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Universidad Nacional Autónoma De Nicaragua

UNAN León

MEDICINA VETERINARIA

Tesis para optar a Licenciado en Medicina veterinaria

Tema: Identificación de agentes bacterianos implicados en mastitis subclínica y perfil de resistencia en vacas que abastecen los centros de acopio Tecuaname y El Sauce en el departamento de León. Septiembre Noviembre 2011.

Elaborado por:

Br: Sandra Elibeth Chavarría Narváez.

Br: Lilliam María Meléndez Martínez.

Tutor: Lic. Byron Flores Somarriba. Msc

Cotutor: Dr. José Luis Bonilla. Msc

‘’A LA LIBERTAD POR LA UNIVERSIDAD’’

León, Nicaragua, Abril, 2012

Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua UNAN-LEON

Escuela de Medicina Veterinaria

CHAVARRIA NARVAEZ‐MELENDEZ MARTINEZ Página 1

DEDICATORIA

A DIOS nuestro padre omnipotente y a mi madre santísima María auxiliadora por brindarme la vida, sabiduría y espíritu de perseverancia durante momentos

difíciles que se presentaron en el transcurso de mi carrera, por iluminarme en

todos estos años para culminar mis estudios universitarios.

A mis PADRES Y HERMANOS por todo el sacrificio y que a pesar de todas las dificultades económicas me brindaron siempre el apoyo incondicional para

poder sacar mi carrera y prepararme para forjar mi futuro.

A Miriam Morales por ser mi segunda Madre y brindarme apoyo en los momentos más difíciles que se presentaron durante lo largo de mi carrera.

Br: Sandra Chavarría

A DIOS creador, por enseñarme a plasmar mis sueños y darle sentido a mi vida.

A MARIA CRISTINA y LILLIAM MARTINEZ les dedico este trabajo porque fueron la verdadera clave del éxito en mi carrera, por el amor que me

brindaron, el interés constante y sobre todo por su pureza de alma, a ustedes

que siempre las amare.

Br: Lilliam Meléndez.




AGRADECIMIENTO

A DIOS por darnos la vida, sabiduría, y deseos de superación alcanzando así nuestro propósito.

A nuestros PADRES por el apoyo incondicional que nos brindaron cada día, para poder alcanzar nuestras metas.

A nuestro Tutor Lic. Byron Flores Somarriba y cotutor Dr. José Luis Bonilla por su apoyo en la revisión y elaboración del presente trabajo

Al proyecto TecnoEmprenDeS por brindarnos la oportunidad y financiamiento.de nuestro estudio.

Al Lic. .M.V Juan José López Garcias por apoyarnos con sus conocimientos teóricos y prácticos sobre la microbiología el manejo de la leche y el efecto

negativo de la mastitis sobre el animal y en la economía del productor.

A la Cooperativa de servicios multisectoriales de Tecuaname por darnos la oportunidad de trabajar en su centro de acopio y recolección de leche y

brindarnos parte de los materiales para la realización de dicho estudio.

A nuestros Maestros que durante toda nuestra carrera nos brindaron sus conocimientos forjándonos para nuestro futuro.

Al presidente de la asociación de estudiantes de Medicina Veterinaria Franklin Carmona Pérez por su colaboración en la impresión de dicho trabajo.




Resumen La mastitis bovina está considerada como una de las enfermedades más

complejas y costosas que afectan a la industria láctea. Aun cuando los

antimicrobianos son actualmente la principal herramienta terapéutica de

infecciones bacterianas en el hombre y los animales, en las últimas décadas el

incremento de la aplicación de estos fármacos, su mal uso y otros factores han

dado lugar a la resistencia antimicrobiana. En este estudio se determinaron los

agentes bacterianos y el perfil de resistencia en la mastitis subclínica de vacas

que abastecen los 8 centros de acopio del municipio del Sauce y Tecuaname

La Paz centro (León). Se aplicó la prueba de mastitis de california (CMT) a 670

vacas productoras de leche, que abastecen los centros de acopio y se realizó

cultivo bacteriológico a muestras extraídas de vacas con resultados positivos al

CMT con el fin de aislar los agentes patógenos causantes de la mastitis

subclínica bovina y determinar la resistencia antimicrobiana de estos agentes

por el método de Kirby Baüer. Se aisló cepas de Staphylococcus aureus en un

71%, siendo éste el patógeno más frecuente, seguido de Klebsiella sp (11%),

staphilococcus coagulasa negativo (SCN) (7%), Escherichia coli (E. coli) (7%) y

Streptococcus spp. (4%). Los antibióticos más efectivos fueron, Gentamicina

con 80% de sensibilidad siendo este el antibiótico más efectivo, Oxitetraciclina

con un 78% de sensibilidad, Enrofloxacina y Ciprofloxacina con 65% de

sensibilidad para las cepas aisladas. A pesar del uso indiscriminado que existe

con estos fármacos como herramientas terapéuticas la Oxitetraciclina y

Gentamicina mostraron ser efectivos en el tratamiento de la mastitis subclínica,

sin embargo es importante realizar antibiogramas como medida de vigilancia

para poder aplicar protocolos terapéuticos eficientes.




ÍNDICE

Contenido página.

I. Introducción 5

II. Antecedentes 7

III. Justificación 9

IV. Planteamiento del problema 10

V. Objetivos 11

1. General

2. Especifico

VI. Marco teórico 12

1. Concepto de leche

2. Definición de mastitis 13

3. Clasificación de mastitis bovina 14

4. Epidemiologia y patogenia de mastitis bovina 15

5. Clasificación de los microorganismos causantes de mastitis bovina 16

6. Factores que influyen en la producción de leche. 26

7. Diagnostico de mastitis 31

8. Tratamiento 41

VII. Metodología 53

VIII. Resultados 59

IX. Discusión 62

X. Conclusión 67

XI. Recomendaciones 68

XII. Referencias 70

XIII. Anexos 74




I. Introducción

La leche constituye un alimento de importancia universal, su alto contenido en

proteína de gran valor biológico, su aporte de energía, la contribución de

minerales osteotroficos hacen que esta forme parte esencial de la dieta del

hombre. Es un alimento natural con el mayor número de sustancias nutritivas

aporta a la dieta, otros son más ricos que ella en algún nutriente en particular,

pero ninguno la supera como alimento equilibrado en componentes necesarios

para el ser vivo.1.

Al poseer un alto contenido de agua y nutrientes; así como el pH cercano a la

neutralidad constituye un excelente medio de cultivo para el desarrollo de

diferentes microorganismos, lo que desde el punto de vista social constituye un

riesgo potencial ya que la población podría ser expuesta al consumo de leche

contaminada, cargada de agentes patógenos o sus toxinas si sus normas

higiénicas no se cumpliesen.1

Entre las enfermedades más importantes que afectan al ganado bovino de

leche está la mastitis, patología reconocida mundialmente por causar grandes

pérdidas económicas tanto al productor como a la industria. 2

La mastitis es una inflamación de la glándula mamaria que se produce como

respuesta al daño causado por diferentes agentes agresores, microorganismos

y sus toxinas, productos químicos, traumas, temperaturas extremas, etc. La

gran mayoría de los casos de mastitis se debe a la penetración de

microorganismos, generalmente bacterias.3

La complejidad de la mastitis subclínica se debe a los numerosos y variados

agentes patógenos que pueden causarla, la variedad, magnitud de la respuesta

que puede producirse en el animal infectado, los múltiples factores que influyen

en su ocurrencia y los resultados encontrados en las medidas de control.4




A pesar de los métodos modernos establecidos para el control de la mastitis

bovina, esta es una de las mayores causas de sufrimiento animal, efectos

negativos en la calidad de leche, y reducción en la higiene del producto.5

Desde el punto de vista epidemiológico, los patógenos causantes de la mastitis

se han clasificado en los siguientes tres grupos, de acuerdo a su origen y forma

de transmisión en el rebaño: Patógenos Contagiosos, Streptococcus

agalactiae, Staphylococcus aureus, Mycoplasma bovis, y Corynebacterium

bovis; Patógenos Ambientales, Streptococcus uberis, Escherichia coli,

Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Arcanobacterium pyogenes y

muchos otros agentes y Patógenos Oportunistas, Staphylococcus hycus,

Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis, Staphylococcus

intermedius y muchas otras especies de estafilococos, que forman parte de la

flora normal de piel.6

Debido a la gran cantidad de patógenos causantes de la mastitis bovina y los

efectos negativos que implica esta enfermedad, se llevó a cabo la investigación

donde se aislaron los agentes bacterianos que causan esta patología y para

aplicar un tratamiento efectivo se realizo a las cepas aisladas el antibiograma,

para conocer la resistencia de las bacterias frente a los antibióticos

recomendables para el tratamiento de esta patología, creando una herramienta

básica para controlar la mastitis en las fincas productoras de leche en estudio.




