trabajo académico - victor hugo guerrero silva (3)
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN DE AREQUIPA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
UNIDAD DE SEGUNDA ESPECIALIDAD
TRABAJO ACADÉMICO REALIZADO SOBRE LA APLICACIÓN DE LA MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA EN EL ESTUDIO DE
MUESTRAS AMBIENTALES Y CARGA MICROBIANA AMBIENTAL EN INVESTIGACIONES FORENSES, LABORATORIOS
CRIMINALÍSTICOS DE LA DIRECCIÓN DE CRIMINALÍSTICA DE LA PNP DE LIMA, 2017 - 2018
Presentado por el Biólogo:
VICTOR HUGO GUERRERO SILVA
Para optar el Título de Segunda Especialidad en
Microbiología y Parasitología
Arequipa - Perú
2021
1
2
INDICE
Resumen ............................................................................................................ 03
Introducción ........................................................................................ ................ 05
Objetivos………………………………………………………………………………… 07
Marco Legal …………………………………………………………………………….. 08
Capítulo I: Marco Teórico……………………………………………………………… 10
1.1. Definiciones operativas ………………………. ………………………………
12
1.2. Operaciones de campo ……………………………..…………………………
13
1.3. Operaciones analíticas …………………………………………………………
13
1.4. Procedimiento para inspección o reconocimiento del lugar de muestreo ...14
1.5. Ubicación y puntos de muestreo …………………………………………….. 14
1.6. Parámetros de evaluación …………………………………………………….
16
Capítulo II: Metodología…………………………………………………………………18
2.1. Lugar de Ejecución del Trabajo……………………………………………….. 18
2.2. Muestreo…………………………………………………………………………. 19
2.3 Análisis microbiológico de muestras de agua ambientales……………….…19
2.4. Análisis parasitológico de aguas y suelo……………………………………...23
2.5 Análisis microbiológico para determinar la carga microbiana ambiental…..25
Capítulo III: Resultados ……………………………………………………………….. 26
Capitulo IV: Conclusiones………………………………………………………………38
Bibliografía………………………………………………………………………………. 40
Anexos ………………………………………………………………………………….. 42
3
RESUMEN
El presente trabajo describe algunas de las aplicaciones de la Microbiología y Parasitología
como parte de las Ciencias Biológicas usadas para la resolución de casos inmersos en
investigaciones para determinar la ocurrencia de posibles delitos que ponen en riesgo la
Salud Pública y Ocupacional.
El objetivo del presente trabajo es documentar el uso de éstas Ciencias Biológicas en la
labor Criminalística, actividades que se llevaron a cabo en la ciudad de Lima entre los años
2017 y 2018, adoptándose criterios y metodologías analíticas de acuerdo al caso materia
de investigación y evaluando los resultados obtenidos con los Limites Permisibles o
Estándares de Calidad dados por la Normativas vigentes que permitieron establecer la
ocurrencia de delitos exponiendo a usuarios, trabajadores, consumidores de productos
obtenidos con estas prácticas, entre otros; a riesgos contra la salud pública y ocupacional;
sin embargo, debido a la diversas aplicaciones, para el presente trabajo académico solo
abordaremos la Toma y análisis de muestras de aguas ambientales y Toma y análisis
de muestras en ambientes cerrados, estableciendo su importancia.
De 82 casos peritados entre el 2017 y 2018 referidos al uso indebido de aguas ambientales,
el 73 casos (89%) de los análisis realizados han sustentados científicamente mediante los
análisis microbiológicos y parasitológicos la ocurrencia de delitos contra la salud pública y
ocupacional, representando el criterio técnico para los entes competentes para la adopción
de las medidas correctivas, asociándose a estos resultados la presencia de Coliformes
totales, fecales, patógenos como: Escherichia coli, Salmonella sp, Shigella sp,
Pseudomona aeruginosa, formas parasitarias tales, como: quiste de Giardia lamblia,
Entamoeba coli, Entamoeba histolytica, huevos de Taenia sp, Hymenolepis nana,
Trichuris Trichura; así como, larvas de uncinarias, Ascaris lumbricoides, tanto en aguas
recreacionales, como en aguas residuales y suelos regados con éstas y en productos del
agro obtenidos con estas fuentes de agua.
En cuanto a la determinación de cargas microbianas de 88 casos peritados en el mismo
periodo de tiempo, 63 de ellos (53%) alertaron de cargas microbianas ambientales que altas
que pueden influir en los procesos de fabricación o almacenamiento y que pueden
4
determinar la calidad o vida útil de los productos almacenamiento, 17 casos (19%) reportan
el aislamiento de microoganismos que representan riesgos asociados a la salud del
personal, destacándose entre ellos la presencia de mohos tales como: Aspergillus sp,
Penicillium sp y Alternaria sp., y 8 casos (9%) que demuestran que los motivos
investigados no se deben a presencia de microorganismos asociados con la salud de las
personas.
Palabras claves: Microbiología Forense, Parasitología Forense,Investigación Forense.
5
I. INTRODUCCIÓN
La Criminalística se encuentra en un momento de especial desarrollo, producto de la mayor
demanda de peritajes por parte del Ministerio Público y diversas dependencias de la PNP,
valiéndose en otras, de las Ciencias Biológicas para contar con el aporte de pruebas
vinculadas a la demostración de actividades ilícitas en gran número de procesos judiciales,
especialmente en el ámbito jurisdiccional penal.
La idea de redactar el presente trabajo como material didáctico de la labor pericial
Criminalística en beneficio de la labor jurisdiccional y como aporte a la conclusión de
estudios de la 2da Especialidad en Microbiología y Parasitología, tiene como objetivo
documentar entre muchas aplicaciones de éstas Ciencias Biológicas, su utilización como
prueba científica, fortaleciendo las capacidades de los operadores de justicia en diversos
niveles cuyo objetivo está encaminado a la lucha contra la delincuencia y criminalidad
creciente en diversas formas, las que se apoderan de nuestro país en forma progresiva.
Debido a la creciente demanda de alimentos producida por el aumento de la población, el
agua, como elemento indispensable en el ciclo del crecimiento de las plantas se convierte
cada día en un elemento fundamental en la producción, la necesidad de alimentación,
recreación y actividades productivas lo que genera la necesidad del uso de fuentes de agua
que no reúnen requisitos mínimos para su uso poniendo en riesgo a la salud pública(7). En
la agricultura el uso de aguas residuales para el riego de cultivos es cada día mas común;
si bien, el rendimiento de los cultivos es superior ya que las aguas residuales contienen
nutrientes para el desarrollo de las plantas; sin embargo, existe el riesgo que este tipo de
aguas facilite la transmisión de enfermedades relacionadas con nematodos intestinales,
bacterias fecales y otras patógenas a consumidores y agricultores(4), prácticas que cada día
van en aumento en distintas partes de Lima y periféricos; así mismo, el uso de otras fuentes
de agua que no reúnen los requisitos de calidad e inocuidad, para otras actividades como
las recreacionales representan igualmente riesgos para la salud. Los peligros que se
encuentran en ambientes de aguas de recreación varían de un lugar a otro, tanto por el
tiempo como por la naturaleza de la exposición, la misma puede ser por contacto directo,
por inhalación, pudiendo llegar hasta la ingesta involuntaria durante la práctica de natación (5) especialmente en balnearios.
6
En cuanto a la carga ambiental, se puede destacar que los contaminantes ambientales de
procedencia biológica (bioaerosoles) están constituidos por las partículas, las moléculas de
tamaño grande, o los compuestos orgánicos volátiles que están vivos o que proceden de
un organismo vivo. (8). Las bacterias pueden adherirse a un medio físico como el material
partículado, y de esta forma son capaces de dispersarse en el ambiente atmosférico. Son
de gran preocupación dentro de las Instituciones de Salud debido a que su alta
concentración puede aumentar la posibilidad de adquirir infecciones intrahospitalarias
(IIH)(9)
La evaluación a la exposición a contaminantes biológicos como cargas ambientales; sin
embargo, tiene el inconveniente de que, por el momento, no existen criterios de valoración
numéricos que permitan una interpretación sencilla y determinante de los resultados
obtenidos o situación analizada; sin embargo, su hallazgo permite identificar las relaciones
directas o indirectas con los productos alimenticios u otros y sus implicancias en la calidad
o inocuidad como consumo o exposición para las personas; así por ejemplo, los ambientes
muy húmedos favorecen el desarrollo de los hongos, de las bacterias y de los ácaros del
polvo doméstico lo cual se relaciona directamente con afecciones que experimentan las
personas que laboran en dicho entorno. El movimiento de desplazamiento o corrientes de
aire contribuye al transporte, mantenimiento y diseminación de los contaminantes biológicos
procedentes del exterior o contenidos en un reservorio del interior(8).
