validaciÓn

VALIDACIÓN DE

MÉTODOS

ANALÍTICOS

Q.F MARÍA MERCEDES MEDINA

H

2

¿Por qué validar?


H

3

¿Por qué validar?

• La validación forma parte integral del sistema de

calidad.

• Las BPM exigen que tanto los procesos como

las metodologías analíticas estén validadas.

• Proporciona confianza y seguridad al método

analítico y calidad a los resultados.

• Optimización del método.

• Competitividad.

• Y …


H

4

NORMA 17025

REQUISITOS TÉCNICOS

5.4.2 Selección de los métodos.

.....Preferiblemente, se deben emplear

métodos publicados en normas

internacionales, regionales o

nacionales. El laboratorio debe

garantizar que utiliza la última edición

válida de las normas, a menos que sea

apropiado o imposible de hacerlo así.


H

5

NORMA 17025


5.4.2 Selección de los métodos.

.... Los métodos desarrollados o

adoptados por el laboratorio también

pueden ser utilizados si resultan

adecuados para los fines propuestos y si

están validados. El cliente debe ser

informado sobre el método elegido


H

6

NORMA 17025


5.4.3 métodos desarrollados por el

laboratorio.

La introducción de métodos de ensayo y

calibración desarrollados por el

laboratorio para su propio uso debe ser

una actividad planeada y se debe

asignar a personal calificado y equipado

con los recursos adecuados.


H

7

NORMA 17025

¿Qué es validar?

5.4.5 Validación de los Métodos.

5.4.5.1 Validación es la confirmación

por examen y suministro de evidencias

objetivas del cumplimiento de los

requisitos particulares para un uso

específico.


H

8

¿Qué es validar?

USP 31

• Proceso por el cual se establece mediante

estudios de laboratorio que las

características de calidad del método

analítico se adecuan a los requerimientos

y necesidades de la aplicación analítica

propuesta.


H

9

DEFINICIONES

TÉCNICA

Aplicación de un principio

científico del cual se ha

demostrado su utilidad

para proveer información

analítica. Ej.: AA , IR, CG,

HPLC.

Taylor JK. Validation of analytical methods. 184th ACS National Meeting. Kansas. USA. 1982.


H

10

DEFINICIONES

MÉTODO

Adaptación de una

técnica para una

medición específica con

un fin determinado.



H

11

DEFINICIONES

PROCEDIMIENTO

Conjunto de instrucciones

detalladas necesarias para llevar a

la práctica un método, presentadas

en forma escrita.



H

12

FASES DE LA VALIDACIÓN

FASE I : ESTANDARIZACIÓN

OPTIMIZACIÓN DE CONDICIONES Y

VARIABLES

FASE II : DETERMINACIÓN DE LAS

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO DEL

MÉTODO

FASE III : EVALUACIÓN POR RESULTADO

La documentación es parte esencial de la

validación

VALIDACIÓN

PROTOCOLO

DE VALIDACIÓN

REALIZACIÓN DE LA

VALIDACIÓN

EVALUACIÓN

RESULTADOS

ANALÍTICOS

INFORMES

TÉCNICOSCERTIFICADO

DE VALIDACIÓN

ESTANDARIZACIÓN OPTIMIZACIÓN

DE CONDICIONES Y VARIABLES


H

14

PROTOCOLO DE VALIDACIÓN

Conjunto de instrucciones que garantizan

resultados uniformes de un procedimiento

de validación, constituye la planificación,

ejecución, verificación y control de la

validación.


H

15

PROTOCOLO DE VALIDACIÓN

• Objetivos

• Alcance

• Responsabilidad

• Referencias

• Factores críticos

• Parámetros a evaluar y C.A.

• Muestras

• Equipos

• Método analítico


H

16

ICHUSP

VALIDACIÓN- Referencias


H

17

VALIDACION

Parámetro I II III IV

Cuan-

titativo

Ensayo

límite

Exactitud Si Si * * No

Precisión Si Si No Si No

Especificidad Si Si Si * Si

Límite de detección No No Si * No

Límite de

cuantificación

No Si No * No

Linealidad Si Si No * No

Rango Si Si * * No

* Puede ser requerido, dependiendo del ensayo


H

18

SELECTIVIDAD

Este parámetro se refiere a la propiedad del

método para producir una respuesta

debida solo al analito de interés, libre de

interferencias de otros componentes.

• Metabolitos del analito.

• Productos de degradación.

• Matriz de la muestra.


H

19

SELECTIVIDAD

¿Como se hace?

• Analizar matriz sin activo.

• Analizar por triplicado matriz adicionado

con los productos de degradación,

sustancias relacionadas y sustancias de

interés equivalente al 100%.

• Analizar por triplicado muestras solas,

solo el analito de interés.


H

20

SELECTIVIDAD

¿Como se hace?

Someter al activo a condiciones de

degradación forzada.

• Termólisis (105°C, 8 días)

• Fotolisis (Luz natural o ultravioleta, 8 días)

• Hidrólisis acida (HCl 0.1N, 24 horas)

• Hidrólisis alcalina (NaOH 0.1N, 24 horas)

• Oxidación (H2O2)


H

21

SELECTIVIDAD

• Ensayos separativos

No se puede hacer identificación sólo con eltiempo de retención.

• HPLC/DAD

• HPLC/MS

• HPLC FR / FN

• CG/MS

• CG/FTIR


H

22

Criterios de aceptación.

• Al analizar el placebo no hay respuesta.

• Resolución > 1.5

• Factor de coleo < 2

• Número de platos teóricos > 2000

• Identidad del pico Pureza de pico.

• Ausencia de coelución.