II. Antecedentes

En el 2008, Acuña y colaboradores realizaron un estudio en Ecuador en el que

identificaron y determinaron las bacterias aisladas de leche con mastitis

bovinas, los resultados obtenidos demuestran que la prevalencia de mastitis es

mayor en las hacienda donde hay deficiencia en las prácticas de ordeño limpio,

(44.68%). El Staphilococcus aureus fue la bacteria más frecuente, (34.64%) los

antibióticos más eficientes para Gram (–) fueron: Tetraciclina, Enrofloxacina y

Neomicina, mientras que los patógenos Gram (+) fueron sensibles

principalmente Amoxicilina/acido clavulonico, Enrofloxacina, Tetraciclina y

resistente a Cloxacilina.7

En septiembre 2010, A.K,Ruiz,y colaboradores realizaron un estudio de

prevalencia de mastitis subclínica bovina y microorganismos asociados:

comparación entre ordeño manual y mecánico en Pernambuco, Brasil,

obteniendo como resultado una prevalencia de 39.3% y 54.8% con la prueba

del (CMT) 57.2% y 63.3% ( diagnostico microbiológico) 33.4% y 49.4% conteo

de células somáticas ( CCS) para ordeño manual y mecánico respectivamente,

se aislaron microorganismos patógenos en el (61%) de la muestra con mayor

prevalencia para Corynebacterium sp (45%) staphilococcus. Sp (29.6%) y

Streptococcus sp (14.6%) en ordeño manual; staphilococcus sp (36.4%)

Corynebacterium sp (27.6%) Micrococcus sp (15.6%) y Streptococcus sp

(12.9%) en ordeño mecánico, el patrón de sensibilidad de los patógenos

hallados indico mayor susceptibilidad hacia la combinación neomicina-

Bacitracina-Tetraciclina (NBT), Florfenicol (FLF) Cefquinone (CEQ) y

Enrofloxacina (ENO) en ese orden la Oxacilina (oxa) resultó ser el

antimicrobiano con menor por ciento de sensibilidad entre los patógenos.5

En febrero 2004, en la Escuela de Medicina Veterinaria, UNAN-León, Berrios y Peralta realizaron una tesis sobre el estudio epidemiológico de la mastitis

subclínica bovina en 4 hatos lecheros del departamento de León, así como la




identificación y sensibilidad antimicrobiana in vitro de los agentes etiológicos

implicados, los resultados obtenidos reflejan que el 54% presentó al menos un

cuarto reactivo a CMT. Los agentes patógenos encontrados fueron

Staphylococcus aureus 62% staphilococcus coagulasa negativo 37%,

Streptococcus spp 6% y E.coli19% se evaluó únicamente la sensibilidad

antimicrobiana en Staphylococcus aureus y E. Coli S.aureus es resistente al

30% a la tetraciclina y el 15% a penicilina. E. Coli, presenta resistencia a todos

los antibióticos a excepción de la Ceftriaxona 8

En septiembre de 2007, Aguirre y Zeledón realizaron un estudio sobre

aislamiento e identificación fenotípica de Staphylococcus aureus mediante la

técnica de finger printer (php) a partir de leche bovina afectada con mastitis

subclínica en 6 fincas del municipio de León. Obteniendo como resultado de

418 muestras enviadas al laboratorio para realizar el análisis bacteriológico, no

hubo crecimiento en un 56.70%, Staphylococcus aureus se aisló en un 33.73%

tétradas en un 3.58%, Streptococcus α-hemolítico en un 1.77%, Streptococcus

β-hemolítico del grupo A 1.91% en igual porcentaje de staphilococcus

epidermidis, Pseudomonas y Enterobacter 0.24%.9




III. JUSTIFICACION

La mastitis subclínica bovina es una enfermedad que afectan a la industria

láctea y al productor causando grandes pérdidas entre las que se puede

mencionar, eliminación de la leche con mastitis, costos del tratamiento de la

enfermedad, y el tiempo con baja producción hasta que el animal se recupere.

Además afecta directamente al animal causando la inflamación de la glándula

mamaria y en algunas ocasiones la atrofia completa de la ubre, efecto por el

cual, hay una disminución de la producción de leche y la calidad de la misma.

Saber cuáles son los patógenos bacterianos que están implicados en el

desarrollo de la mastitis, es de vital importancia, para el tratamiento que se

establezca sea: eficiente, oportuno y concluyente. Actualmente se está usando

los antibióticos de manera consecutiva para las infecciones bacterianas en el

hombre y los animales, esto trae consigo la aparición de la resistencia

antimicrobiana, siendo un gran problema en salud pública que afecta a muchos

países Con este trabajo se pretende conocer los agentes bacterianos y el perfil

de resistencia en la mastitis subclínica de vacas que abastecen el centro de

acopio del Sauce y Tecuaname en el departamento de León. Los resultados

obtenidos pueden ser utilizados para que los productores adopten medidas de

prevención, control y profilaxis, aplicación de antibióticos específicos para

reducir la mastitis en sus hatos y mejorar su economía, a si como base para

estudios posteriores.




IV. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:

¿Cuáles son las bacterias implicadas en la mastitis subclínica de vacas que

abastecen los centros de acopio de leche en fincas de Tecuaname La Paz

Centro y fincas del sauce departamento de León septiembre-noviembre 2011?




V. OBJETIVOS

1. Objetivo general. Identificar los agentes bacterianos y el perfil de resistencia en la mastitis

subclínica de vacas que abastecen los centros de acopio del municipio del

Sauce y Tecuaname La Paz centro (León).

2. Objetivos específicos.

• Identificar los agentes bacterianos implicados en la mastitis subclínica.

• Determinar el perfil de resistencia de los agentes bacterianos

encontrados en la mastitis subclínica




VI. MARCO TEORICO

1. Concepto de leche

Según Valdés de Pérez (1999) en el primer “Congreso Internacional para la

Represión de los Fraudes” celebrado en Ginebra en 1980, se acordó la

siguiente definición: “la leche es el producto integrado del ordeño completo e

ininterrumpido de una hembra sana, bien alimentada y no fatigada, recogida

higiénicamente y no debe contener calostro”. En cuanto a su composición la

grasa en la leche de vaca es considerada uno de los componentes más

importantes por su gran valor económico y por estar sujetos a mayores

variaciones, pudiendo ser afectada por un amplio número de factores

agrupados como: genéticos, fisiológicos y de manejo 10

Concepto según Norma Técnica Obligatoria Nicaragüense

(NTON 03-027-99)

Leche. Es el producto de la secreción normal de la glándula mamaria de

animales bovinos sanos, obtenida por ordeño diario, higiénico e

ininterrumpido.11

Leche cruda entera. Es el producto no alterado, no adulterado, del ordeño

higiénico, regular, completo e ininterrumpido de vacas sanas, que no contenga

calostro y que esté exento de color, olor, sabor y consistencia anormales.11

2. Definición de mastitis

La mastitis es la inflamación de la glándula mamaria en repuesta a un daño

local que puede ser de origen infeccioso, traumático o tóxico. Comúnmente es

una enfermedad infecciosa causada por más de 140 especies bacterianas,

siendo el Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae los principales




microorganismos responsables de la misma. Se considera como una

enfermedad compleja y es producto de la interacción de varios factores

resumidos en el animal, el medio ambiente y los microorganismos, jugando el

hombre un papel decisivo. Se estima que un tercio de todas las vacas lecheras

están afectadas por cualquier forma de mastitis en uno o más cuartos. Por tal

motivo es considerada como la enfermedad más importante de la lechería a

nivel mundial, incluyendo la industria, debido a las grandes pérdidas en

producción láctea que esta ocasiona, fundamentalmente en su forma

subclínica, además de incidir negativamente en la composición de la leche,

gastos en servicios veterinarios, medicamentos, descarte de volúmenes de

leche por contaminación con agentes antimicrobianos, así como en la calidad

de los derivados lácteos.3

Es importante considerar que se trata de una enfermedad multifactorial y que

desde el punto de vista epidemiológico consideramos tres elementos que

conforman el llamado triángulo epidemiológico de la mastitis. 12

La vía de entrada principal de los agentes patógenos es a través del orificio del

pezón y sólo en muy poquísimos casos la llegada a la ubre es vía hematógena.

Después de la invasión bacteriana se produce: congestión capilar,

edematización del tejido secretor y obstrucción de los conductos intralobulares.

