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Tinción de Gram y Morfología Bacteriana.

Miguel Ángel Ortiz Gil.

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• Bacteriólogo danés Christian Gram, 1884.

• Tinción diferencial

• Se fundamenta en la morfología celular bacteriana.

TINCION GRAM

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Técnica Gram:

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Diferenciación de Gram

positivo y Gram negativo • La pared celular de las bacterias Gram positivas posee

una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína).

• Por el contrario, la capa de las Gram negativas tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.

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• Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retención o el escape del colorante.

PARED CELULAR

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• La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.

¿QUE SUCEDE DURANTE LA TINCION DE GRAM?

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Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado fijación. Para bacterias, la fijación por el calor es lo más común, aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehído, ácidos y alcoholes.

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• Ya hemos visto que la tinción de GRAM aporta dos ideas básicas para la deficinión "taxonómica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tinción y la forma que presentan las células bacterianas.

• Esta diversidad depende de que la división de las células se dé a lo largo de uno, dos o tres ejes.

• Formas básicas en que se puede visualizar la morfología bacteriana en una tinción GRAM:

Morfología Bacteriana

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Cocos

• Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular. Diplococos, aparecen por pares. Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamaño

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Bacilos

• grandes variaciones morfológicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos.

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Espirales

• Utilizamos el término Pleomorfismo para referirnos a la adopción de diferentes formas en una misma especie.

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Bibliografía:

• MANUAL DE TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. M. V. Álvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA. 1990.

• DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO CLÍNICOS POR EL LABORATORIO. John Bernard Henry, Todd-Sanford-Davidsohn. Tomo I y II. 8ª Edición. Salvat Editores. 1988.

• DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. TEXTO Y ATLAS COLOR. Koneman, Allen, Dowell, Sommers. Editorial Médica Panamericana. 2ª Reimpresión. 1990.