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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
“EVALUACIÓN DE DOS DOSIS DE OZONO EN EL TRATAMIENTO DE
MASTITIS BOVINA”
Trabajo de grado presentado como requisito parcial para obtener el grado o título
de Médico Veterinario Y Zootecnista.
PAMELA ESTEFANÍA MARTÍNEZ ESTÉVEZ
TUTOR: DR. JORGE MOSQUERA
Quito, mayo, 2015
ii
DEDICATORIA
Dedico este proyecto de tesis a mi familia, por su amor e incondicional apoyo a lo largo de mi
vida.
De manera muy especial a mi madre Gladys, por ser el motor de mi vida y siempre alentarme a
cumplir mis sueños.
Pamela Estefanía Martínez Estévez
iii
AGRADECIMIENTO
Agradezco en primer lugar a Dios, por haberme brindado vida, sabiduría y fortaleza para
culminar esta etapa de mi vida.
A mis padres y a mis hermanos por su gran apoyo a lo largo de toda mi carrera; por ser pilar
fundamental en mi vida y por haber creído en mí.
A la Universidad Central del Ecuador, especialmente a mi querida Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia y a mis maestros por impartirme sus conocimientos.
Al Centro Experimental Uyumbicho y al Laboratorio de Bacteriología de la Facultad de
Medicina Veterinaria y Zootecnia, por facilitar sus instalaciones durante la realización de este
proyecto.
A mi tutor el Dr. Jorge Mosquera y a la Dra. María Inés Baquero por su colaboración,
asesoramiento y valiosa amistad en la elaboración de este proyecto.
A mis amigos, por siempre estar ahí.
Pamela Estefanía Martínez Estévez
iv
ACEPTACIÓN DEL TUTOR
En mi carácter de Tutor del Trabajo de Grado, presentado por la señorita Pamela Estefanía
Martínez Estévez para optar el Grado de Médico Veterinario y Zootecnista cuyo título tentativo
es: EVALUACIÓN DE DOS DOSIS DE OZONO EN EL TRATAMIENTO DE
MASTITIS BOVINA. Considero que dicho Trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes
para ser sometido a la presentación pública y evaluación por parte del jurado examinador que se
designe.
En la ciudad de Quito a cuatro días del mes de Julio de 2014.
_____________________________
FIRMA
Dr. Jorge Mosquera
C.C. 1702609197
v
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, PAMELA ESTEFANÍA MARTÍNEZ ESTÉVEZ, en calidad de autora del trabajo de
investigación o tesis realizada sobre “EVALUACIÓN DE DOS DOSIS DE OZONO EN EL
TRATAMIENTO DE MASTITIS BOVINA”, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD
CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos, que me pertenecen, o de parte
de los que contiene esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como no corresponden, con excepción de la presente autorización, seguirán
vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y demás
pertinentes de la Ley Intelectual y su Reglamento.
Quito, 11 de Mayo de 2015.
_______________________________
Pamela Estefanía Martínez Estévez
C.C. 1724478209
vi
APROBACIÓN DEL TRIBUNAL
“EVALUACIÓN DE DOS DOSIS DE OZONO EN EL TRATAMIENTO DE
MASTITIS BOVINA”
El tribunal constituido por: Dr. Francisco de la Cueva, Dra. María Inés Baquero, Dr. Darío
Pérez y Dr. Javier Vargas.
Luego de receptar la presentación del trabajo de grado previo a la obtención del título o grado
de Médico Veterinario Zootecnista presentado por la señorita PAMELA ESTEFANÍA
MARTÍNEZ ESTÉVEZ.
Con el título:
“EVALUACIÓN DE DOS DOSIS DE OZONO EN EL TRATAMIENTO DE
MASTITIS BOVINA”
Ha emitido el siguiente veredicto de aprobación del Trabajo de Tesis.
Quito, 9 de Julio de 2015 (FECHA DEFENSA)
Para constancia de lo actuado:
Dr. Francisco de la Cueva
Dra. María Inés Baquero
Dr. Darío Pérez
Dr. Javier Vargas
vii
ÍNDICE DE GENERAL
pp
DEDICATORIA ........................................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTO .................................................................................................................. iii
RESUMEN ................................................................................................................................. xiii
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................ 1
CAPÍTULO I ................................................................................................................................. 2
EL PROBLEMA ........................................................................................................................... 2
Planteamiento del problema .......................................................................................................... 2
Justificación ................................................................................................................................... 3
Objetivos ....................................................................................................................................... 4
CAPÍTULO II ............................................................................................................................... 5
MARCO TEÓRICO ...................................................................................................................... 5
Antecedentes de la investigación .................................................................................................. 5
Fundamentación Teórica ............................................................................................................... 6
Caracterización de variables........................................................................................................ 22
Definición de términos básicos ................................................................................................... 23
CAPÍTULO III ............................................................................................................................ 24
METODOLOGÍA ....................................................................................................................... 24
Ubicación de la zona en estudio .................................................................................................. 24
Determinación de los métodos utilizados .................................................................................... 26
Diseño de la investigación........................................................................................................... 28
Variables medidas ....................................................................................................................... 29
Procedimiento de la investigación ............................................................................................... 30
Operacionalización de las variables ............................................................................................ 32
Prueba de hipótesis ...................................................................................................................... 33
Instrumentos de la investigación ................................................................................................. 34
Validez y confiabiliad de los instrumentos ................................................................................. 36
Técnicas de procesamiento y análisis de datos ........................................................................... 36
viii
CAPÍTULO IV ............................................................................................................................ 37
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................................................. 37
Prevalencia de mastitis en el Centro Experimental Uyumbicho. ................................................ 37
Grado de mastitis de los animales en estudio mediante la prueba de CMT, pre y post-
tratamiento. .................................................................................................................................. 37
Identificación de los agentes causales de mastitis aislados en el Centro Experimental
Uyumbicho. ................................................................................................................................. 39
Recuento de UFC/ml previo al tratamiento, al tercer y séptimo día post-tratamiento ................ 42
Significancia de la efectividad de la carga de UFC/ml de leche, durante el periodo de evaluación
(3 y 7 días post-tratamiento). ....................................................................................................... 45
Determinación del Índice de Coliformes Totales y Fecales ........................................................ 47
Análisis económico por costos parciales de los productos utilizados. ........................................ 48
CAPÍTULO V ............................................................................................................................. 50
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .......................................................................... 50
Conclusiones ............................................................................................................................... 50
Recomendaciones ........................................................................................................................ 51
Referencias bibliografías ............................................................................................................. 52
Abreviaturas ................................................................................................................................ 58
Anexos......................................................................................................................................... 59
ix
ÍNDICE DE ANEXOS
pp
Anexo A. Protocolo para la recolección de muestras de leche para cultivo (National
Mastitis Council) ............................................................................................................ 59
Anexo B. Técnica de procesamiento de muestras. ......................................................... 60
Anexo C. Determinación de Coliformes Totales y Fecales por el método del número
más probable. (Camacho, et al., 2009) ........................................................................... 61
Anexo D. Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm3 en
cada uno, 5 con porciones de 1 cm3 y 5 con porciones de 0.1 cm3. ............................ 63
Anexo E. Recuento de Unidades Formadoras de Colonias (UFC/ml). Técnica de vertido
en placa. (López y Torres, 2006) .................................................................................... 64
Anexo F. Aislamiento de agentes causales ..................................................................... 66
Anexo G. Prevalencia de mastitis en vacas lactantes en el Centro Experimental
Uyumbicho. .................................................................................................................... 67
Anexo H. Distribución de los animales por tratamiento. ............................................... 69
Anexo I. Aplicación de los productos. ........................................................................... 70
x
ÍNDICE DE TABLAS
Pp
Tabla N° 1 Criterios para la interpretación de resultados de CMT ................................ 14
Tabla N°2 Relación entre grado de CMT y Rango de células somáticas. ...................... 15
Tabla N°3 Ozonoterapia vs. Antibioterapia ................................................................... 21
Tabla N° 4. Ubicación geográfica de la localidad en estudio. ........................................ 25
Tabla N° 5. Características climáticas. ........................................................................... 25
Tabla N° 6. Características edáficas. .............................................................................. 26
Tabla N° 7. Productos ..................................................................................................... 27
Tabla N° 8. Dosis ........................................................................................................... 27
Tabla N° 9. Frecuencia de aplicación ............................................................................. 27
Tabla N° 10. Factor adicional ......................................................................................... 27
Tabla N° 11. Combinación de los factores en estudio. ................................................... 28
Tabla Nº12. Esquema del ADEVA. ............................................................................... 29
Tabla N° 13. Variable dependiente. ............................................................................... 32
Tabla N° 14. Variable independiente. ............................................................................ 33
Tabla N° 15. Prueba de hipótesis ................................................................................... 33
Tabla N° 16. Prevalencia de mastitis en vacas lecheras del Centro Experimental
Uyumbicho. .................................................................................................................... 37
Tabla N° 17. Número y porcentaje de pezones según el grado de mastitis mediante la
prueba de CMT, pre y post-tratamiento.......................................................................... 38
Tabla N° 18. Identificación de agentes causales de mastitis aislados en el Centro
Experimental Uyumbicho, durante el periodo de evaluación......................................... 40
Tabla N° 19. Recuento de UFC/ml en número y porcentaje previo al tratamiento, y el
número y porcentaje de disminución de colonias al tercer y séptimo días post-
tratamiento. ..................................................................................................................... 42
Tabla N° 20. Resultados obtenidos en el trabajo “Determinación de la eficacia de
ozonoterapia en el tratamiento de mastitis clínica en vacas” ......................................... 44
xi
Tabla Nº 21. Duncan DMS al 5% para la variable recuento de UFC/ml previo al
tratamiento, entre las medias de los grupos experimentales. ........................................ 445
Tabla Nº 22. ADEVA para la variable determinación de la efectividad de los productos
sobre la carga de UFC/ml de leche, durante el periodo de evaluación. .......................... 46
Tabla Nº 23. Análisis de Duncan DMS al 5% para la variable determinación de la
efectividad de los productos durante el periodo de evaluación. ..................................... 46
Tabla Nº 24. Análisis económico por costos parciales de la obtención de los productos
utilizados. ........................................................................................................................ 48
xii
ÍNDICE DE GRÁFICOS
pp
Gráfico Nº 1. Georeferenciación de la zona en estudio. ...................................................... 24
Gráfico N° 2. Staphylococus aureus, sembrado en Agar Manitol Salado y tinción Gram,
en la que se observa cocos gram positivos. ........................................................................... 40
Gráfico N° 3. Pruebas confirmatorias de Staphylococus aureus. Coagulasa positivo y
Rojo de Fenol positivo. ............................................................................................................ 41
Gráfico Nº4. Porcentaje de disminución de la carga de UFC/ml de leche durante el
periodo de evaluación, en relación a la carga inicial. .......................................................... 47
Gráfico N° 5. Tubos con Caldo Bilis Verde Brillante con campana de Druham. ........... 48
xiii
‟EVALUACIÓN DE DOS DOSIS DE OZONO EN EL
TRATAMIENTO DE MASTITIS BOVINA”
Autor: Pamela Estefanía Martínez Estévez
Tutor: Dr. Jorge Mosquera
RESUMEN
En el hato bovino del Centro Experimental Uyumbicho de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Central del Ecuador, ubicado a 2.735 m.s.n.m. en la
parroquia de Uyumbicho, cantón Mejía, provincia de Pichincha, se evaluó el efecto de la
administración intramamaria de ozono médico, para el tratamiento de mastitis en bovinos en
producción lechera, en dosis de 50 µg y 100 µg en tres aplicaciones, frente a un testigo
convencional (aplicación de antibiótico – Cefalexina 200 mg). La investigación constó de 3
tratamientos con 4 repeticiones, para lo que se utilizaron 12 vacas en producción con presencia
de mastitis subclínica grado +++ y clínica, y en la que cada unidad experimental correspondió a
un animal, los cuales se distribuyeron bajo un Diseño de Bloques Completos al Azar. Las
variables analizadas fueron: recuento de UFC/ml (mesófilos), índice de coliformes totales y
fecales y asilamiento de agentes causales pre-tratamiento y determinación de la efectividad de
los tratamientos aplicados. El resultado del análisis bacteriológico pre-tratamiento mostró la
presencia de UFC/ml, la ausencia de coliformes totales y fecales, además de la presencia de
Staphylococcus aureus en el 100% de las muestras de leche analizadas. Los resultados
experimentales de los tratamientos fueron sometidos a análisis de varianza (ADEVA),
encontrándose diferencias altamente significativas (p≤0.05) sobre la carga de UFC/ml
(mesófilos) al tercer día de la evaluación, alcanzando el T1 una efectividad del 94.56% y
difiriendo estadísticamente (p≤0.05) con el T3 y el T2, los que presentaron una efectividad del
89.53% y del 89.52%, respectivamente. Mientras que al séptimo día de la evaluación, también
se encontraron diferencias altamente significativas (p≤0.05), siendo el T1 el que presentó el
mayor porcentaje de efectividad con el 97.53%, difiriendo estadísticamente (p≤0.05) con el T3,
el que presentó una efectividad del 92.38%, y a su vez difiriendo estadísticamente (p≤0.05) del
T2, el que presentó una efectividad de 91.00%.