También existe alteración de la permeabilidad capilar que produce cambios en

la composición de la leche, algunos de ellos son: 12

• Disminuye la cantidad y la calidad de caseína sintetizada




• Disminuye la grasa butirosa

• Disminuye la lactosa

• Aumenta la concentración de sodio

• Aumentan los cloruros

• Aumentan las proteínas del suero sanguíneo

• Aumentan enzimas

• Aumentan las células somáticas12

3. Clasificación de la mastitis

Mastitis clínica La mastitis clínica se caracteriza por presentar: inflamación, rubor, calor, dolor y pérdida parcial de la función de los cuartos o la glándula

mamaria y en la leche se observa la presencia de coágulos o grumos y su color

se torna amarillo o rojizo por la presencia de pus o de sangre; en casos

severos hay aumento de la temperatura corporal y del pulso, decaimiento,

pérdida del apetito y baja de la producción. 13-14

Mastitis subclínica se caracteriza por la ausencia de signos clínicos en la ubre y la apariencia normal de la leche, sin embargo el recuento de las células

somáticas (RCS) se encuentra aumentado13-14

4. Epidemiologia y patogenia de mastitis

La infección de cada glándula mamaria ocurre a través del conducto del pezón

a partir de dos fuentes principales de contaminación: la ubre infectada y el

medio. La contaminación de las manos de los ordeñadores, paños de lavado y

copas de aparatos de ordeño pueden diseminar con rapidez la infección a los

pezones de otros animales por la leche procedente de cuarterones

infectados.15

Los microorganismos pueden invadir el canal del pezón por distintas vías:




(1) Entre ordeños las bacterias pueden avanzar por el canal del pezón por

multiplicación, (2) pueden ingresar por la presión física ejercida sobre la punta

del pezón cuando la vaca se mueve, (3) durante el ordeño mecánico pueden

ser impulsados hacia el canal del pezón o desde el mismo hacia el interior de la

cisterna del pezón, por los impactos que causan las fluctuaciones de vacío

contra el orificio del pezón (4) durante la aplicación de un antibiótico pueden ser

empujados físicamente a través del canal del pezón por la inserción completa

de la cánula 15

La invasión microbiana de la glándula mamaria ocurre siempre siguiendo la vía

del conducto del pezón y a primera vista, el desarrollo de la inflamación

después de la infección se presenta como un fenómeno natural. Sin embargo,

la aparición de la mastitis es más compleja de lo que este concepto puede

indicar y quizás resulte más satisfactorio explicarla en términos de tres etapas:

invasión, infección e inflamación.15

Etapa de invasión. Es aquella en la que el microorganismo pasa del exterior de la ubre a la leche que se encuentra en el interior de la cisterna del pezón.15

Etapa de infección. Este es el momento en que los microorganismos se multiplican rápidamente e invaden el tejido mamario; se establece una

población bacteriana que se disemina por toda la glándula, dependiendo de la

patogenicidad del microorganismo.15

Etapa de inflamación. Todo lo anterior deriva en una inflamación (mastitis) y aumenta notablemente la cuenta leucocitaria en la leche ordeñada 15

5. Clasificación de los microorganismos causantes de la mastitis bovina.

En la glándula mamaria bovina se han identificado hasta 140 especies,

subespecies y serovariedades microbianas. Las técnicas microbiológicas han




permitido la determinación precisa de la identidad de muchos microorganismos

patógenos de la mastitis. Tomando como base la epidemiología y la

fisiopatología, se han clasificado estos microorganismos como causantes de la

mastitis contagiosa o ambiental, en base a su asociación epidemiológica con la

enfermedad y a su proclividad de causar la infección oportunista, persistente o

transcendente, respectivamente 15-16 las bacterias responsables de la mastitis

bovina pueden ser clasificadas como contagiosas y ambientales, dependiendo

de su reservorio primario y el ambiente contra el cuarto de la glándula mamaria

infectada.15

Microorganismos causantes de la mastitis contagiosa.

Los patógenos contagiosos de primera importancia incluyen al Staphylococcus

aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium spp., y al Mycoplasma spp.

Son organismos transmitidos de vaca a vaca a través de los paños utilizados

para limpiar las ubres, la leche residual en las pezoneras y un equipo de

ordeño inadecuado donde el reservorio primario que alberga los patógenos es

el animal infectado o el cuarto de la ubre, y la exposición de los cuartos

mamarios no infectados se restringe al proceso de la ordeña 15

Los patógenos contagiosos de la mastitis como el Staphylococcus aureus y

Streptococcus agalactiae que son infecciosos a nivel individual y a nivel de

población, han sido reportados bajo control en los hatos lecheros a través del

uso de prácticas de manejo que utilizan la desinfección de las tetas después de

la ordeña, terapia de la vaca seca, desecho, mantenimiento del equipo de

ordeño, y terapia antibiótica de las infecciones intramamarias 15

A pesar de que la mastitis por organismos contagiosos (especialmente

Streptococcus agalactiae) ha disminuido por mejoramiento en el manejo, las

pérdidas económicas debido a la enfermedad pueden continuar porque los

organismos causales no pueden ser erradicados del medio ambiente de las




vacas lecheras En general, un programa de control de la mastitis puede

erradicar a Streptococcus agalactiae de la mayoría de los rebaños lecheros. Es

mucho más difícil tratar los rebaños en los que Staphylococcus aureus tiene

una prevalecía alta 15

Microorganismos causantes de la mastitis ambiental.

Los patógenos principales en este grupo son los bacilos entéricos Gram

negativos (Escherichia coli, Klebsiella spp.), Streptococcus dysgalactiae,

Streptococcus uberis, y Enterococcus spp. 15

Otros microorganismos patógenos se incluyen en la clase ambiental de este

tipo de infecciones. Se trata generalmente de oportunas que invaden la

glándula mamaria cuando los mecanismos de defensa están disminuidos o

cuando se introducen inadvertidamente en la glándula mamaria al realizar un

tratamiento intramamario. Este grupo de microorganismos oportunistas

incluyen a Pseudomonas spp., levaduras, Prototheca spp., Serratia

marcescens y Nocardia spp. Cada uno de estos agentes poseen características

de cultivo, mecanismos patógenos y consecuencias clínicas singulares La

fuente de estos agentes patógenos es el entorno de la vaca. La forma de

transmisión principal es del ambiente a la vaca a través de un manejo

inadecuado del primero. Algunos ejemplos incluyen la cama húmeda, terrenos

sucios, ubres mojadas por la leche, preparación inadecuada de la ubre y los

pezones antes del ordeño y sistemas de estabulación que favorecen las

lesiones en los pezones Y la exposición de los cuartos no infectados a los

patógenos ambientales que puede ocurrir en cualquier momento durante la

vida de una vaca. Estas infecciones generalmente ocurren de forma

esporádica. Sin embargo, se pueden producir brotes en los rebaños o en una

región entera, normalmente como consecuencia de problemas con la higiene o

el tratamiento. Por ejemplo, se ha producido mastitis causada por Pseudoma




aeruginosa en brotes relacionados con la contaminación de las conducciones

de goma en las salas de ordeño 15

La mastitis ocasionada por patógenos ambientales es el principal problema que afecta a muchos hatos lecheros bien manejados, que aplican un programa

de control de los patógenos contagiosos de la mastitis. Tradicionalmente, los

agentes más comunes causantes de la mastitis también han sido clasificados

como patógenos principales (mayores) y menores según el grado de

inflamación que estos producen en la glándula mamaria 15

Los patógenos principales son definidos como los patógenos responsables, la

mayoría de las veces, de las mastitis clínicas o de fuertes respuestas

inflamatorias (conteos elevados de células somáticas en la leche) y

comprenden al Staphylococcus aureus, Streptococcus (S. uberis, S.agalactiae,

S. dysgalactiae) y coliformes Los patógenos menores son definidos como los

patógenos que infectan la glándula mamaria, causando conteos moderados de

células somáticas, pero en lo general no causan signos clínicos. Estas

infecciones, son especialmente frecuentes, debidas sobre todo a otros

Staphylococcus (principalmente S. chromogenes, S. hyicus, S. epidermidis, y

S. xylosus) o por Corynebacterium bovis y Micrococcaceae coagulasa-

negativos 15

Genero Staphylococcus.

Los Staphylococcus son cocos Gram-positivos (de 0.5 a 15 µm de diámetro)

que se presentan sueltos, en parejas, en pequeñas cadenas (de 3 o 4células) y

más característicamente en grupos irregulares en forma de racimos (su

denominación procede del griego staphylé, racimo de uvas).Son anaerobios

facultativos, catalasa positiva, generalmente oxidasa negativos, no

esporulados, inmóviles y generalmente no forman cápsula o tienen una limitada

formación capsular. En la actualidad en el género Staphylococcus se




reconocen 32 especies y varias subespecies, si bien sólo algunas de ellas

tienen importancia desde el punto de vista clínico. Los Staphylococcus según

produzcan o no la enzima coagulasa, se dividen en dos grandes grupos:

Staphylococcus coagulasa positivos y Staphylococcus coagulasa negativos.

