tema .reistencia enzi a no fermentadores

7/25/2019 Tema .Reistencia Enzi a No Fermentadores

1/11

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

TEMA : MECANISMOS DE RESISTENCIA ENZIMATICA

Y NO ENZIMATICA A CARBAPENES EN BACTERIAS NO

FERMENTADORAS, MECANISMOS DE DETECCION

FENOTIPICA Y MOLECULAR

ALUMNA: SILVIA NUEZ MONTOYA.

CURSO: MICROBIOLOGIA

SEDE : TRUJILLO

FECHA : 19 DE MAYO DEL 2014.


2/11

En el grupo de los BGNNFBACILOS GRAMNEGATIVOS NO FERMENTADORES!existen especies de importancia clnica, pertenecientes a los gneros

P"#$%&'&()"* A+,(#-&)+-#/* S-#(&-/&&'&()"* B$/&3%#/,).

Actualmente, este grupo de bacterias ocasiona un problema de salud pblica,

principalmente la especie P. aeruginosa, debido a la notable incidencia en las

infecciones intrahospitalarias; adems ha mostrado elevada multirresistencia a

diferentes antibiticos.

MECANISMOS DE RESISTENCIA ENZIMATICA EN BGNNF

!e han descrito dos tipos de carbapenemasas con base en estudios moleculares, las

primeras son en"imas #ue poseen un residuo de serina en su sitio activo, ra"n por

la cual se han denominado carbapenemasas tipo serina $ el segundo grupo, al #ue

pertenece P"#$%&'&()" )#/$,(&") son en"imas #ue en su sitio activo

re#uieren de cationes divalentes, usualmente "inc, como cofactor para su actividaden"imtica; stas ltimas son las denominadas metalo%&%lactamasas .

L)" '#-)3&5653)+-)')")"incluidas en la clase ' tienen dos familias importantes,la ()* $ la )*P, $ aun#ue poseen ba+a homologa en su secuencia de aminocidos

aproximadamente -/0, tienen propiedades similares. Estas metalo%&%lactamasas

son transferibles puesto #ue su gran ma$ora se encuentran principalmente en

integrones tipo 1 $, en algunas ocasiones, se encuentran en plsmidos o

transposones. 2abitualmente, estas en"imas estn asociadas con otros genes de

resistencia ubicados en los mismos genes cassettes, lo cual les permite ser

resistentes a mltiples antibiticos. 3a primera metalo%&%lactamasas se aisl en

4apn en 1551, en una P. aeruginosa dentro de un plsmido $, para 1556, estaba

diseminada entre los bacilos .

3as metalo%&%lactamasas se caracteri"an por generar resistencia a los &%lactmicos

cefalosporinas, cefamicinas, carbapenem0, aminoglucsidos $ #uinolonas, $

presentan sensibilidad variable al a"treonam . Aun#ue el grado de resistencia a

imipenem vara, 7)* entre 8 mgdl $ 19: mg dl, la resistencia a cefta"idima es

actualmente, ambas familias de metalo%&%lactamasas estn ampliamente

diseminadas en cuanto a variedad de especies, aun#ue se hallan ms comnmente

en P. aeruginosa $ A. baumannii. 68 mgdl .

Por lo anterior, las metalo%&%lactamasas median un ma$or grado de resistencia

comparadas con las serin%carbapenemasas $ son ob+eto de una intensa bs#ueda

en el presente.


3/11

C3)",7+)+,8( )")%) #( 3) /&$#"-) %# A'3#/

7A?'APE@E*A!A!

M#-)3&5B53)+-)')""+)-,&(#" %,)3#(-#" -,&


4/11

L) B#-)3)+-)')") A'C, inducible a la P.)#/$,(&")es seme+ante a lade Enterobacter sp $ como tal crea resistencia a la ampicilina,amoxicilina $

cefalosporinas de espectro reducido, son fuertes inductores $ pueden ser

destruidos por esta en"ima ,consecuentemente esos microorganismospresentan resistencia clnica.