Por tanto, hay que saber y conocer cómo interpretar los resultados de una forma correcta,
ya que la mera presencia de microorganismos o proteínas, incluso en concentraciones
ambientales elevadas, no son prueba definitiva y pueden discutir que hayan causado una
enfermedad. El hecho de que hoy en día se desconozcan las relaciones dosis-respuesta
entre muchos contaminantes biológicos y enfermedades en los seres humanos es, quizás,
el mayor obstáculo a la hora de establecer unos criterios de valoración que faciliten la
evaluación de la exposición a dichos contaminantes; sin embargo, en otros casos la mera
presencia de determinados agentes biológicos representa un peligro potencial para el
bienestar de las personas.
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II. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Documentar la aplicación de la Microbiología y Parasitología en actividades de
investigación Criminalística como aporte científico para la resolución de casos
en procesos de investigación, referidos al análisis de muestras ambientales y
carga microbiana ambiental, en la ciudad de Lima, entre los años 2017 y 2018
en los Laboratorios Criminalísticos de la DIRCRI PNP.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Conocer la demanda de servicios de análisis microbiológicos y
parasitológicos de aguas ambientales como aporte científico para establecer
la ocurrencia de delitos asociados a la salud pública y ocupacional.
Conocer la demanda de servicios de análisis microbiológicos de muestras de
carga microbiana en ambientes cerrados como aporte científico para
establecer la ocurrencia de delitos asociados a la salud ocupacional.
8
III. MARCO LEGAL Decreto Supremo N° 031-2010-SA. Reglamento de la Calidad del Agua de
Consumo Humano. MINSA, Perú. Setiembre, 2010.
DS. N° 015-2015- Modifican los estándares nacionales de calidad ambiental
para agua y establecen disposiciones complementarias para su aplicación.
MINAN. Diciembre, 2015.
Ley N° 26842. Ley General de Salud. MINSA. Julio de 1997.
DS. N° 057-2004-PCM. Norma que aprueba el Reglamento de la Ley Ley N°
27314, Ley General de Residuos Sólidos. MINAN. Julio , 2004.
RM. N° 461-2007. Guía Técnica para el Análisis Microbiológicos de
Superficies en Contacto con Alimentos y Bebidas. MINSA. Junio, 2007.
Ley N° 29338-2010. Ley de Recursos Hídricos. Enero, 2010.
Directiva Sanitaria N° 033-MINSA/DIGESA- V.01. Directiva Sanitaria para la
Determinación del índice de Calificación Sanitaria de las Piscinas Públicas y
Privadas de uso colectivo. MINSA, Lima, Perú. 2011.
Dirección de Criminalística PNP. Manual de Procedimientos. Julio del 2016.
DEPBIFOR DIVLACRI – DIRCRI PNP. Manual de Métodos de Análisis
Microbiológicos y Evaluación Ambiental –. Julio 2016.
D.L. N° 1062. Ley de Inocuidad de los Alimentos. MINSA. Junio, 2008.
D.S. 034-2008-AG. Reglamento de la Ley de Inocuidad de los Alimentos.
MINSA. Diciembre, 2008.
Nuevo Código Procesal Penal – Art° 67, Art° 68 y Art° 158 – Establece las
atribuciones de la Policía en la investigación de los delitos y Valoración de la
Prueba.
Resolución Directoral N° 1595-97-DGPNP/EMG, del 14 de julio de 1997,
referida a la creación de la Dirección de Criminalística PNP como Órgano
Sistémico, encargado de planear, dirigir, organizar, controlar y ejecutar
actividades referidas al ámbito científico forense.
Decreto Legislativo N° 1148-2012, del 10 de diciembre del 2012 se aprueba
la nueva Ley de la Policía Nacional del Perú, la misma que en su Art° 10.
Funciones, Inciso 8, establece como una de sus funciones “Practicar y emitir
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los peritajes de Criminalística a través del Sistema Criminalístico Policial, para
efectos del proceso penal y los derivados del cumplimiento de sus funciones”.
Decreto Legislativo N° 1152 del 10 de diciembre del 2012, se aprueba la
Modernización de la Función Criminalístico Policial, con el objeto de fortalecer
la función Criminalística Policial y la lucha contra la criminalidad organizada,
facultando a la Dirección de Criminalística a “practicar y emitir los peritajes
oficiales de criminalística para efectos de la investigación que dirige el
Ministerio Público.
Constitución Política del Perú - Art.° 166 Finalidad de la Policía Nacional del
Perú.
Nuevo Código Procesal Penal – Art°. 67, Art° 68 y Art° 158 – Establece las
atribuciones de la Policía en la investigación de los delitos y Valoración de la
Prueba basada en Criterios Técnicos Científicos base para la determinación
de sanciones.
Manual de Procedimientos de la Dirección Nacional de Criminalística de la
PNP.
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CAPITULO I
MARCO TEORICO
El constante crecimiento de las ciudades y con ellas el incremento de la población tiene
como consecuencia el desarrollo de las sociedades en diversos niveles generando diversas
actividades productivas para obtención de bienes y servicios, formales e informales,
muchas de éstas últimas que atentan contra la seguridad y salud de la población.
Cuando las actividades realizadas transgreden los cuidados, medidas de prevención,
normativas vigentes, entre otras criterios o consideraciones y afectan al ser humano,
animales, medio ambiente u otro amparado por la legislación vigente pueden ser
denunciados, por lo Direcciones Especializadas de la PNP, Ministerio Público, Poder
Judicial, Municipalidades, entre otras, recurren al apoyo que brinda estos Laboratorios
Criminalísticos a fin de contar con los medios probativos de los posibles ilícitos penales y
en base a ello adoptar las medidas pertinentes de acuerdo a su competencia.
Por tal, La Ciencias Biológicas Forenses, constituyen una parte de las ciencias evolutivas,
que merecen un enfoque de actualización constante y que proponen nuevos retos en la
identificación, reconstrucción y medios probativos de los hechos. La actualización,
conocimiento, aprendizaje y aplicación, de procedimientos, técnicas y metodologías,
respaldan el trabajo científico realizados por profesionales Biólogos, los que están
obligados a conocer los alcances y trascendencia de su actuación como parte de un equipo
de profesionales que confluyen en un mismo objetivo en beneficio de la sociedad.
Uno de los principales problemas a nivel mundial es la disponibilidad de agua, lo que
condiciona al reúso de las mismas. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estimó que
2,000 millones de personas están infectadas por helmintos transmitidos por el suelo en todo
el mundo (OMS, 2001b), por Prácticas Agrícolas inseguras como la irrigación con aguas
residuales domésticas no tratadas.(6) Determinando una alta tasa de morbilidad, afectando
la salud y la calidad de vida de la población(11). La contaminación del suelo puede ser
causada por un evento específico o una serie de eventos dentro de un área determinada
11
en la que los contaminantes son liberados al suelo y la fuente e identidad de la
contaminación son fácilmente identificadas.(6).
Debido al desconocimiento de los entes encargados de investigar estas posibles
implicancias a la salud, en cuanto a las cargas microbianas o bioaerosoles en el medio
ambiente, muchas investigaciones no han tenido solides científica, por lo que la DIRCRI
PNP, en los últimos 5 años viene implementando técnicas para brindar los aportes
científicos que respalden las medidas tomadas, encontrándose en el presente año a puertas
de adquirir equipamiento que permitirá la evaluación más precisa y confiable.
Específicamente, en el lado del bienestar y salud ocupacional, tiene una tendencia creciente
la demanda de investigación sobre la evaluación del comportamiento de bioaerosoles fungí,
ya que hay numerosas infecciones micóticas transmitidas por el aire y bibliografías que
asocian las presencias de hongos patógenos y alergénicos en instituciones de salud,
escuelas, bibliotecas, parques, entre otros lugares públicos y privados.
La supervivencia, reproducción y dispersión al aire de los contaminantes biológicos van a
dependen, en gran medida, de diversos factores del lugar donde se encuentren, tales como:
temperatura, humedad, corrientes de aire, luz, disponibilidad de alimento y la carga de
microorganismos presentes, principalmente estos entre otros factores van a determinar el
grado en que los contaminantes biológicos se encontrarán en un ambiente.(8).
