evaluación de pacientes

que se sospecha que han sufrido un IAM.

Las concentraciones sanguíneas de troponina I se elevan entre las 4 y las 8 horas

siguientes a un IAM, alcanzan su máximo entre las 12 y las 16 horas, y

permanecen elevadas de 5 a 9 días después de la lesión miocárdica. Las

concentraciones de troponina I cardíaca aumentan principalmente debido al infarto

de miocardio. Sin embargo, también pueden aumentar como resultado de

lesiones cardíacas menores, que incluyen: angina inestable, contusiones

cardíacas, trasplante de corazón, cirugía de derivación («bypass») aortocoronaria,

traumatismo físico del corazón, insuficiencia cardíaca congestiva y otras

afecciones que pueden lesionar el miocardio. Además, la troponina I cardíaca no

parece elevarse como resultado de lesiones del músculo esquelético. Debido al

aumento de la especificidad analítica y a la prolongada duración de su elevación,

la troponina I cardíaca se ha convertido en un importante marcador en el

diagnóstico y evaluación de los pacientes que se sospecha que han sufrido un

IAM. La cuantificación simultánea de las concentraciones de mioglobina, CK-MB y

troponina I cardíaca después de un IAM puede ser de gran ayuda para el médico

en el diagnóstico y tratamiento de los pacientes que se sospecha que han sufrido

un IAM. En la bibliografía científica también se ha descrito que las concentraciones

de troponina I ofrecen información de pronóstico relacionada con el riesgo de

futuras afecciones cardíacas y de mortalidad en pacientes con síndromes

coronarios agudos. Más recientemente, se ha demostrado que los análisis de

varios marcadores, entre ellos troponina I, CK-MB y mioglobina, ofrecen una mejor

estratificación del riesgo que los de un solo marcador.

Principios del procedimiento de la prueba

170

|

El procedimiento de la prueba incluye la adición de varias gotas de una muestra

de sangre entera o plasma recogida con EDTA al orificio del dispositivo de prueba.

Después de depositar la muestra en el orificio del dispositivo de prueba, las

células de sangre entera se separan del plasma por medio de un filtro incorporado

en el dispositivo de prueba. La muestra reacciona con conjugados de anticuerpos

fluorescentes y pasa por el dispositivo de prueba por acción capilar. Los complejos

de cada conjugado de anticuerpos fluorescentes son capturados en zonas

determinadas, lo que produce análisis de unión específicos para cada analito.

El dispositivo de prueba se inserta en los lectores Triage Meter®. Los resultados

aparecen en la pantalla del lector y pueden imprimirse. Todos los resultados se

almacenan en la memoria del medidor, por lo que se podrán imprimir y visualizar

cuando sea necesario. Si está conectado, el medidor puede enviar los resultados

al sistema de información del hospital o el laboratorio.

Reactivos y materiales suministradosEl dispositivo de prueba contiene todos los reactivos necesarios para la

cuantificación simultánea de las proteínas CK-MB, mioglobina y troponina I en

muestras de plasma y sangre entera a las que se ha añadido ácido edético

(EDTA) como anticoagulante.

El dispositivo de prueba contiene:

• Anticuerpos monoclonales murinos contra la CK-MB, la mioglobina y la troponina

I.

• Anticuerpos policlonalesmurinos contra la CK-MB y la mioglobina.

• Anticuerpos policlonales de cabra contra la troponina I.

• Tinte fluorescente

• Fase sólida

• Estabilizadores

Advertencias y precauciones• Para uso diagnóstico in vitro.

• Para el uso por profesionales sanitarios.

171

|

• No utilice el estuche después de la fecha de caducidad indicada en el exterior de

la caja.

• Mantenga el dispositivo de prueba en la bolsa sellada hasta que esté preparado

para utilizarla. Deséchela tras un solo uso.

• Obtendrá resultados óptimos si realiza la prueba a temperaturas comprendidas

entre los 20 y los 24 °C.

• La pipeta de transferencia debe utilizarse para una sola muestra. Deséchela tras

un solo uso.

• Al trabajar con muestras de pacientes, se deberán seguir técnicas de seguridad

de laboratorio adecuadas en todo momento, ya que las muestras son

potencialmente infecciosas.

Requisitos de almacenamiento y manipulación• Almacene los dispositivos de prueba en un refrigerador a entre 2 °C y 8 °C

• Una vez que se saca del refrigerador, el dispositivo de prueba sellado es estable

durante 14 días, siempre y cuando no se supere la fecha de caducidad indicada

en la bolsa.

• No extraiga el dispositivo de prueba de la bolsa hasta que esté preparado para

utilizarlo

• Antes de utilizar dispositivos de prueba refrigerados (2 °C a 8 °C), deje que

alcancen la temperatura ambiente en sus bolsas individuales. Esto llevará un

mínimo de 15 minutos. Si se saca del refrigerador un kit que contenga más de un

dispositivo de prueba, espere a que el kit y los dispositivos de prueba alcancen la

temperatura ambiente antes de usarlos.

Esto llevará un mínimo de 1 hora.

Obtención y preparación de muestras• Para realizar análisis con este producto se requieren muestras de sangre total o

plasma venosos recogidas con (EDTA) comoanticoagulante. No se han evaluado

otros tipos de muestras, métodos deextracción o anticoagulantes.

• Analice las muestras de sangre en el dispositivo de prueba inmediatamente o en

las 4 horas posteriores a su obtención. Si no pudiera completarse el análisis antes

172

|

de 4 horas, el plasma debe separarse y almacenarse a -20 °C hasta que pueda

analizarse.

• Transporte las muestras a temperatura ambiente o refrigerada y evite las

temperaturas extremas.

• Si piensa que una muestra está hemolizada, deberá obtener otra muestra para la

prueba.

Procedimiento de la prueba

Notas referentes al procedimiento

El plasma congelado y las muestras refrigeradas de plasma o sangre entera

deben alcanzar la temperatura ambiente antes de la realización de la prueba.

Mezcle bien las muestras de los pacientes.

Mezcle las muestras de sangre entera invirtiendo suavemente el tubo varias

veces antes de realizar el análisis.

Si fuera posible, mezcle las muestras de plasma agitando el tubo antes de

realizar el análisis.

Realización del control de calidad del sistema Triage®: dispositivo de CC

Utilice el dispositivo de CC para verificar el funcionamiento correcto del lector.

Realice el procedimiento cada día que se lleven a cabo pruebas de pacientes.

