una molÉcula de vanguardia para …...por un simulador de luz solar las células irradiadas sufren...
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V.6
UNA MOLÉCULA DE VANGUARDIA PARA BLANQUEAR LA PIEL
COLOR DE LA PIEL
El color de nuestra piel está determinado
principalmente por la cantidad, distribución
y tipo de melanina
La melanina es un biopolímero
pigmentado que se sintetiza dentro los
melanocitos dendríticos dispersados en la
unión dermo-epidérmica
Los melanosomas conteniendo melanina
migran hacia las dendritas de los
melanocitos donde son transferidos a los
queratinocitos en la piel
CAMBIOS EN LA PIGMENTACIÓN DE LA PIEL
Durante el envejecimiento intrínseco y el
fotoenvejecimiento se producen cambios
en la pigmentación:
Acumulación anormal de melanina
Exposición aguda o persistente a la
radiación UV
Hiperpigmentación: melasmas, pecas,
manchas y léntigos seniles
LA CULTURA DE UNA PIEL MÁS CLARA
Los productos despigmentantes se utilizan mundialmente:
En los países occidentales, los productos despigmentantes se aplican
para la prevención y tratamiento de hiperpigmentaciones, para
obtener un color de piel más homogéneo
En Asia, una piel clara es símbolo de belleza y feminidad y debido a
las creencias tradicionales el uso de agentes blanqueadores está
ampliamente extendido
SÍNTESIS DE MELANINA
La síntesis de melanina se realiza en los melanosomas, que contienen enzimas específicas
que controlan la producción de pigmentos
La TIROSINASA es la enzima que cataliza el primer y decisivo paso de la melanogénesis
Los agentes blanqueadores potenciales se
evalúan sobre la actividad tirosinasa
HO
NH2
COOH
HO
NH2
COOHHO
O
NH2
COOHO
NH
COOH
HO
HO
NH
COOH
O
O
+NH
COOH
HO
HO
NH
HO
HO
NH
O
O
Tirosina Dopa
rápida
Dopaquinona
rápida
LeucodopacromoDopacromoDHICA
lenta
lenta
DHI indol-5,6-quinona
MELANOCROMO
(violeta)
MELANINA (S)
O2O2
O2
rápidalenta
- CO2
[O] [O]
lenta
Tirosinasa
lenta
540 nm
475 nm (red)
max
max
EN BUSCA DE UN NUEVO AGENTE BLANQUEADOR: EFICACIA EN LA INHIBICIÓN DE LA TIROSINASA
La tirosinasa es una enzima clave en la melanogénesis, y por esto se evalúa el
efecto que producen los agentes blanqueadores sobre la actividad tirosinasa
Ensayos in vitro de inhibición de la tirosina:
• Tirosinasa de champiñón: es un método básico para evaluar el efecto de un
agente blanqueador
• Tirosinasa de mamífero: el uso de este ensayo está mejor considerado que el
de tirosinasa de champiñón, porque las condiciones óptimas de ensayo difieren
dependiendo del ensayo (distintos requisitos de sustratos y cofactores, como
también la sensibilidad a los inhibidores)
Es importante poder realizar el ensayo de tirosinasa humana en el cribado y
evaluación de un agente blanqueador de la piel
LIMITACIONES DE LOS AGENTES BLANQUEADORES
Sólo algunas inducen efectos
hipopigmentantes apreciables
en ensayos clínicos (in vivo)
Eficacia blanqueadora
significativa in vivo/in vitro
No siempre se consigue que la demostración de una eficacia significativa en ensayos
clínicos y la seguridad del producto vayan en concordancia:
Toxicidad/problemas de liberación en
ensayos celularesEficacia in vitro en ensayos
enzimáticos sin células
Irritación, sensibilización, fototoxicidad,
citotoxicidad en melanocitos
Muchas moléculas
demuestran tener
propiedades
despigmentantes in vitro
EFICACIA
SEGURIDAD
FORMULACIÓNMuchos agentes blanqueadores de la
piel presentan problemas de estabilidad
en formulaciones
EL BLANQUEADOR DE LA PIEL IDEAL
Necesidad de nuevos blanqueadores de la piel con una
mayor eficacia y un perfil toxicológico mejorado
De acuerdo con Dooley1, los nuevos productos despigmentantes
deberían incluir las siguientes características:
a) Inhibición de la tirosinasa de mamífero
b) Carecer de potencial toxicológico o mutagénico
c) Eficacia clínica
d) Estabilidad en formulaciones
e) Ser novedad y estar protegido mediante patente del agente y/o
formulación
1Dooley TP. Topical skin depigmentation agents:
current products and discovery of novel inhibitors of
melanogenesis. J Dermatolog Treat. 8:275-279, 1997.
