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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANAUNIDAD IZTAPALAPA
CBS
“EFECTO DE LA SEMILLA MADURA DE Carica papaya SOBRE LAMOVILIDAD Y VIABILIDAD ESPERMÁTICA”.
PDI que presenta:
ANDREA RAMÍREZ HERNÁNDEZ
PARA OBTENER EL GRADO DE LICENCIATURA
Asesores:
DRA. REYNA FIERRO PASTRANA
DR. FRANCISCO ALARCÓN AGUILAR
Lugar de realización:
LABORATORIO DE FARCOLOGÍA Y LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR DELDEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD, UAM-I.
JULIO-2004
INTRODUCCIÓN
Las altas tasas de crecimiento en la población mundial representan un grave
obstáculo para el bienestar de la humanidad, la cual primordialmente depende de los
recursos económicos y naturales disponibles en el mundo. En los últimos años la
población mundial sobrepasó los seis mil millones de habitantes, actualmente sólo se
necesitan 50 años para que la población se duplique; En el caso de México en 1950
tenía 28 millones de habitantes y en 1994 su población llegó a 92 millones de
habitantes, triplicándose en 44 años; en la actualidad se necesitan 38 años para que la
población se duplique. Debido a esto, existe una gran preocupación por controlar el
incremento de la población, particularmente en los países del tercer mundo (Silva et al,
2003).
Desde la antigüedad, el hombre ha tenido la necesidad de buscar diferentes
formas para inhibir la fertilidad. La prescripción médica más antigua de un
anticonceptivo data del año de 1850 A.C. y se encuentra en el papiro egipcio Petri. Se
aconsejaba a las mujeres que emplearan un supositorio vaginal confeccionado con
excremento de cocodrilo y miel; esta mezcla pastosa, al parecer impedía la penetración
de esperma al cérvix. Otros intentos por impedir la concepción los llevó a usar
sustancias tales como el excremento de ratón, amuletos y la inducción del estornudo
durante el coito (Méndez, 1989).
Durante el inicio del siglo XX se han llevado a cabo varios intentos por controlar
el crecimiento de la población, y no fue sino hasta 1950 que se hicieron grandes
progresos en el desarrollo de anticonceptivos eficaces para controlar la natalidad. En
1960 se pusieron en el mercado los primeros anticonceptivos orales y se propusieron
algunos anticonceptivos espermicidas (Silva et al, 2003).
En la actualidad, la mayoría de los métodos anticonceptivos están enfocados a
mujeres, siendo métodos basados en la administración de hormonas esteroides
(píldoras orales, preparaciones inyectables e implantables), aparatos intrauterinos
internos o con medicamentos (DIUs), método de barrera (condones femeninos),
métodos químicos (jabones y geles espermicidas), método quirúrgico (salpingotomia),
así como algunas vacunas y combinaciones entre estos métodos (Griffin, 2001).
Algunos de estos métodos han encontrado gran aceptación en mujeres de
diferentes partes del mundo y han tenido un gran impacto en la planeación familiar, sin
embargo, las medidas disponibles para la regulación de la natalidad no son totalmente
seguras, el rango de opciones es limitado, no siempre son aceptadas por la población y
presentan algunas inconveniencias para su uso, como lo es su inseguridad después de
un uso prolongado, efectos colaterales, permanencia del efecto, etc (Griffin, 2001).
Los métodos anticonceptivos disponibles para el hombre son una minoría con
respecto a la amplia gama de anticonceptivos femeninos, siendo éstos solamente el
método de barrera (condón) y método quirúrgico (vasectomía). El condón, además de
ser una barrera que impide el contacto de los gametos para que no se lleve a cabo la
fecundación, contiene Nonoxinol-9 el cual actúa como espermicida. El uso de éste no
produce efectos secundarios, sin embargo no es un método totalmente seguro. Por su
parte, la vasectomía es un método drástico y puede ser definitivo.
