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62 EXAMEN MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO ESTÉRILES; PRUEBAS PARA MICROORGANISMOS ESPECIFICADOS

INTRODUCCIÓN

Las pruebas que aquí se describen permitirán la determinación de la ausencia, o la ocurrencia limitada de los microorganismos especificados que pueden ser detectados en las condiciones que se describen.

Las pruebas están diseñadas principalmente para determinar si una sustancia o preparación cumple con la especificación establecida para la calidad microbiológica. Cuando se usa para tales propósitos, se deben seguir las instrucciones que se indican a continuación, incluyendo el número de muestras que deben tomarse y la interpretación de los resultados como se indica a continuación.

Se pueden usar procedimientos microbiológicos alternativos, incluyendo métodos automatizados, siempre y cuando se haya demostrado su equivalencia con el método farmacopeico.

PROCEDIMIENTOS GENERALES

La preparación de muestras se realiza como se describe en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61.

Si el producto a examinar posee actividad antimicrobiana, ésta debe removerse o neutralizarse en la medida de lo posible como se describe en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61.

Si se emplean sustancias tensoactivas en la preparación de la muestra, se debe demostrar su ausencia de toxicidad para los microorganismos y su compatibilidad con cualquier inactivador usado, como se describe en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61.

PROPIEDADES DE PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO Y PROPIEDADES INHIBITORIAS DE LOS MEDIOS

IDONEIDAD DE LA PRUEBA Y CONTROLES NEGATIVOS

Se debe establecer la capacidad de la prueba para detectar microorganismos en presencia del producto a examinar. Se debe confirmar la adecuabilidad de la prueba si se introdujera un cambio en la ejecución de la prueba o en el producto, que pudiera afectar los resultados de la prueba.

Preparación de las Cepas de Prueba

Usar suspensiones estables estandarizadas de cepas de prueba, como se indica más adelante. Las técnicas de mantenimiento de cultivos del lote de semilla (sistemas de lote de semilla) se usan de forma tal que los microorganismos viables empleados para la inoculación correspondan a no más de cinco pases a partir del lote maestro de semilla original.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012


MICROORGANISMOS AEROBIOS

Cultivar por separado cada cepa bacteriana de prueba en contenedores que contengan Caldo Digerido de Caseína y Soya o Agar Digerido de Caseína y Soya a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas. Cultivar por separado la cepa de prueba de Candida albicans en Agar Sabouraud Dextrosa o en Caldo Sabouraud Dextrosa a una temperatura entre 20º y 25º durante un período de 2 a 3 días.

Staphylococcus aureus Por ejemplo ATCC 6538, NCIMB 9518,CIP 4.83 o NBRC 13276

Pseudomonas aeruginosa Por ejemplo ATCC 9027, NClMB 8626, CIP 82.118 o NBRC 13275

Escherichia coli Por ejemplo ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 o NBRC 3972

Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Typhimurium o como alternativa

Por ejemplo ATCC 14028

Salmonella entericassp. enterica serotipo Abony

Por ejemplo NBRC 100797, NCTC 6017 o CIP 80.39

Candida albicans Por ejemplo ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 o NBRC 1594

Para preparar las suspensiones de prueba, usar Solución Amortiguada de Cloruro de Sodio y Peptona de pH 7.0 o Solución Amortiguadora de Fosfato de pH 7.2. Utilizar las suspensiones dentro de 2 horas o dentro de 24 horas, si se almacenan a una temperatura entre 2º y 8º

CLOSTRIDIOS

Emplear Clostridium sporogenes, por ejemplo ATCC 11437 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) o ATCC 19404 (NCTC 532 o CIP 79.3). Cultivar la cepa clostridial de prueba en condiciones anaeróbicas en Medio Reforzarlo para Clostridios a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 24 a 48 horas. Como una alternativa para la preparación y posterior dilución de una suspensión fresca de las células vegetativas de Cl. sporogenes, para la inoculación de prueba se emplea una suspensión estable de esporas. La suspensión estable de esporas puede mantenerse a una temperatura entre 2º y 8º durante un período validado.

Control Negativo

Para verificar las condiciones de prueba, se prepara un control negativo utilizando el diluyente seleccionado en lugar de la preparación de prueba. No debe ocurrir crecimiento de microorganismos. También se prepara un control negativo cuando se prueban los productos descritos en Productos de Prueba. Un control negativo que no cumple con lo esperado requiere que se realice una investigación.



Propiedades de Promoción del Crecimientoe Inhibitorias de los Medios

Analizar cada lote de medio listo para usar y cada lote de medio preparado a partir del medio deshidratado o de los ingredientes. Verificar las propiedades adecuadas de los medios pertinentes como se indica en la Tabla 1.