CHROMABRIGHT®
Inhibe la actividad tirosinasa humana in vitro
Mayor inhibición de melanogénesis que Arbutina, MAP y Ácido Kójico
Actividad despigmentante similar a la Hidroquinona sin citotoxicidad
Actividad blanqueadora demostrada in vivo
Excelente estabilidad en formulaciones
Elevada solubilidad en aceites
Perfil toxicológico impecable
+
Previene los daños causados en la piel
por la radiación UV
A diferencia de otros agentes despigmentantes que pueden causar
fotoirritación, CHROMABRIGHT® posee un efecto fotoprotector
CHROMABRIGHT® es una nueva molécula patentada para blanquear la piel:
ESTABILIDAD DE CHROMABRIGHT®
Se estudió la estabilidad del CHROMABRIGHT® en una emulsión O/W
Ingrediente %
Water csp 100
Mineral oil (Paraffinum Liquidum) 10
Polyacrylamide, C13-14 Isoparaffin, Laureth-7 3
CHROMABRIGHT® 0.05
CHROMABRIGHT® demostró permanecer
estable durante 6 meses y en formulaciones
finales con diferente pH
CHROMABRIGHT® también se analizó a diferentes pHs
0
20
40
60
80
100
120
0 meses 1 mes 2 meses 3 meses 4 meses 5 meses
Tiempo
co
nc
en
tra
ció
n (
%)
Tª amb 40 ºC
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
3,8 5,0 8,4
pH
Co
nce
ntr
ació
n (
%)
Tª amb 60 ºC
TOXICIDAD DE CHROMABRIGHT®
Irritación ocular (ensayo HET-CAM)
Fototoxicidad
Citotoxicidad en queratinocitos epidérmicos humanos
Citotoxicidad en fibroblastos 3T3
Ensayo de mutación bacteriana reversa (Ames test)
Citotoxicidad en melanocitos humanos primarios
Sensibilización
El CHROMABRIGHT® no mostró signos de toxicidad en ninguno de los
ensayos
Perfil toxicológico completo:
EFICACIA DE CHROMABRIGHT®
IN VITRO:
IN VIVO:
•Efecto blanqueador de la piel en voluntarios humanos
•Evaluación de la eficacia despigmentante
•Inhibición de la actividad tirosinasa de champiñón
•Inhibición de la actividad tirosinasa endógena humana
•Eficacia despigmentante en cultivos de melanocitos humanos
•Inhibición de la melanogénesis en melanocitos epidérmicos
humanos
•Fotoprotección en queratinocitos epidérmicos humanos
IN VITROInhibición de la actividad tirosinasa de champiñón
L-Dopa (sustrato de la tirosinasa) fue digerido en presencia de 1 mM
CHROMABRIGHT® y la enzima, midiendo la absorbancia a 470 nm
CHROMABRIGHT® inhibió un 37% la actividad tirosinasa de champiñón
El ácido Kójico 0.1mM es el control positivo
55.5%
37.0%
-20
0
20
40
60
80
100
1200
20
40
60
80
100
120
Control Ácido kójico CHROMABRIGHT®
% in
hib
ició
n d
e p
roducció
n d
e
dopacro
mo
% p
roducció
n d
opacro
mo
IN VITROInhibición de la actividad tirosinasa endógena humana
L-Dopa (sustrato de la tirosinasa) fue digerido en presencia de 1 mM
CHROMABRIGHT® y la enzima, midiendo la absorbancia a 470 nm
CHROMABRIGHT® inhibió un 43% la actividad® tirosinasa endógena humana
El ácido kójico 0.1mM es el control positivo
69.0%
43.0%
-20
0
20
40
60
80
100
1200
20
40
60
80
100
120
Control Ácido Kójico CHROMABRIGHT®
% in
hib
ició
n d
e p
roducció
n d
e
dopacro
mo
% p
roducció
n d
e d
opacro
mo
IN VITROEficacia despigmentante en cultivos de melanocitos humanos
Los melanocitos humanos sembrados en confluencia se cultivaron durante
5 o 9 días conteniendo 0.1mM de CHROMABRIGHT®
El contenido de melanina se visualizó directamente mediante
microscopio empleando una lente de 40 aumentos
La eficacia blanqueadora se determinó contando el número de células
conteniendo melanina y el número total de células
CHROMABRIGHT® 0.1 mM presentó mejor eficacia blanqueadora
que el ácido kójico 0.1mM tras 5 días de incubación
Control 5 días CHROMABRIGHT® 5 días
22.1%
15.4%
12.0%
0%
5%
10%
15%
20%
25%
Control ácido kójico CHROMABRIGHT®
% de melanina en las células tras 5 días de incubación
30.2%
45.9%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
ácido kójico CHROMABRIGHT®
% Eficacia blanqueadora
0
20
40
60
80
100
120
% m
ela
nin
a (
pg/c
élu
la)
IN VITRO Inhibición de la melanogénesis en melanocitos epidérmicos humanos
Cultivos de melanocitos humanos primarios fueron tratados con CHROMABRIGHT®,
Hidroquinona, Arbutina, Magnesium Ascorbyl Phosphate (MAP) o Ácido Kójico
CHROMABRIGHT® mostró tener una
eficacia despigmentante dosis-
dependiente
A la misma concentración (10 M) la actividad de
despigmentación de CHROMABRIGHT® es mayor que
la del MAP, Arbutina, Ácido Kójico, y similar a la
Hidroquinona
Después de 20 días, la concentración de melanina se determinó midiendo la absorbancia a 450 nm