DESCRIPTORES
Mastitis, ozono, UFC/ml, coliformes, Staphylococcus aureus.
xiv
‟EVALUATION OF TWO DOSES OF OZONE IN THE
TREATMENT OF BOVINE MASTITIS”
ABSTRACT
In the bovine herd from the Uyumbicho Experimental Center of the Medicine, Veterinary and
Zootecnic Faculty of the Central University, located at 2.735 m over sea level, in Uyumbicho
Parish, Mejia Canton, Pichincha Province, the effect of the intramamary administration of
medical ozone was evaluated for the treatment of mastitis in bovines which are producing milk,
in dosis of 50µg and 100µg for three days, in front of a conventional witness (application of the
antibiotic – Cephalexin 200mg). The research consisted in three treatments (T1: 50ug medical
ozone, T2: 100ug medical ozone and T3: antibiotic - Cephalexin 200mg) with four repetitions
each one, for this, twelve cows in production were used with the presence of subclinic mastitis
grade +++ and clinic one, and each experimental unit corresponding to one animal, which were
distributed under a Desing of Complete Block in Chance. The analyzed variables were: recount
of UFC/ml (mesophile), index of total and fecal coliforms and the lodged of the causal agents
pre-treatment and the determination of the effectiveness of the applied treatments. The result of
the bacteriological pretreatment analisis showed the presence of UFC/ml (mesophile), the
absence of total and fecal coliforms, in addition the presence of Staphylococcus aureus in the
100% of the sample of analyzed milk. The experimental results of the treatments were put under
the control of a varianza analisis (ADEVA), in wich differences higly significant were found (p
≤ 0.05) over a charge of UFC/ml (mesophile) in the third day of evaluation the T1 reaching to
an effectiveness of 94,56% and differing statistically (p ≤ 0.05) from the T3 and the T2, wich
showed an effectiveness of 89,53% and 89,52% respectively, while in the seventh day of
evaluation, differences highly significant were found (p ≤ 0.05), being the T1 which present the
major percentage of effectiveness with the 97,53% differing statistically (p ≤ 0.05) from the T2
that present an effectiveness of 91,00%.
KEYWORDS
Mastitis, ozone, UFC/ml, coliforms, Staphylococcus aureus
1
INTRODUCCIÓN
La mastitis, es decir la inflamación de la glándula mamaria y sus tejidos secretores, es la
patología más común de vacas lecheras; su origen, principalmente, es infeccioso y está
clasificada como una enfermedad multifactorial y su presentación depende de varios factores
como: la vaca, el medio ambiente y el agente causal. Además, es una enfermedad de difícil
erradicación (Mosquera, 2014).
El estudio de las mastitis es muy importante porque se trata de una enfermedad que afecta a la
salud y bienestar de los animales, ocasionando grandes pérdidas económicas a las explotaciones
lecheras.
El tratamiento de esta afección se realiza con antibióticos, lo que genera gastos, resistencia
bacteriana, residuos en la leche, eliminación de leche, reacciones alérgicas en los consumidores
y disminución de la producción (Dután, 2014).
En la presente investigación se usó la ozonoterapia como un método alternativo para el
tratamiento de la mastitis, debido a las poderosas propiedades que se le atribuye al ozono y a fin
de eliminar los problemas que acarrea el tratamiento ortodoxo o tradicional.
El presente estudio aplicó las técnicas microbiológicas, establecidas, en el Laboratorio de
Bacteriología y Micología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, para el
aislamiento del agente causal, recuento de unidades formadoras de colonias/ml e índice de
coliformes de las muestras de leche obtenidas de vacas con mastitis del Centro Experimental
Uyumbicho.
El apoyo del Centro Experimental Uyumbicho y del Laboratorio de Bacteriología y Micología,
de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Central del Ecuador,
hicieron posible llevar a cabo este estudio hasta su finalización.
2
CAPÍTULO I
EL PROBLEMA
Planteamiento del problema
La mastitis de la vaca, junto a los trastornos de la fertilidad, constituye la causa más importante
de la falta de rentabilidad de una explotación lechera (Kleinschroth et al., 1991).
La mastitis nunca será erradicada. Existen demasiadas bacterias diferentes involucradas y
algunas de éstas se hallan presentes continuamente. El tratamiento antibiótico tiene grados
variables de eficacia, por tanto, el enfoque de la mastitis deber ser un enfoque de control, el
mismo que será cada vez más importante en el futuro (Blowey et al., 2010).
La mayoría de infecciones de la ubre son causadas por varias especies de estreptococos,
estafilococos y bacilos gram negativos, especialmente organismos de origen entérico,
comúnmente denominados coliformes. Epidemiológicamente la fuente de la infección puede ser
considerada como contagiosa o ambiental (Erskire, 2007).
La mastitis, actualmente, es considerada un problema de salud pública, debido a la
administración constante de antibióticos a los animales afectados.
Los antibióticos utilizados en el tratamiento de la mastitis son una preocupación industrial y de
salud pública importante, pues estos afectan significativamente a la cantidad y a la calidad de la
leche como también a los productos de procesamiento, reduciendo el tiempo de conservación,
calidad de los productos, sabor y aroma, llegando hasta el punto de desechar la producción; por
tanto, estos parámetros indeseados afectan, de manera significativa, a la industria láctea
económicamente y a la seriedad empresarial (Dután, 2014).
Las graves falencias en el manejo del proceso sanitario, la falta de conocimiento de mastitis
clínica y de mastitis subclínica, y el uso indiscriminado de fármacos para su tratamiento, dan
como consecuencia resistencia bacteriana, pérdidas de cuartos, descarte temprano de animales y
repercusiones en la salud pública, reflejando la ineficiencia de los procesos de producción
(Espinoza y Mier, 2013).
3
La ozonoterapia, al ser una alternativa terapéutica, económica y poco invasiva, ha sido aplicada
en el presente trabajo de investigación, el que se centró en la experimentación del ozono médico
en vacas lecheras para el tratamiento de la mastitis.
Justificación
La mastitis es la enfermedad más común y costosa que padece el ganado lechero en el mundo
entero; son numerosos los estudios que indican la importancia de la enfermedad, principalmente
por las pérdidas económicas que representa a la cadena láctea y los riesgos a la salud pública
(Philpot y Nickerson, 2002).
El principal objetivo de la ganadería lechera es producir leche de forma eficiente en cuanto a
calidad y cantidad. La sanidad de la glándula mamaria constituye uno de los factores
indispensables para cumplir este objetivo (Radostits, 2001).
La mastitis continúa siendo la enfermedad más común y costosa que padece al ganado en el
mundo entero; ha sido reconocida desde que el hombre domesticó la vaca y en los miles de años
siguientes a pesar de todo avance científico, permanece en los hatos lecheros. Las pérdidas que
representa mantener esta enfermedad son cuantiosas (Radostits, 2001).
Uno de los retos médicos actuales es el uso de medios económicos, eficientes y sin efectos
colaterales que permitan prevenir y/o recuperar la salud del hombre y los animales. La
medicina veterinaria no escapa a este reto, toda vez que se preocupa de la producción de
derivados animales idóneos para el consumo humano.
En los últimos años, el uso de la ozonoterapia en tratamientos de varias patologías en animales
se ha incrementado notablemente, ya que las enfermedades que padecen los animales son
semejantes a las encontradas en el ser humano. Debido a los diferentes efectos benéficos que
produce; el uso de ozono es considerado un tratamiento alternativo, económico y menos
invasivo (Vidal et al., 2009).
Aprovechando investigaciones en medicina humana y muy pocas en medicina veterinaria, este
trabajo se propone demostrar que el ozono es eficaz en el tratamiento de mastitis.
4
Objetivos
En el presente estudio, se plantearon los siguientes objetivos:
General
- Evaluar la eficiencia de dos dosis de ozono en el tratamiento de mastitis bovina en el Centro
Experimental Uyumbicho.
Específicos
- Determinar el grado de mastitis de los animales en estudio mediante la prueba de CMT, pre y
post-tratamiento.
- Identificar los agentes causales de mastitis, recuento de UFC/ml de leche e índice de coliformes
fecales y totales.
- Evaluar el efecto de la aplicación intramamaria de los productos sobre el recuento de UFC/ml
de leche, índice de coliformes fecales y totales, y la presencia del agente causal de mastitis.
- Realizar la evaluación financiera a través de costos parciales.
5
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
Antecedentes de la investigación
El mundo exige responder a la demanda creciente de proteínas de origen animal, cuidar el
ambiente y a la vez luchar contra las enfermedades que afectan al ganado y a la salud humana
(FAO, 2010).
Ogata y Nagahata (2000), en Japón, indican que mediante la aplicación de ozono intramamario,
el 60% de las vacas con mastitis aguda no necesitan antibioterapia para su recuperación. Por
tanto, es una terapia efectiva, costo eficiente y no deja residuos en la leche.
Sarmiento (1999) menciona que el suministro de ozono por medio de la inyección en la ubre
ofrece una cura rápida, segura y efectiva contra la mastitis de las vacas, evitando los efectos
secundarios de la antibioterapia, logrando resultados mucho más rápidos, saludables y efectivos.
Dután (2014), en Ecuador, determinó la eficiencia de ozonoterapia en el tratamiento de mastitis
clínica en vacas y los resultados obtenidos revelan que se reduce la inflamación de la glándula
mamaria y se reduce el número de unidades formadoras de colonias, pero a pesar de ello la
leche no cumple con los estándares de calidad.
Reinoso (2012), en Ecuador, evaluó los tratamientos farmacológico y alternativo mediante la
aplicación de ozono para el control intramamario de la mastitis subclínica en bovinos y los
resultados obtenidos revelan que los tratamientos en estudio son eficaces; sin embargo, el
método farmacológico tradicional requiere mayor tiempo, tanto en la aplicación como en el
descarte de la leche, para evitar los residuos medicamentosos; el método alternativo es de acción
inmediata, no presenta residuos post tratamiento en la leche ni riesgo de alteración o desarrollo
de resistencia en la población que consume el producto.
Arichábala y Argudo (2012), en Ecuador, emplearon la ozonoterapia en la ganadería de leche
como alternativa de tratamiento para la mastitis clínica y los resultados obtenidos revelan que la
innovación de Ozonoterapia podría convertirse en un tratamiento ya no solo alternativo sino
electivo en enfermedades como la mastitis en vacunos; el tratamiento con antibiótico sanó al
83% de las vacas que tenían mastitis clínica, el tratamiento de gas ozono sanó en un 76,6% y el
tratamiento con suero ozonificado en un 33,3%.
6
En Ecuador, se ha utilizado ozonoterapia intrauterina en el tratamiento de la endometritis
subclínica bovina y los resultados obtenidos indican que la solución salina fisiológica
ozonizada, a una concentración de 30 µg/ml, en cantidad de 50 ml, aplicada por vía intrauterina,
logró una involución uterina del 81,25% de las vacas tratadas y el Ceftiofur sódico, a una
concentración de 500 mg en 20 ml de suspensión, aplicado por vía intrauterina alcanzó una
involución uterina del 66,66% de las vacas tratadas para la endometritis subclínica (Guzmán,
2013).
Fundamentación Teórica
Mastitis
La mastitis es una reacción inflamatoria de la glándula mamaria. El término se deriva de las
palabras griegas mastos, que significa ‘pechos’ e itis que quiere decir ‘inflamación’ (Philpot y
Nickerson, 2002).
La inflamación de la glándula mamaria es considerada como la enfermedad más costosa en la
industria lechera, lo que conlleva a la disminución en la calidad y cantidad de la leche (Ramírez
et al., 2001).
La mayoría de los ganaderos asocian mastitis con un cuarto inflamado junto con un cambio en
el aspecto de la leche (Blowey y Edmondson, 2010).
La inflamación de la ubre, reduce la producción del volumen de leche, alterando su
composición, incluso su sabor, además de elevar su carga bacteriana normal (Gasque, 2012).
Según Philpot y Nickerson (2002), la mastitis es generalmente el resultado final de la
interacción de varios factores, tales como el hombre, la vaca, el medio ambiente, los
microorganismos y el manejo.
Etiología
Existe gran variedad de agentes que causan mastitis; se ha registrado más de 200
microorganismos diferentes que pueden producir la inflamación de la glándula mamaria
(Blowey y Edmondson, 2010).
Philpot y Nickerson (2002) mencionan que los microorganismos que causan mastitis pueden ser
divididos en cuatro grupos: contagiosos, ambientales, oportunistas y otros.
7
1. Microorganismos contagiosos: Las ubres infectadas son las mayores reservas de dichos
microorganismos; la transmisión de cuartos infectados a no infectados ocurre principalmente
durante el ordeño (Philpot y Nickerson, 2002).
- Staphylococcus aureus: (Staphylo “grupo” y coccus “esferas”). Es el patógeno contagioso más
común, gram positivo, en forma de pequeñas esferas, crecen en grupos y forman colonias
crecientes en los canales de los pezones (Philpot y Nickerson, 2002).
La transmisión a los cuartos sanos ocurre en el momento del ordeño por medio de las pezoneras,
toallas, esponjas de lavado y por las manos del ordeñador; además, las bacterias pueden ingresar
a los cuartos sanos a través de aerosoles de leche proveniente de cuartos infectados por el
resbalamiento de las pezoneras. Produce una inflamación crónica con un elevado conteo de
células somáticas (Philpot y Nickerson, 2002).
El tejido de la ubre, muchas veces, está fibrosado; estas infecciones son muy difíciles de curar
con antibioterapia debido a la destrucción del tejido glandular. Las infecciones de larga duración
suelen ser subclínicas con apariciones periódicas de casos clínicos (Philpot y Nickerson, 2002).
- Streptococcus agalactie: (Strepto “cadenas” y agalactie “sin leche”). Son bacterias gram
positivo, con forma de esferas minúsculas y forma colonias similares a cadenas de esferas; la
única reserva de este microorganismo es la leche procedente de ubres infectadas; el ordeño
incompleto puede incrementar el riesgo de infección (Philpot y Nickerson, 2002).
Los cuartos infectados tienen un conteo elevado de células blancas y células somáticas. El
contaje bacteriano es muy alto, generalmente mayor a 1.000.000 por mililitro y el rango de
células somáticas es de 1 a 10 millones por mililitro (Philpot y Nickerson, 2002).
Las infecciones subclínicas se convierten en crónicas si no se tratan, ocasionando la pérdida del
cuarto. Se deben identificar a los animales infectados para ser que sean ordeñados al final. Para
controlar esta infección resulta eficaz la desinfección post-ordeño y la terapia del secado
(Philpot y Nickerson, 2002).