Tabla 1. Propiedades de Promoción del Crecimiento, Inhibitorias e Indicadoras de los Medios

Prueba/ Medio Propiedad Cepas de PruebaPrueba para bacterias Gram-negativas tolerantes a la bilis

Caldo Mossel para Enriquecimiento Promoción del crecimiento E.colide Enterobacterias P aeruginosa

Inhibitoria S. aureusAgar Violeta Rojo Bilis Glucosa Promoción del crecimiento

+ IndicadoraE. coli

P aeruginosaPrueba para Escherichia coli Promoción del crecimiento E. coli

Caldo MacConkey Inhibitoria S. aureusAgar MacConkey Promoción del crecimiento

+ IndicadoraE. coli

Prueba paraSalmonella

Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella

Promoción del crecimiento Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Typhimurium oSalmonella enterica ssp.enterica serotipo Abony

Inhibitoria S. aureusAgar Xilosa Lisina Desoxicolato Promoción del crecimiento

+ IndicadoraSalmonella enterica ssp. enterica serotipo Tphimurium oSalmonella enterica ssp. enterica serotipo Abony

Prueba para Pseudomonas aeruginosa

Agar Cetrimida Promoción del crecimiento P. aeruginosaInhibitoria E. coli

Prueba para Staphylococcus aureus

Agar Manitol Sal Promoción del crecimiento + Indicadora

S. aureus

Inhibitoria E. coliPrueba para Clostridios

Medio Reforzado para Clostridios Promoción del crecimiento Cl. sporogenesAgar Columbia Promoción del crecimiento Cl. sporogenesPrueba para Candida albicans

Caldo Sabouraud Dextrosa Promoción del crecimiento C. albicansAgar Sabouraud Dextrosa Promoción del crecimiento

+ IndicadoraC. albicans



Prueba de las Propiedades de Promoción del Crecimiento, Medios Líquidos –Inocular una porción del medio apropiado con un número pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no mayor que el período más corto indicado en la prueba. Se produce un crecimiento claramente visible del microorganismo, comparable al obtenido anteriormente con un lote de medio analizado y aprobado previamente.

Prueba de las Propiedades de Promoción del Crecimiento, Medios Sólidos — Realizar el Método de Extensión en Superficie (vea Métodos de Recuento en Placa en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61), inoculando cada una de las placas con un número pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no mayor que el período más corto indicado en la prueba. Se produce un crecimiento del microorganismo comparable al obtenido anteriormente con un lote de medio analizado y aprobado previamente.

Prueba de las Propiedades Inhibitorias, Medios Sólidos o Líquidos — Inocular el medio apropiado con al menos 100 ufc del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no menor que el período mayor indicado en la prueba. No se produce crecimiento del microorganismo de prueba.

Prueba de las Propiedades Indicadoras — Emplear el Método de Extensión en Superficie (vea Métodos de Recuento en Placa en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61), inoculando cada una de las placas con un número pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un período que se encuentre en el intervalo indicado en la prueba. Las colonias son comparables en apariencia, y las reacciones indicadoras son comparables a las previamente obtenidas con un lote de medio analizado y aprobado previamente.

Idoneidad del Método de Prueba

Para cada producto nuevo a analizar, realizar una preparación de la muestra como se indica en el párrafo pertinente en Pruebas de Productos. Al momento de la mezcla, agregar cada cepa de prueba en el medio de crecimiento indicado. Inocular individualmente las cepas de prueba. Usar un número de microorganismos equivalente a no más de 100 ufc en la preparación de prueba inoculada.

Realizar la prueba como se indica en el párrafo pertinente en Pruebas de Productos, empleando el período más corto de incubación indicado.

Se deben detectar los microorganismos especificados con las reacciones indicadoras, como se describe en Pruebas de Productos.

Cualquier actividad antimicrobiana del producto requiere de una modificación del procedimiento de la prueba (vea Neutralización/Eliminación de la Actividad Antimicrobiana en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61).



Para un producto determinado, si la actividad antimicrobiana no puede neutralizarse con respecto al microorganismo para el cual prueba está indicada, se asume que el microorganismo inhibido no estará presente en el producto.

PRUEBAS DE PRODUCTOS

Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la Bilis

Preparación de la Muestra e Incubación Previa Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar, como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61, excepto que como diluyente de elección se debe usar Caldo Digerido de Caseína y Soya, mezclar e incubar a una temperatura entre 20º y 25º durante un período suficiente para resucitar las bacterias pero que no estimule la multiplicación de los organismos (por lo general 2 horas pero no más de 5 horas).