Existe una buena correlación entre la producción de coagulasa y la capacidad

patógena de los Staphylococcus de tal manera que, en general, se considera

que los Staphylococcus coagulasa positivos son patógenos y que los

Staphylococcus coagulasa negativos no lo son. No obstante, algunas especies

de Staphylococcus coagulasa negativos se han relacionado con procesos

patológicos tanto en animales como en el hombre 15

Staphylococcus aureus.

El Staphylococcus aureus (S. aureus) es la principal causa de infección

intramamaria en los rumiantes por lo que se le considera el agente causal más

importante y frecuente de la mastitis bovina Aunque varios patógenos

bacterianos pueden causar la mastitis, el S.aureus es el primer agente

etiológico en la mayor parte del mundo , ha surgido como el más prevaleciente,

y una vez establecido en la glándula mamaria es muy difícil de erradicar y

causa las pérdidas económicas más considerables en la industria de la leche.15

En muchos países el S. aureus es un patógeno de la ubre, muy importante que

causa la mastitis. En 1998 Smith, informó de un brote de mastitis causada por

S. aureus, en el estado de Washington, en un hato lechero el S. aureus y las

bacterias estreptococales son los agentes etiológicos más comunes

involucrados en los casos clínicos y subclínicos de mastitis en los hatos

lecheros de Nueva Zelanda 15

El S. aureus es el patógeno principal responsable de una amplia gama de

infecciones agudas y crónicas. El primer paso en las infecciones por S.aureus

es la adherencia a las diferentes superficies y colonización de tejidos del




organismo infectado. Para este propósito el S. aureus presenta una familia de

adherencias llamada MSCRMMs (componentes de la superficie microbiana que

reconocen las moléculas adhesivas de la matriz).Estas interacciones permiten

al S. aureus adherirse a una variedad de líneas celulares y promover la

invasión y muerte por apoptosis de células epiteliales infectadas. Otro paso en

la colonización del S. aureus es la formación de una biopelícula. La formación

de esta biopelícula es una inquietud importante en las infecciones porque

protege a los microorganismos de los leucocitos y antibióticos, llevando a la

infección crónica y septicemia. Fenómenos similares ocurren con otras

bacterias patógenas, como Staphylococcus epidermidis, Streptococcus

pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Neisseria meningitis, Escherichia coli y

Haemophylus influenzae 15

El S. aureus se reconoce mundialmente como una causa frecuente de

infecciones intramamarias subclínica en las vacas lecheras El reservorio

principal del S. aureus parece ser el cuarto infectado y la transmisión entre las

vacas, normalmente, ocurre durante la ordeña la interacción del S. aureus con

las células de la glándula mamaria bovina es considerada esencial en el rol que

desempeña en la patogénesis de la mastitis infecciones debidas al S. aureus

es de la mayor importancia en la medicina veterinaria y humana. En el humano

el S.aureus es un patógeno responsable de la septicemia, endocarditis y el

síndrome del shock tóxico; ocasionando la mastitis en las vacas y ovejas 15

Staphylococcus chromogenes.

El Staphylococcus chromogenes (S. chromogenes) es considerado un

patógeno secundario de la mastitis bovina; sin embargo, muchos estudios

recientes, han mostrado la importancia que ha adquirido en la infección de la

glándula mamaria bovina. El S. chromogenes puede causar infecciones más

severas que, en promedio, puede causar otra especie de Staphylococcus En

un estudio realizado por Zhang y Maddox. (2000); se encontró que no había




ninguna diferencia significante en los parámetros de inflamación entre una

infección por S. aureus y una infección ocasionada por S.chromogenes. El S.

chromogenes una especie que prevalece en la mastitis subclínica, con un

impacto bien establecido en el conteo de las células somáticas. En un estudio

realizado con 70 muestras de S. chromogenes se determinó que todas eran

susceptibles a la acción de la neomicina, Gentamicina, Eritromicina,

Enrofloxacina, Penicilina y a las Cefalosporinas.15

Corynebacterium bovis.

El Corynebacterium bovis, frecuentemente se aísla de la leche de glándulas

mamarias de vacas infectadas de mastitis y es asociado con la reducción en la

producción de leche. Está relacionado con formas muy apacibles de

inflamación mamaria. La única manifestación de esta infección, es un ligero

aumento de la cuenta de células somáticas 15

Mycoplasma bovis.

El Mycoplasma bovis induce varias manifestaciones clínicas en el ganado,

como la mastitis, artritis y pulmonía; se ha extendido mundialmente, sobretodo

en Europa y América del Norte, produciendo grandes pérdidas económicas en

la industria lechera y en la producción de carne 15

Mycoplasma agalactiae.

El Mycoplasma agalactiae es el principal agente causal de la agalactia

contagiosa. Este síndrome es caracterizado por la agalactia, la mastitis, la

artritis y a veces la Queratoconjuntivitis. Causa severas pérdidas económicas,

particularmente en los hatos de ganado lechero, debido a que el Mycoplasma

agalactiae es persistente y muy contagioso, que hace casi imposible la

producción regular de queso 15




Genero Streptococcus.

El término Streptococcus (Streptós, trenzado; kókkos, grano) fue utilizado por

primera vez por Billroth, en 1874. Para describir unos microorganismos de

forma cocácea, dispuestos en cadena. Son células esféricas u ovoides, con un

diámetro de 0.5 a 2 µm, que se dividen en un plano y pueden quedar adheridas

y formar parejas o bien cadenas largas cuando crecen en medios de cultivo

líquido. A excepción de algunas especies, son generalmente inmóviles y no

capsuladas 15

Los Streptococcus son organismos Gram-positivos, de catalasa negativa, que

frecuentemente son aislados de la glándula mamaria bovina y de tanques de

leche cruda. Algunos organismos que pertenecen al género Enterococcus y

Streptococcus en particular el Enterococcus faecium, Streptococcus Agalactiae,

Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus equinus y el Streptococcus uberis,

han sido bien documentados como agentes etiológicos de mastitis bovina y sus

resultados han provocado severas pérdidas económicas a la industria lechera

Los Streptococcus son, probablemente, el segundo grupo en importancia,

después de los Staphylococcus, responsables de la mastitis. Aunque el

Streptococcus agalactiae, el Streptococcus uberis y el Streptococcus

dysgalactiae son las especies más frecuentemente identificadas, otra especie

de Streptococcus, el Streptococcus parasanguinis, ha sido implicado en las

infecciones de la glándula mamaria 15

Streptococcus agalactiae.

El Streptococcus agalactiae es considerado una de las mayores causas de

infecciones intramamarias bovinas. Es un patógeno muy contagioso de la

glándula mamaria, donde puede sobrevivir por largos períodos de tiempo; esta

bacteria es considerada una de las mayores causas de infecciones

intramamarias bovinas particularmente en América del Norte En los países




donde se ha controlado el Streptococcus agalactiae, los patógenos más

importantes son el Staphylococcus aureus, el Streptococcus dysgalactiae y el

Streptococcus uberis. En general las especies normalmente aisladas, a nivel

mundial, de Staphylococcus coagulasa negativos parecen ser de

Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus epidermidis y de

Staphylococcus simulans. Algunas diferencias en la patogenicidad entre las

diferentes especies de Staphylococcus coagulasa negativo han sido

observadas. Así, se encuentra al Staphylococcus simulans más

frecuentemente asociado con las infecciones clínicas que las otras especies y

asociado con la reacción de una inflamación aumentada 15

Streptococcus uberis.

El Streptococcus uberis es una bacteria patógena medioambiental que induce,

en una proporción significativa, la mastitis clínica bovina en todo el mundo ; Por

consiguiente la mastitis medioambiental se ha vuelto un gran problema El

Streptococcus uberis es un importante patógeno medioambiental involucrado

en los casos de mastitis subclínica y clínica durante el periodo de lactación

temprana y el periodo seco y es responsable del 12 al 14% de la mastitis

clínica en vacas lactantes .Se han diferenciado 31 especies del género

Streptococcus incluidas las especies S. uberis y S. parauberis, ambas especies

son bien conocidas como agentes causales de mastitis bovina 15

Streptococcus dysgalactiae.

La mastitis causada por patógenos medioambientales es un gran problema que

afecta a los hatos lecheros. De entre los patógenos medioambientales, el

Streptococcus dysgalactiae ha sido frecuentemente aislado de las infecciones

intramamarias durante la lactación y el período seco .El Streptococcus

dysgalactiae es una de las especies bacterianas más importantes aislada en la

mastitis bovina. El de la especie hemolítica, es un patógeno muy común en la




mastitis clínica y subclínica .Este patógeno es muy capaz de sobrevivir en la

boca, vagina y piel de los animales saludables que pastan. Debido a su

situación medioambiental, los métodos de higiene normales y la terapia del

antibiótico son menos eficaces previniendo las infecciones por Streptococcus

dysgalactiae que las infecciones por otro patógeno contagioso 15

Escherichia coli.