- Mycoplasma bovis: Estos microorganismos son de un tamaño intermedio entre una bacteria y un
virus. Se sospecha de la presencia de este microorganismo cuando los cultivos microbiológicos
de leche procedente de varios cuartos con síntomas clínicos, dan un resultado negativo (Philpot
y Nickerson, 2002). Esta forma de mastitis se manifiesta súbitamente, con una secreción
purulenta, altamente contagiosa, reducción marcada de la producción (Philpot y Nickerson,
2002).
Los animales infectados deben ser aislados y eliminados del hato, ya que los tratamientos no
son de utilidad (Philpot y Nickerson, 2002).
8
- Corynebacterium bovis: Es una bacteria en forma de bastón, gram positiva, la forma de mastitis
ocasionada por este microorganismo es generalmente leve e incrementa ligeramente las células
somáticas de 200.000 a 400.000 por mililitro. Aparece cuando no se realiza el sellado de los
pezones posterior al ordeño y terapia de la vaca seca (Philpot y Nickerson, 2002).
La principal reserva son las ubres infectadas y los canales de los pezones y se contamina de
vaca a vaca; la presencia de dicho microorganismo es indicativo de fallas en medidas
preventivas (Philpot y Nickerson, 2002).
2. Microorganismos ambientales: La prevalencia de mastitis por agentes del medio ambiente,
generalmente, es menor del 5%; las vacas estabuladas están expuestas a un mayor riesgo de una
infección de microorganismos del ambiente que aquellas en pastoreo y los casos clínicos
incrementan en los meses del invierno por el confinamiento (Philpot y Nickerson, 2002).
- Streptococcus: Las infecciones ocasionadas por este microrganismo son muy comunes en las
vacas secas por lo que la terapia de secado es una medida de control fundamental (Philpot y
Nickerson, 2002).
La prevalencia de infecciones incrementa cuando se realiza ordeños con ubres húmedas, con el
uso de esponjas sucias y corrales inadecuados; las infecciones tienen una duración corta, menor
a 30 días, pero algunos casos pueden hacerse crónicos (Philpot y Nickerson, 2002).
Los conteos de células somáticas en los cuartos con afección subclínica oscilan entre 300.000 y
2millones por mililitro. La mejor manera de controlar la presencia de este tipo de mastitis es
realizar un cultivo bacteriológico a las vacas que muestren síntomas clínicos al parto y al secado
(Philpot y Nickerson, 2002).
- Coliformes: Son bacterias gram negativas de forma tubular; se encuentran en el estiércol, en el
agua contaminada, en la tierra y en los materiales usados como cama de los animales (Philpot y
Nickerson, 2002).
Las mastitis por coliformes son las causadas por Escherichia coli, que es de origen animal,
Klebsiella pneumoniae, que se origina en el suelo y Enterobacter aerogenes (Philpot y
Nickerson, 2002).
La incidencia de este tipo de infección es común cerca del parto y al inicio de la lactancia, por
un descuido en el tratamiento de secado, por mantener vacas secas en ambientes contaminados
durante el período de seco, por partos en áreas contaminadas y por no ordeñar después del parto.
La duración de las infecciones es corta entre 10 a 30 días aunque algunas persisten más tiempo.
El 10% de los casos clínicos progresan a la forma hiperaguda y la leche suele ser amarillenta y
acuosa, conteniendo grumos y escamas (Philpot y Nickerson, 2002).
9
3. Microorganismos oportunistas
- Staphylococcus coagulasa negativos (CNS): Son los microorganismos que con más frecuencia
se identifican en el hato; las infecciones son leves y con presencia de coágulos y escamas en la
leche (Philpot y Nickerson, 2002).
Este microorganismo vive normalmente en el tejido sano de los pezones y manos del ordeñador.
Puede infectar a vaquillonas antes de su primer parto, pero la mayoría de las infecciones se
curan espontáneamente (Philpot y Nickerson, 2002).
4. Otros microorganismos: Las infecciones con estos microorganismos son debidas, casi siempre,
a los malos procedimientos de tratamiento.
- Pseudomonas aeruginosa: Este microorganismo genera infecciones de tipo subclínico con
manifestaciones clínicas, resistentes a la terapia de antibióticos (Philpot y Nickerson, 2002).
La leche de los cuartos infectados se presenta acuosa, amarillenta, con grumos y escamas; se ha
encontrado a este microorganismo en selladores de pezones a base de amonio cuaternario y
clorhexidina contaminados. Los casos de mastitis por Pseudomona se le atribuyen a las aguas
contaminadas y a los malos métodos de tratamiento (Philpot y Nickerson, 2002).
- Arcanobacterium pyogenes: Generalmente presentan síntomas clínicos acompañados de
secreción de un líquido verdoso, espeso y mal oliente; es frecuente en novillas y vacas secas
próximas al parto y se cree que se contaminan por medio de las moscas (Philpot y Nickerson,
2002).
- Nocardia: La infección resulta por la deficiente higiene de la punta del pezón previa la infusión
de antibióticos intramamarios, produce una inflamación marcada con endurecimiento del cuarto
afectado y la secreción láctea es con grumos, de color pajizo y de textura similar a la cera,
algunas vacas pueden presentar síntomas sistémicos (Philpot y Nickerson, 2002).
10
Factores predisponentes de mastitis
Philpot y Nickerson (2002), mencionan los subsecuentes factores predisponentes para la
presentación de mastitis:
- Factores físicos
Heridas y lesiones: Amplían el riesgo de entrada de bacterias a través del orificio del pezón,
como: verrugas, eccema o viruela.
Agentes químicos: Exceden la capacidad de controlar la microflora del medio, al igual que el
uso de medicamentos terapéuticos sin una base técnica.
Personal: Es de quienes depende la higiene de instalaciones, equipos de ordeño y animales,
como también la ejecución de actividades durante el ordeño.
Equipo de ordeño: Cuando el equipo se encuentra en malas condiciones sanitarias o
mecánicas.
Otros factores: Traumas, picaduras de insectos, la humedad o el calor también pueden
provocar problemas que conllevan a la inflamación de la ubre.
- Factores genéticos
La forma de la glándula mamaria es otro de los factores que predisponen a la prevalencia de
mastitis, vacas con ubres colgantes y profundas, pezones de mayor diámetro o invertidos
suponen mayor riesgo de infección ya que facilitan el ingreso de la bacteria a la cisterna del
pezón. En el estado de lactación existe mayor grado de susceptibilidad principalmente en la
primera y última semana, así como en la primera semana del secado (Pérez, 2007).
- Factores nutricionales
Los factores nutricionales relacionados con la resistencia a mastitis de vacas primerizas son el
selenio y la vitamina E, ya que mejoran la actividad fagocítica de las células de defensa. La
presencia de vitamina A y el β-caroteno en la dieta es muy importante para la salud de las
mucosas, el zinc participa en la integridad de los epitelios, y el cobre posee efectos importantes
efectos antioxidantes (McDougall et al., 2009).
- Factores de manejo
Las formas más efectivas para controlar la difusión de la mastitis son limpieza general de las
vacas, buenas prácticas de manejo y el adecuado ordeño, ya que los microorganismos que
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causan la mastitis viven en diferentes ambientes como: materia fecal, cama, piel, entre otros
(Philpot y Nickerson, 2002).
Patogenia
La inflamación es la respuesta de los tejidos productores de leche en la ubre a una lesión
traumática o la presencia de microorganismos infecciosos que han ingresado a la ubre (Philpot y
Nickerson, 2002).
Radostits (2001) señala que la inflamación de la glándula mamaria se presenta en tres etapas:
invasión, infección e inflamación.
1. Invasión: En esta etapa los gérmenes ingresan del exterior de la ubre a la leche que se encuentra
en el conducto del pezón.
2. Infección: Los microorganismos se multiplican rápidamente e invaden el tejido glandular,
estableciéndose una población bacteriana en el canal del pezón para diseminarse en el tejido
mamario.
3. Inflamación: La glándula mamaria presenta anomalías como: hinchazón, temperatura y en la
leche ordeñada incrementa el número de leucocitos, evidenciándose mastitis clínica.
Clasificación de la mastitis de acuerdo al grado de inflamación
Philpot y Nickerson (2002) clasifican a la mastitis de la siguiente forma:
1. Mastitis clínica:
Se identifica por anormalidades visibles en la ubre o en la leche, las mismas que varían
enormemente en su severidad durante el curso de la enfermedad. Los cuartos mamarios pueden
estar rojizos, inflamados y endurecidos a la palpación; las alteraciones de la leche varían de
coágulos a flóculos.
Clasificación de la mastitis clínica, de acuerdo a la gravedad (Philpot y Nickerson, 2002).
- Mastitis clínica subaguda: Esta forma de inflamación se puede definir como medianamente
clínica; se presentan alteraciones menores en la leche tales como coágulos, flóculos pequeños,
grumos, escamas o secreciones descoloradas; los cuartos afectados se presentan levemente
inflamados, sensibles y hay reducción de la producción sin que presente problemas sistémicos
(Philpot y Nickerson, 2002).
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- Mastitis clínica aguda: Esta forma de inflamación se caracteriza por el aparecimiento repentino
de signos: enrojecimiento, hinchazón, dolor y endurecimiento; la leche tiene un aspecto
anormal purulento, de suero aguado o sanguinolento y se reduce drásticamente la producción.
Además, se presentan signos sistémicos como: postración, diarrea, pulso acelerado, disminución
de la función ruminal, temblores y depresión (Philpot y Nickerson, 2002).
- Mastitis clínica hiperaguda: Los casos de esta forma de inflamación son poco comunes; se
caracteriza por un desarrollo muy rápido y presenta los mismos síntomas que la mastitis clínica
aguda pero también incluyen depresión, fiebre, choque, fibrosis de la ubre, septicemia, pulso y
respiración agitada, pérdida de coordinación muscular, extremidades frías, falta de reflejo en las
pupilas, deshidratación y diarrea (Philpot y Nickerson, 2002).
- Mastitis clínica crónica: Este tipo de inflamación puede ser detectada por presentar signos
repentinos e intermitentes de mastitis clínica, es de larga duración y se puede establecer como
cualquiera de las formas clínicas previamente descritas. Usualmente, tiene un desarrollo
progresivo de tejido cicatrizante alterando la forma y el tamaño de la glándula y la reducción de
la producción láctea (Philpot y Nickerson, 2002).
- Mastitis iatrogénica: Esta forma de inflamación está asociada al uso inadecuado de cánulas
intramamarias; su etiología son mohos o levaduras de los géneros: Candida, Cryptococcus y
Trichosphorum (Philpot y Nickerson, 2002).
2. Mastitis subclínica
Predominante en las infecciones intramamaria; es de larga duración, no puede detectarse por
observación visual de la ubre o de la leche porque presentan una apariencia normal; únicamente
puede ser detectada mediante pruebas que detecten la presencia de microorganismos
infecciosos. La mastitis subclínica usualmente precede a la clínica y es la forma de mastitis que
provoca mayores pérdidas económicas por disminución de la producción y de la calidad de la
leche; constituye un reservorio de la infección para otros animales del hato (Philpot y
Nickerson, 2002).
3. Mastitis no específica
También se denomina mastitis aséptica o no bacteriana; en esta forma no se aísla ningún
microorganismo causal en las muestras de leche; sin embargo, existe incremento del conteo de
células somáticas. Su origen puede ser a causa de traumas físicos en la glándula mamaria,
irritaciones químicas, por el uso de productos para el tratamiento de mastitis o por el inadecuado
funcionamiento de los equipos de ordeño (Philpot y Nickerson, 2002).
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Prevalencia e incidencia de mastitis
La resolución y control del problema de mastitis requieren la intervención profesional como
cualquier otro problema en producción animal, una planificación, recolección de información
pertinente, elaboración de un plan, ejecución y monitoreo de resultados. Esta organización
asegura al profesional mejores resultados e incrementa la eficiencia en el uso de recursos del
productor (económicos y fuerza laboral) y del profesional (tiempo) (Rhoda y Pantoja, 2012).
La prevalencia de la mastitis se define como el número de casos clínicos por mes o por año que
pudiera tener un hato con variaciones por efectos de temporada, épocas lluviosas, veranos
cálidos y húmedos. En general, un hato es considerado dentro del rango normal cuando el
número de casos clínicos anuales no supera el 36% (Sotomayor, 2013).
Mier y Espinoza, en el 2013, en un diagnóstico situacional realizado en treinta fincas del cantón
El Chaco durante el último trimestre del 2011, reveló a la mastitis como la enfermedad más
frecuente dentro de las explotaciones lecheras.
La incidencia se define como nuevos casos clínicos que aparezcan luego de un periodo de
recuperación aproximado de 2 semanas; varios estudios mencionan que se puede realizar el
recuento de células somática (RCC) y California Mastitis Test (CMT) cada 30 días para
identificar nuevos casos de infección, es decir la migración de negativo a positivo (Sotomayor,
2013).
Diagnóstico de mastitis
Philpot y Nickerson (2002) mencionan varias pruebas para la detección de mastitis:
1. Examen físico de la glándula mamaria: Se realiza con la ubre vacía, después del ordeño; hay
incremento de la temperatura de la glándula o del cuarto afectado, enrojecimiento,
endurecimiento y dolor; pueden presentarse cuartos atrofiados o deformes con áreas de tejido
cicatrizante (Philpot y Nickerson, 2002).
2. Pruebas de despunte: Consiste en examinar el primer chorro de leche a través de un jarro de
fondo obscuro; permite detectar la leche anormal que no debe enviarse al tanque, e identifica
vacas con mastitis que requieren tratamiento (Philpot y Nickerson, 2002).
3. Prueba de Mastitis de California (CMT): Es una prueba utilizada durante varias décadas; es
la prueba más utilizada en el campo para diagnosticar mastitis (Bedolla et al., 2007).