Se debe destacar que, una vez que los microorganismos se han asentado en un substrato
o lugar (reservorio) e iniciado su desarrollo (amplificación, desarrollo o colonización), su
paso al aire (diseminación), estará condicionado por varios factores, como: actividades
laborales, arrastre por corrientes de aire, desplazamiento de personas o equipos; la
alteración del lugar que hace las veces de reservorio debido a obras de remodelación,
demolición, operaciones de limpieza, entre otros. (8)., condicionando con ello la disposición
de los mismos para el ser humano por varias puertas de entrada al organismo como las
vías respiratorias, epidérmicas y otras en donde los microorganismos utilizan el
oportunismo para su accesibilidad, causando con ello cuadros clínicos que en algunos
casos pueden causar cuadros de salud severos.
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1.1 Definiciones Operativas
Muestra. - Es una o más porciones de un volumen de agua, colectadas en cuerpos
receptores, descargas, efluentes o vertimientos industriales, redes de abastecimiento
público, etc., con el fin de determinar sus características físicas, químicas, físico
químicas o biológicas.
Muestreo. - Es el proceso de tomar una porción representativa de agua, que permita
medir los parámetros que representan la calidad de un cuerpo de agua.
Contaminación. - Es la presencia en el ambiente de una o más sustancias que
perjudiquen o resulten nocivos a la vida y el bienestar humano, la flora, la fauna o que
degrade la calidad del ambiente causando cambios indeseables en el ecosistema.
Contaminación de muestra. - Es la alteración involuntaria de la muestra, causada por
agentes físicos, químicos o biológicos, que la invalidan para los fines analíticos y de
medición que se recolecta.
Monitoreo. - Es la determinación continua o periódica de la cantidad de contaminantes,
físicos, químicos, biológicos o su combinación en un recurso hídrico.
Punto de muestreo. - es un lugar específico cerca de o en un cuerpo receptor agua,
en la cual se recoge la muestra, su ubicación es fundamental para interpretar los
reportes obtenidos.
Cuerpo Receptor. - Es el recurso que recibe o al que se arrojan directa o
indirectamente los residuos de cualquier actividad humana, es decir, son los lagos, ríos,
acequias, pozos, suelos, aire, etc.
Parámetros: Son aquellas características físicas, químicas y biológicas, de calidad del
agua, que puede ser sometido a medición.
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Límite Máximo Permisible: Nivel de concentración o cantidad de uno o más
contaminantes, por debajo del cual no se prevé riesgo para la salud, el bienestar
humano y los ecosistemas, que es fijado por la Autoridad Competente y es legalmente
exigible.
Estándar de Calidad: Es el que reúne los requisitos mínimos en busca de la excelencia
dentro de una organización institucional.
1.2 Operaciones en campo
Las operaciones en campo son aquellas que se realizan en los lugares solicitados para
el muestreo en donde se investiga la ocurrencia del delito investigado, tales como,
campos de cultivo, parques y jardines, piscinas, ambientes cerrados dedicados a
almacenamiento de productos o documentos, ambientes de atención médica.
Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realizadas por personal
capacitado en la materia:
a. Procedimiento para la selección de la muestra
b. Selección del método de muestreo
c. Procedimiento para la toma de muestra
1.3 Operaciones analíticas
Las operaciones analíticas son aquellas que se realizan en un laboratorio destinado y
acondicionado para el análisis de las muestras según el interés de la investigación
Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realizadas por personal
capacitado en la materia:
a. Determinación de los ensayos microbiológicos
b. Procedimiento de análisis microbiológicos
c. Cálculo y expresión de resultados
d. Interpretación de resultados de acuerdo a los límites microbiológicos
1.4 Procedimiento para la reconocimiento o inspección criminalística ambiental y
toma de muestras.
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Se da a solicitud de la Dirección de Policía de Protección al Medio Ambiente, Ministerio
Público, Municipalidades, Dirección de Seguridad de Estado, etc., a mérito de una
denuncia o hecho investigado, sobre la cual se solicita la evaluación de parámetros de
interés a fin de demostrar la ocurrencia del hecho delictuoso.
Reconocimiento del lugar del muestreo, El Perito Biólogo a cargo debe realizar un
reconocimiento del lugar de muestreo, conjuntamente de los responsables de
establecimiento, lugar o área, y debe perennizar mediante fotografía, videos, o croquis,
el lugar de estudio y muestreo y su área de influencia, a fin de contar con elementos
de juicio que permita discernir o relacionar los evidenciado con los resultados de los
análisis obtenidos de las muestras tomadas. La ubicación para toma de muestras
ambientales debe ser georeferenciados.
En primer lugar, se debe conocer cómo, dónde y qué se ha de muestrear. En
ocasiones, la concentración ambiental de este tipo de contaminantes no está siempre
ligada a un proceso de trabajo, sino a las diversas fases del desarrollo microbiológico,
y a los factores que favorecen su diseminación.(8)
1.5 Ubicación y puntos de muestreo:
El personal de monitoreo deberá obtener toda la información posible y de manera
detallada del punto de muestreo, generalmente esta información es proporcionada por
los responsables del establecimiento donde se realizará la toma de muestras y/o
interesados y/o afectados por los contaminantes existentes materia de investigación y
que consideran que afectan directa o indirectamente.
Ubicación
La ubicación de los puntos de muestreo deberá cumplir los siguientes criterios:
Identificación: El punto de muestreo, debe ser identificado y reconocido
claramente, identificándolo, con la actividad realizada relacionándolo con el flujo de
15
proceso evaluado que permita su identificación exacta con su importancia en el
desarrollo de las actividades evaluadas.
Accesibilidad: Las características del punto deben permitir un rápido y seguro
acceso para tomar la muestra, no debe implicar riesgo para el perito.
Representatividad: Se debe elegir un punto de muestreo representativo. Es
importante considerar una referencia para la ubicación del punto de muestreo. Se
debe tener en cuenta el impacto y el área de influencia, afín de interpretar o
proyectar su impacto sobre el personal.
Seguridad: Un aspecto a tener en cuenta, dentro de la ubicación de los sitios de
muestreo, es el nivel de seguridad con el que contará el personal de peritos
encargados de la toma de muestra.
Se deben incluir medidas de seguridad para lograr el acceso a un punto de
monitoreo según el caso lo requiera y siempre y cuando sea estrictamente
necesario, ya que lo primordial es preservar la vida del recurso humano.
Información a tener en cuenta
Antecedentes, del lugar de suceso, del hecho investigado, frecuencia de
ocurrencia, etc.
Ubicación (georreferenciación), tamaño, capacidad ó área, influencia del hecho
investigado, origen de la contaminación y otro relacionado.
Memoria descriptiva de los procesos, desplazamiento o actividad.
Flujo de actividades: de circulación, desplazamiento, actividades, etc.
Estudio o caracterización del origen de la contaminación: fuentes de origen,
sustratos, materiales, afluentes, efluentes, desechos, etc. (sólidos, líquidos o
gaseosos).
Toma de muestras necesarias a fin de ser analizadas en el laboratorio.
Los resultados determinarán el grado de contaminación para el ambiente,
homologándolos con límites máximos y mínimos (Normativa vigente), de ser el
caso.
16
1.6 Parámetros de evaluación
Métodos de análisis microbiológicos para aguas ambientales
Para los análisis microbiológicos y parasitológicos de muestras de agua ambientales
superficiales, de afluentes, efluentes, residuales, recreacionales, domésticas, suelos
agrícolas, forestales, entre otras, se aplica los Métodos contemplados en el Manual de
Métodos de Análisis Microbiológicos y Parasitológicos del Laboratorio de Microbiología
y Ecología de la DIVLACRI – DIRCRI PNP, los mismos que están basados en los
“Métodos Estándar para el Análisis de Aguas y Aguas Residuales” (9) (STANDARD
METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER), que son
modificados cuando se hace necesario en la forma de muestreo y tamaño de muestra,
de acuerdo a la naturaleza de la investigación y presunción del delito cometido, entre
los parámetros a considerados se pueden enumerar:
Recuento de heterótrofos viables: Método de siembra en placa, para el recuento de
unidades formadoras de colonia por ml de muestra (ufc/ml)
Numeración de Coliformes totales: Método de Numero Mas Probable, estableciendo el
NMP de Coliformes totales por 100 ml de muestra (NMP/100ml)
Numeración de coliformes fecales: Método de Numero Mas Probable estableciendo el
NMP de Coliformes fecales por 100 ml de muestra (NMP/100ml)
Detección de microorganismos patógenos: Método Presencia Ausencia.
Búsqueda de formas parasitarias por métodos de concentración y flotación y
observación microscópica para la identificación de formas parasitarias.
Toma de muestras y análisis microbiológicos de ambientes cerrados
Parámetros Biológicos
Recuento de heterótrofos viables
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Recuento de enterobacterias.
Recuento de mohos y levaduras.
Detección de Staphylococcus aureus
Detección de Pseudomona aeruginosa
(*) Los parámetros son aplicados de acuerdo al hecho investigado.