Por lo anterior es necesario hacer una serie de investigaciones para encontrar el
anticonceptivo ideal, tanto masculino como femenino, con las siguientes características:
a) seguridad y efectividad; b) protección a largo plazo (no permanente); c) actividad
farmacológica selectiva, sin los disturbios metabólicos y endócrinos que muchas veces
acompañan a los métodos existentes; d) que no requieran la introducción de un objeto o
un implante; e) libre de efectos secundarios; f) que preferentemente pueda aplicarse
antes de tener contacto sexual y g) ser económicamente accesible a todas las clases
sociales (Silva et al, 2003). Actualmente no existe un anticonceptivo con estas
características en el mercado. Para poder buscar un anticonceptivo que tenga la mayor
parte de las características mencionadas, es importante conocer el proceso de la
fertilización.
La fertilización es un proceso que involucra el reconocimiento y fusión de
gametos (espermatozoide y un óvulo). El espermatozoide es una célula especializada,
cuyo propósito fundamental es conducir la información genética masculina hacia el
gameto femenino para unirse y formar un nuevo organismo. En los mamíferos, los
espermatozoides se producen dentro de los túbulos seminíferos por medio del proceso
llamado espermatogénesis, el cual puede ser dividido en tres etapas: 1. Multiplicación
de las células tallo (espermatogónias) por el proceso de mitosis. 2. Reducción del
número cromosómico diploide a haploide por el proceso de meiosis. 3. Diferenciación
de las células precursoras a células especializadas llamadas espermatozoides (Knobil y
Nelly, 1994).
Para que el espermatozoide logre una fertilización eficiente, es necesario que
pase por tres eventos importantes: maduración, capacitación y reacción acrosomal
(Austin, 1987). Dentro de estos eventos, la movilidad espermática es de gran
importancia ya que aporta un movimiento vigoroso del flagelo para poder llegar al óvulo,
proporcionando un gran empuje para atravesar las células de la granulosa hasta llegar
a la zona pelúcida (Lamirande et al, 1997). Por lo tanto, si se altera al espermatozoide
en alguno de estos eventos, entonces éste será incapaz de llevar a cabo la fertilización
y por tanto se puede considerar como factor causante de infertilidad (Knobill y Neill,
1994). Esta célula representa un blanco de estudio para la creación de posibles formas
de anticoncepción.
Los espermatozoides de mamíferos son células alargadas que constan de una
cabeza aplanada que contiene al núcleo y una cola que contiene el aparato necesario
para la movilidad celular, ambas estructuras, están unidas por el cuello. La célula
espermática está completamente cubierta por el plasmalema o membrana plasmática
(Garner y Hafez, 1993). En la mayoría de las especies animales los espermatozoides
tienen tamaño y forma uniforme, miden aproximadamente entre 60 y 65 µm de longitud.
La cabeza del espermatozoide se caracteriza por presentar un núcleo de forma
oval y plano que contiene cromatina altamente condensada. La cabeza se divide en
región acrosomal y post-acrosomal. El acrosoma es una estructura situada entre la
membrana plasmática y la parte anterior del núcleo. Contiene enzimas hidrolíticas que
son de importancia durante la fertilización, entre las que se encuentran la proacrosina,
hialuronidasa y esterasas (Cormark, 1988). El flagelo está compuesto por el cuello o
segmento conector, segmento medio, segmento principal y segmento caudal o terminal.
El cuello forma una placa basal en la superficie posterior del núcleo. La placa basal del
cuello es continua en sentido posterior, y tiene nueve fibras gruesas que se proyectan
hacia atrás a través de la mayor parte del flagelo (cola). La región del flagelo entre el
cuello y el anillo es el segmento medio. El centro de este segmento medio, junto con
toda la longitud de la cola, forma el axonema, que es el responsable del movimiento
(Garner y Hafez, 1993; Hafez y Hafez, 2000). El axonema central está formado por dos
microtúbulos centrales rodeados de nueve pares de túbulos periféricos (disposición de
9 + 2) de tubulina y actina (Alberts et al, 1994).