1. La primera vez que utilice un dispositivo de CC en el lector, deberá instalar el

CODE CHIP™ del dispositivo de CC. Los datos del CODE CHIP del dispositivo de CC se almacenan en la memoria del lector. No es necesario volver a instalar el CODE CHIP del dispositivo de CC después de la instalación inicial.

a) En la pantalla principal, seleccione <Ins. nuevoCode Chip>y pulse Enter.

b) Coloque el Code Chip del dispositivo de CC en la esquina frontal inferior

izquierda del lector. Siga las instrucciones que aparecen en la pantalla.

c) Retire el Code Chip del dispositivo de CC del lector cuando se haya completado

la transferencia de datos.

2. En la pantalla principal, seleccione <Ejecutar test>y pulse Enter.

173

|

3. Si hay un ID de usuario activado, introduzca su número de ID de usuario y

pulse Enter.

4. Seleccione <Dispositivo de CC>y pulse Enter.

5. Introduzca el dispositivo de CC y pulse Enter.

6. Aparecerá o se imprimirá un resultado de OK o Fallo cuando se complete el

análisis. Todos los parámetros deben ajustarse a los límites establecidos antes

de la realización de la prueba del paciente.

7. Retire el dispositivo de CC del lector y colóquelo en su caja negra especial. NO DESECHE EL DISPOSITIVO DE CC.

Calibración del lote usando el chip del reactivo

Al abrir un lote nuevo de dispositivos de prueba, debe transferirse la información

sobre calibración y caducidad de ese lote de tarjetas al lector antes del análisis del

paciente. Para transferir dicha información al lector, utilice el CODE CHIP del

reactivo suministrado con el nuevo lote de dispositivos de prueba.

Hágalo una vez con cada nuevo lote de dispositivos de prueba.

1. En la pantalla principal, seleccione <Ins. nuevoCode Chip>. Pulse Enter.

2. Inserte el CODE CHIP del reactivo en la esquina frontal inferior izquierda del

lector y siga las indicaciones que aparecen en pantalla.

3. Retire el módulo del chip del reactivo del lector cuando haya completado la

transferencia.

Análisis de las muestras de los pacientes

PASO 1 Añadir la muestra del paciente

1. Abra la bolsa y rotule el dispositivo de prueba con el número de identificación

del paciente.

2. Con la pipeta de transferencia, apriete por completo la perilla de mayor

tamaño (superior) e introduzca la punta en la muestra del paciente.

3. Suelte el bulbo lentamente. El cilindro de la pipeta de transferencia deberá

llenarse por completo y parte del líquido deberá entrar en la perilla de menor

tamaño (inferior).

174

|

4. Coloque la punta de la pipeta de transferencia en el puerto de muestreo del

dispositivo de prueba y apriete por completo la perilla de mayor tamaño. La

totalidad del contenido líquido del cilindro de la pipeta de transferencia debería

entrar en el puerto de muestreo. No deberá dispensarse la muestra del bulbo

menor (inferior).

5. Retire la punta de la pipeta de transferencia del puerto de muestreo y, a

continuación, suelte la perilla de mayor tamaño (superior).

6. Deseche la pipeta de transferencia.

PASO 2 Realización de la prueba

1. En la pantalla principal, seleccione <Run Test>(Realizar prueba) y pulse

Intro.

2. Seleccione <Muestra del paciente>y pulse Enter.

3. Introduzca el número de identificación del paciente y pulse Enter.

4. Para confirmar que ha introducido el número correctamente, seleccione

<Confirmar ID del paciente>y pulse Enter. Si no ha introducido el número

correctamente, seleccione <Corregir ID del paciente>, pulse Entery repita el

paso anterior.

5. Introduzca el dispositivo de prueba en el lector y pulse Enter. Los resultados

se mostrarán cuando el análisis haya finalizado.

Nota: el dispositivo de prueba debería introducirse en el medidor en un plazo de

30 minutos a partir del momento en el que se añadió la muestra del paciente. Un

retraso de más de 30 minutos podría producir resultados incorrectos y que éstos

aparezcan sombreados en negro en la copia impresa.

PASO 3 Lea los resultados

1. Los resultados pueden imprimirse pulsando el botón Print.

2. Deseche el dispositivo de prueba después de que el lector lo expulse.

3. Un resultado sombreado en negro indica que éste fue incorrecto y que debe

repetirse la prueba.

175

|

Resultados

El medidor Triage® mide la muestra del paciente de forma automática. Los

resultados se visualizan en la pantalla. El usuario tiene la opción de imprimir los

resultados.

Para obtener información adicional, consulte el manual del usuario del lector

Triage Meter.

Estandarización

La prueba de enzimas cardíacas Triage® Cardiac Panel se ha estandarizado

utilizando preparaciones proteínicas purificadas de CK-MB, mioglobina y troponina

I a partir de una concentración de analito presente en plasma anticoagulado con

ácido edético (EDTA).

Control de calidad

Consideraciones sobre el control de calidad

Cada dispositivo de prueba consiste en un kit para la determinación cuantitativa

con dos materiales de control de concentraciones diferentes que se procesan

automáticamente con cada muestra de paciente, solución de controles líquidos

externos o muestra para pruebas de aptitud. Si la comprobación automática de

estos controles incorporados muestra que los resultados de los valores de los

controles están dentro de los límites establecidos durante la fabricación, el lector

ofrecerá un resultado para la muestra que se esté analizando. Si la comprobación

automática de estos controles incorporados muestra que los resultados de los

valores de los controles no están dentro de los límites establecidos durante la

fabricación, no se ofrecerá ningún resultado analítico. En su lugar, el lector

mostrará una advertencia o un mensaje de error que aparece descrito en el

manual del usuario del lector Triage®.

Las prácticas correctas de laboratorio indican que los controles externos deben

analizarse con cada nuevo lote o remesa de material, o cada 30 días, y cuando así

lo requiera el control de calidad estándar de su laboratorio. Los controles deberían

176

|

analizarse del mismo modo que las muestras de pacientes. Al analizar muestras

de pacientes o controles externos, si un analito falla por alguna razón (un fallo de

un control incorporado o un control externo fuera del intervalo), no se ofrecerán

resultados de pacientes.

Dispositivo de CC Triage®

Realice la prueba del dispositivo de CC cada día que se analicen muestras de

pacientes para comprobar el funcionamiento del instrumento. La prueba del

dispositivo de CC también puede realizarse al configurar el lector y siempre que lo

requieran los requisitos de control de calidad del laboratorio.

Analice el dispositivo de CC en los siguientes casos:

• Al instalar inicialmente el lector.

• Cada día que se hagan análisis de pacientes.

• Cuando se haya movido o transportado el lector.

• Cuando haya incertidumbre acerca del funcionamiento del lector.

Nota: Si el dispositivo de CC o los controles externos no funcionan como se

esperaba, revise las instrucciones anteriores para ver si la prueba se realizó

correctamente. Consulte el manual del usuario del lector Triage Meter para

obtener una descripción completa del sistema de control de calidad.