La mastitis medioambiental es causada por bacterias coliformes. La mayoría de

las bacterias coliformes son clasificadas como Escherichia coli (E. coli). La

mastitis ocasionada por la E. coli es normalmente esporádica y las señales

clínicas varían desde muy severa, incluso formas fatales, a mastitis apacible,

donde las vacas tienen solo señales locales en la ubre La mastitis es un

problema importante en la industria lechera y la mastitis producida por E. coli

es sobre todo la principal enfermedad en las vacas La razón para la

importancia de la mastitis por Escherichia coli es su creciente incidencia y los

síntomas severos. Este aumento puede ser debido al uso rutinario de la terapia

de la vaca seca, la cual es eficaz contra el organismo contagioso Gram

positivo, pero no contra el patógeno medioambiental como E. coli. La infección

de la ubre por este patógeno probablemente es resultado de contaminación

fecal De la gran variedad de patógenos microbianos que pueden causar la

mastitis bovina, la E. coli y la Klebsiella pneumoniae son los patógenos

medioambientales más frecuentemente aislados de las infecciones

intramamarias y son los principales causantes de la mastitis clínica La E. coli

ha sido clasificada como un agente patógeno medio ambiental que induce la

mastitis clínica, que es caracterizada por una intensa concentración de

neutrofilos, que lleva a la eliminación de las bacterias 15




Arcanobacterium pyogenes.

El Arcanobacterium pyogenes es un habitante común de los tractos respiratorio

superior, urogenital y el gastrointestinal de muchas especies animales

domésticas. Sin embargo, una herida física o microbiana a la ubre puede

ocasionar una variedad de infección supurativa de tipo piogénico, como la

mastitis en las vacas y cabras lecheras 15

Hongos y levaduras.

La incidencia de mastitis debida a hongos es usualmente muy baja en los hatos

lecheros, pero algunas veces puede ocurrir en proporciones epizoóticas

Diversas especies de levaduras han sido reportadas en muchos países como

causantes de mastitis. La infección fungal de la glándula mamaria es

predominantemente causada por levaduras del género Cándida. Los hongos no

son un agente extraño en la mastitis bovina y son frecuentemente considerados

en la mastitis medioambiental debido a la pobre higiene animal 15

Algas.

La Protothecosis es una forma severa de mastitis en ganado bovino causada

por las algas descoloridas del género Prototheca 15

Importancia de la mastitis.

Salud Humana La leche contaminada pone en peligro la salud de quienes la consumen, en el caso del hombre cobra gran importancia la diseminación de

bacterias causantes de enfermedades tales como: tuberculosis, brucelosis,

faringitis estreptocócica, entre otras Salud Animal Gaytán, (1992), reporta en México una frecuencia de mastitis por coliformes del 14%, lo que representa en

esos animales una considerable disminución de la producción de leche,

frecuentemente pérdida glandular y no es muy raro la muerte de la vaca.




Económica Diferentes investigadores han reportado que los porcentajes de vacas eliminadas a causa de mastitis varían anualmente desde 13 hasta 25%.

En un estudio realizado en un hato del Altiplano de México con 500 animales

en ordeño, se determinó que el costo anual por mastitis clínica fue de

$244,797.que equivalen a la producción por lactancia (305 días) de 43 vacas

con 6,000 Kg. cada una.16

Factores que influyen en la producción de leche

Los principales factores que influyen en la producción de leche son de orden

fisiológico, ambiental, nutricional y genético.17

Factores fisiológicos.

Estado de la lactancia, Edad, Tamaño, Tipo, Raza, Celo, Enfermedades.

6. Factores ambientales y de manejo

Período seco. Intervalo entre partos. Estado de nutrición antes del parto

Intervalo entre ordeños y número de ordeños. Ordeño completo Estaciones.

Temperatura. Ejercicio.

Factores alimenticios.17

Anatomía de la Glándula mamaria, fisiología de la lactación y el reflejo de eyección de la leche.

La ubre de la vaca está formada por dos glándulas mamarías, independientes,

cada una de las cuales posee dos cuartos anteriores y dos posteriores en cada

mitad derecha e izquierda separadas por una pared de tejido fibroso elástico

que sirve de sostén al tejido glandular El tabique de tejido conectivo que separa

las dos mitades derecha e izquierda es llamado ligamento suspensor medio De

esta forma la ubre queda suspendida de la pared inferior del abdomen

mediante éste sostén y los ligamentos suspensorios laterales .Vista de lado, la




ubre debe tener una forma redondeada, de saco, con suspensiones que se

extienden hacia delante por la parte craneal y hacia arriba por la parte caudal.

Los cuatro cuartos secretan la leche por separado. Los cuartos delanteros

producen un 40% de la leche y los traseros un 60%.18-19

El tejido de la ubre es esponjoso debido a la gran cantidad de tejidos

secretores de leche. Dentro de cada glándula o cuarto se encuentran millones

de alvéolos que secretan leche, la cual se vierte a un sistema de conductos que

van a desembocar en la cisterna de la ubre y la teta, Rodeando cada alvéolo,

hay grupos de fibras musculares que se contraen y estiran bajo ciertos

estímulos para expulsar la leche en el momento del ordeño .La comunicación

de la ubre con el exterior se establece por medio de un canal de 6-10 mm, de

longitud, que se mantiene cerrado por un esfínter circular, situado cerca de su

extremo externo. Este músculo hace que la leche permanezca en la ubre

resistiendo la presión del líquido, entre los ordeños e impide que penetren en la

ubre bacterias y cuerpos extraños. 18-19

El canal del pezón llega hasta la cisterna del pezón, que es la cavidad del

pezón, donde la leche se recoge naturalmente y de donde se saca durante el

ordeño. La cisterna del pezón comunica con la cisterna de la glándula; las dos

cavidades están separadas parcialmente por un pliegue circular que se

extiende en la cavidad superior. La cisterna de la glándula, depósito de la leche

varía en forma y tamaño de una vaca a otra y aún en los cuartos de la misma

ubre. Su capacidad media es de 470 ml, pero puede variar de 120 a 940 ml.

Numerosos conductos atraviesan las paredes laterales y la pared superior de la

cisterna. El número de estos conductos varía entre 12 y 50 en cada cuarto y se

ramifican muy irregularmente. 18-19

En unas vacas cada conducto principal se divide en dos de igual tamaño y en

otras emite muchas ramas pequeñas. La ramificación prosigue hasta la

formación de numerosos conductillos galactóforos, cada uno de los cuales

termina en un ensanchamiento llamado alvéolo. El alvéolo tiene forma casi

esférica y está revestido interiormente por una capa sencilla de células




epiteliales. Estas células están conectadas por una capa sencilla de células

epiteliales. Estas células están conectadas en su base con los capilares

sanguíneos, los vasos linfáticos y los nervios. 18-19

La leche pasa de la célula al lumen del alvéolo y después al sistema de

conductos galactóforos. Un gran número de alvéolos que vierten en su

conducto común forman un lobulillo. Un grupo de lobulillos forma un lóbulo.

Debe preferirse una ubre dotada en menos tejido conectivo y más secretor. 18-19

(Anatomía y fisiología de la glándula mamaria, salvadir aila Téllez)




La estructura suspensoria de la ubre (Adaptado deThe Bovine Udder and

Mastitis, ed. Sandholm et al. 1995).

La ubre es un gran cuerpo glandular, el cual sirve para la nutrición del becerro y

consta de cuatro cuartos. Cada cuarto representa una unidad. Ello da como

resultado que la enfermedad mastitis puede estar confinada a un cuarto, cada

cuarto de la ubre consta del cuerpo glandular y el pezón 18-19

La leche puede únicamente ser liberada con ayuda de la hormona oxitocina

que es producida en el lóbulo posterior de la hipófisis. El pezón ayuda en la

eyección de la leche. La lactación se mantiene a través de la regulación

hormonal. La hormona somatotropa (STH) es la hormona galactopoyetica más

importante en la vaca. Mediante la inyección de esta hormona puede ser

aumentado claramente el rendimiento lácteo de la vaca. Otras hormonas que

también son importantes para la secreción de la leche son las hormonas

esteroides, estrógenos, progesterona, prolactina, glucoesteroides y la oxitocina.

Con él termino eyección de la leche se entiende la salida activa, es decir, la

conducción de la leche alveolar de la porción alveolar a la porción cisternal de

la ubre. Esta se inicia mediante la contracción del mioepitelio que rodea al




alveolo. La eyección de la leche es un proceso de expulsión, que se puede

también denominar “disparo” de la leche. Mediante la eyección puede ser

extraída la leche del alveolo. La eyección de la leche es el resultado de un

reflejo involuntario neurohormonal, el cual es conocido como el reflejo de

eyección de la leche y que abarca los siguientes procesos: 18

1. Estimulación de los receptores en la pared del pezón mediante; succión,

masaje o estimulo de la ordeña y la transformación del estimulo en un impulso

excitatorio.