Prueba de la Ausencia — A menos que se indique algo diferente, usar un volumen correspondiente a 1 g del producto, como se indica en Preparación de la Muestra e Incubación Previa, para inocular Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar en placas de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas.El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.

Prueba Cuantitativa

Selección y Subcultivo – Inocular cantidades adecuadas de Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias con la preparación, como se indica en Preparación de la Muestra e Incubación Previa y/o con diluciones de la misma que contengan respectivamente 0.1 g, 0.01 g y 0.001 g (ó 0.1 mL, 0.01 mL y 0.001 mL) del producto a examinar. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar cada uno de los cultivos en una placa de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas.

Interpretación – El crecimiento de colonias constituye un resultado positivo. Indicar la menor cantidad del producto que produce un resultado positivo y la mayor cantidad que produce un resultado negativo. Determinar la cantidad probable de bacterias a partir de la Tabla 2.

Escherichia coli

Preparación de la Muestra e Incubación Previa – Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61 y usar 10 mL de la cantidad correspondiente a 1 g ó 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Adecuabilidad del Método de Prueba) de Caldo Digerido de Caseína y Soya, mezclar e incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas.



Tabla 2. Interpretación de Resultados

Resultados para Cada Cantidad de Producto

0.1 g o 0.1 mL 0.1 g o 0.1 mL 0.1 g o 0.1 mLNúmero probable de bacterias por g o mL de producto

+ + + más de 103

+ + - Menos de 103 y más de 102

+ - - Menos de 102 y más de 10

- - - Menos de 10

Selección y Subcultivo – Agitar el contenedor, transferir 1 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soya a 100 mL de Caldo MacConkey, e incubar a una temperatura entre 42º y 44º durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar en una placa de Agar MacConkey a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 72 horas.

Interpretación – El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.El producto cumple con la prueba si no se presentan colonias o si los resultados de las pruebas de identificación son negativos.

Salmonella

Preparación de la Muestra e Incubación Previa – Preparar el producto a analizar como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61 y usar una cantidad correspondiente a no menos de 10 g ó 10 mL para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del Método de Prueba) de Caldo Digerido de Caseína y Soya, mezclar e incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas.

Selección y Subcultivo – Transferir 0.1 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soya a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella e incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante 18 a 24 horas. Subcultivar en placas de Agar Xilosa Lisina Desoxicolato. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 48 horas.

Interpretación – El crecimiento de colonias bien desarrolladas de color rojo, con o sin centros negros indica la posible presencia de Salmonella. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.El producto cumple con la prueba si no se presentan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.



Pseudomonas aeruginosa

Preparación de la Muestra e Incubación Previa – Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61) y usar 10 mL de la cantidad correspondiente a 1 g ó 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del Método de Prueba) de Caldo Digerido de Caseína y Soya, y mezclar. Cuando se analizan parches transdérmicos, filtrar el volumen de muestra correspondiente a un parche de la preparación (vea Parches Transdérmicos en Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61) a través de un filtro de membrana estéril, y colocar en 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soya. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas.

Selección y Subcultivo – Subcultivar en una placa de Agar Cetrimida e incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 72 horas.

Interpretación – El crecimiento de colonias indica la posible presencia de P. aeruginosa. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.

Staphylococcus aureus

Preparación de la Muestra e Incubación Previa – Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61 y usar 10 mL de la cantidad correspondiente a 1 g ó 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del Método de Prueba) de Caldo Digerido de Caseína y Soya, y homogenizar. Al analizar parches transdérmicos, filtrar el volumen de muestra correspondiente a un parche de la preparación (vea Parches Transdérmicos en Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61) a través de un filtro de membrana estéril, y colocar en 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soya. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 24 horas.

Selección y Subcultivo – Subcultivar en una placa de Agar Manitol Sal, incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 18 a 72 horas.

Interpretación El crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una zona amarilla indica la posible presencia de S. aureus. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.



Clostridios

Preparación de la Muestra y Tratamiento Térmico – Preparar el producto a analizar como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61. Tomar dos porciones iguales correspondientes a no menos de 1 g o 1 mL del producto a examinar. Calentar una porción a 80º durante 10 minutos, y enfriar rápidamente. No calentar la otra porción.

Selección y Subcultivo – Usar 10 mL o la cantidad correspondiente a 1 g o 1 mL del producto a analizar de ambas porciones, para inocular cantidades adecuadas (determinadas como se describe en Adecuabilidad del Método de Prueba) de Medio Reforzado para Clostridios. Incubar en condiciones anaeróbicas a una temperatura entre 30º y 35º durante 48 horas. Luego de la incubación, realizar subcultivos a partir de cada contenedor en Agar Columbia, e incubar en condiciones anaeróbicas a una temperatura entre 30º y 35º durante 48 a 72 horas.