Limitaciones del procedimiento

Los resultados de la prueba no deben utilizarse como prueba absoluta de infarto

de miocardio y deben evaluarse en el contexto de todos los datos clínicos y de

laboratorio disponibles. En los casos en que los resultados del laboratorio no

coincidan con la evaluación clínica, deberán realizarse pruebas adicionales.

Los pacientes con lesiones del músculo esquelético pueden tener concentraciones

elevadas de CK-MB, mioglobina y troponina I. Los pacientes con fallo renal

pueden tener concentraciones elevadas de CK-MB y mioglobina.

Si no se consigue ver u obtener los resultados de la troponina I, la prueba no

podrá utilizarse como ayuda en el diagnóstico del infarto de miocardio (lesión).

177

|

Características de rendimiento

Sensibilidad analítica

La sensibilidad analítica o concentración mínima detectable y distinguible de cero

para los tres analitos se determinó analizando un calibrador de valor cero 20 veces

para cada analito, utilizando 3 lotes de reactivos y 5 lectores en 3 días distintos. La

sensibilidad analítica de cada análisis de la prueba de enzimas cardíacas Triage®

Cardiac Panel se indica a continuación:

CK-MB: 1, 0 ng/ml

Mioglobina: 5 ng/ml

Troponina I: 0,05 ng/ml

Intervalos de medición

CK-MB: 1, 0 - 80 ng/ml

Mioglobina: 5 - 500 ng/ml

Troponina I: 0,05 - 30 ng/ml

Sustancias que interfieren

La hemoglobina (hasta 1.000 mg/dl), los lípidos (colesterol hasta 1.000mg/dl y

triglicéridos hasta 1.000 mg/dl) o la bilirrubina (hasta 20mg/dl) añadidos a plasma

recogido con ácido edético (EDTA) como anticoagulante que contenía los tres

analitos no interfirieron en la recuperación de éstos. Estas sustancias no

produjeron una respuesta positiva en una muestra que no contenía ninguno de los

analitos de interés.

El hematocrito se varió entre un 30 y un 60%, sin ningún efecto significativo sobre

la recuperación de CK-MB, mioglobina o troponina I. No obstante, deben evitarse

en lo posible muestras muy hemolizadas. Cuando una muestra parezca muy

hemolizada, debe obtenerse y analizarse otra muestra.

Reporte De Resultados

178

|

Como en el Laboratorio Clínico del Hospital La María está protocolizada la prueba

CK-MB mediante otra técnica, sólo se reportan los resultados obtenidos para la

Troponina I y la Mioglobina.

Cobas b 121 (BEG). GASES ARTERIALES Y ELECTROLITOS

El sistema cobas b 121 (BGE) reúne las condiciones de brindar bajos costos y ser

un instrumento confiable para las determinaciones rápidas de gases en sangre y

electrolitos. El sistema cobas b 121 (BGE) sostiene a laboratorios clínicos que

enfrentan el desafío de la presión del incremento de sus costos para el cuidado de

la salud de sus pacientes. Altos niveles de automatización y bajos niveles de

mantenimiento significan muy poca intervención del operador. Esta combinación

con su modo económico, su mantenimiento libre alarga la vida de sus sensores y

sus botellones de desechos reusables ayudan a disminuir los costos del

laboratorio. Sistema confiable y efectivo en costos. Durante el desarrollo del

instrumento Roche se focalizó en reducir la complejidad y los costos para proveer

así una solución Premium para los laboratorios clínicos. Esto se logró utilizando la

plataforma, ya existente y ampliamente probada, cobas b 121 que simplifica y

reduce las determinaciones de los analitos necesarios para gases en sangre y

desórdenes del equilibrio ácido-base.

El sistema cobas b121 (BGE) entrega resultados de alta calidad en 50 segundos

incluyendo gases en sangre (pH, PCO2, PO2), electrolitos (Na+, K+, Ca++, Cl-) y

hematocrito (Hct), de estos parámetros son calculadas otras mediciones en forma

adicional como por ejemplo Base Excess (BE).

Gases Arteriales

Toma Y Manipulacion De La MuestraLa fase preanalítica es la que más contribuye a la inexactitud en la medición de los

gases sanguíneos. Para minimizar estos errores sería conveniente seguir las

siguientes recomendaciones:

179

|

1. Dispositivos para la toma de la muestra:Los recipientes de referencia son las jeringas de vidrio o plástico. Las

determinaciones de los gases sanguíneos se deben realizar en sangre completa,

por lo que para impedir que la sangre extraída se coagule en la jeringa se utilizan

anticoagulantes para inactivar los mecanismos que ponen en marcha la

coagulación. La heparina de litio es el anticoagulante de elección, pero hay que

tener en cuenta que un exceso de heparina afecta a la determinación del pH,

pCO2, pO2 y a la hemoglobina.

2. Preparación de la muestra tras la obtención:Hay que evitar la formación de burbujas de aire en la jeringa. Las burbujas que se

mezclan con una muestra de sangre dará lugar a una equilibración de gases entre

el aire y la sangre, reduciéndose de forma importante la pCO2 de la muestra,

aumentando el pH, por lo que tras la extracción es conveniente expulsar las

burbujas. Seguidamente se cierra con un tapón y se agita para disolver la

heparina, evitando así la formación de coágulos.

6. ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE

Las muestras deberían analizarse lo antes posible, ya que la sangre consume

oxígeno y libera

CO2 a una velocidad que depende de la temperatura corporal. Por ello, si se ha de

almacenar una muestra más de 10 minutos, deberá enfriarse entre 0 ºC y 4 ºC no

más de 30 minutos para minimizar los efectos del metabolismo.

Actuación previa a la etapa analítica:Una vez que la muestra llega al laboratorio, debe colocarse en agua helada e

identificarse. A continuación, se procede a su inspección para descartar la

180

|

existencia de coágulos o burbujas de aire, en cuyo caso debe ser rechazada. La

muestra debe ser homogénea, para ello es necesario mezclarla bien.

Las primeras gotas de sangre del cono de la jeringa suelen estar coaguladas, por

lo que deben rechazarse.

TIPO DE MUESTRASCuando se accede a un vaso para obtener una muestra donde determinar los

gases en sangre, hay que tener presente que pueden ocurrir tres tipos de

complicaciones: obstrucción vascular, hemorragia con formación de hematomas e

infección.

Las muestras sanguíneas pueden obtenerse por los siguientes procedimientos:

181

|

3. Muestras de sangre capilar.Es especialmente útil en cuidados intensivos de neonatos y pediatría, debiéndose

emplear con precaución por el riesgo de cometer errores muy graves.