0
20
40
60
80
100
120
% m
ela
nin
a (
pg/c
élu
la)
resp
ecto
a c
ontr
ol
CHROMABRIGHT® 10µM HIDROQUINONA 10µM
Control CHROMABRIGHT® 200µM
La inhibición de la melanogenesis del CHROMABRIGHT® también se estudió
por microscopía óptica, mostrando que a la misma concentración (10 M):
CHROMABRIGHT® e Hidroquinona
mostraron una actividad
despigmentante similar
CHROMABRIGHT® no presentó
citotoxicidad, mientras que la
Hidroquinona es claramente
citotóxica
IN VITRO Inhibición de la melanogénesis en melanocitos epidérmicos humanos
0
20
40
60
80
100
120
Via
bilid
ad c
elu
lar
(%)
IN VITROFotoprotección en queratinocitos epidérmicos humanos
CHROMABRIGHT® se evaluó mediante el ensayo in vitro
de fotoprotección HEKa NRU, método basado en la
determinación del efecto protector de una sustancia
química en presencia de una dosis citotóxica generada
por un simulador de luz solar
Las células irradiadas sufren un descenso en la absorción
del colorante Rojo Neutro (NR)
Se observó un aumento en la viabilidad celular del 254.88%
con 150 µg/mL de CHROMABRIGHT® respecto a las células
control irradiadas (CTR+UV)
CTR-UV CTR+UV 47 µg/mL
CHROMABRIGHT®
+UV
150 µg/mL
CHROMABRIGHT®
+UV
+255%
+190%
IN VIVOEFECTO BLANQUEADOR
20 mujeres asiáticas sanas, de edades comprendidas entre los 18
y 46 años se aplicaron una crema que contenía CHROMABRIGHT®
0.1% dos veces al día durante 60 días
Las voluntarias se aplicaron la crema placebo en un lado de la
cara y en el otro la crema que contenía CHROMABRIGHT®
El efecto blanqueador se evaluó instrumentalmente mediante el
cromámetro CR-300
Las medidas se tomaron antes de la aplicación, después de 30 y
60 días de tratamiento
IN VIVOEFECTO BLANQUEADOR
Se utilizaron los siguientes parámetros para la evaluación in vivo
de los efectos que ejerce CHROMABRIGHT® en el color de la piel
L* (Luminosidad): representa la luminosidad relativa, de oscuridad
total (L*=0) a blanco absoluto (L*=100)
ITAº (Ángulo Tipológico Individual): categoriza el color de la piel,
y viene dado por la combinación de los parámetros L* y b* (eje
amarillo-azul)
Cuanto mayores son los parámetros L* e ITAº, más clara es la piel
IN VIVOEFECTO BLANQUEADOR
Después de 30 y 60 días de tratamiento con una crema que contenía
CHROMABRIGHT®, se observó un aumento estadísticamente
significativo de L * e ITAº
El efecto blanqueador inducido por CHROMABRIGHT® fue significativamente
superior al observado para la crema placebo
230 días: p<0.01
60 días: p<0.001
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
T30 T60
1.1
1.7
Tiempo (meses)
% variación L*
CHROMABRIGHT®
Placebo
-2
0
2
4
6
8
10
12
14
T30 T60
7.7
13.7
Tiempo (meses)
% variación ITAº
CHROMABRIGHT®
Placebo
IN VIVOEVALUACIÓN DE LA EFICACIA DESPIGMENTANTE
• Se evaluó mediante controles clínicos e iconográficos la eficacia de CHROMABRIGHT® en
un panel de 10 voluntarios afectados de melasma y/o lentigos actínicos que se aplicaron
una crema que contenía 0.5% CHROMABRIGHT® en la cara y/o manos dos veces al día
durante 60 días
Después del control clínico a los 30 días y 60 días
tanto de los lentigos como del melasma tratados con
CHROMABRIGHT® se observó una mejoría notable
0 días 60 días
0 días 30 días0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
MELASMA LENTIGOS
2.20 2.11
3.403.11
Puntu
ació
n
T30
T60
CONCLUSIONES
Inhibe la actividad de la tirosinasa de champiñón y la tirosinasa endógena humana
Exhibe un efecto despigmentante significativo en melanocitos humanos que es
mucho mayor que el de la Arbutina, MAP y Ácido Kójico
Tiene un efecto fotoprotector significativo sobre cultivos celulares de queratinocitos
epidérmicos humanos, previniendo el daño en la piel inducido por la radiación UV
Produce in vivo un efecto blanqueador significativo en la piel
Buena estabilidad en formulaciones finales
Presenta un excelente perfil toxicológico
Al contrario que la Hidroquinona, no es citotóxico a 10 µM pero presenta una
actividad despigmentante similar
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publicación, incluyendo, sin excluir, el uso de la misma en publicidad, datos contenidos en la
etiqueta del producto final, y no utilizará esta publicación como prueba que justifique una
reclamación de producto final ante cualquier autoridad legal.
Reduce eficazmente la apariencia de melasma y lentigos