14
Esta prueba estima la cantidad de células somáticas de la leche, y es realizada antes del ordeño y
luego de la eliminación de los primeros chorros de leche.
Mellenberger (2000) menciona que la prueba de CMT, a pesar de presentar alta sensibilidad,
presenta deficiencias en especificidad, dando falsos positivos durante la primera semana
después del parto, en vacas que tienen más de siete meses de producción y varios partos, por lo
que se debe tener en cuenta que la viscosidad va a ser similar en los 4 pezones.
La prueba se fundamenta en agregar un detergente a la leche, en iguales proporciones, el dodecil
sodio sulfato y el cristal violeta, que causan la liberación del ADN de los leucocitos presentes
en la leche y éste en combinación con los agentes proteicos de la leche se convierte en gelatina
(Medina y Montalvo, 2003).
Tabla N° 1 Criterios para la interpretación de resultados de CMT
Grado de mastitis Características
Negativo (0)
El estado de la solución permanece inalterado, en estado
líquido. El 25% de las células son leucocitos
polimorfonucleares.
Trazas
Se forma un precipitado en el piso de la paleta que
desaparece pronto. El 30% de las células son leucocitos
polimorfonucleares.
1 (+)
Hay mayor precipitado y se forma un velo. El 30 a 40%
son leucocitos polimorfonucleares.
2 (++)
El precipitado se torna denso y se concentra en el centro.
El 40 a 70% son leucocitos polimorfonucleares.
3 (+++)
Se forma un gel muy denso que se adhiere a la paleta. El
70 a 80% son leucocitos polimorfonucleares.
Fuente: DVG, 2002.
Elaboración: La autora.
15
4. Conteo de células somáticas: Es la medición más ampliamente utilizada para supervisar la
inflamación de la ubre; se realiza con una mezcla de los cuatro cuartos para determinar la salud
de la ubre, generalmente cada mes (Philpot y Nickerson, 2002).
En ausencia de infección de la glándula mamaria, el conteo de células somáticas oscila entre
200.000 a 300.000 ccs/ml; en cuartos normales existe menos de 100.000 ccs/ml mientras que en
infecciones persistentes los recuentos son superiores a 800.000 ccs/ml (Cerón et al., 2007).
Tabla N°2 Relación entre grado de CMT y Rango de células somáticas.
Grado de CMT Rango de células somáticas
(cs/ml)
Negativo Menor a 200.000
Trazas 200.000 – 400.000
1 400.000 – 1'500.000
2 1'500.000 - 5'000.000
3 Mayor a 5'000.000
Fuente: Mellenberger, 2000.
Elaboración: La autora.
5. Conductividad eléctrica: Determina la presencia de mastitis de acuerdo a los diferentes
niveles de sal, ya que con la presencia de bacterias incrementa el sodio y el cloro en la leche y
disminuyen los iones calcio y la lactosa (Philpot y Nickerson, 2002).
6. Cultivos bacterianos: Son realizados en el laboratorio y consiste en llevar un microorganismo
a un medio artificial y brindarle las condiciones idóneas para su crecimiento, tales como
temperatura, humedad, presión osmótica y pH.
La fidelidad de los resultados de laboratorio depende de los cuidados sanitarios que se tengan
durante la toma de muestras y su manipulación posterior (Pérez et al., 2007).
16
Control y prevención
Philpot y Nickerson (2002) mencionan que para controlar a la mastitis es importante encontrar
un método práctico para su prevención, implementando guías para el hato, que pueda aplicarse a
todos los hatos a nivel nacional.
Existen solo cuatro maneras de eliminar y controlar las infecciones, que son: descarte de las
vacas infectadas, tratamiento durante la lactancia, tratamiento en el secado y curación
espontánea (Philpot y Nickerson, 2002).
Impacto económico de la mastitis
La mastitis es la enfermedad más costosa del ganado lechero; representa el 26% del costo total
de todas las enfermedades en el ganado lechero; el 70 a 80% de todas las pérdidas son asociadas
a mastitis subclínicas, mientras que solo el 20 a 30% se deben a la mastitis clínica (Philpot y
Nickerson, 2002).
Philpot y Nickerson (2002) mencionan que cada cuarto infectado produce aproximadamente
780 litros menos de leche por lactancia que un cuarto sin infección.
Según Blowey y Edmondson (2010), la mastitis afecta económicamente al ganadero de dos
formas:
Costos directos:
1. La leche descartada.
2. Drogas de tratamiento y atención veterinaria.
Costos indirectos:
1. Las sanciones a causa del incremento de recuento de células somáticas.
2. Disminución de la producción de leche durante la lactancia debido a daños o a la infección
subclínica.
3. Mano de obra extra para el tratamiento y la enfermería.
4. Las tasas de descarte y servicios de sustitución más altos, lo que conlleva a la pérdida de
potencial genético.
5. Muerte.
El Concilio Nacional de Mastitis (NMC), en el año 2007 estimó que los costos causados por
mastitis para el ganadero promedio son de $180 dólares por vaca por año (Philpot y Nickerson,
2002).
17
La mastitis clínica causa pérdidas económicas evidentes para el ganadero, lo que concita su
preocupación para resolver el problema.
El impacto económico de la mastitis subclínica no es evidente sin un análisis de pérdidas de
producción en un período largo (un año o más), razón por la cual es difícil de comprometer a los
ganaderos en la decisión de tomar medidas de control (Andresen, 2001).
Tratamiento de mastitis
En la terapia de la mastitis, se utilizan en primera línea los antibióticos, la vía de aplicación
puede ser sistémica o local (intramamaria) (Wolter et al., 2004).
Básicamente para la terapia antibacterial de mastitis se recomiendan: ß- lactámicos,
aminoglucósidos, lincosamidas, macrólidos, tetraciclinas, polipéptidos, trimetropim-
sulfonamidas combinadas y fluoroquinolonas (Wolter et al., 2004).
La elección del antibiótico para el tratamiento de mastitis se lo debe realizar en base a: la
sensibilidad antibiótica de las bacterias implicadas, la capacidad de penetrar en la ubre, la
capacidad de persistir en la ubre en una concentración suficiente para destruir a las bacterias de
una sola infusión o varias, la eficacia de la presencia en la leche, si es bacteriostática o
bactericida, la liposolubilidad, los períodos de retiro y el precio del tratamiento (Blowey y
Etmondson, 2010).
Ozono
El ozono es la unidad alotrópica del oxígeno, formado por moléculas triatómicas de este
elemento (Marusi et al., 1999).
El ozono fue descubierto por Chistian F. Schonbein en el año 1840, quien lo asoció con el olor
producido por descargas eléctricas atmosféricas, olor que se formaba en la electrólisis del agua;
lo denominó ozono, que en griego significa oloroso (Campos et al., 2003).
El ozono es un gas inestable y altamente reactivo, que produce un olor característico debido a su
acción oxidante, que le da el poder de inactivación y eliminación de microorganismos (Carrijo y
García, 2006).
La molécula de ozono presenta acción fungicida, viricida y bactericida, pudiendo ser utilizado
en el tratamiento de diversas enfermedades (Sunnen, 2003).
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Mecanismo de acción de la ozonoterapia
Bocci, (2015) menciona que la aplicación de ozono-oxígeno interviene directamente en los
procesos metabólicos.
El ozono se añade a las cadenas dobles de ácidos grasos insaturados de la pared fosfolípidica de
la membrana eritrocítica, lo cual conduce a la formación de peroxidasa, la misma que tiene un
importante papel en el metabolismo a través de los sistemas redox, NADH/NAD, y GSH/GSSG.
La reacción de la peroxidasa en el glutatión incrementa la producción de 2.3 DPG
(difosfogliceraldehído) e hidrogeniones facilitando la liberación de oxígeno a partir de la
oxihemoglobina, principalmente en territorios isquémicos (Bocci, 2015).
La acción bactericida, fungicida y viricida se da por la capacidad aseptizante del ozono (Bocci,
2015).
Principales efectos del Ozono
1. Efecto bactericida, una de las ventajas más importantes del ozono, con respecto a otros
bactericidas, es que este efecto se manifiesta a bajas concentraciones (0,01 p.p.m. o menos) y
durante periodos de exposición muy cortos. Incluso a concentraciones ínfimas de ozono es
observable un efecto bacteriostático (Ricaurte, 2006).
Mata la mayoría de bacterias ya que su metabolismo es 17 veces menos eficiente que nuestras
células y están desprovistas de sistemas antioxidantes (Shallenberger, 2009).
El ozono tiene un alto potencial de oxidación, es inestable y desinfectante ya que ataca a
enzimas, grupos sulfihidrilos o aldehídos y libera peróxidos lo que conlleva a la dispersión del
citoplasma y por consiguiente la muerte del microorganismo (Ricaurte, 2006).
2. Efecto viricida, el ozono actúa sobre los virus oxidando las proteínas de su envoltura y
modificando su estructura; al ocurrir esto, el virus no puede anclarse a ninguna célula
hospedadora por no reconocer su punto de anclaje, y al encontrarse el virus desprotegido y sin
poder reproducirse, muere. La acción viricida es observable a concentraciones de ozono
inferiores a la de acción bactericida (Ricaurte, 2006).
3. Efecto fungicida para cualquier tipo de hongos (Shallenberger, 2009).
Ricaurte, en el 2006, mencionó que el ozono puede controlar y eliminar estas formas patógenas,
cuyas esporas proliferan por todo tipo de ambientes.
19
4. Efecto esporicida, existen algunos hongos y bacterias que, cuando las condiciones son adversas
para su desarrollo, fabrican una gruesa envoltura alrededor de ellas y paralizan su actividad
metabólica, permaneciendo en estado de latencia. Cuando las condiciones para la supervivencia
vuelven a ser favorables, vuelven a su forma normal y su metabolismo recupera su actividad.
Estas formas de resistencia se conocen como esporas y son típicas de bacterias tan patógenas
como las que provocan el tétanos, la gangrena gaseosa, el botulismo y el ántrax.
El ozono, a concentraciones superiores, es capaz de acabar con la resistencia de las esporas
(Ricaurte, 2006).
5. Acción desodorante, es una de las propiedades mejor comprobadas, debido a su gran utilidad en
todo tipo de locales de uso público y en el tratamiento de ciertos olores de origen industrial;
posee la propiedad de destruir los malos olores (Ricaurte, 2006).
6. Estimula la producción de leucotrienos, células fundamentales en la defensa contra infecciones
y el cáncer. Las dos situaciones suponen un medio ambiente mal oxigenado y por tanto existe
un mal funcionamiento de la actividad defensiva leucocitaria, fallando en la eliminación de
gérmenes y pudiendo provocar el ataque a células sanas. El ozono al incrementar los niveles de
oxígeno en la sangre, durante largos periodos de tiempo, facilita las condiciones para que la
actividad defensiva leucocitaria cumpla su función, modulando además su respuesta
(Shallenberger, 2009).
7. El ozono eleva el interferón, los interferones son proteínas globulares que cumplen un papel
significativo en la respuesta inmune, algunos interferones son producidos por las células
infectadas por virus y alertan a las células vecinas de la probabilidad de infección, evitando así
la replicación viral.
El interferón gamma puede ser elevado bajo el estímulo el ozono hasta niveles de 400 – 900% y
está implicado en el control de células fagocíticas, encargadas de envolver y matar a patógenos
y células anormales (Shallenberger, 2009).
8. El ozono incrementa los niveles del Factor de Necrosis Tumoral (TNF), cuya misión es impedir
el crecimiento de tumores y células metastásicas (Benner et al., 2011).
9. El ozono aumenta las propiedades reológicas de la sangre, aumentando la elasticidad y
flexibilidad de los glóbulos rojos facilitando así el tránsito y su circulación a través de los
capilares (Shallenberger, 2009).
20
Incrementa la capacidad de absorción del oxígeno en los eritrocitos, así como su transferencia
hacia los tejidos, lo que permite que aumente el metabolismo en el área dañada donde se
aplique, permitiendo así su pronta regeneración (Benner et al., 2011).
10. El ozono estimula los sistemas enzimáticos antioxidantes (Benner et al., 2011).
11. El ozono acelera el Ciclo de Krebs, aumentando la glicólisis y por tanto la producción de
energía en forma de ATP (Shallenberger, 2009).
12. El ozono degrada sustancias petroquímicas, potencialmente peligrosas para el sistema inmune
(Benner et al., 2011).
13. El ozono por su poder oxigenante contribuye a mejorar la eficiencia de las células de los
organismos superiores en cuanto al aprovechamiento del oxígeno disponible (Benner et al.,
2011).
Terapia con Ozono
La terapéutica con ozono en el campo de la medicina humana tiene gran relevancia y fue usada
desde mediados del siglo XX en Alemania en el tratamiento de numerosas patologías; en
medicina veterinaria el uso de ozono es limitado; sin embargo, actualmente, debido a las
bondades y facilidad de uso, su importancia en tratamientos ha incrementado.
Los efectos biológicos del ozono le otorgan propiedades terapéuticas y biológicas que permiten
la aplicación de la ozonoterapia en un extenso campo de especialidades, tales como en la mejora
medio ambiental a través de la potabilización de aguas, la alimentación (desinfección de frutas y
verduras) y la medicina (Fierro, 2006).
En la medicina humana, se ha demostrado el efecto beneficioso de la ozonoterapia en
enfermedades de diferente etiología tales como, neurológicas, oftalmológicas, endocrino-
metabólica, ortopédicas e inmunológicas (Vidal et al., 2009).
Vías de administración
El ozono puede aplicarse por vía rectal, vía vaginal, uso tópico (pomada de aceite de ozono),
agua ozonizada, campana de vacío o bolsa de vacío, cámara especial, vía hemática
(autohemoterapia), inyección intrarticular, paravertebral, intramuscular, intramamaria,
subcutánea, intradérmica (Fierro, 2006).