4. Muestras de sangre venosa.Para el análisis de gases en sangre no se recomienda las muestras de sangre

venosa priférica ya que no proporcionan ninguna información sobre el estado de

oxigenación y sólo a groso modo reflejan el estado ácido-base arterial. La

distribución del volumen minuto cardiaco total a los diversos sistemas orgánicos

depende de la resistencia arteriolar local y del tono vasomotor de los lechos

capilares respectivos. El sistema cardiovascular intenta mantener un flujo

sanguíneo adecuado hacia los sistemas orgánicos ajustando las resistencias

periféricas, es por ello que los diferentes órganos no reciben una irrigación

proporcional a sus demandas metabólicas, lo que se traduce en una variación de

los valores de oxígeno según el sistema orgánico del que proviene la sangre

venosa.

PRINCIPALES PARAMETROS IMPLICADOS EN EL EQUILIBRIO ACIDOBASE.

182

|

VALORES DE REFERENCIA.

1. pH: es un parámetro indicador de la acidez o alcalinidad de una muestra de

sangre.

Por su relación con la pCO2, el pH se considera que tiene un componente

respiratorio, y por su relación con la concentración de bicarbonato plasmático y el

exceso de baseestándar se considera que tiene un componente metabólico,

pudiendo así distinguirse entre desequilibrios respiratorios y metabólicos.

Rango de referencia del pH en el adulto: 7.35-7.45.

2. pCO2: es la presión parcial de dióxido de carbono en la fase gaseosa en

equilibrio con la sangre. El dióxido de carbono difunde rápidamente a través de las

membranas celulares y puede considerarse igual a cero en el aire inspirado

normal. Por tanto su determinación es una medida directa de la idoneidad de la

ventilación alveolar en relación con el índice metabólico. Los valores altos y bajos

de pCO2 en sangre arterial indican hipercapnia e hipocapnia respectivamente.

Rango de referencia de pCO2 en adultos: varones: 35-48 mmHg; mujeres: 32-45

mmHg.

3. pO2: Es la presión parcial de extracción del oxígeno de la sangre arterial. Este

parámetro refleja los cambios producidos en la pO2 arterial, la concentración de

oxígeno y la afinidad de la hemoglobina por el oxígeno sobre la capacidad de la

sangre arterial para suministrar oxigeno a los tejidos.

Rango de referencia de pO2 en el adulto: 83-108 mmHg.

4. HCO3-real: Es la concentración de bicarbonato en el plasma de la muestra. Se

calcula utilizando los valores de pH y pCO2 en la ecuación de Henderson-

Hasselbalch.

Encontramos valores elevados en la alcalosis metabólica y como mecanismo de

compensación en la acidosis respiratoria. Los niveles bajos se detectan en la

acidosis metabólica y como mecanismo compensatorio en la alcalosis respiratoria.

Rango de referencia en el adulto de la HCO3-real: 22-26 mmol/L.

183

|

5. HCO3-estándar: es la concentración de carbonato de hidrógeno en el plasma

de sangre equilibrada con una mezcla de gases con una pCO2 de 40 mmHg y una

pO2 mayor o igual a 100 mmHg. Un bicarbonato estandar bajo indicaría una una

acidosis metabólica y si por el contrario fuera alto, sería indicativo de una alcalosis

metabólica.

Rango de referencia en el adulto del HCO3 estándar: 22-26 mmol/L

6. CTCO2: es la suma de las concentraciones de cada una de las formas en las

que se puede encontrar el dióxido de carbono.

7. Exceso/deficit de base: Es la concentración de base en sangre total valorable

con un ácido o una base fuerte hasta un pH de 7.4 a una pCO2 de 40 y a 37ºC. El

valor numérico del exceso (o déficit) de base representa la cantidad teórica de

ácido o base que habría que administrar para corregir una desviación de pH.

Rango de referencia: +2 / -2 mEq/L

8. SO2: es la saturación de oxígeno. Hace referencia al porcentaje de la

hemoglobina oxigenada en relación con la cantidad de hemoglobina capaz de

transportar oxígeno.

Rango de referencia de SO2 en el adulto: 95-99%.

9. FiO2: es la concentración de oxígeno inspirado fraccional. Representa la

concentración calculable de oxígeno que se administra al paciente. Se utiliza para

adecuar la oxigenoterapia en función de la clínica y del análisis de los gases

sanguíneos.

184

|

Electrolitos

Se define como electrolito a toda sustancia con iones libres, capaz de transportar

la corriente eléctrica y que se encuentra en forma de sólido fundido o presente en

una disolución.

En el cuerpo humano, los electrolitos se encuentran disueltos en el plasma y sus

variaciones provocan movimiento de agua entre los compartimientos donde se

encuentran, concentrándose de manera diferente y manteniendo un equilibrio de

los fluidos en las células.

Cabe mencionar que los más importantes son aquellos con carga positiva como el:

sodio (Na+), potasio (K+), calcio (Ca++) y magnesio (Mg++); y los iones con carga

negativa como el:

Cloro (Cl-), bicarbonato (HCO3-) y fosfato (HPO4-).

El de mayor concentración en el líquido extracelular es el Na++, mientras que el

K+ es el electrolito de mayor concentración del líquido intracelular, junto con el

185

|

Mg+. De igual manera, se pueden identificar a la dextrosa, creatinina y urea que

son consideradas no electrolitos debido a que no pueden disociarse, formando

iones, como lo hacen las sustancias antes mencionadas.

De esta manera, cada compartimiento líquido tendrá su propia composición

electrolítica, que se encuentra medida en miliequivalentes (mEq) que indican el

número de cargas iónicas o uniones electrovalentes en la solución ionizada.

POTASIO

El potasio es uno de los principales iones del organismo alcanzando una

concentración de cerca a 3500 mEq y a diferencia del sodio, se localiza (98%),

mientras que su concentración plasmática alcanza a los 5 mEq/l.

La eliminación del K+por vía fecal es de 5 a 10 mEq/d, y por sudor se pierde al

menos 10 mEq/d.

La principal función del potasio es la generación del potencial de reposo de la

membrana celular, siendo particularmente importante en el proceso de

excitabilidad del tejido nervioso, corazón y músculos (liso y esquelético),

encontrándose en estos últimos, así como en el hígado el mayor reservorio de

este elemento.

CLORO

Es el principal anión del líquido extracelular y se encuentra casi siempre unido al

sodio en forma de cloruro de sodio (ClNa), lo que favorece al mantenimiento de la

presión osmótica de la sangre.