2. Transmisión de la excitación a las vías aferentes nerviosas y al hipotálamo.

3. Liberación de la hormona oxitocina, la cual se forma en el núcleo

paraventricular y supraoptico y por transporte axonal se almacena en la

hipófisis posterior y de ahí se libera en la sangre.

4. Transporte de la oxitocina de la sangre al mioepitelio de los alvéolos.

5. Contracción de las células mioepiteliales por efecto de la oxitocina con los

receptores oxitocinegicos.

6. La leche alveolar con esto es presionada de la parte alveolar a la porción

cisternal alcanzando una presión intramamaria de 1-4 kPa.18

7. Diagnostico de la mastitis subclínica

La inflamación de la glándula mamaria involucra una serie de cambios en la

composición de la leche, que sirven de base para las muchas pruebas de

diagnóstico que se han desarrollado. Uno de los cambios más precoces es el

aumento en el número de células somáticas que normalmente es menor a

200.000cél/ml y que durante el proceso inflamatorio supera las 500.000 cél/ml

Este incremento es la base de muchos métodos de diagnóstico entre los cuales

se encuentran el Recuento de Células Somáticas, la Prueba para Mastitis de

California (CMT, con sus siglas en inglés) y la Prueba para Mastitis de

Wisconsin (WMT, con sus siglas en inglés). 6

Además se puede utilizar la exploración física de la ubre que se hace aplicando

los métodos de: 20




• Inspección. Consiste en ver y observar, empleando el sentido de la vista.

Puede llevarse acabo en dos formas:

Inmediata. Es decir a simple vista.

Mediata. Empleando equipos de iluminación, radiología y aparatos de

mensuración 20

• Palpación: La palpación se hace utilizando el tacto. Puede ser inmediata en la

que se emplea el tacto al tocar o hacer presión, o mediata mediante

cateterismo valiéndonos de una sonda o cánula o de un bisturí de campana 21

• Percusión. Procedimiento exploratorio como un auxiliar en la identificación de

abscesos, quistes, estenosis de ductos, enfisema, etc. 20

Auscultación. Es escuchar aplicando el oído. Habiendo gas entre piel y tejido

celular subcutáneo al palpar la glándula, podemos escuchar por medio del

sentido auditivo la crepitación que acusa la presencia del gas 20

• Olfación. Este es un procedimiento de exploración que nos permite percibir

por medio del sentido del olfato a la ubre, así como a las muestras de leche

que ocasionalmente tienen olores característicos, que sugieren alteraciones y

etiología específicas.20

El CMT es una prueba de campo económica, sencilla y rápida, que detecta con

buena sensibilidad y especificidad el estado de salud de la ubre, mediante una

estimación gruesa del contenido de células somáticas. Se basa en la

gelificación que tiene lugar cuando el ADN (acido desoxirribonucleico) es

liberado de las células somáticas presentes en la leche por la acción de un

detergente aniónico como el alkyl-aril-sulfonato de sodio; por tanto, a mayor

contenido celular en la leche, mayor gelificación.6-20

El Recuento de Células Somáticas (RCS) es el método aceptado para el

diagnóstico de la mastitis a nivel de cuartos y animales, así como para la

vigilancia de la situación de la mastitis en las fincas y es uno de los principales

parámetros para evaluar la calidad de la leche producida. Ofrece una serie de

ventajas sobre los métodos anteriores, entre ellas: el procedimiento puede




automatizarse, puede aplicarse sobre muestras preservadas y es mucho más

preciso, objetivo y repetitivo. 6

Las principales desventajas son el alto costo de los equipos, la necesidad de

constante revisión técnica y el requerimiento de personal entrenado, lo que

obliga a centralizar los servicios; como consecuencia, otra desventaja es que

resulta difícil el acceso inmediato a los resultados. El RCS en leche de cuartos

o de ubres, se ha utilizado para conocer de manera rápida y efectiva el estado

de salud del cuarto o ubre y para vigilar los progresos logrados en los

programas de control de mastitis. El valor límite de RCS que se considera

como normal para cuartos de ubres es 200.000 cél/ml, mientras que el valor

límite en leche compuesta de ubre es 300.000 cél/ml.6

Cultivo Microbiológico. Es la única prueba que permite identificar los agentes causales presentes en la finca, así como los cuartos y animales infectados.

Esta información permite diseñar o modificar programas de control, identificar

los factores predisponentes, establecer la dinámica epidemiológica en la finca,

evaluar la efectividad de las medidas de control y orientar la estrategia

terapéutica. Las mayores desventajas del cultivo son su laboriosidad, tiempo

que consume, requerimiento de personal entrenado y elevado costo. Las

muestras de leche de cuartos individuales o muestras compuestas de los

cuatro cuartos, pueden obtenerse en cualquier momento, pero se recomienda

hacerlo inmediatamente antes o después del ordeño. Deben muestrearse el

mayor número posible de cuartos mamarios y animales que resulten positivos

(mayor a 2 ó 3 +) a alguna prueba indirecta como el CMT, 6

Cultivos microbianos de la leche Aislamiento bacteriano.

Las muestras es cultivada en agar Mac Conkey y agar Sangre de Carnero al 5

% (ASC) e Incubadas a 37ºc por 24 hrs y en 5% de CO2 para la búsqueda de

Streptoccocus.




Procedimientos básicos de cultivo El medio utilizado para el aislamiento primario de la mayoría de los organismos

patógenos de mastitis es agar sangre. La sangre de bovino (preferiblemente

ternero) u ovino, desfibrinada u obtenida con anticoagulante, se agrega al

medio base en una concentración del 5%. No se recomienda el uso de sangre

de caballo o conejo ya que no revelan la presencia de la hemolisina b de S.

aureus.

Las muestras deben ser retiradas del refrigerador para que tomen temperatura

ambiente antes de ser sembradas. Las bacterias se concentran en la capa de

grasa, por lo que las muestras deben ser cuidadosamente homogeneizadas

mecánica o manualmente antes de inocular el medio de cultivo. La leche de los

cuartos mamarios se siembra 0,01 ml en un cuadrante de la placa de cultivo.

Las placas inoculadas deben incubarse a 35-37°C por 24-48 hs. Usualmente

las placas se examinan a las 18-24 hs para detectar la presencia de

organismos de crecimiento rápido. En caso de no observarse desarrollo se

reincuban por otras 24 hrs. Si se sospecha la presencia de organismos de

crecimiento lento, la incubación puede prolongarse. Por lo comentado

anteriormente es posible que una muestra tomada en condiciones asépticas

contenga organismos contaminantes provenientes del canal o el orificio del

pezón.20

Identificación de los organismos más frecuentemente aislados. Los aislamientos se les realizan la tinción de Gram.

Las bacterias Gram Negativas son identificadas a través de las pruebas de

fermentación de azucares que incluyen Triple azúcar mas hierro de sus siglas

en ingles TSI. Desanimación de lisina LIA. Citrato de Simons. Ureasa. Motilidad

indol. Mientras que para la identificación de Staphyloccocus aureus se utiliza la

prueba Beta hemolisis, Catalasa y coagulasa. Y para Estreptococos agalactiae

se emplea la beta hemolisis y el test de CAMP. (Monofosfato de adenosina

cíclico)




Se usa agar sangre para el estudio de la bacteria Gram positivas, porque es un

medio rico en nutrientes, por lo que permitirá el crecimiento de una amplia

variedad de bacterias además es un medio diferencial, ya que permite

comprobar si la bacteria es capaz de hemolisar los eritrocitos del medio de

cultivo. Si la hemolisis que se produce es total, se denomina beta-hemolisis, si

es parcial alfa-hemolisis, y cuando no existe se habla de hemolisis tipo

Gamma. Se siembra la muestra en medio agar sangre. Con el asa

bacteriológica, con el asa flameada y fría se extiende toda la muestra sobre el

agar sangre y se incuba por 24 horas a 37 ºc. 20

Tinción de Gram Esta tinción nos sirve para clasificar a los microorganismos en dos grandes

grupos, Gram positivos y Gram negativos. A la vez podemos observar la forma

de las bacterias: cocos, bacilos, etc. y cómo se agrupan: parejas, cadenas, etc.

Fundamento: La tinción permite dividir las bacterias en dos grandes grupos, Gram positivas y Gram negativas. Se cree que la diferencia de espesor, la

concentración de cargas y la composición química de la pared celular, son las

responsables de la coloración final con la que permanecen las bacterias

teñidas por este método. 21

Las bacterias Gram positivas permiten que un colorante básico (cristal violeta)

se una a las estructuras de la pared, la membrana y el citoplasma; esta unión

se refuerza con la adición de lugol. La acción decolorante del alcohol, se ve

impedida por las características de la pared celular antes mencionadas de

forma que la bacteria permanece teñida con el colorante inicial; la adición de un

segundo colorante (safranina) no modifica dicha coloración y la bacteria se

observará con una tonalidad azul-violeta.21

En las bacterias Gram negativas, el alcohol arrastra al colorante inicial (por la

distinta naturaleza de la pared celular) de manera que la adición de safranina

tiñe finalmente la bacteria de color rojo. 21




Técnica. Suspensión

Extensión

Fijación. Para que las proteínas queden fijadas al porta pasaremos el porta tres

veces por la llama del mechero (fijación con calor). Dejar enfriar antes de teñir.