Métodos de análisis microbiológicos para ambientes cerrados
Para los análisis microbiológicos de muestras en ambientes cerrados, sobre superficies
inertes o ambientes, entre otras, se aplica los Métodos contemplados en el Manual de
Métodos de Análisis Microbiológicos del Laboratorio de Microbiología y Ecología de la
DIVLACRI – DIRCRI PNP (9),
18
CAPITULO II
METODOLOGÍA
2.1 Lugar de ejecución del trabajo
Para documentar el presente trabajo académico se ha tomado como referencia los
casos peritados entre el 2017 y 2018 en la ciudad de Lima y periféricos, a mérito de
las denuncias presentadas o investigadas por delitos contra la salud pública y
ocupacional, de los cuales se ha considerado 82 casos ( 143 muestras) de estudio o
peritados de muestras de aguas ambientales, de ellos 01 caso investigado en
efluentes de industrias de papel y 14 efluentes de establecimientos dedicados al
beneficio de aves y ganado (efluentes de empresas); 11 de servicios de piscina y 03
en escuelas de natación (aguas recreacionales); 07 en regadío de cultivos y 04 en
aguas de regadío de parques y jardines (aguas residuales); 18 en terrenos agrícolas
y 24 en vegetales cultivados con aguas negras (suelos agrícolas), las mismas que
fueron muestreadas y sometidas a análisis microbiológicos y parasitológicos.
En cuanto a la carga microbiana ambiental, se tomó como referencia en el mismo
periodo de tiempo en la ciudad de Lima, los casos sobre los que se ha peritado a
mérito de las denuncias o investigaciones por delitos contra la salud pública y
ocupacional, sumando un total de 88 casos de los cuales 19 corresponden a muestras
tomadas en establecimiento de alimentación colectiva, 08 en áreas de fabricación de
productos naturales, 06 en áreas de producción de panaderías y 05 en áreas de
procesamiento de productos cárnicos (ambientes de producción de alimentos); 15 en
ambientes de materia primas y productos terminados y 10 en cámaras de
almacenamiento en frio (almacenes); 04 en archivos de bibliotecas, 12 en archivos
documentarios y 01 en archivos otros (archivos documentarios); 02 para detección de
patógenos en quirófanos, 01 en Unidad de cuidados intensivos y 05 en áreas para
tratamiento de quemados (Establecimientos de atención médica), las mismas que
fueron muestreadas y sometidas a incubación y lectura para el recuento e
identificación de microorganismos según el caso, materia de investigación.
2.2 Muestreo
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Objetivo
Obtener una muestra representativa del agua para poder determinar a partir de ella
su calidad microbiológica de interés sanitario. La toma de muestras debe respetar,
por consiguiente la composición microbiológica del agua captada
Envase
Se utilizan frascos con capacidad de 250 a 500 ml, de plástico o vidrio, esterilizados,
con tapa hermética y en lo posible de boca ancha.
Según los análisis que vayan a realizarse se definirá el tipo de envase a utilizar. El
mismo estará en función de la cantidad de muestra a tomar y de la necesidad de dejar
una cámara de aire, o un espacio para mezclas o para el agregado de algún reactivo
que permita la conservación de la muestra, de ser necesario.
En el caso de que las muestras deban ser transportadas, debe dejarse un espacio del
1% de la capacidad del envase para permitir la variación de volumen debida a
diferencia térmica.
Las muestras serán acondicionadas en cadena de frio hasta su llegada al laboratorio,
a fin de facilitar su conservación
2.3 Análisis microbiológico de aguas ambientales.
En el agua pueden encontrarse una gran variedad de microorganismos, los cuales
afectan en mayor o menor medida a la calidad del agua para sus diversos usos;
además de la flora normal presente en cualquier sistema acuático (ejemplos: Bacillus,
Pseudomonas, etc.); sin embargo, dicha presencia debe ser valorada dependiendo
de los usos al que sea destinado dicho elemento, algunos de ellos patógenos para el
ser humano y/u otros animales. Una de las fuentes principales de contaminación son
las aguas residuales que contienen materia fecal que puede ser vehículo de
transmisión de patógenos.
Objetivo
El objetivo principal del análisis es determinar si el agua estudiada está contaminada
con materia fecal humana o de otros animales y si cumple con los requisitos de calidad
sanitaria exigidos para las aguas ambientales (aguas de playa y cultivo de animales,
20
por ejemplo). Análisis del agua La calidad del agua se valora mediante análisis
bacteriológico, utilizando a distintos tipos de microorganismos.
Los ensayos que se realizaron fueron:
Valoración de bacterias indicadoras de contaminación fecal: Coliformes totales (CT),
coliformes fecales (CF) y detección de patógenos por el método presencia ausencia.
Los métodos de análisis empleados fue el Método de Diluciones sucesivas y
valoración según el número más probable (NMP) y Método de detección de
patógenos por presencia ausencia
Preparación de muestras para análisis
Agitar siempre de forma vigorosa la botella que contiene la muestra de agua antes
de tomar cantidad alguna de la misma.
Preparar diluciones 1/10, 1/100, 1/1000 y 1/10.000, según el método de las
diluciones sucesivas y usando una pipeta distinta y estéril para cada situación.
Método de las diluciones sucesivas y valoración según el NMP
La técnica de las diluciones sucesivas y la valoración según el NMP es un método
de enumeración indirecta, basado en la interpretación estadística del crecimiento, o
no crecimiento, observado en varias series de tubos, inoculados con volúmenes
decrecientes de la muestra de agua, después de la inoculación e incubación
adecuadas, es necesario realizar las diluciones suficientes para ello. El número de
diluciones a realizar dependerá del grado de contaminación de la muestra.
Objetivo: El objetivo principal de la técnica es el desarrollo, identificación y
cuantificación de los microorganismos que crecen en un determinado medio de
cultivo.
En la tabla adjunta se detalla las diluciones recomendadas para la aplicación del
método del número más probable, según el microorganismo considerado y el grado
de contaminación del agua.
21
TIPO DE AGUA COLIFORMES TOTALES COLIFORMES FECALES
AGUA RESIDUAL 102 103 104 105 106 107 …. 102 103 104 105 106 107 ….
AFLUENTE SECUNDARIO 102 103 104 105 106 …. 102 103 104 105 106 ….
El agua problema se siembra en el caldo lauril triptosa o lauril sulfato que contiene
lactosa, que permite el enriquecimiento e identificación de las bacterias coliformes.
La lactosa presente es fermentada produciendo gas (detectado en la campana de
Durham) y ácido (detectado por el cambio de color del medio).
El objeto es estudiar la posible presencia de bacterias del grupo coliformes indicativa
de posible contaminación fecal. Tomando las diluciones realizadas en la preparación
de la muestra se procede a la siembra en serie de tres tubos, estos estarán provisto
de campanas Durham para evidenciar el desarrollo de gas como producto de la
fermentación de la lactosa, se siembran tantas series de tres tubos como número
de diluciones sean necesarias, una vez inoculados los tubos por las diluciones
requeridas se proceden a Incubar a 37 °C durante 24 horas.
Colimetría presuntiva (Lectura): Se consideran tubos positivos aquellos en los
que aparece formación de turbiedad y formación de gas atrapado en la campana de
Durham. Los tubos negativos se incuban otras 24 h. La valoración se realiza según
la tabla del NMP. La tabla indica el número más probable de microorganismos
presentes en 100 ml de agua teniendo en cuenta los tubos en que hay crecimiento,
o no crecimiento, así como las diluciones realizadas.
Procedimiento
1. De cada tubo considerado positivo de la terna utilizada para la lectura del NMP
en la determinación de coliformes totales, se toma un inoculo de muestra (0.1 ml)
con una pipeta pasteur o 3 asadas (con asa en anillo) y se inocula en caldo verde
brillante bilis al 2% y paralelamente en caldo EC para determinar el desarrollo a
partir de la fermentación de lactosa (selectivo y diferencial para coliformes).
2. Incubar a 37 °C y a 44.5°C respectivamente durante 24 y los tubos con lectura
negativo a su crecimiento se reincuban 24 horas adicionales, los incubados a 37°C
22
confirmará la presencia de coliformes totales y los incubados a 44.5°C la presencia
de coliformes fecales.
Colimetria confirmativa (Lectura). En el medio Verde brillante, se considerará que
hay crecimiento y fermentación de lactosa si se observa turbiedad y formación de
gas en la campana de Durham después de incubar a 37,0 ± 0,2 °C durante 48 ± 2
horas.
En el medio EC, se considerará que hay crecimiento y fermentación de lactosa si se
observa turbiedad y formación de gas en la campana de Durham después de incubar
a 44,5 ± 0,2 °C durante 48 ± 2 horas.