El cloro se excreta en pequeñas cantidades a partir de la transpiración insensible y

al igual que el Na+ se elimina en grandes cantidades en caso de sudoración

profusa. Este anión tiene poca reabsorción renal, misma que se encuentra

determinada por la reabsorción de sodio (Na+), controlada por la acción de la

aldosterona. De esta forma por cada cloruro de sodio reabsorbido, se reabsorbe

una molécula de bicarbonato, participando de esta forma en la neutralización de

pH sanguíneo y el mantenimiento del equilibrio ácido base.

186

|

El cloro regula también la producción de ácido clorhídrico en el estómago e

interviene en la contractilidad muscular, además de favorecer el transporte del

dióxido de carbono por los hematíes.

CALCIO IONIZADO

Este electrolito requiere una ingesta diaria de 500 a 1000 mg de calcio elemental,

eliminándose 100 a 200 mg por riñones, y 400 a 800mg/d por heces.El calcio (Ca+

+) es un ion importante para la formación del hueso, interviniendo de manera

activa en la coagulación sanguínea, reabsorción de la vitamina B12, transmisión

sináptica y excitabilidad de las membranas. Sus valores plasmáticos dependen de

la contracción muscular y se mantienen constantes, aun a expensas de extraer

Ca++de los huesos.

1. Marcadores Tumorales

El VEDALAB EASY READER

Es un medidor para la lectura de tarjetas de pruebas rápidas

inmunocromatográficas usando una cámara-CCD de alta resolución un software

integrado creado para el análisis de imágenes.

El EASY READER tiene un chip extraíble que contiene todo el software

necesario para la obtención de los resultados cuantitativos o semi - cuantitativos

de las líneas de prueba los valores de absorbancia. Dependiendo del parámetro

probado, los resultados pueden ser obtenidos a partir de muestras de sangre total,

plasma, suero u orina.

El medidor también tiene una impresora incorporada para mantener archivos de

toda la información relativa a cada paciente (nombre, fecha de nacimiento y

resultados) y para el usuario después de haber realizado el análisis.

Principio de la reacciónSi está presente en la muestra, el analito reacciona con el conjugado de color y

fluye para ser capturado por los reactivos de la cubierta de la membrana. La

187

|

intensidad de la banda de color que aparece en la zona de prueba es directamente

proporcional a la concentración del analito.

Principio del lectorEl VEDALAB EASY READER se basa en tecnología de inmunocromatografía

cuantitativa mediante la medición de la intensidad de la reacción en un casete de

prueba.

La cámara CCD de Easy reader puede medir la intensidad del color y determinar

la concentración de analitos en una muestra.

1. Coloque el instrumento en condiciones ambientales no corrosivas, en una

superficie plana y uniforme que está libre de polvo, el agua (o cualquier líquido)

y vibraciones fuertes .

2. Primero conecte el teclado para el lector

3. Conecte el lector a una fuente de alimentación

4. Pulse el interruptor en la parte posterior del lector para empezar a usarlo.

5. Pulse el botón " Inicio"

6. Seleccione el parámetro

7. Los datos de entrada del paciente necesarios para identificar la muestra a

través del teclado

188

|

8. Realizar el procedimiento de ensayo como se indica en las descripciones de

las pruebas a continuación.

9. Seleccione el modo " inmediato " o " cuenta atrás "

10. Inserte la tarjeta de prueba en el medidor

GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA (hCG) La gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona glicoproteica

producida en el embarazo, fabricada por el embrión en desarrollo poco después

de la concepción y más tarde por el sinciciotrofoblasto (parte de la placenta). Su

función es evitar la desintegración del cuerpo lúteo del ovario y, por ende,

mantener la producción de progesterona que es fundamental para el embarazo en

los seres humanos. La hCG puede tener funciones adicionales; por ejemplo, se

cree que afecta a la tolerancia inmunológica del embarazo. Las primeras pruebas

de embarazo, en general, se basan en la detección o medición de hCG. Debido a

que la hCG es producida también por algunos tipos de tumores, es un importante

marcador tumoral, pero no se sabe si esta producción es una causa o un efecto de

la tumorigénesis.

HCG CHECK-1 es una prueba cuantitativa rápida para la detección de la HCG en

el suero, el plasma o la orina El método, patentado, se basa en la combinación

única de anticuerpos monoclonales marcados con oro coloidal y de anticuerpos

policlonales en la fase sólida para identificar la HCG en las muestras con gran

especificidad. Según la concentración en HCG, varias líneas aparecen en la zona

de lectura, permitiendo la medida cuantitativa del nivel de HCG en las muestras de

suero, plasma u orina, si la prueba se realiza con el lector rápido EASY

READER®.

III. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD

1. Todos los componentes del kit deben conservarse a temperatura ambiente

(entre +4°C y +30°C) en sus empaques originales.

2. No congele el kit.

3. La prueba es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del

empaque.

189

|

IV- PRECAUCIONES

1- Esta prueba es concebida sólo para uso diagnóstico in vitro y un uso

profesional.

2- Léase atentamente estas instrucciones antes de usar la prueba.

3- No use la prueba después de la fecha de caducidad indicada en el

empaque.

4- No use una prueba si su bolsa de protección está deteriorada.

TOMA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS

a) Suero o plasma

1. Las muestras deben tomarse en condiciones de toma estándares (de

manera aséptica para procurar evitar cualquier hemólisis).

2. No es necesario centrifugar o una filtrar de suero.

3. Si la prueba se realiza dentro de 48 horas después de la toma, la muestra

debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y +8°C). 4. Si la prueba se

realiza a más de 48 horas después de la toma, la muestra debe congelarse.

Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente descongelada,

cuidadosamente mezclada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite

descongelar y recongelar las muestras. 5. En caso de turbidez, de viscosidad

alta o de presencia de partículas en la muestra de suero, hay que diluir con un

volumen igual (V/V) de solución fisiológica antes de realizar la prueba.

b) Orina 1. Para la detección óptima de un embarazo precoz, es preferible usar

una muestra de la primera orina de la mañana, porque contiene la

concentración más alta de HCG. Sin embargo, se pueden usar muestras de

orina tomadas en cualquier momento del día. 2. Tome la muestra de orina en

un recipiente limpio, seco y sin conservantes 3. Si la prueba no se realiza

inmediatamente, la muestra debe conservarse en el frigorífico (entre +2°C y

+8°C) o a una temperatura inferior a +25°C durante 24 horas máximo. En este

c aso, equilibre la muestra a temperatura ambiente antes de realizar la prueba.

4. Si la prueba se realiza más de 48 horas después de la toma, la muestra

debe congelarse. Antes de la prueba, la muestra debe ser totalmente

190

|

descongelada y equilibrada a temperatura ambiente. Evite descongelar y

recongelar las muestras.