21
Ozonoterapia en medicina veterinaria
En los últimos años, el uso de la ozonoterapia en tratamientos de varias patologías animales ha
incrementado notablemente, ya que las enfermedades que padecen los animales son muy
semejantes a las encontradas en humanos, debido a los diferentes efectos benéficos que produce;
el uso de ozono es considerado un tratamiento alternativo, económico y menos invasivo (Vidal
et al., 2009).
Campos y Calles en el 2003, mencionaron la efectividad cicatrizante a través del uso tópico de
ozono como alternativa de tratamiento en la cicatrización de las heridas en cerdos castrados, no
se observó riesgo de contaminación de las heridas y se comprobó una rápida regeneración de
los tejidos.
En la tabla N°3 se puede observar la caracterización de las acciones del ozono y de los
antibióticos.
Tabla N°3 Ozonoterapia vs. Antibioterapia
OZONO ANTIBIÓTICO
Esteriliza todos los organismos patógenos y
sus toxinas.
Esteriliza solo un tipo de bacteria u hongo. No
actúa sobre virus, levaduras ni toxinas.
Efecto antibacterial se mantiene en presencia
de materia orgánica.
Efecto antibacterial disminuye en presencia de
materia orgánica.
Insuflaciones intramamarias alcanzan a los
compartimentos de la glándula.
Los antibióticos locales no alcanzan los ductos
de la glándula y debe asociarse a tratamiento
parenteral.
Tratamiento rápido, a veces un solo
tratamiento puede curar la ubre.
Los tratamientos con antibiótico por lo menos
duran 3 días.
Sin resistencia a los patógenos asociados. Genera resistencia bacteriana.
No tiene ninguna interacción adversa con
otros medicamentos o con la flora
gastrointestinal.
La mayoría de antibióticos interactúan con
otros medicamentos y con la flora
gastrointestinal.
22
Ninguna reacción alérgica se muestra a
concentraciones terapéuticas.
Todos los antibióticos tienen un grado de
reacción adversa, incluso a concentraciones
terapéuticas.
Después del tratamiento, la carne y leche
pueden ser consumidas inmediatamente.
La leche no puede usarse por lo menos por 5
días.
La carne no puede usarse por 30 días (tiempo
de retiro).
De acuerdo a las concentraciones, el ozono
tiene una acción antiinflamatoria.
Los antibióticos no actúan sobre el proceso de
inflamación.
La autohemoterapia con ozono puede curar la
toxemia.
No desintoxica, produce daño hepático, renal
y del tracto gastrointestinal.
Aumenta la producción de leche de 5 a 30%. No aumenta la producción láctea.
Fuente: Scrollavezza et al., (1997)
Elaboración: La autora
CARACTERIZACIÓN DE VARIABLES
VARIABLE DEPENDIENTE:
Mastitis: Es una reacción inflamatoria de la glándula mamaria resultante de la interacción de
varios factores: hombre, vaca, medio ambiente, microorganismos y manejo (Philpot y
Nickerson, 2002).
VARIABLE INDEPENDIENTE:
Ozono: Es la unidad alotrópica del oxígeno, formado por moléculas triatómicas de este
elemento (Bocci, 2015).
La molécula de ozono presenta acción fungicida, viricida y bactericida pudiendo ser utilizada en
el tratamiento de diversas enfermedades (Sunnen, 2003).
23
DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS
Leche: Producto de la secreción mamaria normal de animales bovinos lecheros sanos, obtenida
mediante uno o más ordeños diarios, higiénicos, completos e ininterrumpidos, sin ningún tipo
de adición o extracción, destinada a un tratamiento posterior previo a su consumo (NTE INEN
9:2012).
Mastitis: Es un síndrome multifactorial y significa inflamación de la glándula mamaria, debido
a la presencia de patógenos; se convierte en una infección provocando daños al epitelio
mamario (Cano, 2006).
California Mastitis Test: Es la reacción de un compuesto químico que rompe las células
(lisador) y deja salir su ADN fuera de la membrana celular, estos filamentos de ADN tienen
tendencia a formar unas estructuras tipo gel cuando se unen unos con otros (Philpot y
Nickerson, 2002).
Células somáticas en la leche: Están constituidas por una asociación de leucocitos y células
epiteliales. Los leucocitos se introducen en la leche en respuesta a la inflamación que puede
aparecer debido a una enfermedad o, a veces, a una lesión. Las células epiteliales se desprenden
del revestimiento del tejido de la ubre (Blowey y Edmondson, 1995).
Cultivo: Es el proceso de crecimiento de microorganismos en un medio artificial después de la
obtención de bacterias de un sitio de infección (Forbes et al., 2009).
Antibiograma: Es un método in vitro que determina la susceptibilidad de los microorganismos
a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio específicas y
estandarizadas, para proveer recomendaciones sobre la terapia que puede ser más apropiada en
una infección específica (Pedrique, 2002).
Resistencia: Es el mecanismo de los microorganismos para eludir la actividad de los
antimicrobianos (Forbes et al., 2009).
Ozono: Es la unidad alotrópica del oxígeno, formado por moléculas triatómicas de este
elemento (Bocci, 2015).
24
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
Ubicación de la zona en estudio
El presente estudio se realizó en el Programa Bovino del Centro Experimental Uyumbicho de la
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Central del Ecuador (Gráfico
Nº 1), cuya ubicación geográfica, características climáticas y características edáficas se
describen en las Tabla N°4, N°5, N°6.
Gráfico Nº 1. Georeferenciación de la zona en estudio.
Fuente: Google Maps, 2014.
25
Tabla N° 4. Ubicación geográfica de la localidad en estudio.
Provincia: Pichincha
Cantón: Mejía
Parroquia: Uyumbicho, 20km al Sur de Quito
Sitio: Centro Experimental Uyumbicho
Altitud: 2.735 m.s.n.m.
Latitud: 0° 24' Sur
Longitud: 78° 32' Oeste
Fuente: INAMHI, 2013.
Elaboración: La autora.
Tabla N° 5. Características climáticas.
Temperatura máxima 26°C
Temperatura mínima 3°C
Temperatura promedio: 14°C
Clima Frío – templado
Precipitación media anual: 1.238,8 mm
Humedad relativa promedio: 77 - 82%
Heliofanía Promedio anual 1.971 horas luz
Junio-Agosto hay más intensidad y duración.
Vientos Velocidad: 1,6m/seg
Mayor intensidad de Norte a Sur
Fuente: INAMHI, 2013.
Elaboración: La autora.
26
Tabla N° 6. Características edáficas.
pH: 6
Topografía: 92% es pendiente, 8% plano
Textura: Franco – arcilloso
Fuente: INAMHI, 2013.
Elaboración: La autora.
El trabajo de laboratorio se realizó en el Laboratorio de Bacteriología de la Facultad de
Medicina Veterinaria y Zootecnia, perteneciente a la Universidad Central del Ecuador.
DETERMINACIÓN DE LOS MÉTODOS UTILIZADOS
Criterios de la investigación
El presente trabajo se sustenta en una investigación de campo, ya que se observó el fenómeno
estudiado en el medio que se desarrolló y se apoya en una investigación bibliográfica que
permite analizar y comprender los problemas encontrados; su tendencia es de carácter
cuantitativo porque nos permitió calcular la magnitud del problema para confirmar las hipótesis
descritas.
Para la orientación de la investigación y la evolución del fenómeno estudiado, se realizó un
estudio observacional de tipo transversal, debido a que se determinó en un punto del tiempo,
con la ayuda de pruebas diagnósticas de campo y laboratorio.
El análisis y alcance de los resultados se valoraron estadísticamente aplicando medidas de
tendencia central que cuantifican el problema y gráficos bidimensionales regidos por el sistema
de coordenadas y que constituyen una representación del fenómeno estudiado.
27
Factores en estudio
Los factores en estudio estuvieron constituidos por los productos, la dosis y la frecuencia de
aplicación. Dichos factores se describen en Tablas Nº 7, Nº8, Nº9 y Nº10.
Tabla N° 7. Productos
Código Descripción
p1 Ozono (O3)
Elaboración: La autora.
Tabla N° 8. Dosis
Código Descripción
d1 50µg/ml O3 en 60cc O2-O3
d2 100µg/ml O3 en 60cc O2-O3
Elaboración: La autora.
Tabla N° 9. Frecuencia de aplicación
Código Descripción
f1 Tres veces
Elaboración: La autora.
Tabla N° 10. Factor adicional
Código Descripción
Tc Cefalexina (200 mg)
Elaboración: La autora.
28
Tratamientos
Los tratamientos utilizados en la investigación resultaron de la combinación de los factores en
estudio, más el tratamiento testigo.
Tabla N° 11. Combinación de los factores en estudio.
Tratamiento Código Descripción
T1 p1 x d1 x f1 Ozono+ 50µg/ml O3 + Tres veces
T2 p1 x d2 x f1 Ozono+ 100µg/ml O3 + Tres veces
T3 tc Testigo convencional Cefalexina 200mg *
+ Tres veces
Elaboración: La autora.
*Antibiótico seleccionado por el Método de determinación de sensibilidad a los antimicrobianos
por difusión en discos en agar (Método de Kirby Bauer). (NCCLS, 2004).
DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
Para el desarrollo de la presente investigación, se utilizaron dos dosis de ozono médico
(50µg/ml O3 y 100µg/ml O3), frente a un tratamiento o testigo convencional (administración de
antibiótico intramamario - Cefalexina 200mg), para evaluar la eficiencia de los mismos en el
tratamiento de vacas lecheras con mastitis.
Unidad experimental
La unidad experimental estuvo constituida por un bovino adulto en producción que presente
mastitis.
Diseño experimental
Se aplicó un DBCA (Diseño de Bloques Completos al Azar) con 4 repeticiones.
Análisis estadístico
Los datos obtenidos durante el proceso experimental fueron analizados con el paquete
estadístico InfoStat, empleando el análisis de varianza descrito en la Tabla Nº12.
29
Tabla Nº12. Esquema del ADEVA.
Fuente de variación Grados de libertad
Total 11
Tratamientos 2
Repetición 3
Error experimental 6
Elaboración: La autora.
Análisis funcional
Las fuentes de variación que resultaron significativas fueron analizadas mediante la prueba de
Duncan DMS al 5%, para establecer rangos de significación. El coeficiente de variación (CV) se
expresó en porcentaje.
VARIABLES MEDIDAS
Índice de Coliformes totales y fecales
Para determinar el índice de coliformes se realizó un análisis bacteriológico antes de la
aplicación de los productos, durante la evaluación de la efectividad de los mismos y luego del
tratamiento, para lo que se tomaron muestras de leche de cada unidad experimental (Anexo A) y
se las llevó al Laboratorio de Bacteriología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
de la Universidad Central del Ecuador. Para la determinación de coliformes totales y fecales, se
utilizó el Método del Número Más Probable (Camacho et al., 2009), descrita en el Anexo C y
D.
Recuento de unidades formadoras de colonias/ml pre-tratamiento
Para el recuento de UFC/ml (mesófilos) se realizó un análisis bacteriológico antes de la
aplicación de los productos, durante la evaluación de la efectividad de los mismos y luego del
tratamiento, para lo que se tomaron muestras de leche de cada unidad experimental (Anexo A) y
se las llevó al Laboratorio de Bacteriología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
de la Universidad Central del Ecuador. La técnica utilizada fue la de recuento de unidades
formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml) de leche – Siembra de Vertido en Placa (López y
Torres, 2006), descrita en el Anexo E.
30
Identificación del agente causal de mastitis.
La identificación de los agentes causales de mastitis se realizó conjuntamente con el recuento de
unidades formadoras de colonias en las muestras de leche, para lo que se utilizaron las técnicas
y procedimientos descritos en el Anexo F.
Determinación la efectividad de los tratamientos aplicados, mediante el porcentaje
de reducción de UFC/ml.
Para la determinación de la efectividad de los productos, se realizó un análisis bacteriológico
antes del tratamiento y a los 3 y 7 días después de la aplicación de los productos, para lo que se
utilizaron las mismas técnicas y procedimientos descritos en los Anexos A, B, C, D, E y F. La
efectividad o no de los productos aplicados se midió en porcentaje (%). El porcentaje de
reducción (eficiencia) de la cantidad de unidades formadoras de colonias se calculó a través de
la siguiente fórmula (Mosquera, 2015):
Dónde;
PR: Porcentaje de reducción
UFC/ml inicial: Unidades formadoras de colonias por mililitro inicial.
UFC/ml final: Unidades formadoras de colonias por mililitro final.
PROCEDIMIENTO DE LA INVESTIGACIÓN
Selección de los animales para el estudio
La selección de los animales para el estudio se realizó mediante el uso de la prueba
CMT en el total de las vacas en producción (N=52) escogiendo aquellos animales que
tenían presencia de mastitis (N=12) del Programa Bovino del Centro Experimental
Uyumbicho de la Universidad Central del Ecuador. Esto se describe en el Anexo G.
31
Análisis bacteriológico pre - tratamiento para determinar el Índice de coliformes
totales y fecales, UFC/ml y agente causal de mastitis
Para el examen inicial, se realizó el análisis bacteriológico a cada muestra de leche obtenida de
los animales en estudio, con el propósito de determinar la presencia de coliformes totales y
fecales, cuantificar las UFC/ml e identificar los agentes causales de mastitis. Las técnicas y
procedimientos empleados se describen en los Anexos A, B, C, D y E.
Distribución de los animales
La distribución de los animales fue realizada después de determinar agentes causales y UFC/ml,
los animales fueron distribuidos aleatoriamente y al azar. Esto se describe en el Anexo H.
Preparación del Ozono
Para la preparación del gas Ozono, que fue administrado como antimastítico, se debió conectar
la máquina ozonizadora a una fuente de energía eléctrica y a una fuente de oxígeno médico, se
calibró la maquina a las dosis a probarse, se extrajo el gas con una jeringuilla.
Aplicación de los productos por tratamiento (Anexo I).
Tratamiento con O3
La aplicación del ozono se realizó por vía intramamaria (Shinozuka et al., 2009).