7efalosporinas de 9 $ - generacin son dbiles inductores pudiendo

mantener su actividad contra cepas #ue expresen esta en"ima por

induccin, pero no contra hiperproductoras. 3os carbapenemicos son fuertes

inductores $ sufren la accin de estas mismas en"imas.

S-#(&-/&&'&()" ')3-&=3,), tiene como expresin de origencromosomial e inducible. !e clasiCca en 'etalactamasas D?PF -% 73A!E '

$ no es inhibida por inhibidores de '%lactamicos cido

clavulanico,sulbactam,ta"obactam0. Esta clase ', de en"imas estcatalogada como "inc betalactamasa por#ue utili"a iones de Ginc0 por la

ruptura del anillo betalactamico. En particular, al contrario

de las otras betalactamasas presenta una fuerte actividad contra los

carbapenmicos.

7omo un patgeno oportunista, la !.maltop$lia ha aumentado su

importancia clnica. Esta especie se diferencia de las citadas en este grupo

por#ue su resistencia envuelve la produccin de dos betalactamasas

cromosmicas inducible, la 3%1 carbapenemasas $ 3%9 cefalosporinasa

,adems de factores intrnsecos.

3a 3%1 es una en"ima perteneciente a la 7lase ' $ hidroli"a a todos los

betalactamicos. 3a 3%9 es una cefalosporinas inusual perteneciente al grupo

9e de 'usch 7lase A0 serina betalactamasa #ue hidroli"a cefalosporinas $

monobactamicos #ue escapan de la accin de 3%1.

3as 'etalactamasas 3%1 $ 3%9 hacen parte del mismo sistema regulador,

sea sufren induccin como desreprecion, con relacin a !.maltoph$lia el

sulfametoxa"ol%trimetropin$ levoHoxacina son las drogas de eleccin para

su tratamiento.

L)" C)/)#(#')")" -,& "#/,() %# 3) +3)"# D&>)+,3,()")" !se hancaracteri"ado principalmente en A+,(#-&)+-#/ )$')(,,. El espectro deactividad entre todas las oxacilinas es bastante similar, puesto #ue

hidroli"an dbilmente imipenen $ meropenen, no hidroli"an ni

cefalosporinas de spectro extendido ni a"treonam, a excepcin de FIA 9J $

todas son predominantemente penicilinasas con gran poder hidrolitico

frente a Fxacilina. Adems son inhibidas por el cido clavulanico, a

excepcin de FIA 9- #ue es resistente. A pesar de #ue hasta la fecha las

oxacilinasas no han recibido tanta atencin como las 'etalactamasas, esimportante considerarlas como potencialmente peligrosas.


5/11

MECANISMOS DE RESISTENCIA NO ENZIMATICAS A CARBAPENES ENBACTERIAS NO FERMENTADORAS

1.5 DISMINUCI?N DE LA PERMEABILIDAD DEL ANTIBI?TICO ATRAV@S DE LA MEMBRANA E


6/11

EnP. aerugin!a* el sistema de Hu+o M#>AB5O/M#" capa" detransportar meropenem $ su expresin exagerada conduce a la elevacin de

la 7)* del antibitico. En A. )$')((,, los sistemas de Hu+o se handescrito mediando resistencia a las #uinolonas pero, hasta el momento, no

se han asociado con resistencia a los carbapenem.

.5 MODIFICACI?N DEL SITIO BLANCO

El sitio blanco de los carbapenem, $ de todos los L %lactmicos, son las

protenas unidoras de penicilinas PP0, macromolculas #ue hacen parte de

la membrana citoplasmtica $ participan en la sntesis de la pared

bacteriana. Estas protenas pueden sufrir modiCcaciones moleculares #ue

disminu$en su aCnidad por los L %lactmicos, pero #ue no afectan su

actividad funcional. Aun#ue la produccin de protenas unidoras de

penicilinas con ba+a aCnidad por los L %lactmicos no es un mecanismo deresistencia cmn entre los Dram negativos, el nmero de reportes se ha

incrementado en los ltimos aMos.