Cubrir el porta con cristal Violeta y dejar actuar 1 min.

Lavar con agua.

Lugol. Actúa de mordiente formando un complejo con cristal violeta que hace

que se fije al colorante. 30 seg.

Lavar con agua.

Decolorar con alcohol. 10-15 seg.

Lavar con agua para impedir que el alcohol siga ejerciendo su acción.

Safranina. Colorante de contraste. 1 min.

Lavar con agua.

Secar.

Observar al microscopio con objetivo de inmersión. 21

Prueba de catalasa La prueba de catalasa en los ambientes acuosos, contienen oxigeno disuelto

como el citoplasma de las células, parecen formas toxicas derivados del

oxigeno.las bacterias que viven en ambiente aerobios necesitan un equipo

enzimático capaz de neutralizar estas formas toxicas. Entre estas enzimas se

encuentra la catalasa que convierte el peróxido de hidrogeno en agua y

oxigeno molecular. 21

La prueba de la catalasa es positiva cuando se ponen en contacto una colonia

de la bacteria en estudio, con peróxido de hidrogeno al 3% y se producen

burbujas de oxigeno. Esta prueba es empleada para diferenciar el género

Staphylococcus (catalasa positivo) del genero enterococcus (catalasa

negativo). 21




Prueba de coagulasa Esta permite diferenciar Staphylococcus aureus, que es coagulasa positivo, del

resto de especies de Staphylococcus, que son coagulasa negativos. 21

En un tubo con 0.5 ml de plasma citrato o EDTA, (ácido

etilendiaminotetraacético) resuspender una colonia aislada hasta una turbidez

visible, incubar a 37ºC durante 2 horas, con la formación de coagulo es una

prueba positiva, en caso contrario el medio continua liquido. 21

TSI (Triple Sugar Iron): Composición: tres azúcares Glucosa (al 0.1%), Lactosa (al 1%) y Sacarosa (al 1%). más sulfato ferroso, tiosulfato sódico y rojo

fenol como indicador. pH ácido color amarillo; pH básico color rojo. 23

Los microorganismos que fermentan la glucosa amarillean el medio sólo en la

base, ya que la producción de ácido es limitada, al ser la concentración de

glucosa en el medio muy baja. Los que además fermentan los otros azúcares lo

amarillean tanto en la base como en el pico. Los no fermentadores hacen que

el medio se vuelva más rojo. 21

También se puede observar la producción de gas que se manifiesta por la

formación de burbujas en el medio y la producción de SH2 (acido sulfúrico) a

partir del tiosulfato a sulfhídrico y luego sulfuro ferroso que es de color negro. 21

Forma de siembra: Tomar una colonia aislada con un asa, pinchar el medio alcanzando la parte inferior del mismo; sacar el asa e inocular la superficie de

la lengüeta. 21

Prueba de la ureasa: La ureasa es una enzima que desdobla la urea produciendo amoníaco. Esta

sustancia de naturaleza básica eleva el pH del medio haciendo virar el color del

indicador de pH.21

Composición: medio base, agar, urea y rojo fenol. Forma de siembra: Extender la colonia sobre la lengüeta del medio.

Interpretación: Rosa ureasa positivo. Amarillo ureasa negativo. 23




Citrato.

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato

como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente

de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio. Se

cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene

citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno

respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. 21

Antibiograma. El antibiograma es una técnica de estudio in Vitro de la actividad de los

antimicrobianos sobre un microorganismo determinado. La valoración de dicha

actividad constituye una de las bases fundamentales para el tratamiento de

muchas enfermedades infecciosas, ya que orienta en la selección de

antibióticos que se ha de utilizar en un enfermo en el que se conoce el agente

causal de la infección, mediante el establecimiento de una predicción de la

respuesta terapéutica, que se obtiene a través del análisis de datos y

conceptos microbiológicos, farmacológicos y clínicos continuamente

actualizados.15-21

Los microorganismos pueden clasificarse en:

•Sensibles: cuando la concentración mínima inhibitoria de un antibiótico para una bacteria se puede conseguir in vivo con dosis terapéuticas y la experiencia

ha demostrado su eficacia. 15-21

•Resistentes: cuando el microorganismo no es inhibido por las concentraciones que normalmente se pueden obtener en el sitio de la infección.

15-21

•Intermedios: cuando las bacterias se inhiben con concentraciones que no se alcanzan con dosis habituales, pero que pueden alcanzarse con dosis más

altas sin que sean tóxicas.15-21




El medio de cultivo en el que se realizan la mayoría de los antibiogramas

(excepto para bacterias exigentes) es el medio Muëller-Hinton (extracto de

carne, aminoácidos y almidón. Este medio se puede usar en estado líquido o

sólido.21

Lectura e interpretación del antibiograma:

Con una regla milimetrada se miden los diámetros de los halos de inhibición

que aparezcan alrededor de los discos de antimicrobianos. Los resultados se

comparan con unas tablas en las que se correlacionan diámetros de halo con

categorías clínicas (S, I, R). 21

Pruebas de dilución o Concentraciones Inhibitorias Mínimas (C.I.M.) La determinación de las Concentraciones Inhibitorias Mínimas (C.I.M.), para los

patógenos específicos, provee datos, que conjuntamente con los parámetros

farmacocinéticos de los agentes antibacteriales en el animal, permiten predecir

la eficacia “in vivo” del compuesto en el tratamiento de una enfermedad

específica. Aunque existen regímenes terapéuticos para muchos agentes

antibacteriales utilizados en el tratamiento de infecciones intramamarias, la

sensibilidad del germen puede variar de tal manera que es necesario replantear

el esquema terapéutico; de acuerdo al patrón de sensibilidades desarrollado, y

para esto las C.I.M. permiten a los veterinarios monitorear la sensibilidad

antimicrobial de las cepas en los hatos lecheros.22

Pruebas de difusión en gel de agar o método de Kirby-Bauer Este método consiste en el cultivo de los agentes patógenos en medios

apropiados para su crecimiento, en el cual se colocan antibióticos en discos

que dependiendo de la concentración del antibiótico en este y de la sensibilidad

del microorganismo al antimicrobiano, da como resultado zonas donde el

crecimiento bacteriano es inhibido luego de varias horas de incubación 22




Este método da como resultado datos cualitativos ordinales (sensible,

intermedio y resistente), dichos resultados son la conclusión de varias

consideraciones como la especie de microorganismo, la clase de antibiótico,

concentración del antibiótico en el disco, el halo de inhibición del crecimiento

(medido en mm) 22

Método de difusión en disco: se emplean discos de papel impregnados de antibiótico localizados en zonas libres de microorganismos con dosis seriada.

Observando el tamaño del halo de inhibición de crecimiento se puede obtener

resultados semicuantitativos. La sensibilidad está determinada por el diámetro

del halo cuya lectura viene estandarizada.22

Mecanismos de resistencia Desde el punto de vista molecular y bioquímico existen básicamente tres

mecanismos por medio de los cuales una bacteria puede hacerse resistente al

efecto del antibiótico, a saber:

• Inactivación del antibiótico.

• Alteración del sitio blanco del antibiótico.

• Barreras de permeabilidad.