La valoración o reporte se realiza según la tabla del NMP. La tabla indica el número
más probable de microorganismos presentes en 100 ml de agua teniendo en cuenta
los tubos en que hay crecimiento, o no crecimiento, así como las diluciones
realizadas, estableciendo un número probable de desarrollo producto de la
combinación de tubos positivos multiplicado por la dilución en que se observa el
desarrollo.
Método Presencia Ausencia para determinación de patógenos
La técnica Presencia Ausencia consiste en un método de detección directo, basado
en el enriquecimiento de la muestra en una porción de caldo a triple concentración
a fin de favorecer el desarrollo de microorganismos patógenos. La interpretación es
la presencia o ausencia del microorganismo investigado.
Objetivo: El objetivo principal de la técnica es el desarrollo y detección de
microorganismos patógenos en un medio de cultivo enriquecido y su posterior
aislamiento para su identificación.
Procedimiento
1. Sembrar 2 partes de muestra en investigación en una parte de Caldo PA a triple
concentración con campana de Durham, luego se procede a incubar a 35°C +/-
2°C por 48 horas al cabo de los cuales de procede a realizar la lectura.
23
2. Tomando en consideración el objetivo de microorganismos investigado, se
procede con los indicativos de turbiedad y gas para bacterias gran negativas,
procediendo a su aislamiento en agares diferenciales.
3. Para la investigación de Escherichia coli, y otras enterobacterias se toma usa
asada del cultivo que evidencie desarrollo microbiano característico (turbiedad y
formación de gas) u otra característica particular de otros microorganismos
(Pseudomona sp.) y de estriar en medios diferenciales como Mac Conkey, SS,
XLD, VRBG, procediendo a su incubación 35 °C +/- 2°C x 24 horas.
4. Pasadas las 24 horas se seleccionan colonias características al
microorganismos en estudio y se somete a siembre en medios de cultivo para
bioquímica (TSI, LIA, INDOL, UREA, Citrato) a fin de identificar el género del
microorganismos en desarrollo.
5. El resultado se reporta como Presencia o Ausencia del microorganismo
investigado por 100 ml de muestra.
2.4 Análisis parasitológicos de aguas y suelos.
Se eligieron dos técnicas para la detección de huevos, quistes y otras formas de
parásitos intestinales, para los efectos las muestras tomadas en los puntos de
muestreo se concentraron mediante centrifugación, obteniendo sedimentos los
mismos que fueron sometidos a las técnicas siguientes:
Técnica de Centrifugación - Flotación con NaCl: indicadas para concentrar huevos
de helmintos ya que por su densidad flotan fácilmente cuando se suspenden en una
solución de alta concentración salina.
Centrifugación - Sedimentación con solución acética formolada:
preferentemente para concentrar quistes de protozoarios, mediante el uso de
soluciones salinas de baja densidad.
Ambas se fundamentan en que, al encontrarse irregularmente dispersos en las aguas
residuales y muestras de suelos, es necesario concentrar los elementos parasitarios.
Se introdujeron modificaciones dado que las muestras contenían gran cantidad de
sedimentos.
24
Para el caso de muestras de suelos, se trabajó con 100gr de muestras y se
suspendieron en 900 ml de agua destilada estéril para lograr una emulsión, tratando
la muestra de la misma forma que las muestras de aguas residuales.
Para el análisis de vegetales provenientes de campos de cultivo regados con aguas
negras, se procede a realizar un lavado de 100 gr de muestra en 900 ml de agua
destilada estéril, tratando la solución de lavado de la misma la detallada líneas arriba.
Una vez obtenidos los sedimentos y sobrenadantes por ambos métodos de realizaron
montajes en laminas portaobjetos con su cubre objeto y se procedió a la observación
microscópica.
2.5 Análisis microbiológico de establecer la carga microbiana ambiental.
Método para establecer la carga microbiana de ambientes Objetivo: El objetivo principal de la técnica es captar los microorganismos presentes
en el área de influencia determinado en el muestreo a fin de establecer las
implicancias de su presencia con los hechos investigados.
Estos análisis de investigación explorativo pueden aplicarse también cuando se trata
de investigar riesgos asociados a la calidad de los productos lo que constituye una
infracción a la ley o para establecer riesgos asociados a la salud del personal que
labora en estas áreas, para lo que se toma muestras en locales de producción, tanto
en las diferentes fases de la transformación como sobre el producto terminado, que
aún no está comercializado o que está en el comercio. Considerando que estas
muestras no reflejan las características del lote, el criterio de selección de un
producto que evidencia ciertas modificaciones de sus características, debe ser bien
sustentado o en centro de labores donde las condiciones reinantes están en
contacto con los trabajadores de una determinada área en estudio.
Procedimiento
1. Una vez establecido los puntos de muestreo de acuerdo a lo estipulado líneas
arriba, se marcan o identifican las placas y se procede a colocar las placas con
25
medios de cultivo para la investigación de aerobios mesófilos y mohos y
levaduras.
2. El muestreo se basa principalmente en la exposición de placas (apertura de las
placas) con agar nutritivo para la captación de microorganismos heterótrofos
viables y placas con agar Sabouraud para el desarrollo de mohos y levaduras,
dicha exposición se realiza por un tiempo de 15 minutos, al cabo del cual las
placas se cierran y se recogen, asegurándose que su disposición evite la
captación de contaminantes microbianos no propios del lugar de muestreo, se
trasladan a los laboratorios en cadena de frio.
3. Ingresadas al laboratorio las muestras se incubación a la temperaturas para
favorecer el desarrollo de microorganismos heterótrofos (30°C+/-2°C) por 72
horas y para mohos y levaduras a (23°C +/-2°C) por 120 horas.
4. Las lecturas se realizan haciendo un recuento directo de las unidades
formadoras de colonia (ufc) que se evidencian sobre el medio de cultivo, para
ambos casos.
5. En el caso de mohos y levaduras, y para la investigación de patógenos que
condicionen enfermedades ocupacionales, se realiza montajes para ser
observados en el microscopio a fin de identificar los géneros causantes de
afecciones pulmonares, alérgicas y/o dérmicas, destacando entre ellos los
géneros Penicullium sp, Aspergillus sp, Alternaria sp, etc.
6. Los resultados de los análisis se reportan estableciendo el recuento de las UFC
por 15 minutos de exposición de las placas por el área del medio de cultivo
expuesto para la captación de las formas microbianas.
7. El muestreo debe realizarse en condiciones normales de trabajo de los operarios
para favorecer la proliferación de los microorganismos de interés o investigados.
26
CAPITULO III
RESULTADOS
REPORTE DE TOMA Y ANALISIS DE MUESTRAS DE AGUAS AMBIENTALES
ENTRE LOS AÑOS 2017 Y 2018.
TABLA N° 1.
FUENTE: MEMORIA ANUAL - DPTO. BIOLOGIA FORENSE – DIVLACRI - DIRCRI PNP 2017 – 2018.
GRAFICO N° 1.
FUENTE: MEMORIA ANUAL - DPTO. BIOLOGIA FORENSE – DIVLACRI - DIRCRI PNP 2017 – 2018.
2017 2018
AGUAS DE EFLUENTES DE EMPRESAS 14 19 15
AGUAS RECREACIONALES 12 16 14
AGUAS RESIDUALES 14 21 11
SUELOS AGRICOLAS 21 26 42
N° DE CASOS
N° DE MUESTRAS ANALIZADAS
TIPO DE MUESTRAS
14
12
14
21
19
16
21
26
15
14
11
42
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
AGUAS DE EFLUENTES DE EMPRESAS
AGUAS RECREACIONALES
AGUAS RESIDUALES
SUELOS AGRICOLAS
CASOS ATENDIDOS Y MUESTRAS AMBIENTALES PROCESADAS - 2017 -2018
N° DE CASOS N° DE MUESTRAS ANALIZADAS 2018 N° DE MUESTRAS ANALIZADAS 2017
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° MUESTRAS AMBIENTALES PROCESADAS ENTRE EL 2017-2018. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y ECOLOGIA FORENSE - DIVLACRI - DIRCRI PNP, SUMANDO UN TOTAL DE 82 CASOS PERITADOS O ATENDIDOS HACIENDO UN TOTAL DE 143 MUESTRAS DE EFLUENTES DE EMPRESAS, AGUAS RECREACIONALES, AGUAS RESIDUALES Y SUELOS AGRICOLAS.