?ecientemente, enA. baumanniise describi #ue la ausencia de dosprotenas unidoras de penicilinas, una de J-,9 Bd PP9a0 $ otra de J,1 Bd

PP9b0, se relaciona con resistencia de ba+o grado a imipenem,

meropenem o ambos.

MECANISMO DE DETECCION FENOTIPICA PARABACILOS NOFERMENTADORES

TEST DE HODGE


7/11

Gn!F8 en 1 ml de agua molecular0 $ con ella impregnar el disco de imipenem de 1

g, el resto de la tcnica es similar a la anteriormente descrita para deteccin de

carbapenemasa .

2! #3 '-&%& %#3 E-#"- MBL* +&(","-,8 #( 3) $-,3,)+,8( %# -,/)"+&'#/+,)3#" $# &/ $( #>-/#'& #"-( ,'/#()%)" +&( ,',#(#'IP! ) %,;#/#(-#" +&(+#(-/)+,&(#" = &/ #3 &-/& +&( ,',#(#' EDTA IPI!. S# ,(-#//#-8 $() /$#) MBL &",-,) +$)(%& "#&"#/8 $() %,"',($+,8( 3& #( 3) CMI %#3 ,',#(#' #(/#"#(+,) %#3 EDTA #( /#3)+,8( +&( 3) CMI %# ,',#(#' ",( #3,(,,%&/. P)/) +&(7/')/ 3) /#"#(+,) %# MBL* ;$# (#+#")/,&&-#(#/ #3 /#"$3-)%& &",-,& #( )'&" -#"-* -)(-& #( #3 -#"- %#H&%# Z(SO4 +&'& #( #3 E-#"- MBL

TEST DE HODGE


8/11

TEST DE DOBLE DISCO DDST!


9/11

ETEST MBL

MECANISMOS DE DETECCION GENOTIPICA PARA BACTERIAS NOFERMENTADORAS


10/11

Deteccin de genes que codifican para las metalo-ft-lactamasas mediantereaccin de polimerasa en cadena (RPC)

Esta tcnica se aplica para diagnstico molecular de las bacterias nofermentadoras.

E"#ra$$i%n &e' ADN $rm!ma'de las cepas de P. aerugin!a.A partirde un cultivo puro de 1: h en agar tripticasa so$a 2i *ediaS0 se tomaronvarias colonias, se resuspendieron en 9 Tl de


11/11

Ti(i)$a$i%n m'e$u'ar de los aislados de P. aeruginosa.!e reali" la

tipiCcacin molecular de los aislados mediante la electroforesis de campos

pulsantes E7P0 en el e#uipo Duefast%6S.

Pre(ara$i%n &e' ADN inm*i'i+a&.3as cepas de P. aeruginosafueron

crecidas en agar *ueller%2inton , luego fueron recolectadas $ lavadas conuna solucin de @a7l al ,=/ p2 :,; posteriormente, se suspendieron en =

Tl de la solucin de lavado $ se me"claron con 1= Tl de agarosa de ba+o

punto de fusin al 1,=/, fundida $ atemperada a 8= U7 $ utili"ando el molde

para la fabricacin de blo#ues, se prepararon miniblo#ues de - mm x - mm

x ,J mm largo, ancho $ grosor0. 3a concentracin Cnal de clulas

bacterianas en cada miniblo#ue fue de 9,1 x 15clsml aproximadamente.

na ve" elaborados los miniblo#ues, las clulas fueron sometidas a unproceso de lisis $ desproteini"acin colocndolas en solucin #ue contena,1*

tema .reistencia enzi a no fermentadores

Documents