En el segmento medio, esta disposición de 9 + 2 de los microtúbulos está
rodeada por nueve fibras gruesas o densas que al parecer están relacionadas con los
nueve pares del axonema. El axonema y las fibras densas asociadas del segmento
medio están cubiertos de manera periférica por numerosas mitocondrias. La vaina
mitocondrial, dispuesta en un patrón helicoidal alrededor de las fibras longitudinales de
la cola, es la fuente de energía necesaria para la movilidad espermática. El segmento
principal, que continúa en sentido posterior desde el anillo citoplásmico y se extiende
casi hasta la punta de la cola, está formado por el axonema en el centro y sus fibras
gruesas asociadas. La vaina fibrosa da estabilidad a los elementos contráctiles de la
cola (Hafez y Hafez, 2000). El segmento caudal o terminal, posterior a la terminación de
la vaina fibrosa, contiene sólo el axonema central cubierto por la membrana plasmática
(Hafez y Hafez, 2000).
El axonema es el que proporciona la movilidad al espermatozoide. Los pares
externos de los microtúbulos del patrón 9+2 generan las ondas de flexión de la cola por
un movimiento deslizante entre pares adyacentes (Hafez y Hafez, 2000). Por tanto, el
movimiento flagelar está impulsado por la proteína motora dineína, que utiliza la energía
de hidrólisis del ATP para hacer deslizar los microtúbulos.
ANTECEDENTES
En la actualidad las investigaciones que se llevan a cabo en los países
desarrollados como Estados Unidos de América e Inglaterra y algunos países en
desarrollo como la India y China se dirigen a la búsqueda de nuevos anticonceptivos
espermicidas que han mostrado no tener efectos secundarios importantes (Silva et al,
2003). En el caso de México se ha realizado una larga búsqueda de formas efectivas
para el control de la natalidad, los pueblos primitivos desarrollaron técnicas
anticonceptivas utilizando plantas medicinales (Secretaria de Salud, 1993).
México es un país de gran diversidad florística, se estima que la flora medicinal
en uso contiene alrededor de 5000 plantas (Lozoya, 1982; Aguilar, 1994.), y su
población a través del tiempo y de un largo proceso de aprendizaje ha sabido
apropiarse de esos recursos naturales para su beneficio (Lozoya, 1987; Carrera, 1982;
Bodenstein, 1973).
Los extractos naturales obtenidos de plantas han demostrado tener un potencial
farmacológico muy importante sobre diferentes enfermedades que aquejan al hombre
en la actualidad, así la etnobotánica ha jugado un papel importante en el desarrollo de
nuevas drogas por muchos siglos. Esta importancia del reino vegetal como fuente de
drogas curativas o para el tratamiento de ciertas enfermedades, ha llevado a comprobar
que el 25 % de los fármacos existentes en el mercado son derivados de plantas
(Méndez, 1989).
Un largo número de plantas ha sido seleccionado con actividad espermicida in
vitro. De 1600 plantas estudiadas, 90 mostraron propiedades para coagular el semen.
Este dato se puede correlacionar con los resultados de experimentos obtenidos por
diferentes grupos de investigadores en estudios in vitro e in vivo, y la información
encontrada en la medicina tradicional (Farnsworth et al, 2002; Griffin, 2001). Esto es de
gran interés para el desarrollo de inhibidores de la fertilidad masculina, que sean
totalmente selectivos, existiendo la posibilidad de que las drogas derivadas de las
plantas pudieran tener este efecto (Farnsworth et al, 2002).
Se ha reportado un número considerable de plantas de uso en la medicina
tradicional que pueden ser estudiadas para efectos inhibitorios de la fertilidad en
machos (Farnsworth et al, 1982), entre las que se encuentran: Aristolachea indica L.;
Balanites roxburghii Planch.; Calotropis procera; Gossypium species; Phytolacca
dodecandra, Azadirachta indica, Sapindus mukorossi, Samanea saman, Sedum
praealtum y Carica papaya, entre otras (Farnsworth et al, 2002; Silva et al, 2003; Kamal
y Yadav, 1993; Udoh y Kehinde, 1999; Gupta et al, 2000; Lohiya et al, 2000; Watcho et
al, 2001).