• Recuperación del analito 98-102%

SELECTIVIDAD


H

23

LINEALIDAD Y RANGOSe refiere a la proporcionalidad entre la

concentración del analito y su respuesta.

¿Como se hace?

• Solución patrón

• Muestra problema

• 3 a 5 niveles de concentración, mínimo por triplicado.

mg de activo vs Vol. titulante y = 0.7215x + 0.1719

R2 = 0.9973

0.000

2.000

4.000

6.000

8.000

10.000

12.000

14.000

16.000

0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0

mg

Vo

lum

en

mg activo vs Vol titulante Lineal (mg activo vs Vol titulante)


H

24

LINEALIDAD Y RANGO

Criterios de aceptación

• Coeficiente de correlación r y de determinación r2.

• r: >= 0.999

• r2: >= 0.990

• Prueba para el intercepto (prueba t)

• Prueba para la pendiente (prueba t)

• Prueba para la regresión (Prueba F)


H

25

EXACTITUD

• Grado de concordancia entre el valor que es

aceptado convencionalmente como valor

verdadero o un valor de referencia y el valor

encontrado.

• Indica que cerca se esta del valor verdadero


H

26

EXACTITUD

¿Como se hace?

• Se recomienda un mínimo de 3 determinaciones por 3 niveles de concentración en todo el rango especificado. (80%-120%)

La exactitud se expresa como:

Porcentaje de recuperación (%R)

%R = xm/U*100


H

27

EXACTITUD


• Porcentaje de recuperación: 98.0 - 102.0%

• Coeficiente de variación: <= 2.0%

– Test De Cochran

• Si G calculado < G tabulado se acepta Ho

entonces las varianzas entre los niveles de

concentración son equivalentes, es decir el

factor concentración no influye en la variabilidad

de los resultados.


H

28

PRECISIÓN

• Grado de concordancia (grado de dispersión)

entre una serie de medidas obtenidas de

múltiples muestras de una muestra homogénea

bajo condiciones prescritas.

• Se presentan tres niveles de precisión

Repetibilidad

Precisión intermedia

Reproducibilidad


H

29

REPETIBILIDAD

• Expresa la precisión de la técnica analítica bajo

las mismas condiciones de operación en un

intervalo de tiempo corto.

• Es llamada precisión intra-ensayo.

• La repetibilidad esta dividida en dos niveles

Repetibilidad del sistema

Repetibilidad del método


H

30

PRECISIÓN

¿Como se hace?

• Repetibilidad

Mínimo 6 muestras al 100% ó un mínimo de 3

muestras a tres niveles. (80%-120%)

• Precisión intermedia

Se estudiara la variación de los factores día (3

días) y analista (2 analistas) al 100% de la

concentración.


H

31

PRECISIÓN


• Repetibilidad

Coeficiente de variación: <= 2.0%

• Precisión intermedia

Coeficiente de variación global: <= 2 CV de la repetibilidad.

Coeficiente de grupos: <= 2.0%

• El resultado se presenta con intervalos de confianza para cada nivel de concentración.

X t * s/√n


H

32

REPRODUCIBILIDAD

• El objetivo, es verificar que el método de análisis

proporciona los mismos resultados en diferentes

laboratorios.

• Es llamada precisión inter-laboratorios.

• Se acepta una variación del

10% del valor promedio de los

resultados del laboratorio

primario.


H

33

ROBUSTEZ

• Medida de la capacidad para permanecer

inalterado ante pequeñas pero

deliberadas variaciones en ciertos

parámetros.

• Proporciona idea de fiabilidad durante la

aplicación de rutina.


H

34

ROBUSTEZ

¿Como se hace?

• La evaluación de la robustez se realiza

mediante diseños factoriales:

• Diseño factorial completo y fraccionado

• Diseño de Youden-Steiner


H

35

ROBUSTEZ

Criterio de aceptación

• Cálculo del efecto:

Vd-vd s+t+y+z - u+v+w+z

4 4

• El valor encontrado se compara con la

desviación estándar de la repetibilidad del

método.

US FDA Guidance on method validationhttp://www.fda.gov/cder/guidance/2396dft.htmFor US FDA data submissions

Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for Methods ValidationPublished by employees of the US FDA, February 1987, http://www.fda.gov/cder/guidance/ameth.htm


http://www.fda.gov/cder/guidance/2396dft.htm

http://www.fda.gov/cder/guidance/2396dft.htm

http://www.fda.gov/cder/guidance/ameth.htm

Validation of chromatographic methods, Reviewer Guidance (FDA)http://www.fda.gov/cder/guidance/cmc3

Policies and Procedures Guide for the Official Methods Program (OMA)

http://www.aoac.org/vmeth/omamanual/omamanual.htm


http://www.fda.gov/cder/guidance/cmc3

http://www.fda.gov/cder/guidance/cmc3



USP 32 : <1225> Validation of

Compendial Methods, United States

ICH Q2A: Validation of Analytical

Procedures: Methodology

http://www.fda.gov/cder/guidance/ichqa2.

ICH Publicaciones, Guías:

http://www.ich.org/UrlGrpServer.jser?@_ID=363&

@_TEMPLATE=272


http://www.ich.org/UrlGrpServer.jser?@_ID=363&@_TEMPLATE=272

http://www.ich.org/UrlGrpServer.jser?@_ID=363&@_TEMPLATE=272

– Programas de Validación de Métodos

http://www.aoac.org/vmeth/page1.htm

http://www.ivthome.com/publications/index.htm

http://www.ivthome.com/free/index.htm


http://www.aoac.org/vmeth/page1.htm

http://www.ivthome.com/publications/index.htm

http://www.ivthome.com/free/index.htm

Gracias

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mg activo

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