27
TABLA N° 1.1. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE EFLUENTES DE EMPRESAS. 2017 - 2018
GRAFICO N° 1.1. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE EFLUENTES DE EMPRESAS – 2017 - 2018
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
EMPRESAS DE MANUFACTURA DE PAPEL 0 0 2 1 6.67
CAMALES DE BENEFICIO DE AVES 8 3 6 4 46.67
CAMALES DE BENFICIO DE EQUINOS 4 25 2 26.67
CAMALES DE BENFICIO DE VACUNOS Y PORCINOS 2 1 6 2 20.00
EFLUENTES DE EMPRESAS
2017 2018 % CASOS ATENDIDOS 2017 - 2018
0
84 20
3 2 126 5 6
14 2 2
6.67
46.67
26.67
20.00
05
101520253035404550
EMPRESAS DE MANUFACTURA DE PAPEL CAMALES DE BENEFICIO DE AVES CAMALES DE BENFICIO DE EQUINOS CAMALES DE BENFICIO DE VACUNOS YPORCINOS
EVALUACIÓN Y ANÁLISIS DE EFLUENTES DE EMPRESAS - 2017-2018
2017 MUESTRAS PROCESADAS 2017 CASOS ATENDIDOS 2018 MUESTRAS PROCESADAS
2018 CASOS ATENDIDOS % CASOS ATENDIDOS 2017 - 2018
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRAN LOS CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE EFLUENTES DE EMPRESAS PROCESADAS ENTRE EL 2017 Y 2018, HACIENDO UN TOTAL DE 15 CASOS Y 33 MUESTRAS PROCESADAS, DE LAS CUALES EL 6.67% CORRESPONDEN A MUESTRAS DE EFLUENTES DE INDUSTRIAS DE PAPEL, 46.67% A CENTROS DE BENEFICIO DE AVES, 26,67% A CENTRO DE BENEFICIO DE GANADO EQUINO Y EL 20% A CENTROS DE BENEFICIO DE VACUNOS Y PORCINOS. DE LOS RESULTADOS SE REPORTA EL 93.33% DE MUESTRAS CON COLIFORMES FECALES, ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA SP, PSEUDOMONA AERUGINOSA, HUEVOS DE TAENIA SP, TRICHURIS TRICHURA, QUISTES DE GIARDIA LAMBLIA Y LARVAS DE UNCINARIAS, A EXCEPCIÓN DE LAS MUESTRAS CORRESPONDIENTES A LOS EFLUENTES DE LA INDUSTRIA PAPELERA QUE NO REPORTARON HALLAZGOS RELACIONADOS CON LOS HECHOS INVESTIGADOS.
28
TABLA N° 1.2. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE AGUAS RECREACIONALES
PROCESADAS - 2017 - 2018.
GRAFICO N° 1.2. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE AGUAS RECREACIONALES PROCESADAS 2017-2018
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° MUESTRAS DE MUESTRAS RECREACIONALES PROCESADAS ENTRE EL 2017 Y 2018, HACIENDO UN TOTAL DE 14 CASOS ATENDIDOS Y 28 MUESTRAS PROCESADAS, DE LOS CUALES EL 78.57% CORRESPONDE A MUESTRAS DE SERVICIO DE PISCINAS Y 21.43% A PISCINAS DEDICADAS A ESCUELA DE NATACIÓN, HECHOS QUE SE INVESTIGAN GENERALMENTE EN EPOCAS DE VERANO, DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS EL 54.54% DEL LAS MUESTRAS CORRESPONDIENTES AL LOS SERVICIOS DE RECREACIÓN (PISCINAS) Y EL 33.33% CORRESPONDIENTES A PISCINAS DEDICADAS A CLASES DE NATACIÓN REPORTARON INDICADORES DE CONTAMINACIÓN DEL GRUPO COLIFORMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES, COINCIDENTEMENTE CON MUESTRAS QUE REPORTARON UN NIVEL DE CLORO LIBRE RESIDUAL POR DEBAJO DE 0.5 PPM.
83
158
78.57
4 2 1 1
21.43
05
101520253035404550556065707580
MUESTRAS PROCESADAS CASOS ATENDIDOS MUESTRAS PROCESADAS CASOS ATENDIDOS
2017 2018 % CASOS ATENDIDOS
AGUAS USADAS EN PISCINA (RECREACIÓN / ESCUELA NATACION)
RECREACIÓN ESCUELA DE NATACIÓN
ACUMULADO 2017 - 2018
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
RECREACIÓN 8 3 15 8 78.57
ESCUELA DE NATACIÓN 4 2 1 1 21.43
% CASOS ATENDIDOS 2017-2018
AGUAS USADAS EN PISCINAS2017 2018
29
TABLA N° 1.3. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE AGUAS RESIDUALES PROCESADAS 2017 - 2018.
GRAFICO N° 1.3. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE AGUAS RESIDUALES PROCESADAS 2017 - 2018.
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° MUESTRAS DE MUESTRAS DE AGUAS RESIDUALES PROCESADAS ENTRE EL 2017 Y 2018, HACIENDO UN TOTAL DE 10 CASOS ATENDIDOS Y 29 MUESTRAS PROCESADAS, DE LOS CUALES EL 60.00% CORRESPONDE A MUESTRAS DE AGUAS USADAS EN REGADIO DE CULTIVOS Y UN 40.00% A AGUAS USADAS EN EL RIEGO DE PARQUES Y JARDINES. LOS REPORTES MICROBIOLOGICOS CONFIRMAN LA PRESENCIA DE COLIFORMES FECALES, SALMONELLA SP, CLOSTRIDIUM SP, PSEUDOMONA AERUGINOSA, HUEVOS DE TAENIA SP, TRICHURIS TRICHURA, ASCARIS LUMBRICOIDES, QUISTE DE GIARDIA LAMBLIA, ENTAMOEBA COLI Y ENTAMOEBA HISTOLYTICA, ADEMAS DE LARVAS DE UNCINARIAS EN 100% DE LAS MUESTRAS ANALIZADAS.
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
REGADIO DE CULTIVOS 10 3 9 3 60.00
RIEGO DE PARQUES Y JARDINES 4 2 6 2 40.00
AGUAS RESIDUALES2017 2018 % CASOS
ATENDIDOS 2017-2018
10
3
9
3
60.00
4
2
6
2
40.00
0 10 20 30 40 50 60 70
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
2017
2018
% C
ASO
SAT
END
IDO
S 20
17-
2018
AGUAS RESIDUALES USADAS EN PRACTICAS DE RIEGO
RIEGO DE PARQUES Y JARDINES REGADIO DE CULTIVOS
30
TABLA N° 1.4. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS DE SUELOS AGRICOLAS PROCESADAS - 2017 - 2018.
GRAFICO N° 1.4. CASOS ATENDIDOS Y N° DE SUELOS AGRICOLAS PROCESADAS - 2017 - 2018.
13
10
15
8
42.86
8
11
11
13
57.14
0 10 20 30 40 50 60
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
2017
2018
% C
ASO
SAT
END
IDO
S
AGUAS RESIDUALES USADAS EN PRACTICAS DE RIEGO
VEGETALES CULTIVADOS TERRENOS AGRICOLAS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
TERRENOS AGRICOLAS 13 10 15 8 42.86
VEGETALES CULTIVADOS 8 11 11 13 57.14
AGUAS RESIDUALES2017 2018
% CASOS ATENDIDOS
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° MUESTRAS DE MUESTRAS DE SUELOS AGRICOLAS PROCESADAS ENTRE EL 2017 Y 2018, HACIENDO UN TOTAL DE 42 CASOS ATENDIDOS Y 47 MUESTRAS PROCESADAS, DE LOS CUALES EL 42.86% CORRESPONDE A MUESTRAS DE TERRENOS AGRICOLAS Y 57.14% A MUESTRAS DE VEGETALES REGADOS CON AGUAS RESIDUALES. LOS REPORTES MICROBIOLOGICOS CONFIRMAN LA PRESENCIA DE COLIFORMES FECALES, SALMONELLA SP, CLOSTRIDIUM SP, PSEUDOMONA AERUGINOSA, HUEVOS DE TAENIA SP, TRICHURIS TRICHURA, ASCARIS LUMBRICOIDES, QUISTE DE GIARDIA LAMBLIA, ENTAMOEBA COLI Y ENTAMOEBA HISTOLYTICA, ADEMAS DE LARVAS DE UNCINARIAS EN 100% DE LAS MUESTRAS ANALIZADAS.
31
REPORTE DE TOMA Y ANALISIS DE MUESTRAS DE CARGA MICROBIANA
EN AMBIENTES CERRADOS ENTRE LOS AÑOS 2017 Y 2018.
TABLA N° 2. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS PARA ESTABLECER LA CARGA MICROBIANA EN AMBIENTES CERRADOS 2017 - 2018.