Cabe resaltar que los tres mecanismos pueden ocurrir simultáneamente 22 Resistencia a antibióticos La información genética que controla la resistencia bacteriana hacia los

agentes antimicrobianos se halla codificada en el ADN cromosómico y

extracromosómico (plásmidos). La resistencia a antibióticos es un fenómeno

que se adquiere por transferencia horizontal de los determinantes de

resistencia de una célula donante, a menudo de otra especie, mediante

transformación, transducción y/o conjugación, aunque también se puede

transmitir mediante transposones Además, también se puede con menor

frecuencia por mutación. Existen diversos mecanismos bioquímicos por los que

se expresa la resistencia a ciertos antimicrobianos. Estos son: 22




Disminución de la permeabilidad celular: se genera por cambios en receptores específicos y/o pérdida de la capacidad de transporte activo para

una determinada droga.22

También se pueden producir cambios estructurales en la membrana celular que

influyen en la permeabilidad en forma no específica, como la modificación

estructural de las porinas y otras proteínas de membrana. 22

Inactivación enzimática de la droga: este tipo de resistencia se debe a ciertas enzimas que producen cambios conformacionales en las drogas. Estas

enzimas pueden ser constitutivas o inducibles, como las penicilinasas o

betalactamasas, y la mayor parte de su actividad es extracelular en las

bacterias Gram positivas Es el caso del gen blaZ (portado por un plásmido)

que codifica para la síntesis de betalactamasas en Staphylococcus,

responsable de la degradación del anillo betalactámico de las penicilinas

También pueden ser degradados por enzimas los antibióticos aminoglucósidos

y el Cloranfenicol 22

Modificación del sitio blanco donde actúa la droga: Este tipo de resistencia se genera por mutaciones cromosómicas, o por la acción de genes presentes

en plásmidos que producen cambios en enzimas o sitios activos involucrados

en reacciones metabólicas esenciales para la célula. Estos cambios

disminuyen o bloquean la afinidad del antimicrobiano por el sitio blanco, como

ocurre con la resistencia de S. aureus a meticilina codificada por el gen

cromosómico adquirido “mecA”. La meticilinoresistencia está asociada

fenotípicamente con la presencia de una transpeptidasa adicional PBP2a

(Proteína de Unión a Penicilina), ausente en cepas de Staphylococcus

susceptibles 22

La pared de las bacterias está formada en su mayor parte por una

macromolécula constituida por residuos alternados de los aminoazúcares, N-

acetilglucosamina y ácido N-acetil murámico, unidos por enlaces β 1-4. El

grupo carboxilo del ácido láctico de cada residuo de N-acetil-D-murámico se




une al grupo amino del aminoácido terminal de un tetrapéptido. El tercer

aminoácido del tetrapéptido, L-lisina, se une mediante un pentapéptido de D-

glicina al cuarto aminoácido (D-alanina) del tetrapéptido de la cadena de

aminoazúcares lateral adyacente, con liberación del 5 residuo de D-alanina.

Esta unión ocurre en la última etapa de la síntesis de la pared celular, se

denomina transpeptidación indirecta y contribuye a la formación de una matriz

densa. Es precisamente esta última etapa de la síntesis del peptidoglicano la

que es inhibida por los antibióticos beta-lactámicos22

8. Tratamiento con antibióticos. La Gentamicina: Es un aminoglucósido.se emplea como antibiótico para erradicar infecciones en contra de bacterias sensibles. También sirve para

tratar diversas enfermedades graves de piel, pulmón, estómago, vías urinarias

y sangre. Su uso está indicado cuando la administración de otros antibióticos

menos potentes haya sido ineficaz. Debido a su gran toxicidad y a los múltiples

efectos secundarios, ha de evitarse su uso si no es estrictamente necesario. Se

concentran en oído y riñón, por lo tanto tienen efectos ototóxicos y

nefrotóxico.23 Mecanismo de acción: consiste en interferir en la síntesis normal de proteínas originando proteínas no funcionales en microorganismos susceptibles. Para

ejercer su acción deben ingresar en la célula bacteriana. Esto ocurre en 2

etapas por un mecanismo de transporte activo. En la primera fase, el ingreso a

la célula depende del potencial transmembrana generado por el metabolismo

aerobio. La segunda fase es de ingreso acelerado, y se ve favorecida por la

unión previa del aminoglucósido al ribosoma bacteriano. Ciertas condiciones

que reducen el potencial eléctrico de la membrana como la anaerobiosis o el

bajo pH del medio, disminuyen el ingreso de estos compuestos al citoplasma

bacteriano. Una vez dentro de la célula, los aminoglucósidos se unen de

manera irreversible a la subunidad 30S del ribosoma bacteriano. Esta unión

interfiere con la elongación de la cadena peptídica. También causan lecturas




incorrectas del código genético formándose proteínas anómalas. Algunas de

estas son proteínas de membrana y el resultado es la formación de canales

que permiten el ingreso de más drogas a la célula. 23

Espectro de acción: Es activo contra Gram negativas, especialmente Escherichia coli, especies de

Proteus (indol-positivo e indol-negativo),Pseudomonas aeruginosa, especies de

Klebsiella,Enterobacter,Serratia,Citrobacter, y especies de Staphylococcus

(coagulasa-positiva y coagulasa negativa, incluyendo cepas resistentes a

penicilina y meticilina).Los anaerobios, tales como Bacteroides o Clostridium, y

la mayoría de las especies de Streptococcus suelen ser resistentes a los

aminoglucósidos La vida media es corta, alcanza sus mayores concentraciones

en 2-4 h, su disponibilidad oral es limitada, su unión a proteínas es de 0-10%,

se excreta vía renal. 23

Enrofloxacina Antibiótico bactericida oral de amplio espectro, indicado para el tratamiento de

infecciones causadas por bacterias Gram-positivas, Gram-negativas y

Mycoplasmas. 23

Mecanismo de acción: La enrofloxacina es una fluoroquinolona de tercera generación cuyo mecanismo

de acción sobre bacterias y Mycoplasmas se caracteriza por inhibir la enzima

D.N.A.-girasa (topoisomerasa) que es responsable del superenrollado del D.N.A.

Comúnmente ocurre depuración del citoplasma en la periferia de la bacteria

afectada, que es seguida de lisis y también ocurre una interrupción de la

respiración y división celular. Además inhibe la síntesis de acido ribonucleico

(ARN) mensajero y la enzima sintetasa ARN de transferencia. 23

Farmacodinamia: Por vía oral se absorbe rápidamente en las especies monogástricas y en los

becerros pre-rumiantes. Los niveles máximos de concentración ocurren alrededor




de una hora post-aplicación. La presencia de comida en el estómago puede

retrasar su absorción, más no la absorción total En general la biodisponibilidad es

excelente teniendo curvas de concentración en plasma similares después de la

administración oral y parenteral 23

Excreción: Es por vía renal y por heces.

Tetraciclinas Las tetraciclinas tienen actividad contra bacterias Gram positivas, Gram

negativas aeróbicas y anaeróbicas. Las tetraciclinas actúan contra Rickettsiae

sp., Coxiella burnetti, Borrelia burgdorferi, Borrelia sp. , T. pallidum, Treponema

pertenue, Chlamydia sp .Mycoplasma pneumoniae, Plasmidium sp.,E.

histolytica y algunas micobacterias no tuberculosis. Las tres tetraciclinas con

mejor actividad son: Doxiciclina, Minociclina y Tetraciclina. 23

Mecanismo de acción: Las tetraciclinas se unen de manera definitiva a la subunidad 30S ribosómica,

provocando inhibición de la síntesis de proteínas. Para llegar a su sitio blanco

las tetraciclinas tienen que penetrar la pared celular a través de poros o por un

proceso de transporte. 23

Mecanismo de resistencia: La resistencia a tetraciclinas ocurre cuando disminuye la penetración o cuando

se forman proteínas que protegen al ribosoma de la unión de las tetraciclinas a

su sitio blanco. La disminución de la penetración de tetraciclina dentro de la

célula bacteriana puede acompañarse de un mecanismo de egreso activo

mediano por proteínas de membrana tipo Tet 23

Farmacocinética: La absorción después de su administración oral es de 90-100% para

Doxiciclina y Minociclina y de 75-80% para Tetraciclina. La vida media es de




14-24 horas para Doxiciclina, 11-26 horas para Minociclina y de 6-12 horas

para Tetraciclina. La Doxiciclina y la Minociclina tienen una mayor unión a las

proteínas que la Tetraciclina (60-95%, 55-76% y 20-65%) respectivamente. Las

Tetraciclinas se acumulan en el sistema retículo-endotelial y se excretan por

vía renal. 23

Amoxicilina. Es un antibiótico semisintético derivado de la penicilina. Se trata de un amino penicilina. Actúa contra un amplio espectro de microorganismos,

tanto Gram positivos como Gram-negativos. Por esto se emplea a menudo

como primer remedio en infecciones de diferente gravedad, tanto en medicina

humana como también en veterinaria. Se utiliza por vía oral o parenteral. 23

A pesar de su amplio espectro, no es estable frente a beta lactamasas, por lo

que no debe usarse frente a infecciones por gérmenes productores de las

mismas. Sin embargo, hay preparados comerciales con la adición de ácido

clavulánico o sulbactam, que aumentan su estabilidad y amplían su espectro en

estos casos. 23

Mecanismo de acción: Como las demás penicilinas la Amoxicilina impide en las bacterias la correcta

formación de las paredes celulares. Concretamente inhibe la conexión entre las

cadenas peptidoglicáneas lineares que forman la mayor parte de las paredes

de los microorganismos Gram-positivos. Al impedir que la pared celular se

construya correctamente, la amoxicilina ocasiona, en último término, la lisis de

la bacteria y su muerte. 23

Farmacodinamia: Es absorbida rápidamente en el intestino delgado (disponibilidad de aprox. el

80 %) tanto en ayunas como tras la ingesta de alimentos. Es eliminado con la

orina sin ser metabolizado. 23



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