Interpretación El crecimiento anaeróbico de bacilos (con o sin endoesporas) que da una reacción de catalasa negativa indica la presencia de Clostridios.Esto se confirma mediante pruebas de identificación. El producto cumple con la prueba si no hay presentes colonias de los tipos descritos, o si las pruebas de identificación confirmatorias son negativas.

Candida albicans

Preparación de la Muestra e Incubación Previa – Preparar el producto a analizar como se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano 61, y usar 10 mL o la cantidad correspondiente a no menos de 1 g o 1 mL, para inocular 100 mL de Caldo Sabouraud Dextrosa, y mezclar. Incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 3 a 5 días.

Selección y Subcultivo – Subcultivar en una placa de Agar Sabouraud Dextrosa e incubar a una temperatura entre 30º y 35º durante un período de 24 a 48 horas.

Interpretación – El crecimiento de colonias blancas puede indicar la presencia de C. albicans. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.El producto cumple con la prueba si no se desarrollan tales colonias o si las pruebas de identificación confirmatorias resultan negativas.

SOLUCIONES RECOMENDADAS Y MEDIOS DE CULTIVO

[NOTA Esta sección se proporciona como información.]

Las siguientes soluciones y medios de cultivo han resultado satisfactorios en el cumplimiento de los objetivos para los cuales se indican en la prueba de contaminación microbiana en la Farmacopea.

Se pueden usar otros medios si se puede demostrar su adecuabilidad.

Solución Amortiguadora Concentrada – Transferir 34 g de fosfato dihidrogenado de



potasio a un matraz volumétrico de 1000 mL, disolver en 500 mL de Agua Purificada, ajustar con hidróxido de sodio a un pH de 7.2 ± 0.2, agregar Agua Purificada a volumen y mezclar. Dispensar en contenedores y esterilizar. Almacenar a una temperatura entre 2º y 8º.

Solución Amortiguadora de Fosfato de pH 7.2 – Preparar una mezcla de Agua Purificada y Solución Amortiguadora Concentrada (800:1 v/v), y esterilizar.

Solución Amortiguada de Cloruro de Sodio y Peptona de pH 7.0Fosfato Dihidrogenado de Potasio 3.6 gFosfato Hidrogenado Disódico Dihidrato 7.2 g (equivalente a 0.067 M de fosfato)Cloruro de Sodio 4.3 gPeptona (de carne o caseína) 1.0 gAgua Purificada 1000 mL

Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Caldo Digerido de Caseína y SoyaDigerido Pancreático de Caseína 17.0 gDigerido Papaínico de Soya 3.0 gCloruro de Sodio 5.0 gFosfato Hidrogenado de Potasio 2.5 gGlucosa Monohidrato 2.5 gAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7.3 ± 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar Digerido de Caseína y SoyaDigerido Pancreático de Caseína 15.0 gDigerido Papaínico de Soya 5.0 gCloruro de Sodio 5.0 gAgar 15.0 gAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7.3 + 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar Sabouraud DextrosaDextrosa 40.0 gMezcla de Digerido Péptico de Tejido Animal y Digerido Pancreático de Caseína (1 : 1)

10.0 g

Agar 15.0 gAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 5.6 + 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.



Agar Papa DextrosaInfusión de papas 2 00 gDextrosa 20.0 gAgar 15.0 gAgua Purificada 1000 mL


Caldo Sabouraud DextrosaDextrosa 20.0 gMezcla de Digerido Péptico de Tejido Animal y Digerido Pancreático de Caseína (1 : 1)

10.0 g

Agua Purificada1000 mL


Caldo Mossel para Enriquecimiento de EnterobacteriasDigerido Pancreático de Gelatina 10.0 gGlucosa Monohidrato 5.0 gBilis de Buey Deshidratada 70.0 gFosfato Monobásico de Potasio 2.0 gFosfato Dihidrogenado de Sodio Dihidrato 8.0 gVerde Brillante 15 mgAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después del calentamiento sea de 7.2 ± 0.2 a 25º. Calentar a 100º durante 30 minutos y enfriar inmediatamente.

Agar Violeta Rojo Bilis GlucosaExtracto de Levadura 3.0 gDigerido Pancreático de Gelatina 7.0 gSales Biliares 1.5 gCloruro de Sodio 5.0 gGlucosa Monohidrato 10.0 gAgar 15.0 gRojo Neutro 30 mgCristal Violeta 2 mgAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después del calentamiento sea de 7.4 ± 0.2 a 25º. Calentar hasta el punto de ebullición, pero no calentar en autoclave.