C. papaya (papaya) pertenece a la familia Caricacea, es un arbusto de 3 a 4
metros de altura perennifolio, originario del sur de México y América Central. Se cultiva
en diversas regiones tropicales del país como Veracruz, Tabasco, Oaxaca, Chiapas,
Yucatán y Nayarit. El fruto y las demás partes de la planta contienen un jugo lechoso
que posee una enzima proteolítica llamada papaína, la papaína tiene diferentes usos.
Se utiliza para ablandar carnes y mariscos, como agentes desinflamatorios en casos de
infecciones y tramautismos. La semilla contiene de 20 a 30 % de aceite no secante que
tiene aplicaciones en la industria farmacéutica. (Niembro, 1986). La semilla mide 4.0
mm de longitud (Moreno, 1980). El extracto de semilla de papaya administrado a ratas
albino machos adultos por vía intramuscular a razón de 0.5 mg/kg durante 7 días
reduce la respuesta contráctil de la cauda del túbulo seminífero de manera reversible
(Verma et al, 2002).
El extracto clorofórmico de la semilla de C. papaya administrado diariamente por
vía oral a monos langur adultos a una dosis de 50 mg/kg durante 360 días provocó
azoospermia a los 90 días de tratamiento actuando a nivel del desarrollo de las células
germinales; estudios a nivel de microscopía electrónica mostraron cambios deletéreos
en la pieza media. Los efectos fueron reversibles (Lohiya et al, 2001).
JUSTIFICACIÓN
Las altas tasas de crecimiento en la población mundial representan un grave
obstáculo para el bienestar de la humanidad, el cual primordialmente depende de los
recursos económicos y naturales disponibles en el mundo. Entre 1990 y 2005, por
ejemplo, el número de habitantes sobre el planeta se espera aumente a 3.2 billones. En
México se espera que de 98.9 millones de habitantes en el año 2000, aumente a 130.2
en el 2025.
Así, el control del crecimiento de la población usando métodos anticonceptivos
es una necesidad de nuestro tiempo. Sin embargo, las medidas disponibles para la
regulación de la natalidad no son totalmente seguras y no siempre son aceptadas por la
población. Por lo tanto, hay una necesidad urgente de desarrollar nuevos métodos de
anticoncepción, tanto para hombres como para mujeres.
Este proyecto está dirigido a la búsqueda de sustancias con actividad
anticonceptiva que sirvan como fuente de materia prima para la obtención de nuevos
agentes anticonceptivos masculinos. Así, este trabajo podría servir para realizar
estudios básicos de biología de la reproducción y ayudar a encontrar formas
alternativas de regulación de la natalidad.
OBJETIVO GENERAL
Determinar el efecto sobre la movilidad y viabilidad espermática del extracto
acuoso obtenido de la semilla madura de C. papaya, empleando como modelo
espermatozoides de cerdo in vitro.
OBJETIVOS PARTICULARES
• Evaluar el efecto sobre la viabilidad y movilidad de los espermatozoides
expuestos a extracto acuoso de la semilla completa de C. papaya.
• Evaluar el efecto sobre la viabilidad y movilidad de los espermatozoides
expuestos a extracto acuoso de la semilla sin mucílago de C. papaya.
HIPÓTESIS
Si los extractos de la semilla de C. papaya administrados por vía oral a ratas y
monos disminuyen la fertilidad, entonces dicho efecto podría relacionarse a una acción
directa sobre la movilidad y/o viabilidad espermática.
MATERIAL Y MÉTODO
Obtención del extracto
El fruto de C. papaya fue obtenido comercialmente en la ciudad de México. La
semilla fue extraída, lavada con agua destilada y separada en dos grupos. El primero
de ellos se puso a secar a temperatura ambiente y a la sombra durante 7 días. Al
segundo grupo se le desprendió el mucílago y se puso a secar. Una vez secas, ambas
semillas maduras fueron procesadas en la misma forma: molidas en un mortero, se
tomaron 40 g del pulverizado y fueron sometidos a extracción continua durante 5 horas
en un equipo soxhlet con cloroformo (250 ml). Después de filtrar, el disolvente fue
evaporado en un rotavapor. El residuo de las extracciones (40 g de la semilla) se secó
en la sombra a temperatura ambiente por 2 días. Una vez seco, el material se colocó en
un matraz con 300 ml de agua destilada y se sometió a temperatura de reflujo durante 4
horas a punto de ebullición. Trascurrido el tiempo, la muestra se filtró
y el filtrado resultante fue sometido a un proceso de liofilización para obtener,
finalmente, el extracto acuoso.