PROCEDIMIENTO DE PRUEBA

1. Asegúrese de que todas las muestras y todos los casetes de reactivo estén

a temperatura ambiente antes de empezar la prueba.

2. Saque el casete de reactivo de su bolsa de protección rasgando a lo largo

de las muescas.

3. Indique en la prueba el nombre del paciente o un número de identificación.

4. Llene la pipeta con la muestra (plasma, suero u orina) y manténgala

verticalmente. Deposite exactamente 4 gotas (150 µL, sin burbuja de aire) de

plasma, suero u orina en el pocillo de muestra.

5. Lea el resultado (en mUI/mL) después de 15 minutos, en lectura inmediata o

diferida.

VII- RENDIMIENTO

El intervalo de medida es de 5 hasta 500,000 UI/L

LÍMITACIONES DE LA PRUEBA

1. La orina de los hombres sanos y de las mujeres no embarazadas muestra

normalmente concentraciones indetectables de HCG con la prueba.

191

|

2. A pesar de la variabilidad de las concentraciones de HCG en las mujeres sanas

al principio del embarazo, la prueba puede generalmente confirmar un embarazo

desde el primer día de amenorrea.

3. La HCG fue encontrada no sólo durante el embarazo, sino también en pacientes

sufriendo de una enfermedad trofoblástica gravídica y no gravídica. Como la HCG

de los tumores trofoblásticos es la misma que la observada durante el embarazo,

estas afecciones, como el coriocarcinoma y la mola hydatidiforma, deben

descartarse antes de realizar el diagnóstico de embarazo.

4. Un embarazo normal no se puede distinguir de un embarazo ectópico sólo

basándose en la concentración de HCG. De la misma manera, un aborto

espontáneo puede afectar la interpretación de los resultados de la prueba.

5. Un embarazo muy precoz, con una concentración extremamente baja de HCG,

puede resultar en un resultado negativo. En este caso, otra muestra debe tomarse

y analizarse al menos 48 horas más tarde.

6. Las concentraciones de HCG pueden detectarse durante varias semanas

después de un parto normal, un parto por cesárea, un aborto terapéutico.

7. Ciertas muestras de suero conteniendo altas concentraciones de factor

reumatoide (RF), de anticuerpos heterofilos o de Forssman pueden resultar en

resultados positivos no específicos. Estas pacientes deben ser identificadas antes

de la prueba.

8. Como para cualquier procedimiento diagnóstico, el médico debe evaluar los

datos obtenidos con esta prueba simultáneamente con otros datos clínicos.

9. La presencia de hidroxietilcelulosa en la composición del lubricante de las

sondas urinarias puede resultar en un resultado falso-positivo con la prueba en

una concentración superior o igual a 0.1 %.

10. Este tipo de prueba sólo debe usarse con el lector de pruebas rápidas EASY

READER® de VEDALAB.

11. Si el tiempo de lectura (15 minutos) no es rigurosamente respetado, los

resultados obtenidos son falseados.

12. Este tipo de prueba no debe usarse para una lectura visual.

192

|

13. Como es el caso para cualquier método de diagnóstico o para cualquier

sistema automático, existe una variabilidad de los resultados obtenidos. Por

consiguiente, hay que tomar en cuenta un intervalo de confianza de +/-25% para

el valor obtenido y para la interpretación clínica del resultado.

Antígeno de Cáncer CA-125 El antígeno de cáncer CA 125 es un antígeno de superficie asociado con el cáncer

de epitelio ovárico. En suero, el CA-125 circula asociado con una glicoproteína de

gran peso molecular. Estudios publicados han in dicado que niveles séricos

elevados de CA-125 pueden ser detectados en individuos con carcinoma

indiferenciado de ovario, endometrio y células claras. Las concentraciónes

séricas de CA-125 son superiores a 35 IU/mL en el 60% de las mujeres con

cáncer de ovario. Por lo tanto gran parte de los estudios recomiendan este valor

como nivel de decisión. El CA 125 sérico se encuentra elevado en el 1% de la

mujeres sanas, 3% de las mujeres sanas con alteraciones benignas de ovario, 6%

de pacientes con condiciones no neoplásicas (incluído pero no limitado al primer

trimestre de la gestación, endometriosis, menstruación, fibrosis uterina, salpingitis

aguda, enfermedad hepática e inflamación peritoneal, de pericardio o pleura).

Determinaciones seriadas de CA 125 en suero, así como una evaluación pélvica

incrementa la especificidad del test. Las concentraciones séricas de CA 125

pueden ser útiles en el monitoreo del tratamiento y el pronóstico a la respuesta al

mismo y la progresión de la enfermedad. CA 125 es un marcador tumoral sérico

para el monitoreo de la respuesta a la quimioterapia, detectando la recurrencia y

es útil para distinguir las masas pélvicas malignas de las benignas. Una caída

rápida de valores séricos de CA 125 durante la quimioterapia predice un

pronóstico favorable.

Hasta la fecha, CA 125 es el marcador más sensible para el cáncer de epitelio

ovárico residual. CA 125 también puede estar elevado en pacientes con cáncer de

pulmón, cérvix, trompas de Falopio, útero y endometriosis.

El CA-125 –CHECK-1 es un ensayo cuantitativo rápido para la detección de

antígeno de cáncer de ovario en suero, plasma o sangre total para ser usado

como prueba de detección- el método emplea una única combinación de

193

|

conjugado monoclonal marcado con anticuerpos policlonales de fase sólida para

identificar CA 125 con un alto grado de especificidad.

Cuando la muestra fluye a través del dispositivo absorbente el conjugado de

anticuerpos marcado se une con el CA 125 contenido en la muestra. Este

complejo migra en la membrana y es ligado por los anticuerpos policlonales anti

CA 125 atrapados en la fase sólida en la zona de reacción (T). la intensidad del

color de la banda del test es proporcional a la concentración de CA 125 en la

muestra. la mezcla sigue fluyendo a través del dispositivo absorbente pasando la

zona reactiva (T), la zona de control (C). El conjugado no ligado se une a los

reactivos en la zona control (C), produciendo una banda de color rosa

demostrando que los reactivos funcionan correctamente.






empaque.

IV- PRECAUCIONES

Esta prueba es concebida sólo para uso diagnóstico in vitro y un uso

profesional.

Léase atentamente estas instrucciones antes de usar la prueba.

No use la prueba después de la fecha de caducidad indicada en el

empaque.

No use una prueba si su bolsa de protección está deteriorada.



manera aséptica para evitar cualquier hemólisis).


194

|













de las muescas.