GRAFICO N° 2. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS ANALIZADAS PARA ESTABLECER LA CARGA
MICROBIANA EN AMBIENTES CERRADOS - 2017 – 2018.
FUENTE: MEMORIA ANUAL - DPTO. BIOLOGIA FORENSE – DIVLACRI - DIRCRI PNP 2017 – 2018.
2017 2018
AREAS DE PROCESO - PLANTAS DEALIMENTOS
35 27 38
ALMACENES DE PRODUCTOS 22 18 25
ARCHIVOS DOCUMENTARIOS 22 18 17
BUSQUEDA DE PATOGENOS EN CENTROS DEATENCIÓN MEDICA
8 12 8
TOMA DE MUESTRA EN AMBIENTES CERRADOS
N° DE MUESTRAS ANALIZADAS
N° DE CASOS
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° MUESTRAS AMBIENTALES PROCESADAS ENTRE EL 2017-2018. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y ECOLOGIA FORENSE - DIVLACRI - DIRCRI PNP, SUMANDO UN TOTAL DE 88 CASOS PERITADOS O ATENDIDOS HACIENDO UN TOTAL DE 162 CORRESPONDIENTES A MUESTRAS TOMADAS EN ESTABLECIMIENTO DE PROCESO, ALMACENES DE PRODUCTOS, ARCHIVOS DOCUMENTARIOS Y BUSQUEDA DE PATOGENOS EN CENTROS DE ATENCIÓN MEDICA.
32
TABLA N° 2.1. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN ESTABLECIMIENTOS DE PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS – 2017-2018.
GRAFICO N° 2.1. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN ESTABLECIMIENTO DE
PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS – 2017 -2018.
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
ESTABLECIMIENTOS DE ALIMENTACIÓN COLECTIVA - COCINA RESTAURANTES
21 10 15 9 50.00
AREAS DE PRODUCCIÓN DE PRODUCTOS NATURALES 8 4 3 4 21.05
AREAS DE PRODUCCIÓN DE PANADERIAS 4 4 5 2 15.79
AREAS DE PROCESAMIENTO DE CARNES 2 3 4 2 13.16
TOMA DE MUESTRAS EN AMBIENTES DE PRODUCCIÓN DE ALIMENTOS
2017 2018% CASOS
ATENDIDOS
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS PROCESADAS DE LA CARGA MICROBIANA AMBIENTAL EN ESTABLECIMIENTOS DEDICADOS AL PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS ENTRE LOS AÑOS 2017 Y 2018, DE LOS CUALES EL 50.00% CORRESPONDE A ESTABLECIMIENTOS DE ALIMENTACIÓN COLECTIVA, 21.05% A AMBIENTES DE PRODUCCIÓN DE PRODUCTOS NATURALES, 15.79% A AMBIENTES DE PRODUCCIÓN DE PANADERIAS Y 13.16% A AREAS DE PROCESAMIENTO DE PRODUCTOS CARNICOS. DE LOS RECUENTOS MICROBIOLOGICOS OBTENIDOS EL 100% DE LAS MUESTRAS TOMADAS PARA LAS ÁREAS DE FABRICACIÓN DE PRODUCTOS NATURALES Y PANADERIAS REPORTAN VALORES ≥ 10 X 101 ufc/15 min/69 cm2 PARA LOS HETEROTROFOS VIABLES Y ≥ 80 ufc/15 min/69 cm2 PARA LOS MOHOS Y LEVADURAS; EL 80% DE LAS MUESTRAS EN PROMEDIO REPORTAN VALORES ELEVADOS PARA ESTABLECIMIENTOS DE ALIMENTACIÓN COLECTIVA Y ESTABLECIMIENTOS QUE PROCESAN CARNICOS.
33
TABLA N° 2.2. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN ALMACENES 2017 - 2018.
GRAFICO N° 2.2. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN ALMACENES 2017 - 2018.
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
ALMACENES DE MATERIA PRIMA Y PRODUCTO TERMINADO
14 8 13 7 60.00
CAMARAS DE FRIO - REFRIGERACIÓN 8 6 5 4 40.00
DETERMINACIÓN DE LA CARGA MICROBIANA AMBIENTAL EN ALMACENES
2017 2018% CASOS
ATENDIDOS
14
8
13
7
60.00
8
6
5
4
40.00
0 10 20 30 40 50 60 70
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
2017
2018
% C
ASO
SAT
END
IDO
S
CARGA MICROBIANA AMBIENTAL DE ALMACENES
CAMARAS DE FRIO - REFRIGERACIÓN ALMACENES DE MATERIA PRIMA Y PRODUCTO TERMINADO
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS PROCESADAS DE LA CARGA MICROBIANA AMBIENTAL EN ALMACENES DE MATERIAS PRIMAS Y PRODUCTOS TERMINADOS ENTRE LOS AÑOS 2017 Y 2018, DE LOS CUALES EL 60.00% CORRESPONDE A ALMACENES DE MATERIA PRIMA Y PRODUCTO TERMINADO Y 40.00% A CAMARAS DE FRIO / AMBIENTES REFRIGERADOS. DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS EL 60 % DE LAS MUESTRAS EN PROMEDIO REPORTAN VALORES ≥ 50 ufc/15 min/69 cm2 .
34
TABLA N° 2.3. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN ARCHIVOS DOCUMENTARIOS 2017 - 2018.
GRAFICO N° 2.3. CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN ARCHIVOS DOCUMENTARIOS. 2017 - 2018
81
6 3
23.53
126
126
70.59
2 1 0 05.88
0
10
20
30
40
50
60
70
80
MUESTRASPROCESADAS
CASOS ATENDIDOS MUESTRASPROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
CARGA MICROBIANA EN ARCHIVOS
ARCHIVOS BIBLIOTECAS ARCHIVOS DOCUMENTARIOS ARCHIVOS OTROS
20172017 2018
2018% CASOS
ATENDIDOS 2017-2018
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
ARCHIVOS BIBLIOTECAS 8 1 6 3 23.53
ARCHIVOS DOCUMENTARIOS 12 6 12 6 70.59
ARCHIVOS OTROS 2 1 0 0 5.88
CARGA MICROBIANA EN ARCHIVOS
2017 2018% CASOS
ATENDIDOS
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS PROCESADAS DE LA CARGA MICROBIANA EN ARCHIVOS DOCUMENTARIOS ENTRE LOS AÑOS 2017 Y 2018, DE LOS CUALES EL 23.53% CORRESPONDE A ARCHIVOS DE BIBLIOTECAS, EL 70.59% A ARCHIVOS DOCUMENTARIOS Y EL 5.88% A ARCHIVOS OTROS. DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS EL 100% DE LOS CASOS EVALUADOS REPORTAN LA PRESENCIA DE MOHOS EN VALORES PROMEDIO DE 40 ufc/15min/69 cm2 , IDENTIFICÁNDOSE ENTRE LOS MOHOS LOS GENEROS ASPERGILLUS SP, ALTERNARIA SP Y PENICILLIUM SP, VINCULADOS AL DESARROLLO DE ENFERMEDADES OCUPACIONALES COMO LA MICOSIS PULMONAR, ALERGIAS, DERMATITIS, ETC.,
35
TABLA N° 2.4 CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN CENTROS DE ATENCIÓN MEDICA. 2017 - 2018.
GRAFICO N° 2.4 CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS TOMADAS EN CENTROS DE ATENCIÓN MEDICA. 2017 - 2018.
3 1 2 1
25.00
0 0 2 1
12.50
52
83
62.50
0
10
20
30
40
50
60
70
MUESTRAS PROCESADAS CASOS ATENDIDOS MUESTRAS PROCESADAS CASOS ATENDIDOS
CARGA MICROBIANA DE CENTROS DE ATENCIÓN MEDICA
PATOGENOS EN QUIROFANOS PATOGENOS EN UCI PATOGENOS AREA DE QUEMADOS
2017 2018 20182017
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
MUESTRAS PROCESADAS
CASOS ATENDIDOS
PATOGENOS EN QUIROFANOS 3 1 2 1 25.00
PATOGENOS EN UCI 0 0 2 1 12.50
PATOGENOS AREA DE QUEMADOS 5 2 8 3 62.50
CARGA MICROBIANA EN ESTABLECIMIENTO DE ATENCIÓN
MEDICA
2017 2018 % CASOS ATENDIDOS 2017-2018
LA TABLA Y GRAFICO MUESTRA LOS CASOS ATENDIDOS Y N° DE MUESTRAS PROCESADAS DE BUSQUEDA DE PATÓGENOSS EN CENTROS DE ATENCIÓN MEDICA ENTRE LOS AÑOS 2017 Y 2018, DE LOS CUALES EL 25.00% CORRESPONDE A MUESTREOS EN QUIROFANOS, 12.50% A UNIDAD DE CUIDADOS INTENSIVOS Y 62.50% A SALA DE QUEMADOS. DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS EL 100% DE LOS CASOS EVALUADOS NO REPORTAN LA PRESENCIA DE PATOGENOS RELACIONADOS CON LOS CASOS INVESTIGADOS.