El rendimiento del extracto acuoso de la semilla madura completa fue de 2.9 g
mientras que el rendimiento del extracto acuoso de la semilla sin mucílago fue de 1.8 g.
Colecta del semen
Se obtuvo el eyaculado de cerdos adultos (> 18 meses de edad) por el método
de la mano enguantada, posteriormente se filtró por medio de una gasa para obtener
únicamente la fracción rica en espermatozoides; en el lapso de una hora se transportó
al laboratorio en una caja de poliuretano a temperatura de 28 a 30º C para su estudio.
Evaluación del semen
En la evaluación básica se analizaron la movilidad progresiva y las
anormalidades de la cabeza y cola, en un microscopio de campo claro a 400x. Se
utilizaron únicamente eyaculados con movilidad progresiva mayor al 85% y
anormalidades espermáticas menores al 15%.
Dilución del semen
De la suspensión de semen se tomó una alícuota para diluirla, en una solución
de almacenamiento a 30ºC para obtener una concentración final de 50x106
espermatozoides en 1000 µl para su uso. La solución de almacenamiento (Reading) se
preparó según Revell y Glossop (Revell y Glossop, 1989). Cada 100 ml contenía: D-
glucosa (1.15 g), NaHCO3 (0.175 g), EDTA (0.234 g), citrato de sodio (1.164g) Tris
(0.548g), ácido cítrico (0.41 g), cisteina (0.007g), trehalosa (0.1g), alcohol polivinílico
(PVA) tipo II (0.01 g), KCL (0.075 g), sulfato de estreptomicina (0.05 g), ajustado a una
osmolaridad de 284 mosm/kg y un pH de 6.4.
Concentración del extracto
Se emplearon los extractos acuosos de la semilla madura con y sin mucílago de
C. papaya. Se preparó una solución al 10 % con 0.15 g del extracto acuoso disuelto en
1500 µl de medio TALP-HEPES (T-H) suplementado con BSA (0.03 g/5 ml) y piruvato
de sodio 1 mM (200 µl/5 ml)(Sigma Chemicalls St. Louis, MO EUA) a un pH de 7.3.
Preparación de la muestra de espermatozoides
Lavado de espermatozoides. Se tomaron 3000 µl de la muestra diluida de
espermatozoides y se centrifugaron a 1500 rpm durante 5 minutos, se decantó el
sobrenadante y el sedimento fue resuspendido en 1000 µl de medio T-H suplementado,
se centrifugó nuevamente a 1500 rpm /5 minutos. El sobrenadante fue decantado y el
sedimento fue resuspendido en 3000 µl de medio T-H suplementado, para ser utilizados
posteriormente
Tratamiento
Por cada extracto se prepararon cajas de cuatro pozos con las concentraciones
finales de 1, 2,3, 4 y 5 % disueltas en medio T-H suplementado, dichas cajas y la
muestra de espermatozoides se incubaron por separado a 37 oC en una atmósfera al
5% de CO2 y humedad a saturación durante 10 minutos. Transcurrido este tiempo, se
agregaron a cada pozo 250 µl de los espermatozoides diluidos, para obtener una
concentración de 12 x106 espermatozoides por pozo, siendo el volumen final de cada
pozo de 750 µl.
Una vez agregados los espermatozoides se evaluó la movilidad y viabilidad
espermática de cada tratamiento. Posteriormente, los tratamientos fueron incubados
durante 1, 30 y 60 minutos, a 37 ºC en una atmósfera al 5% de CO2 y humedad a
saturación y se evaluaron la movilidad y la viabilidad. Así mismo, se realizó un control
únicamente con el medio T-H suplementado. Los experimentos se repitieron cinco
veces.