Luego del ordeño de las vacas seleccionadas, se realizó, la antisepsia de los pezones de las
vacas, con alcohol de 70° (Philpot y Nickerson, 2002).
Se administró el Ozono médico en estado gaseoso, con una cánula estéril descartable adosada a
una jeringuilla, el primer día, a las 24 horas y 48 horas.
Se sellaron los pezones.
Tratamiento con Rilexine 200 (antibiótico)
Luego del ordeño de las vacas seleccionadas, se realizó, la antisepsia de los pezones de las
vacas, con alcohol de 70° (Philpot y Nickerson, 2002).
Administró el producto (Rilexine 200), mediante el uso de una jeringuilla descartable, el primer
día, a las 24 horas y 48 horas.
Se sellaron los pezones.
32
Análisis bacteriológico post–tratamiento para determinar el Índice de coliformes
totales y fecales, UFC/ml y agente causal de mastitis
Luego de la administración de los productos a los animales en estudio, de acuerdo al respectivo
tratamiento, se procedió a realizar análisis bacteriológicos a los 3 y 7 días, aplicando las mismas
técnicas y procedimientos que se mencionan en los Anexos A, B, C, D y E.
Comparación de resultados.
Finalmente, se realizó un análisis de los resultados que se obtuvieron de los análisis
bacteriológicos previos a la administración de los productos y los resultados obtenidos después
de la aplicación de los productos, en relación tanto al índice de coliformes totales y fecales, al
número de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml) como a los agentes causales
de mastitis bovina. Esto se hizo para llegar a la conclusión específica acerca de si el gas ozono
es específico o no frente a las bacterias causales de mastitis encontradas inicialmente y para
estimar el tiempo del efecto de dicho producto.
OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
Variable dependiente: Mastitis.
Tabla N° 13. Variable dependiente.
CONCEPTO CATEGORÍA INDICADOR ITEMS TÉCNICA
MASTITIS
Enfermedad de
la producción
Grado de
mastitis
¿En qué medida disminuirá
el grado de mastitis con
Ozono?
California
Mastitis Test
¿En qué medida disminuirán
los agentes causales de
mastitis?
Cultivo
bacteriológico
Elaboración: La autora.
33
Variable independiente: Ozono.
Tabla N° 14. Variable independiente.
CONCEPTO CATEGORÍA INDICADOR ITEMS TÉCNICA
OZONO
Compuesto
alotrópico
triatómico del
oxígeno
Agentes
bacterianos
¿Qué dosis de ozono será
más efectiva en el
tratamiento de mastitis?
Pruebas
bacteriológicas
California
Mastitis Test ¿El uso de ozono disminuirá
el grado de mastitis y
disminuirán los agentes
bacterianos?
Elaboración: La autora.
PRUEBA DE HIPÓTESIS
Tabla N° 15. Prueba de hipótesis
Hipótesis Nula Hipótesis Alternativa
No es posible controlar la mastitis en
vacas lecheras con las dos dosis de
ozono propuestas.
Sí es posible controlar la mastitis en
vacas lecheras con las dos dosis de
ozono propuestas.
Elaboración: La autora.
34
INSTRUMENTOS DE LA INVESTIGACIÓN
MATERIALES
Biológicos
12 vacas lecheras, que presenten mastitis.
Sangre de cordero desfibrinada.
Químicos
Reactivo para CMT – 1000ml LIFE. Lote: 13-2869. (Ecuador).
Ozono
Oxígeno médico
Rilexine 200mg.
Medios de Cultivo
Agar Base Sangre – 500g. DIFCOTM
. Lote: 3254351. (Francia).
Agar Chocolate – 500g. DIFCO TM
. Lote: 3254351. (Francia).
Agar Manitol salado – 500g. DIFCOTM
. Lote: 4020274. (Francia).
Agar Mc Conkey – 500g. DIFCOTM
. Lote: 1255936. (Francia).
Agar Chromocult – 500g. MERCK ®. Lote: VM166026 025. (Alemania).
Agar Plate count – 500g. DIFCOTM
. Lote: 4027440. (Francia).
Caldo Bilis Verde Brillante – 500g. CONDA. Lote: 807151. (España).
Materiales de Vidrio
Asa microbiológica Digralsky.
Matraces Erlenmeyer 250, 500 y 1000 ml.
Campanas de Durham.
Probetas 100, 250, 500ml.
Tubos de ensayo 10 ml.
Tubos de ensayo tapa rosca 10ml.
Portaobjetos.
Pipetas de 1ml y 10ml.
Materiales desechables
Cajas petri.
Fundas plásticas.
Papel empaque.
35
Papel aluminio.
Algodón.
Guantes de látex M.
Jeringas de 60cc.
Sondas intramamarias descartables.
Hisopos.
Materiales varios
Gradilla.
Mandil.
Overol.
Botas de caucho.
Registros de campo.
Paleta negra para CMT.
Caja térmica.
Hielo químico (en gel).
Materiales de limpieza
Alcohol antiséptico.
Clorexhidina.
Jabón de manos.
Cloro doméstico.
Papel toalla.
Suministros de oficina
Cuaderno empastado 100 hojas (cuaderno de acreditación).
Cuaderno de apuntes.
Marcador permanente.
Esferográficos.
Computador portátil.
Papel de impresora 75g/m2.
Tinta de impresora.
Copias.
Anillados.
Empastados.
36
Servicios
Servicio de internet.
Transporte.
Equipos
Ozonificador médico Bioline BL-X5.
Incubadora. Precision Thelco Model 6.
Autoclave: Market Forge Sterilmatic.
Cámara de flujo laminar: Biological Hazard. Biobase. Midcis.
Balanza electrónica.
Microscopio.
Contador de colonias Funke Gerber.
VALIDEZ Y CONFIABILIAD DE LOS INSTRUMENTOS
Los registros y protocolos establecidos en los manuales de procedimientos mencionados
anteriormente son válidos, ya que han sido evaluados por técnicos especializados y vienen
siendo utilizados con éxito desde hace ya varios años.
TÉCNICAS DE PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE DATOS
Registro de animales: Para la recolección de información importante como identificación, raza,
edad, número de parto, días de lactancia.
Registro de laboratorio: Para la anotación de datos en el laboratorio se utilizó el cuaderno de
laboratorio y se registraron los resultados de los aislamientos bacteriológicos.
Después de la recopilación de los datos con los instrumentos señalados, estos se ordenaron para
su procesamiento y análisis y se los cuantificó estadísticamente aplicando medidas de tendencia
central, representando los resultados en gráficos bidimensionales no regidos por el sistema de
coordenadas y realizando cálculos de valores porcentuales, utilizando el software de hojas de
cálculo de Excel de Microsoft Office 2010.
37
CAPÍTULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Prevalencia de mastitis en el Centro Experimental Uyumbicho.
En la Tabla N° 16 se muestran los resultados de la prevalencia de mastitis mediante la prueba de
California Mastitis Test realizada del hato lechero del Programa Bovino del Centro
Experimental Uyumbicho. Se observa que de los 52 animales en producción (cuenta rejo), se
muestrearon 208 pezones, de los cuales el 79.32% fueron Negativos y el 20.68% fueron
positivos; de éstos el 18.76% correspondió a mastitis subclínica y el 1.92% a mastitis clínica.
Esto se describe en el Anexo G.
Tabla N° 16. Prevalencia de mastitis en vacas lecheras del Centro Experimental Uyumbicho.
CMT Grado N° pezones % Total %
Negativos - 165 79.32 79.32
Positivo
+ 27 12.98
18.76 ++ 4 1.92
+++ 8 3.85
Clínica 4 1.92 1.92
Total N° vacas: 52 208 100% 100
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
Grado de mastitis de los animales en estudio mediante la prueba de CMT, pre y
post-tratamiento.
En la Tabla N° 17 se muestran los resultados de los pezones en estudio, tomando en cuenta
aquellos que presentaron una mastitis subclínica grado +++ y clínica (cuatro pezones por
tratamiento), antes del tratamiento y posterior a la aplicación de los productos, para determinar
su efectividad a los 3 y 7 días mediante la prueba California Mastitis Test. Se analizaron 12
pezones previo al tratamiento los que están distribuidos en tres tratamientos.
38
Tabla N° 17. Número y porcentaje de pezones según el grado de mastitis mediante la prueba de
CMT, pre y post-tratamiento.
Tratamiento
Resultados
CMT
Grado
Pre-tratamiento Post-tratamiento
Día 0 Día 3 Día 7
N° % N° % N° %
T1
Negativo - 0 0 0 0 0 0
Positivo
+ 0 0 1 25 3 75
++ 0 0 3 75 1 25
+++ 3 75 0 0 0 0
Cl 1 25 0 0 0 0
Total 4 100 4 100 4 100
T2
Negativo - 0 0 0 0 0 0
Positivo
+ 0 0 1 25 2 50
++ 0 0 3 75 2 50
+++ 3 75 0 0 0 0
Cl 1 25 0 0 0 0
Total 4 100 4 100 4 100
Tc
Negativo - 0 0 0 0 3 75
Positivo
+ 0 0 2 50 1 25
++ 0 0 2 50 0 0
+++ 2 50 0 0 0 0
Cl 2 50 0 0 0 0
Total 4 100 4 100 4 100
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
En el tratamiento 1 (50µg/ml O3) de los pezones analizados (4), previo al tratamiento, el 75%
presentó mastitis subclínica grado +++ y el 25% restante presentó mastitis clínica. Al tercer día
de evaluación, el 25% presentó mastitis subclínica grado + y el 75% restante correspondió a
mastitis subclínica grado ++. Al séptimo día de evaluación, el 75% presentó mastitis subclínica
grado + y el 25% restante correspondió a mastitis subclínica grado++. Por lo que podemos
anotar que el tratamiento con 50µg/ml de ozono médico disminuye el grado de mastitis, tanto
subclínica como clínica.
39
En el tratamiento 2 (100µg/ml O3) de los pezones analizados (4), previo al tratamiento, el 75%
presentó mastitis subclínica grado +++ y el 25% restante presentó mastitis clínica. Al tercer día
de evaluación, el 25% presentó mastitis subclínica grado + y el 75% restante correspondió a
mastitis subclínica grado ++. Al séptimo día de evaluación, el 50% presentó mastitis subclínica
grado + y el 50% restante presentó mastitis subclínica grado++. Por lo que podemos anotar que
el tratamiento con 100µg/ml de ozono médico disminuye el grado de mastitis, tanto subclínica
como clínica.
En el tratamiento convencional (Cefalexina – 200mg) de los pezones analizados (4), previo al
tratamiento el 50% presentó mastitis subclínica grado +++ y el 50% restante presentó mastitis
clínica. Al tercer día de evaluación el 50% presentó mastitis subclínica grado + y el 50%
restante correspondió a mastitis subclínica grado ++. Al séptimo día de evaluación el 75% de
los pezones analizados fueron negativos y el 25% restante presentó mastitis subclínica grado +.
Por lo que podemos anotar que el tratamiento con Cefalexina 200mg disminuye el grado de
mastitis, tanto subclínica como clínica.
Identificación de los agentes causales de mastitis aislados en el Centro
Experimental Uyumbicho.
Al realizar la identificación de los agentes causales de mastitis presentes, previo a la aplicación
de los productos, se aisló en el 100% de las muestras bacterias del género Staphylococcus
aureus.
En la Tabla N° 18, se puede evidenciar que al realizar el análisis bacteriológico previo a la
aplicación de los tratamientos de todas las muestras de leche analizadas se aisló Staphylococcus
aureus, durante el periodo de evaluación el único tratamiento que eliminó dicha bacteria
presente en la leche con mastitis fue el tratamiento convencional. Se evidencio la presencia de
Staphylococcus aureus al tercer y séptimo día al aplicar los tratamientos T1 y T2.
40
Tabla N° 18. Identificación de agentes causales de mastitis aislados en el Centro Experimental
Uyumbicho, durante el periodo de evaluación.
Tratamiento Pre-tratamiento Post-tratamiento
Día 0 Día 3 Día 7
T1 Staphylococcus
aureus.
Staphylococcus
aureus.
Staphylococcus
aureus.
T2 Staphylococcus
aureus.
Staphylococcus
aureus.
Staphylococcus
aureus.
Tc Staphylococcus
aureus.
No existió
crecimiento
No existió
crecimiento
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
El aislamiento de Staphylococcus aureus se realizó en el medio Manitol salado y se confirmó a
través de las pruebas: Catalasa, Coagulasa y Rojo de Fenol (Anexo F). En el gráfico N° 2, se
puede evidenciar el crecimiento de Staphylococus aureus, con colonias amarillas y
fermentación del manitol (cambio de color del medio de rojo a amarillo). Tinción Gram, en la
que se observa Cocos Gram positivos, que caracteriza a esta bacteria.
Manitol salado Tinción Gram
Gráfico N° 2. Staphylococus aureus, sembrado en Agar Manitol Salado y tinción Gram, en la
que se observa cocos gram positivos.
Fuente: La autora.
41
En el gráfico N° 3, se puede evidenciar la prueba Coagulasa postivo y Rojo de Fenol positivo.
Prueba Coagulasa positivo Prueba Rojo de Fenol positivo
Gráfico N° 3. Pruebas confirmatorias de Staphylococus aureus. Coagulasa positivo y Rojo de
Fenol positivo.
Fuente: La autora.
Según Espinoza y Mier (2013), en su investigación “Determinación de la prevalencia de
mastitis mediante la prueba California Mastitis Test e identificación y antibiograma del agente
causal en ganaderías lecheras del cantón el Chaco, provincia del Napo” dieron a conocer que el
47,64% de los agentes causales de mastitis, fue Staphylococcus aureus, siendo el de mayor
prevalencia, coincidiendo con los resultados obtenidos en este trabajo.
