tema 4-el medio de cultivo 2
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Tema 3
El medio de cultivo 2
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Suplementos orgnicos
VitaminasLas plantas no producen vitaminas
Tiamina (Vit. B1)Metabolismo carbohidratos y sntesis
de aa Myo-inositol
Formacin pectinas y hemicelulosas Acido nicotnico o niacina Piridoxina (Vit. B6)
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Suplementos orgnicos Otras vitaminas
Acido pantotnico Vitamina C (cido ascrbico)
Antioxidante, divisin y elongacin celular
Vitamina D Vitamina E Glicina (aminocido)
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Suplementos no definidos Extracto de levadura (inositol y tiamina) Leche de coco
Aminocidos Acidos
orgnicos
Acidos
nucleicos Purinas Azcar Azcar-alcohol Vitaminas Reguladores del crecimiento Minerales
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Acidos orgnicos
Agentes quelantes Tampn
Ojima
and
Ohira
(1980) Acido mlico y ctrico corrigen deficiencia en Fe
NutrientesAumento del metabolismo del N
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Azcares
Energa Agente osmtico
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Azcar como fuente de energa
Autotrofa Metabolismo de carbohidratos por
asimilacin de CO2 Enriquecimiento de CO2
y retirada de azcar Limitado nmero de ocasiones se observa in
vitro
Sacarosa
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Unos ms que otros
SacarosaGlucosa
MaltosaRafinosa
ManosaLactosa
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Por qu
es mejor la sacarosa que la glucosa?
Mejor translocacin a los centros de crecimiento
Menor impacto osmtico
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Otros
Azcares alcoholManitol, Sorbitol
AlmidnLiberacin de amilasas, favorecida
por giberelinas Maretzki
et al. (1971, 1974)
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Efectos de la sacarosa
Formacin de elementos vasculares (+) Formacin de clorofila (-)
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Azcar como agente osmtico
La adicin de solutos a un solvente reduce el potencial osmtico de la solucin
s
=macronutrientes
+azcar
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Efectos y usos de osmolitos
en cultivo de tejidos
Aislamiento y cultivo de protoplastos Crecimiento Contenido hdrico del tejido Morfognesis
Apogamia
en helechos Diferenciacin de yemas florales Formacin de raz y crecimiento radical Embriognesis somtica Formacin de rganos de almacenamiento Cultivo de anteras
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El pH del medio de cultivo
Solubilidad de las sales Absorcin de nutrientes del medio Reacciones qumicas, especialmente
las enzimticas Eficiencia de los agentes solidificantes
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Tampones
Aislamiento de protoplastos Cultivos celulares a bajas densidades
TRIS MES HEPES CAPS
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Medio lquido
Medio lquido Aporte de Oxgeno Hiperhidricidad
Cuando el potencial del medio es elevado entra agua en las clulas y las clulas se vuelven hiperhdricas Se reduce:
aumentando los osmolitos
en el medio y/o la
concentracin de agar
aireando el medio para evaporar el agua
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Uso del medio lquido
Cultivo de protoplastos Cultivos celulares/races
Metabolitos secundarios Propagacin
Embriones somticos Ndulos meristemticos Agregados de tallos Microtubrculos
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Matrices semislidas
Agar Agarosa Alginatos Almidn Pectinas
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Agar
Forma geles
con agua que mezclan a 100 C
y solidifica a 45 C
No digerido por enzimas vegetales Inerte Polisacridos a partir de galactosa
Gelidium y otras algas rojas Componente ms caro del medio de
cultivo
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Alginatos
Heteropolmero
binario cido 1,4 --
D mannuronico
y cido 1,4--
L guluronico Brown algae
La sal de sodio expuesta a iones Ca provoca la gelacin
Cultivo de protoplastos Encapsulacin de semillas artificiales
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Cultivos ventilados y soportes porosos
Menor humedad relativa Mayor transpiracin Menor hiperhidricidad Posible autotrofa
en medio sin azcar
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Soportes porosos
Membranas de polipropileno Poliester
fleece
Papel de filtro ashless Mezcla de pulpa de papel y vermiculita
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Clulas inmobilizadas
Aumentar el rendimiento de metabolitos secundarios a partir de clulas diferenciadas, con crecimiento lento
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Auxinas
Induccin de callo Rizognesis Embriognesis (2,4 D)
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Citoquininas
Estimulacin de la divisin celular Formacin de tallos adventicios Embriognesis Proliferacin de yemas axilares Inhibicin de la rizognesis
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Giberelinas
Elongacin del tallo Inhibicin del desarrollo
Inhibidores de la sntesis de giberelinas
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Acido abscsico
Embriognesis Tolerancia a la sequa
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Carbono activo Absorcin de compuestos secretados al
medio de cultivo, inhibidores del crecimiento Fenoles de la herida, durante el establecimiento
del cultivo Impedir la formacin de callo Promover morfognesis, especialmente la
embriognesis Promover rizognesis Absorcin de metabolitos secundarios
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Habituacin
Capacidad de las clulas de pasar de un estado dependiente del aporte exgeno de una determinada sustancia a otro, independiente de dicha sustancia.
Tema 3Suplementos orgnicosSuplementos orgnicosSuplementos no definidosAcidos orgnicosAzcaresAzcar como fuente de energaUnos ms que otrosPor qu es mejor la sacarosa que la glucosa?OtrosEfectos de la sacarosaAzcar como agente osmticoEfectos y usos de osmolitos en cultivo de tejidosEl pH del medio de cultivoTamponesMedio lquidoUso del medio lquidoMatrices semislidasAgarAlginatosCultivos ventilados y soportes porososSoportes porososClulas inmobilizadasAuxinasCitoquininasGiberelinasAcido abscsicoCarbono activoHabituacin