Evaluación de los parámetros de movilidad y viabilidad
Se evaluó la movilidad por observación directa al microscopio invertido a 400x al
minuto 1, 30 y 60. Se estimó el porcentaje de espermatozoides móviles.
La viabilidad espermática se evaluó utilizando la tinción de eosina-nigrosina de
acuerdo a los criterios descritos (Flowers, 1998; Jouannet et al, 1998; Rillo et al, 1996),
en una proporción 1:1. Se colocaron 20 µ de espermatozoides de cada tratamiento
sobre un portaobjetos y se agregaron 20 µl de eosina-nigrosina. Se mezclaron ambas
alícuotas y se dejó reposar durante 20 segundos, posteriormente se hizo el frotis y se
dejó secar a 37ºC. Se observó al microscopio óptico a 400x. Se contaron 100 células y
se determinó el porcentaje de espermatozoides vivos. Se consideraron como
espermatozoides vivos aquéllos que no presentaron tinción, y como espermatozoides
muertos los teñidos en coloración púrpura.
Análisis de datos
Se usó la prueba estadística no paramétrica de U de Mann-Whitney (p<0.05).
RESULTADOS
Los espermatozoides tratados con el extracto acuoso de la semilla completa de
C. papaya al 1% no mostró diferencia estadística en cuanto a movilidad con respecto al
control durante el estudio. Sin embargo, las concentraciones de 2, 3, 4 y 5 % mostraron
diferencia estadística con respecto al control (p<0.05) a los tiempos 1, 30 y 60 minutos.
Se observa que a concentración de 5% la movilidad se inhibe (Tabla 1).
MOVILIDAD (%)Concentración (%) Tiempo en minutos
1 30 600 90 + 0 90 + 0 85 + 31 90 + 0 90 + 3 80 + 22 85 + 5* 60 + 4* 30 + 4*3 75 + 0* 20 + 3* 5 + 3*4 25 + 5* 0* 0*5 5 + 0* 0* 0*
Tabla 1. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura completa de C. papaya sobre la movilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).
Los porcentajes de viabilidad de los espermatozoides tratados con el mismo
extracto presentaron una diferencia estadística en todas las concentraciones probadas
con respecto al control (p<0.05), durante el periodo de incubación (Tabla 2).
VIABILIDAD (%)Concentración
(%) Tiempo en minutos
1 30 600 91 + 1 88 + 2 85 + 21 88 + 3* 82 + 5* 80 + 4*2 82 + 2* 78 + 4* 75 + 4*3 79 + 3* 74 + 5* 68 + 6*4 77 + 6* 71 + 6* 64 + 5*5 72 + 5* 67 + 3* 61 + 3*
Tabla 2. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura completa de C. papaya sobre la viabilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).
Por otro lado, la movilidad de los espermatozoides tratados con el extracto
acuoso de la semilla sin mucílago de C. papaya a concentración de 1%, no mostró
diferencia estadística con respecto al control. La concentración de 2% presenta una
disminución de la movilidad de 85% (un minuto) a 10% a los 60 minutos de incubación.
Las concentraciones de 3, 4 y 5% muestran una inhibición total de la movilidad al final
del estudio. Cabe señalar que la concentración de 5% inhibe la movilidad espermática a
partir de la adición del extracto (Tabla 3).
MOVILIDAD (%)Concentración (%) Tiempo en minutos
1 30 600 90 + 0 90 + 0 85 + 31 90 + 0 88 + 3 82 + 42 85 + 4 30 + 11* 10 + 3*3 65 + 5* 5 + 5* 0*4 30 + 8* 0* 0*5 0* 0* 0*
Tabla 3. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura sin mucílago de C. papaya sobre la movilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).
La viabilidad de los espermatozoides tratados con dicho extracto a concentración 1 y
2% muestran una diferencia estadística con respecto al control. Con las otras
concentraciones se observaron diferencias en algunos tiempos solamente.