Caldo MacConkeyDigerido Pancreático de Gelatina 20.0 gLactosa Monohidrato 10.0 gBilis de Buey Deshidratada 5.0 gPúrpura de Bromocresol 10 mgAgua Purificada 1000 mL


Agar MacConkey

Digerido Pancreático de Gelatina 17.0 gPeptonas (de carne y caseína) 3.0 gLactosa Monohidrato 10.0 gCloruro de Sodio 5.0 gSales Biliares 1.5 gAgar 13.5 gRojo Neutro 30.0 mgCristal Violeta 1 mgAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7.1 ± 0.2 a 25º. Calentar a ebullición durante 1 minuto, agitando constantemente, y luego esterilizar en un autoclave usando un ciclo validado.

Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de SalmonellaPeptona de Soya 4.5 gCloruro de Magnesio Hexahidrato 29.0 gCloruro de Sodio 8.0 gFosfato Dipotásico 0.4 gFosfato Dihidrogenado de Potasio 0.6 gVerde de Malaquita 0.036 gAgua Purificada 1000 mL

Disolver, calentando ligeramente. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado, a una temperatura que no exceda de 115°. El pH debe ser de 5.2 ± 0.2 a 25º luego del calentamiento y esterilización en autoclave.



Agar Xilosa Lisina DesoxicolatoXilosa 3.5 gL-Lisina 5.0 gLactosa Monohidrato 7.5 gSacarosa 7.5 gCloruro de Sodio 5.0 gExtracto de Levadura 3.0 gRojo de Fenol 80 mgAgar 13.5 gDesoxicolato de Sodio 2.5 gTiosulfato de Sodio 6.8 gCitrato Férrico Amónico 0.8 gAgua Purificada 1000 mL

Ajustar el pH para que después del calentamiento sea de 7.4 ± 0.2 a 25°. Calentar a ebullición, enfriar a 50º y verter en placas Petri. No calentar en un autoclave.

Agar CetrimidaDigerido Pancreático de Gelatina 20.0 gCloruro de Magnesio 1.4 gSulfato de Potasio 10.08Cetrimida 0.3 gAgar 13.6 gAgua Purificada 1000 mLGlicerol 10.0 mL

Calentar a ebullición durante 1 minuto con agitación. Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7.2 ± 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar Manitol SalDigerido Pancreático de Caseína 5.0 gDigerido Péptico de Tejido Animal 5.0 gExtracto de Carne 1.0 gD-Manitol 10.08Cloruro de Sodio 75.0 gAgar 15.0 gRojo de Fenol 0.025 gAgua Purificada 1000 mL

Calentar a ebullición durante 1 minuto con agitación. Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7.4 ± 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.



Medio Reforzado para ClostridiosExtracto de Carne 10.0 gPeptona 10.0 gExtracto de Levadura 3.0 gAlmidón Soluble 1.0 gGlucosa Monohidrato 5.0 gClorhidrato de Cisteína 0.5 gCloruro de Sodio 5.0 gAcetato de Sodio 3.0 gAgar 0.5 gAgua Purificada 1000 mL

Hidratar el agar y disolver calentando hasta ebullición y revolviendo constantemente. Si friera necesario, ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 6.8 ± 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar ColumbiaDigerido Pancreático de Caseína 10.0 gDigerido Péptico de Carne 5,0 gDigerido Pancreático de Corazón 3,0 gExtracto de Levadura 5,0 gAlmidón de Maíz 1,0 gCloruro de Sodio 5,0 gAgar, de acuerdo a la capacidad de gelificación 10.0 – 15,0 gAgua Purificada 1000 mL

Hidratar el agar y disolver calentando hasta ebullición y revolviendo constantemente. Si friera necesario, ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7.3 ± 0.2 a 25º. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado. Dejar enfriar a una temperatura entre 45º y 50º, agregar, siempre que sea necesario, sulfato de gentamicina correspondiente a 20 mg de gentamicina base y verter en placas de Petri.

Información Auxiliar — Por favor busque su pregunta en las Preguntas más frecuentes antes de contactar a la USP.

Tema/Pregunta Contacto Comité de ExpertosCapítulo General Radhakrishna S Tirumalai,

Ph.D.

Científico PrincipalCoordinador1-301-816-8339

(GCM2010) Capítulos Generales - Microbiología

USP34–NF29 Página 56 Pharmacopeial Forum: Volumen No. 29(5) Página 1722


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