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IV. CONCLUSIONES
1. Durante el 2017 y 2018 en la ciudad de Lima y periféricos, se realizó
muestreos y análisis de muestras de aguas ambientales, suelos, y muestreos
para establecer la carga microbiana en ambientes cerrados, realizándose
análisis microbiológicos y parasitológicos como herramienta científica en
investigaciones de denuncias por delitos contra la salud pública y
ocupacional, a fin de proporcionar los medios probativos para establecer la
ocurrencia de los mismos, tal como se expone en el Capítulo III. Resultados.
2. De 82 casos peritados entre el 2017 y 2018 referidos al uso indebido de
aguas ambientales, el 89% de los mismos han sido sustentados
científicamente mediante los análisis microbiológicos y parasitológicos,
representando el criterio técnico a los entes competentes para la adopción
de las medidas correctivas, determinándose la presencia en dichas muestras
de indicadores de contaminación fecal, Escherichia coli, Salmonella sp.,
Clostridium sp., Pseudomona aeruginosa, huevos de Taenia sp.,
Trichuris truchura, Ascaris lumbricoides, quistes Giardia lamblia,
Entamoeba coli, Entamoeba hystolitica y larvas de uncinarias,
microorganismos que se relacionan directamente con la salud pública y
ocupacional.
3. En cuanto a la determinación de cargas microbianas de 88 casos peritados
en el mismo periodo de tiempo, el 74% de los casos aproximadamente
alertaron de cargas microbianas ambientales que pueden influir en los
procesos, almacenamiento de productos o en riesgos asociados a la salud
del personal, el 17% de ellos están referidos a cargas microbianas en
ambientes de archivos donde se aisló mohos de los géneros Aspergillus sp,
Alternaria sp y Penicillum sp, relacionados directamente con
enfermedades ocupacionales, proporcionando un criterios científico para la
adopción de medidas correctivas o preventivas.
39
4. Si bien, tanto para la investigación del uso indebido de aguas ambientales y
carga microbiana de ambientes la microbiología y parasitología han servido
para proporcionar los medios probativos de la ocurrencia de delitos; también
su aplicación a servido de base para desvirtuar en algunos casos las
implicancias penales sobre las que se investigan los hechos denunciados.
40
BIBLIOGRAFIA
1. Antonio Santos de la Sen. Ignacio Belda Aguilar. Luis Gamella Pozuelo.
Alejandro Alonso Conde. Domingo Marquina Díaz. Microbiología Forense.
Reduca (Biología). Serie Microbiología. 5 (5): 23-45, 2012. 2. José Antonio Novais. Departamento de Microbiología III. Facultad de Ciencias
Biológicas. Universidad Complutense de Madrid., 2. 28040 Madrid.
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Ambiental para el Agua. Perú, Julio, 2008.
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Ciencias Forenses en la Investigación Criminal. Microbiología en la Investigación
Criminal.
5. María Gonzales Gonzales. Sergio Chiroles Rubalcaba. Uso seguro y riesgos
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Pública. 37(1) 61-73.
6. Nadia Rodríguez y otros. Contaminación del Suelo una realidad oculta.
Organización de la Naciones Unidad para la Alimentación y Agricultura. Roma,
FAO. 2019.
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Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. NTP 409, Ministerio del
trabajo y Asuntos Sociales. España.
9. Jhorma J. Medina A., Stephanie De La Hoz P. Evaluación del Comportamiento
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Barranquilla Atlántico. Tesis para Optar el Título Profesional de Ingeniero
Ambiental. Barranquilla, Colombia, 2018
10. Gregorio Pérez-Cordón, María J. Rosales, Renzo A. Valdez, Franklin Vargas-
Vásquez, Ofelia Córdova, Detección de parásitos intestinales en aguas y
alimentos. Trujillo, Perú. Rev. Perú Med. Exp. Salud Publica. 2008; 25(1): 144
41
11. Verónica L. Enriquez 2 Adriana E. Soria 2 María C. Salomón. Monitoreo de
parrasitos patógenos en efluentes agroindustriales. Rev. FCA UNCuyo. Tomo
XXXV. N° 2. Año 2003. 25-32
42
ANEXO 1
Tabla del NMP, usada para establecer el reporte de los resultados ensayados por
la técnica de tubos múltiples, serie de tres tubos.
43
ANEXO 2
TECNICAS MODIFICADAS PARA DETECCIÓN DE HUEVOS, QUISTES Y LARVAS DE PARASITOS INTESTINALES
Sobrenadante
MUESTRA
CENTRIFUGAR SEDIMENTACIÓN
Resuspender
Centrifugar
Añadir solución acética formolada
Añadir éter
Centrifugar
Sedimento
Observación microscópica Observación microscopica
Dejar reposar por 20 min.
Llenar con sol. NaCl.
Colocar portaobjetos
Colocar en tubos
Resuspender en sol. NaCl
FLOTACIÓN
SOBRENADANTE
Cualquiera sea el método de concentración utilizado, la identificación del agente se logra por el análisis de sus características morfológicas, observando en microscopio (100X y 400X) todo el material fresco concentrado (3)E
44
ANEXO 3
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46
ANEXO FOTOGRAFICO
Vistas fotográficas de diversos casos en los que con la aplicación de la Microbiología y
Parasitología se ha establecido la ocurrencia de delitos.
Las actividades de muestreo realizadas por los Peritos Biólogos de la PNP, son
solicitadas por el Ministerio Público, Poder judicial, dependencias especializadas
de la PNP. En las fotos se observa la toma de muestras a aguas residuales
usadas en para el riego de cultivos de tallo corto, los mismos que cosechados
van directamente a los mercados locales, representando riesgo para la salud
pública.
47
El riego de cultivos con aguas residuales constituyen un riesgo de enfermedades para los
consumidores, como riesgos ocupacionales para el personal que labora en actividades
agrícolas, reportándose indicadores de contaminación fecal, Escherichia coli, Salmonella sp.,
Clostridium sp., Pseudomona aeruginosa, huevos de Taenia sp., Trichuris truchura,
Ascaris lumbricoides, quistes Giardia lamblia, Entamoeba coli, Entamoeba hystolitica y
larvas de uncinarias
48
La inadecuada disposición de residuos industriales, como por ejemplo los efluentes
de centros de beneficio de aves y ganado representan una fuente de proliferación de
plagas y a través de ellas la diseminación de enfermedades a las poblaciones
aledañas, generando riesgos para la salud publica e igualmente ocupacional para las
personas que inescrupulosamente hacen uso de estas fuente de aguas no tratadas.
49
El inadecuado cumplimiento de los procedimientos de limpieza y desinfección y las
malas prácticas de almacenamiento, condicionan a los productos almacenados a la
pérdida de su calidad, condicionando la calidad sanitaria por la pérdida de su vida útil.,
condiciones que coadyuvan a responsabilidades contra la salud pública por la
comercialización de productos no aptos para consumo y comercialización.
50
En ambientes cerrados, la carga microbiana ambiental presenta un factor de vital
importancia parala salud ocupacional de los trabajadores de estas áreas, debido a que los
factores como el polvo, material particulados, bioaerosoles, humedad, etc, son factores
que condicionan el desarrollo de microorganismos asociados con enfermedades
ocupacionales como micosis pulmonares, alergias, enfermedades de las vias respiratorias,
entre otras, por lo que su control y prevención radica en su hallazgo mediante le
determinación de la carga microbiana ambiental.
51
La falta de supervisión por los entes reguladores de las Normas vigentes condiciona a la trasgresión de los parámetros establecidos para la protección del medio ambiente y la salud pública. La mayoría de los casos investigados de este tipo se encuentran en la ciudad o cerca a ciudades, condicionando con ello la calidad de vida de la población y la diseminación de los contaminantes microbianos por vectores, atentando contra la salud pública.
52
Los métodos de exposición de placas han permitido relacionar las condiciones de salubridad de
plantas de proceso, carga microbiana en archivos, con posibles efectos sobre la calidad o vida útil
de los productos, como los efectos creados en trabajadores; sin embargo, se requiere un método
más efectivo que permita brindar un reporte más real de la contaminación ambiental en áreas
confinadas, por lo que se está implementando el muestreo por volumen de aire filtrado.