VIABILIDAD (%)Concentración (%) Tiempo en minutos
1 30 600 94 + 1 88 + 3 84 + 31 88 + 1* 83 + 2* 81 + 3*2 89 + 1* 83 + 2* 80 + 2*3 90 + 1* 85 + 4 80 + 3*4 87 + 1* 84 + 3 83 + 15 93 + 3 90 + 2* 86 + 2
Tabla 4. Promedio + D.E. del efecto de diferentes concentraciones del extracto acuosode la semilla madura sin mucílago de C. papaya sobre la viabilidad espermática. *Diferencia significativa con respecto al control (p<0.05).
DISCUSION
El objetivo principal de este trabajo fue estudiar el efecto del extracto acuoso de
la semilla madura de C. papaya sobre la movilidad y viabilidad espermática, en
espermatozoides de cerdo in vitro para usarse en el control de la natalidad.
En trabajos anteriores se probó el extracto acuoso de la corteza de C. papaya en
ratas macho sprague-Dawley administrado oralmente en una dosis de 5-10 ml por
animal durante 4 semanas; se encontró pérdida de la fertilidad, la cual se atribuye a la
declinación en la movilidad y a las alteraciones en la morfología de espermatozoides de
epidídimo (Kusemiju et al, 2002).
El extracto acuoso de la semilla madura sin mucílago de C. papaya presenta una
disminución en la movilidad a concentración de 2% con respecto al tiempo hasta
disminuirla al 10% al minuto 60. Cabe señalar que las concentraciones de 3, 4 y 5%
presentan una inhibición total al minuto 60, 30 y 1, respectivamente. Sin embargo, los
porcentajes de viabilidad se mantienen altos en todas las concentraciones y a los
tiempos estudiados. Esto indica que este extracto tiene propiedades espermiostáticas
pero no espermicidas, contrariamente a lo que encontraron Lohiya et al (2000). Ellos
probaron el extracto cloroformo, la fracción cromatográfica benceno del extracto
cloroformo y las subfracciones metanol y acetato etílico de la semilla de C. papaya en
un estudio in vitro utilizando espermatozoides de humano a concentraciones de 0.1,
0.5, 1 y 2 %; observaron inhibición total de la movilidad a los 25 minutos con todas las
concentraciones probadas; la prueba de viabilidad mostró un efecto espermicida y no
espermiostático (Lohiya et al, 2000).
Así mismo, encontramos que el extracto acuoso de la semilla madura completa
de C. papaya disminuye la movilidad espermática a concentraciones de 2 y 3% con
respecto al control durante el periodo de incubación, las concentraciones de 4 y 5%
presentan una inhibición total de la movilidad a partir del minuto 30 y 1 respectivamente.
La viabilidad muestra una tendencia a disminuir gradualmente conforme al tiempo de
tratamiento y concentración del extracto. Nuestros resultados indican que el mucílago
de la semilla de C. papaya contiene alguna sustancia con propiedad espermicida.
Se ha visto que el extracto acuoso de la semilla de C. Papaya disminuye la
fertilidad en ratones sin causar efectos nocivos en el organismos (Chinoy et al, 1994),
pero no afectó la fertilidad en conejos (Lohiya et al, 2000) probablemente debido a
alguna respuesta especie-específica de dichos organismos. Hasta donde sabemos,
todavía no se ha determinado cuál es la sustancia activa que causa dicha disminución
de la fertilidad, es por ello que es importante continuar con esta línea de investigación.
CONCLUSIONES
El extracto acuoso de la semilla completa de C. papaya reduce la movilidad de
los espermatozoides de manera dosis (y tiempo) dependiente.
Este extracto reduce la viabilidad en un 40 %, pero no induce letalidad en el 50 %
de los espermatozoides, ni aún a la concentración más alta probada (5%).
El extracto acuoso de la semilla sin mucílago induce un mayor efecto sobre la
movilidad, sin embargo no afectó la viabilidad de los espermatozoides.
PERSPECTIVAS
Se considera importante continuar con esta línea de investigación, realizando
estos mismos estudios solamente con el mucílago de la semilla de C. papaya y
determinar la sustancia que tiene efecto espermicida.
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