4. Llene la pipeta con la muestra (plasma, suero o sangre total) y manténgala

verticalmente. Deposite exactamente 1 gota (25 µL, sin burbuja de aire) de

plasma o suero o 2 gotas (50 µL) de sangre total en el pocillo de muestra y

espere a que la muestra sea totalmente absorbida antes de adicionar el

diluente.

5. agregue exactamente 4 gotas de diluente en el pocillo de muestra

6. lea los resultados (en U/mL) pasados 15 minutos usando el modo de lectura

inmediato o en conteo regresivo.

CARACTERISTICAS ANALÍTICAS

Linealidad

El rango de medida es 15-750 U/ml

Para muestras cuya concentración es superior a 750 U/ml, diluir con solución

salina y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por el factor de dilución.

Sensibilidad

195

|

El CA-125-CHECK-1 detecta niveles cercanos a los 10U/ml, caso en el cual los

resultados se reportan como < 15 U/ml. Niveles superiores a 35 U/ml son

considerados anormales.

LIMITACIONES DEL TEST

1. Como en cualquier procedimiento diagnóstico, el médico debe confirmar los

resultados obtenidos con este test, empleando otros métodos diagnósticos.

2. Para el caso de muestras de sangre total utilice sólo muestras recién

obtenidas (<4 horas). Si la muestra procede de punción dactilar debe ser

procesada inmediatamente.

3. En caso de concentraciones altas de factor reumatoide (RF) o proteína C

Reactiva (PCR), el test puede presentar un falso positivo.

4. El test está diseñado para eliminar la inteferencia potencial de anticuerpos

humanos contra IgG murina (HAMA). Sin embargo niveles elevados de

HAMA pueden inducir falsos positivos.

5. El test sólo puede ser usado empleando el VEDALAB EASY READER.

6. Si el test no es leído en exactamente 15 minutos los resultados pueden ser

erróneos.

ALFA FETO PROTEÍNA.La alfa fetoproteína (AFP) es una glicoproteína de cadena simple con un peso

molecular aproximado de 70.000 kDa. Es producida por el saco vitelino fetal y

estructuras proximales del hígado y tracto gastrointestinal. En el feto humano, AFP

es la principal proteína que alcanza altos niveles séricos alrededor de la semana

12 de gestación y luego desciende a niveles indetectables en el adulto sano no

gestante.

AFP como marcador tumoral no fue inmediatamente apreciado porque el ensayo

usado para la cuantificación no era lo suficientemente sensible para detectar las

concentraciones en nanogramos asociadas con enfermedad temprana. Cuando un

radioinmunoensayo más sensible estuvo disponible, la utilidad de AFP como

marcador tumoral fue en aumento.

196

|

Aumentos marcados se encuentran en tumores malignos en l infancia, tales como

hepatoblastomas y nefroblastomas y en carcinoma hepatocelular y ciertos tumores

testiculares en adultos. Menos comúnmente, tumores malignos de tracto

gastrointestinal y otros órganos con metástasis masiva en hígado son asociados

con concentraciones aumentadas de AFP en suero.

La AFP-CHECK -1 es un ensayo cuantitativo rápido para la detección de AFP

humana en suero, plasma o sangre total. El método emplea un conjugado

monoclonal coloreado y una fase solida con anticuerpos policlonales para

identificar AFP en muestras con alto grado de especificidad.

Cuando la muestra fluye a través del dispositivo absorbente el conjugado de

anticuerpos marcado se une con la AFP contenido en la muestra. Este complejo

migra en la membrana y es ligado por los anticuerpos policlonales anti AFP

atrapados en la fase sólida en la zona de reacción (T). La intensidad del color de

la banda del test es proporcional a la concentración de AFP en la muestra. La

mezcla sigue fluyendo a través del dispositivo absorbente pasando la zona

reactiva (T), la zona de control (C). El conjugado no ligado se une a los reactivos

en la zona control (C), produciendo una banda de color rosa demostrando que los

reactivos funcionan correctamente.






empaque.

IV- PRECAUCIONES


profesional.


197

|


empaque.














PROCEDIMIENTO DE PRUEBA1. Asegúrese de que todas las muestras y todos los casetes de reactivo estén



de las muescas.






diluente.


198

|

6. lea los resultados (en ng/mL) pasados 10 minutos usando el modo de lectura


CARACTERISTICAS ANALÍTICASLinealidad

El rango de medida es 10-300 ng/ml

Para muestras cuya concentración es superior a 300 ng/ml, diluir con solución


Sensibilidad

El AFP-CHECK-1 detecta niveles cercanos a los 5U/ml, caso en el cual los

resultados se reportan como < 15 U/ml. Niveles superiores a 30 ng/ml en menores

de 1 año y de 40 ng/ml en adultos son considerados anormales.


Como en cualquier procedimiento diagnóstico, el médico debe confirmar los

resultados obtenidos con este test, empleando otros métodos diagnósticos.

Para el caso de muestras de sangre total utilice sólo muestras recién

obtenidas (<4 horas). Si la muestra procede de punción dactilar debe ser

procesada inmediatamente.

En caso de concentraciones altas de factor reumatoide (RF) o proteína C


El test está diseñado para eliminar la inteferencia potencial de anticuerpos

humanos contra IgG murina (HAMA). Sin embargo niveles elevados de

HAMA pueden inducir falsos positivos.

El test sólo puede ser usado empleando el VEDALAB EASY READER.

Si el test no es leído en exactamente 10 minutos los resultados pueden ser

erróneos.

ANTÍGENO CARCINOEMBRIONARIO CEAEl antígeno Carcinoembrionario al igual que la AFP es producido durante el

desarrollo fetal. Después del nacimiento, la producción de CEA se detiene y remite

199

|

a valores indetectables en adultos sanos normales. Sin embargo antígenos onco-

fetales pueden aparecer debido a la des- represión de genes que son

normalmente expresados solo durante los primeros años de vida. Como antígenos

secretados CEA y AFP no contribuyen significativamente en la inmunidad contra

tumores, el papel de estos antígenos, llamados neoantígenos, en la

inmunovigilancia es cuestionable. Los niveles normales de CEA niveles en las

personas normales no fumadoras oscilan hasta 2,5 y 5,0 para el grupo de los

fumadores pero se elevan por encima de 10 ng/ml normalmente en variedad de

cáncer: pulmón, mama, colo- rectal. El seguimiento de estos pacientes es el

principal uso de estos neoantígenos tumorales. La presencia de CEA en la

circulación ha sido explotada estos diagnósticos y esquemas terapéuticos. La

medición de CEA no indica necesariamente desarrollo de cáncer ya que los

niveles de este antígeno también puede aumentar en algunas condiciones no

malignas, como en cirrosis crónica, enfisema pulmonar o tabaquismo crónico.