En Pichincha, Acuña y Rivadeneira en el 2008, en su investigación, dieron a conocer los
siguientes agentes causales de mastitis con su respectivo porcentaje de aislamiento: 34,64%
Staphylococcus aureus, 20,92%, Corynebacterium, 16,34% Streptococccus spp., 2,13%
Pseudomonas spp., 1,42% Enterobacter y Escherichia coli.
En el año 2008, en Argentina, Chávez realiza un estudio donde los patógenos de mastitis más
frecuentes fueron: 21,91% Staphylococcus aureus, 5.85% Streptococcus agalactiae, 13,60%
Staphylococcus spp., 14,33% Corynebacterium spp., 4.34% Streptococcus spp.,
2,03%Coliformes y cultivos sin crecimiento 37,94%.
42
Recuento de UFC/ml previo al tratamiento, al tercer y séptimo día post-
tratamiento
En la tabla N° 19. Se muestra los resultados obtenidos de la cuantificación de UFC/ml de leche
antes del tratamiento, presentando una carga bacteriana variable previo a la aplicación de los
productos, así como a los 3 y 7 días post-tratamiento. Se obtuvo un recuento promedio de los
tres tratamientos de 89.167 ± 2.188 unidades formadoras de colonia por mililitro (UFC/ml) al
día cero, mientras que al tercer día se obtuvo 7.767 ± 2.122 unidades formadoras de colonia por
mililitro (UFC/ml) y al séptimo día 5.614 ± 2.858 unidades formadoras de colonia por mililitro
(UFC/ml).
Tabla N° 19. Recuento de UFC/ml en número y porcentaje previo al tratamiento, y el número y
porcentaje de disminución de colonias al tercer y séptimo días post-tratamiento.
Tratamiento Pezón/Vaca 0 día 3 día 7 día
T1
UFC/ml % UFC/ml % UFC/ml %
1 108000 100 5863 90,25 1909 92,27
2 89000 100 3906 90,38 1636 92,53
3 87000 100 5500 87,78 3455 92,54
4 83000 100 4681 89,71 1909 92,16
Σ 367000 19950 8909
Promedio 91750 100 4987,5 89,53 2227,25 92,38
Desviación estándar ±11116,80 ±874,21 ±828,56
Coeficiente de variación 12,12 17,53 37,2
T2
1 90000 100 8772 90,54 6954 91,38
2 92500 100 8902 89,43 6909 91,11
3 72500 100 8863 89,11 5409 90,63
4 94500 100 9727 88,98 7409 90,86
Σ 349500 36264 26681
Promedio 87375 100 9066 89,52 6670,25 91,00
Desviación estándar ±10086,09 ±444,02 ±870,64
Coeficiente de variación 11,54 4,9 13,05
T3
1 97000 100 9181 94,57 8363 98,23
2 92000 100 9727 95,61 8181 98,16
3 81000 100 8818 93,68 7590 96,03
4 83500 100 9200 94,36 7636 97,70
Σ 353500 36926 31770
43
Promedio 88375 100 9231,5 94,56 7942,5 97,53
Desviación estándar ±7431,63 ±374,19 ±378,30
Coeficiente de variación 8,41 4,05 4,76
PROMEDIO TRATAMIENTOS
89167 7762 5614
±21878 ±2122 ±2858
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
El promedio obtenido en los tres tratamientos oscila entre 87.375 y 91.750 UFC/ml de leche
previo a la aplicación de los tratamientos, lo que se encuentra dentro de los parámetros de
recuentos obtenidos por Vásquez, et al. (2011), quienes en su investigación “Calidad higiénica y
sanitaria de leche cruda acopiada en diferentes regiones colombianas” mencionan que el
promedio de UFC/ml de leche oscilaron entre 70.000 y 93.000 UFC/ml.
Para el T1 previo al tratamiento se obtuvo un promedio de 91.750 ±1.1116,80 UFC/ml que
representan el 100%. Al día tres post-tratamiento las UFC/ml descienden a 9.066 ±444,02
representando el 89,52%. Al séptimo día post-tratamiento el número de UFC/ml descendió a
6.670,25 ±870,64 que representa un 91%.
Para el T2 previo al tratamiento se obtuvo un promedio de 87.375 ±10.086,09UFC/ml que
representan el 100%. Al día tres post-tratamiento las UFC/ml descienden a 9.066 ±874,21
representando el 89,53%. Al séptimo día post-tratamiento el número de UFC/ml descendió a
2227,25 ±828,56 que representa un 92,38%.
Para el T3 previo al tratamiento se obtuvo un promedio de 8.8375 ±7.431,63UFC/ml que
representan el 100%. Al día tres post-tratamiento las UFC/ml descienden a 9.231,5 ±374,19
representando el 94,56%. Al séptimo día post-tratamiento el número de UFC/ml descendió a
7.942,5 ±378,30 que representa un 97,53%.
Cuando la leche tiene un rango menor de 25.000 UFC/ml, se clasifica como leche cruda de muy
alta calidad higiénica (Vásquez, et al., 2011).
En la investigación realizada por Dután (2014) en Cuenca, Ecuador cuyo título es:
“Determinación de la eficacia de ozonoterapia en el tratamiento de mastitis clínica en vacas”
con tres concentraciones y dos aplicaciones de ozono, encontró los siguientes resultados:
44
Tabla N° 20. Resultados obtenidos en el trabajo “Determinación de la eficacia de ozonoterapia
en el tratamiento de mastitis clínica en vacas”
Tratamiento
Periodo de evaluación
Pre-tratamiento 1era aplicación 2da aplicación
UFC/ml % UFC/ml % UFC/ml %
40µg/ml
Solución salina
ozonificada
270.000 100 144.000 46,66 40.000 85,18
50µg/ml
Solución salina
ozonificada
614.000 100 84.000 86.32 50.000 91.86
60µg/ml
Solución salina
ozonificada
202.000 100 110.000 45.54 190.000 5,94
Fuente: Dután, 2014.
Elaboración: La autora.
En la Tabla N° 20. Se muestra que existió un notable descenso de UFC/ml para la dosis de
50µg/ml, paulatino para la dosis de 40µg/ml y desemejante para la dosis de 60µg/ml de solución
salina ozonizada (Dután, 2014).
El mismo autor menciona que al aplicar la dosis de 40µg/ml inició con 270.000 UFC/ml; luego
de la primera aplicación, la carga bacteriana desciende a 144.000 UFC/ml, que corresponde a
46,66% y después de la segunda aplicación llegó a 40.000 UFC/ml que corresponde a 85,18%.
Con la dosis de 50µg/ml, el autor mencionado, empezó con 614.000 UFC/ml; con la primera
aplicación descendió a 84.000 UFC/ml que corresponde a 86,32% y después de la segunda
aplicación tuvo un descenso de 50.000 UFC/ml que corresponde a 91,86%, lo que concuerda
con lo encontrado en el presente estudio.
Y con la dosis de 60µg/ml, inició con 202.000 UFC/ml; con la primera aplicación desciende a
11.000 UFC/ml, pero con la segunda aplicación existió un ascenso a 190.00 UFC/ml.
45
ADEVA para la variable recuento de UFC/ml previo al tratamiento, entre las
medias de los grupos experimentales.
Tabla Nº 21. ADEVA para la variable recuento de UFC/ml previo al tratamiento, entre
las medias de los grupos experimentales.
F.V. SC Gl CM F Valor p
Total 883666666,67 11
Tratamiento 42041666,67 2 21020833,33 0,39 0,6909
Repetición 521166666,67 3 173722222,22 3,25 0,1019 NS
Error 320458333,33 6 53409722,22
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: El autor.
Como puede verse en la tabla Nº 21, no existe diferencia significativa entre los
promedios de UFC/ml previo al tratamiento, lo que significa que los datos son similares
para las vacas de los tres grupos experimentales.
Significancia de la efectividad de la carga de UFC/ml de leche, durante el periodo
de evaluación (3 y 7 días post-tratamiento).
En la Tabla Nº 22 se muestra que el análisis de varianza para la variable determinación de la
efectividad del ozono durante el periodo de evaluación, a los 3 días post-tratamiento presenta
una diferencia altamente significativa entre tratamientos y no presenta diferencia significativa
entre repeticiones. El coeficiente de variación fue de 0.70% y el promedio de 91.20%.
A los 7 días post-tratamiento, el análisis de varianza también presenta una diferencia altamente
significativa entre tratamientos y no presenta diferencia significativa entre repeticiones. El
coeficiente de variación fue de 0.62% y el promedio de 93.63%.
46
Tabla Nº 22. ADEVA para la variable determinación de la efectividad de los productos sobre la
carga de UFC/ml de leche, durante el periodo de evaluación.
F.V. GL Periodo de evaluación
3er día 7mo día
CM Valor p CM Valor p
Total 11
Tratamiento 2 33,77 0.0001 ** 47.46 0.0001**
Repetición 3 1.77 0.0610 NS 0.52 0.2967 NS
Error 6 0,41 0.34
Promedio (%) 91.20 93.63
CV (%) 0.70 0.62
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: El autor.
Al realizar la prueba de Duncan DMS al 5% (Tabla Nº22) para la variable determinación de la
efectividad de los productos sobre la cantidad de UFC/ml de leche durante el periodo de
evaluación, se determina que a los 3 días pos-tratamiento se observan 2 rangos. El T3 (Testigo
convencional) presentó el mayor porcentaje de reducción con el 94.56%, difiriendo
estadísticamente (p≤0.05) con el T1 (50 µg O3 + 3 aplicaciones) y con el T2 (100 µg O3 + 3
aplicaciones), los que presentaron una efectividad del 89.53% y del 89.52%, respectivamente.
A los 7 días pos-tratamiento se observan 3 rangos. El T3 (Testigo convencional) presentó el
mayor porcentaje de efectividad con el 97.53%, difiriendo estadísticamente (p≤0.05) con el T1
(50 µg O3 + 3 aplicaciones), el que presentó una reducción del 92.38%, y éstos, a su vez,
difiriendo estadísticamente (p≤0.05) del T2 (100 µg O3 + 3 aplicaciones) el que presentó una
reducción de 91.00%, datos que se presentan en el grafico 4.
Tabla Nº 23. Análisis de Duncan DMS al 5% para la variable determinación de la efectividad de
los productos durante el periodo de evaluación.
Tratamiento
Medias del Porcentaje de Reducción de UFC/ml durante el
periodo de evaluación
3 días 7 días
T1 89.53 a 92.38 b
T2 89.52 a 91.00 a
T3 94.56 b 97.53 c
Medias con una letra común en sentido vertical no son significativamente diferentes (p≥0,05)
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
47
Graficando el porcentaje de UFC/ml residuales por tratamiento, tenemos el siguiente gráfico:
Gráfico Nº4. Porcentaje inicial (antes del tratamiento) y porcentaje residual de UFC/ml de leche
al tercero y séptimo día post-tratamiento.
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
Los resultados de efectividad obtenidos de los productos aplicados sobre la cantidad de
unidades formadoras de colonias, muestran que el T3 (Testigo convencional – Cefalexina 200
mg) fue el más efectivo hasta los siete días de evaluación en un 97,53%.
Arichábala y Argudo (2012) en su investigación “El empleo de la ozonoterapia en ganadería de
leche como alternativa de tratamiento para la mastitis bovina” mencionan que los tratamientos
de gas ozono y el tratamiento testigo (Ceftiofur) tienen una diferencia mínima de efectividad,
por lo que es sensato pensar en la innovación de ozonoterapia en medicina veterinaria.
Determinación del Índice de Coliformes Totales y Fecales
Al realizar el análisis bacteriológico para la determinación del índice de coliformes totales y
fecales, utilizando el método del NMP (número más probable), se encontró que el total de tubos
son negativos; por lo tanto, se reportó ausencia de coliformes totales y fecales pre y post-
tratamiento en el 100% de las muestras de leche analizadas.
100 100 100
10,47 10,49 5,44 7,62 9,01
2,47
0
20
40
60
80
100
120
t1 t2 t3
% d
e U
FC/m
l
Tratamientos
0 día
3 día
7 día
48
Gráfico N° 5. Tubos con Caldo Bilis Verde Brillante con campana de Druham.
Fuente: La autora.
Análisis económico por costos parciales de los productos utilizados.
Tabla Nº 24. Análisis económico por costos parciales de la obtención de los productos
utilizados.
Concepto Valor/dosis
(dólares)
T1 (50µg/ml)
(dólares)
T2 (100µg/ml)
(dólares)
T3 (Cefalexina)
(dólares)
Oxígeno médico 0,32 0,96 1,82 ---
Jeringuilla 60ml 0,75 2,25 2,25 ---
Puntas 0,01 0,03 0,03 ---
Ozonizador
médico 0,41 1,23 1,23 ---
Antibiótico 3,6 --- --- 10,8
SUBTOTAL 4,47 5,33 10,8
Leche
descartada (l) 0,50 0 0 12,25
TOTAL (dólares) 4,47 5,33 23,05
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
De acuerdo al análisis económico por costos parciales, que se reportan en la Tabla Nº24, donde
se desglosan los costos de producción por cada dosis de ozono obtenida, se establece que los
49
menores costos se obtiene al utilizar los tratamientos T1 (Gas ozono 50 µg/ml) y T2 (Gas ozono
100 µg/ml), siendo de 4,47 dólares y 5,33 dólares respectivamente.
Mientras que al emplearse el antibiótico (Cefalexina – 200 mg), el valor del producto fue de
10,8 dólares, el mismo que sumado a la pérdida por leche descartada 12,25 dólares, nos da un
valor de 23,05 dólares.
Los costos obtenidos al utilizar el gas ozono fueron mayores a los descritos por Arichábala y
Argudo (2010) en su estudio “El empleo de la ozonoterapia en ganadería de leche como
alternativa de tratamiento para la mastitis clínica”, quienes mencionan que el costo por animal
fue de 2,55 dólares, mientras que con suero ozonificado fue de 2,85 dólares y el tratamiento con
antibiótico (Ceftiofur) fue de 11,24 dólares en total por animal.