Cuando se contempla un procedimiento curativo (cirugía), los niveles

prequirúrgicos de CEA pueden hacer pronóstico significativo. Altos niveles de CEA

en vesicula biliar pueden indicar la presencia de metástasis hepática en pacientes

que fueron sometidos a cirugía curativa de carcinoma colorrectal. Además, se ha

hallado que niveles séricos de CEA son un valioso indicador pronóstico de cáncer

de mama avanzado.

CEA-CHECK-1 es un test cuantitativo rápido para la medición de CEA en suero,

plasma o sangre total. El método se basa en la unión entre anticuerpos

monoclonal anti-CEA fijados en el conjugado coloreado y el CEA presente en la

muestra. Cuando el CEA esta preente en la muetra, el complejo antígeno-

conjugado e une a los anticuerpos monoclonales que recubren la membrana del

test. Una muestra que contiene niveles elevados de CEA induce la formación de

una banda coloreada de rosa en la región del test (T) mientras que una muestra

negativa solo producirá la formación de la banda de control (C), que indica el

correcto funcionamiento de la prueba.

200

|






empaque.

IV- PRECAUCIONES


profesional.



empaque.

















201

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de las muescas.






diluente.


6. lea los resultados (en U/mL) pasados 15 minutos usando el modo de lectura


CARACTERISTICAS ANALÍTICAS

Linealidad

El rango de medida es 5-250 ng/ml

Para muestras cuya concentración es superior a 250 ng/ml, diluir con solución


Sensibilidad

El CEA-CHECK-1 detecta niveles cercanos a los 2 ng/ml, caso en el cual los

resultados se reportan como < 5 ng/ml. Niveles superiores a 5 ng/ml son

considerados anormales.


1. Si bien el aumento en los niveles de CEA generalmente ocurre en ciertas

malignidades, estos también pueden aparecer en algunas condiciones no

malignas como la cirrosis crónica, el enfisema pulmonar y fumar en exceso.

2. Los resultados de CEA no deben ser interpretados como evidencia absoluta

de la presencia o ausencia de enfermedad malina pero puede ser usada en

conjunto con información procedente de otros procedimientos diagnósticos y

la evaluación clínica del paciente. CEA no es una prueba de detección de

cáncer oculto pero si una prueba de monitoreo para pacientes con varios tipos

202

|

de malignidades o para evaluar la respuesta a la terapia y como potencial

indicador de la recurrencia y pronóstico.

3. Niveles inferiores a 5 ng/ml pueden ser obtenidos en muestras de pacientes

con carcinoma temprano.

4. Se pueden obtener resultados positivos en pacientes con tratamientos

antineoplásicos (la hepatotoxicidad producida por estos medicamentos puede

causar el incremento de niveles séricos de CEA). La radioterapia también

puede causar incrementos transitorios de CEA.

5. En caso de concentraciones altas de factor reumatoide (RF) o proteína C


6. El test está diseñado para eliminar la inteferencia potencial de anticuerpos

humanos contra IgG murina (HAMA). Sin embargo niveles elevados de HAMA

pueden inducir falsos positivos.

7. El test sólo puede ser usado empleando el VEDALAB EASY READER.

8. Si el test no es leído en exactamente 15 minutos los resultados pueden ser

erróneos.

INMUNOGLOBULINA E TOTAL

La IgE es una inmunoglobulina normalmente encontrada en niveles mínimos

(nanogramos) en individuos sanos.

En pacientes alérgicos la IgE está presente tanto en el suero como fuertemente

unido a la superficie de los basófilos y mastocitos. La detección del nivel de IgE

total es de uso diagnóstico en caso de asma (para diferenciar alérgica de asma no

alérgica), rinitis y eczema.

Otras enfermedades en las que se encuentran niveles elevados de IgE en suero

incluyen infecciones parasitarias, aspergilosis broncopulmonar y algunas

dermatitis.

La IgE -CHECK - 1 es un ensayo cuantitativo rápido para la detección de IgE en

muestras de sangre total, plasma o suero. El método emplea una combinación

203

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única de conjugado monoclonal coloreado y anticuerpos policlonales en fase

sólida para identificar IgE en las muestras de ensayo con un alto grado de

sensibilidad.

Como la muestra de prueba fluye a través del dispositivo absorbente, el conjugado

anticuerpo - colorante se une al anticuerpo anti IgE formando un complejo

antígeno-anticuerpo. Este complejo se une al anticuerpo anti IgE en la zona de

reacción (T) y produce una banda de color rosa. En ausencia de IgE, la mezcla

continúa fluyendo a través del dispositivo absorbente por la zona control y la zona

reactiva. El conjugado no unido se une a los reactivos en la zona de control (C), la

producción de una banda de color rosa, lo que demuestra que el reactivo está

funcionando correctamente.

204

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7. ANEXOS

205

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8. REFERENCIAS

http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/nguias/other/renalallNS.pdf

Ministerio de Salud, República de Chile, Instituto Nacional de Salud. Documentos

Técnicos para el Laboratorio Clínico: Recomendaciones para el análisis de

Líquidos biológicos Abril 01 de 2016. Santiago de Chile. [Internet] Disponible en:

http://www.ispch.cl/sites/default/files/Recomendaciones%20para%20el%20Analisis

%20Liquidos%20Biologicos.pdf Consultado: julio 01 de 2016

206

http://www.ispch.cl/sites/default/files/Recomendaciones%20para%20el%20Analisis%20Liquidos%20Biologicos.pdf

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Ruíz, M. Ortíz, C. Sánchez, J. Peña, A. Transtornos del Equilibrio Acido base.

Málaga, España. [Internet] Disponible en:

http://www.medynet.com/usuarios/jraguilar/Manual%20de%20urgencias%20y

%20Emergencias/acidbase.pdf Consultado: julio 01 de 2016

Bustamante C. Gladys, Cuba Pardo Grover. Electrolitos. Rev. Act. Clin. Med

[revista en la Internet]. [citado 2016 Ago 07]. Disponible en:

http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2304-

37682013001200001&lng=es. Consultado: 15 Junio de 2016

Elaborado por Cargo Fecha

207

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http://www.medynet.com/usuarios/jraguilar/Manual%20de%20urgencias%20y%20Emergencias/acidbase.pdf

http://www.medynet.com/usuarios/jraguilar/Manual%20de%20urgencias%20y%20Emergencias/acidbase.pdf

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Revisado por Cargo Fecha

Aprobado por Cargo Firma Fecha

9. Historial de versiones

Versión Fecha del Cambio Descripción

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lamaria.gov.colamaria.gov.co/institucional/wp-content/uploads/2018/01/... · web viewla albúmina...

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