50
CAPÍTULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
CONCLUSIONES
- El tratamiento con gas ozono con 50 µg/ml y con 100 µg/ml disminuye el grado de mastitis, en
forma similar al antibiótico, medido a través de la prueba de CMT.
- Las bacterias del género Staphylococcus aureus fueron las únicas que se encontraron en un
porcentaje del 100%.
- En el recuento de UFC/ml, previo la administración de los productos, se obtuvo en el T1:
91.750 ±1.1116,80 UFC/ml, en el T2: 87.375 ±10086,09 UFC/ml y en el T3: 88.375
±7431,63UFC/ml.
- El índice de coliformes fue negativo en el 100% de muestras analizadas.
- El único tratamiento que eliminó el agente causal fue el T3, debido a que el Staphylococcus
aureus es sensible a la Cefalexina.
- El tratamiento más efectivo para el control de la mastitis fue el T3 (convencional) con un
porcentaje de reducción de 94,56% al día 3 y 97,53% al día 7 de la evaluación, según el
recuento de UFC/ml.
- Los tratamientos a base de Ozono médico fueron efectivos para el control de mastitis: el T1
presentó un porcentaje de reducción del 89.53% al tercer día y 92.38% al séptimo día, mientras
que el T2 presentó un porcentaje de reducción de 89.52% al tercer día y un 91.00% al séptimo
día, según el recuento de UFC/ml, presentando similares resultados.
- La dosis de ozono no influyó significativamente sobre la reducción de UFC/ml.
- Las mayores pérdidas parciales por litro de leche descartada, se obtienen aplicando el T3 con
12.25 dólares, mientras que aplicando el T1 y T2 no existe tiempo de retiro de leche.
51
- Los menores costos parciales por tratamiento utilizado se obtienen con la aplicación de Ozono
médico (T1: 4,47 dólares y T2: 5,33 dólares); costos que son más bajos respecto a la aplicación
del antibiótico (23,05 dólares).
RECOMENDACIONES
En base a los resultados obtenidos en la presente investigación, se pueden realizar las siguientes
recomendaciones:
- Emplear el ozono médico, ya sea en dosis de 50 o 100 µg para reducir el recuento de UFC/ml
con tres aplicaciones, por ser eficientes y de menos costo.
- Las dosis de ozono médico utilizadas se pueden emplear en forma libre, debido a que no se
identificaron efectos clínicos secundarios luego de su aplicación.
- Experimentar un mayor número de aplicaciones de ozono médico para el tratamiento de
mastitis, ya que con la frecuencia de administración en estudio únicamente se redujo la carga
bacteriana sin eliminar totalmente el agente causal.
- Realizar futuras investigaciones usando mayor cantidad de mezcla oxígeno - ozono, ya que se
sabe que a mayor cantidad mejor distribución.
52
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Pecuarias, Escuela Superior Politécnica de Chimborazo.
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ABREVIATURAS
CCS: Conteo de células somáticas
CEU: Centro Experimental Uyumbicho
CMT: California Mastitis Test
d: Dosis
E: Experimental
f: Frecuencia
FDA: Food and Drug Aministration
GSH/GSSG: Glutatión/Disulfuro de glutatión
mg: Miligramo
NADH/NAD: Nicotinamida adenina dinucleótido reducido
NCCLS: National Committee for clinical laboratory
NMC: National Mastitis Council
NMP: Número más probable
O2: Oxígeno
O3: Ozono
p: Producto
Redox: Reacción Oxido – Reducción
T: Tratamiento
UFC/ml: Unidades formadoras de colonias por mililitro
µg: Microgramos
2.3 DPG: 2, 3 difosfoglicérido
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ANEXOS
Anexo A. Protocolo para la recolección de muestras de leche para cultivo (National
Mastitis Council)
Lavarse muy bien las manos con agua y jabón, y utilizar guantes de látex descartables.
Limpiar cuidadosamente con agua clorada el pezón a muestrear, secarlo.
Con el objeto de disminuir los riesgos de contaminación en la recogida de las muestras, los
pezones de la ubre se limpiarán comenzando desde los más alejados hasta los más cercanos al
operario: posterior izquierdo, anterior izquierdo, posterior derecho y anterior derecho (Nieves,
2011).
Limpiar con una torunda de algodón empapada en alcohol de 70°, limpiar y frotar bien la punta
del pezón, dejar secar por dos minutos.
Eliminar los dos primeros chorros y después ordeñar dentro del tubo estéril sin topar sus bordes
(Evitar usar frascos de boca ancha, porque aumenta las posibilidades de contaminar la muestra).
Tapar el tubo.
Identificar el tubo: número de la vaca y cuarto muestreado.
Colocar la gradilla con los tubos en la caja térmica con abundantes refrigerantes y transportar al
laboratorio dentro de las próximas 24 horas.
Repetir el procedimiento al tercer y séptimo día de evaluación.
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Anexo B. Técnica de procesamiento de muestras.
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Anexo C. Determinación de Coliformes Totales y Fecales por el método del
número más probable. (Camacho, et al., 2009)
- Agitar vigorosamente la muestra, al menos 20 veces para lograr una distribución uniforme de
los microorganismos.
- Preparar las diluciones, con una pipeta estéril tomar 1ml de la muestra original y llevarlo a uno
de los tubos conteniendo 9ml de agua destilada estéril, obteniendo la dilución .
- Agitar el tubo de la dilución y con otra pipeta estéril tomar 1ml y llevarlo a otro tubo con
9ml de agua de dilución estéril para obtener una dilución
- Repetir el proceso para obtener la dilución a la
- Inocular asépticamente con 1ml de muestra por triplicado en los tubos que contienen el Caldo
Bilis Verde Brillante, de cada una de las diluciones, conservar las diluciones en refrigeración.
- Incubar los tubos a 35°C por 24 horas.
- Efectuar la primera lectura para observar si hay tubos positivos, es decir turbidez del medio, y
producción de gas en el interior de la campana de Durham.
- De los tubos que den positivo a la primera lectura, se puede realizar la prueba confirmatoria
para coliformes totales y fecales.
- Si no se evidencia crecimiento en los tubos, continuarán en incubación 24 horas más.
- Después de las 48 ± 2 horas a partir de la inoculación, se realiza la lectura final, si luego de las
48 horas no se aprecia crecimiento ni producción de gas, los tubos se toman como negativos.
- Interpretar: Si todos los tubos son NEGATIVOS el examen se da por terminado, reportando
Ausencia de Coliformes Totales y Fecales en la muestra analizada. Y a los que den POSITIVO
a la prueba presuntiva, se realizará la prueba confirmatoria para Coliformes Totales y Fecales.
- Prueba confirmativa de microorganismos coliformes totales
Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva, a otro
tubo que contiene caldo de bilis verde brillante, con campana de Durham.
- Agitar los tubos para su homogeneización.
- Incubar a 35 ± 2°C durante 24 a 48 h.
- Registrar como positivos aquellos tubos en donde se observe turbidez (crecimiento) y
producción de gas después de un período de incubación de 24 a 48 h.
- Consultar la tabla de NMP para conocer el número más probable de organismos coliformes
totales/100 ml. Dicha tabla esta descrita en el Anexo D.
62
Elaboración: La autora.
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Anexo D. Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm3
en cada uno, 5 con porciones de 1 cm3 y 5 con porciones de 0.1 cm3.
Fuente: Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. UNAM.
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Anexo E. Recuento de Unidades Formadoras de Colonias (UFC/ml). Técnica de
vertido en placa. (López y Torres, 2006)
- Homogenizar la muestra, invirtiéndola 20 veces en forma rápida de manera que los
microorganismos estén uniformemente distribuidos.
- Tomar 1ml de muestra y agregarlo a 9ml de agua destilada estéril.
- Agitar la primera dilución (1/10).
- Transferir con una pipeta 1ml de la primera dilución a otro tubo con 9ml de diluyente,
obteniendo 1/100.
- Repetir las operaciones usando la dilución 1/100 para obtener 1/1000.
- Pipetear por duplicado a cajas de Petri estériles, 100 µl de cada dilución.
- Colocar el medio de cultivo diluido, sobre el inóculo (técnica de vertido en placa).
- Mantener las placas sobre una superficie horizontal hasta que se solidifique el medio.
- Incubar por 48 ±3 horas, a 37 ±1°C.
- Realizar la cuantificación (FDA, 2001).
Cuando las placas contienen entre 25 -250 UFC, se aplica la siguiente fórmula:
Dónde;
N= Número de colonias por mililitro o gramo de leche.
∑C= Sumatoria de todas las colonias de todas las placas contadas.
n1= Número de placas en la primera dilución contada.
n2= Número de placas en la segunda dilución contada.
d= Dilución de la que se obtuvo el primer recuento.
Cuando las placas contienen menos de 25 UFC, en ambas diluciones cada una, se aplica la
siguiente fórmula:
25 x 1/d
Dónde;
d= Factor de dilución para la dilución de la que se obtuvieron los primeros recuentos.
Cuando las placas contienen más de 250 UFC en ambas diluciones, en cada una. Se multiplica
por la dilución.
- Reportar como UFC/ml o g.
65
Elaboración: La autora.
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Anexo F. Aislamiento de agentes causales
- Homogenizar la muestra.
- Sembrar en Agar Sangre para evidenciar el crecimiento de cocos Gram + (Streptococcus
agalactie); incubar a 37°C por 24 horas, determinar la morfología de las colonias. Realizar
coloración Gram de las colonias, realizar prueba de catalasa, Realizar la prueba de CAMP en
Agar Sangre.
- Sembrar en Agar Manitol Salado para evidenciar el crecimiento de Staphylococcus aureus.
Incubar a 37° C por 48 horas, y realizar las pruebas confirmatorias coagulasa y fermentación de
carbohidratos (rojo de fenol).
- Sembrar en Agar Chromocult, incubar a 37°C por 24 horas y determinar la coloración de las
colonias, si son violetas evidencia Escherichia coli y si son rojas evidencia otras Coliformes.
Respaldo de cepas
- Identificar los tubos Eppendorf, con el número de muestra y el agente aislado.
- Sembrar tres colonias en 300 µl de caldo TSB.
- Incubar a 37°C por 24 horas.
- Colocar 600 µl de glicerol.
- Almacenar a -80°C.
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Anexo G. Prevalencia de mastitis en vacas lactantes en el Centro Experimental
Uyumbicho.
*Las macas de color amarillo corresponden a las vacas del estudio.
# vaca Arete Cuarto Mamario
AI AD PI PD
1 06-2 Negativo + Negativo Negativo
2 11-2 Negativo Negativo Negativo Negativo
3 10-1 + Negativo Negativo Negativo
4 10-4 Negativo Negativo Negativo Negativo
5* 1 + Clínica Negativo +
6* 11-10 +++ Negativo Negativo Negativo
7 06-4 Negativo Negativo Negativo Negativo
8 07-11 Negativo Negativo Negativo Negativo
9* 06-13 Negativo + Negativo +++
10 09-13 Negativo Negativo Negativo Negativo
11 05-3 Negativo Negativo Negativo Negativo
12 08-10 Negativo + Negativo Negativo
13 09-10 Negativo Negativo Negativo +
14* 05-6 Negativo +++ ++ Negativo
15 63 Negativo Negativo Negativo Negativo
16* 07-14 + +++ Negativo +
17 49 Negativo Negativo Negativo Negativo
18 2 Negativo Negativo Negativo Negativo
19* 38 Clínica Negativo ++ Negativo
20 08-12 Negativo Negativo Negativo +
21 11-3 Negativo Negativo Negativo Negativo
22 11-4 Negativo Negativo Negativo Negativo
23 12-4 Negativo Negativo Negativo Negativo
24 44 + Negativo Negativo Negativo
25 30 Negativo Negativo Negativo Negativo
26 60 Negativo Negativo Negativo Negativo
27 07-3 + Negativo + Negativo
28 58 Negativo Negativo Negativo Negativo
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29* 09-5 ++ +++ ++ Negativo
30 41 Negativo Negativo Negativo Negativo
31* 07-10 Negativo +++ Negativo Negativo
32 47 Negativo Negativo Negativo Negativo
33 55 Negativo Negativo Negativo Negativo
34 18 Negativo Negativo Negativo Negativo
35 12-9 Negativo Negativo Negativo Negativo
36* 07-12 Clínica Negativo Negativo Negativo
37 10-12 Negativo Negativo Negativo Negativo
38 59 Negativo Negativo Negativo Negativo
39 43 Negativo Negativo Negativo Negativo
40 11-12 Negativo Negativo Negativo Negativo
41 07-9 Negativo Negativo + Negativo
42 11-7 Negativo + Negativo Negativo
43 10-15 Negativo Negativo Negativo +
44 11-6 Negativo Negativo Negativo Negativo
45* 52 Negativo Negativo Clínica Negativo
46* 16 Negativo Negativo Negativo +++
47 5 + + + +
48 11-13 + + + Negativo
49 12-5 Negativo Negativo + Negativo
50* 09-8 Negativo +++ Negativo Negativo
51 09-2 + Negativo + +
52 10-1 Negativo Negativo Negativo Negativo
Fuente: Investigación directa.
Elaboración: La autora.
Anexo H. Distribución de los animales por tratamiento.
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Tratamiento Arete Grado de mastitis
T1
1 Clínica
05-6 +++
09-8 +++
07-10 +++
T2
16 +++
07-14 +++
52 Clínica
09-5 +++
T3
06-13 +++
38 Clínica
11-10 +++
07-12 Clínica
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Anexo I. Aplicación de los productos.
Tratamiento Arete Producto, dosis y frecuencia
T1
1
Ozono médico
50µg/ml O3
Tres aplicaciones
05-6
09-8
07-10
T2
16
Ozono médico
100µg/ml O3
Tres aplicaciones
07-14
52
09-5
T3
06-13
Testigo convencional
Cefalexina 200mg
Tres aplicaciones
38
11-10
07-12