tema 12 pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
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TEMA 12
Pruebas de sensibilidada los antimicrobianos
Tema 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
1. Nacimiento de la era de los antibióticos2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
2.1. En surco2.2. Con tiras de papel2.3. En caldo
2.3.1. Cálculo de la CMI2.3.2. Cálculo de la CMB
2.4. Con discos de papel2.4.1. Estandarización del medio de cultivo2.4.2. Estandarización del inóculo2.4.3. Estandarización de los discos
2.4.3.1. Concentración de algunos antimicrobianos2.4.4. Condiciones de incubación y lectura de los resultados2.4.5. Cepas bacterianas para control de calidad de las pruebas2.4.6. Fundamento de la prueba de Bauer-Kirby
2.4.6.1. Correlación entre el halo de inhibición y la CMI2.4.6.2. Ejemplos de sensibilidad/resistencia2.4.6.3. Resultados atípicos
2.4.7. Limitaciones de la prueba de Bauer-Kirby
Tema 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
3. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos con determinación de la CMI3.1. Técnica de dilución en caldo3.2. Técnica de dilución en agar3.3. Técnica de microdilución en caldo3.4. Test Épsilon
Penicilina 1929
Estreptomicina 1943
Gramicidina y tirocidina 1943
Clortetraciclina 1944
1. Nacimiento de la era de los antibióticos
2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
2.1. En surco
Realizada por Fleming
2.2. Con tiras de papel
CMI = 0,25 mg/L
Observar el crecimiento tras 18-24 h de incubación a 37 ºC
Añadir una concentración baja (aproximadamente10.000/ml) de las colonias de prueba a cada dilución
Efectuar diluciones dobles del antibiótico en un medio de crecimiento líquido
Concentración(mg/L)
2.3. En caldo
Concentración(mg/L)
Concentración(mg/L)
CMI = 2 mg/L
2.3.1. Cálculo de la CMI
CMB = 1 mg/L
2.3.2. Cálculo de la CMB
Prueba de Bauer-Kirby
2.4. Con discos de papel
Zona de inhibición
Agar de Müeller-Hinton
Infusión de carne de vaca 300 g/L
Casaminoácidos 17,5 g/L
Almidón 1,5 g/L
Agar 17 g/L
Características
Permite crecer a la mayoría de los patógenos
Transparente
No tiene PABA
pH
Espesor
2.4.1. Estandarización del medio de cultivo
Sembrar tres veces rotando la placa 120º
Tomar 4-5 colonias Resuspender en TSB
Incubar hasta turbidez 0,5 de MacFarland
2.4.2. Estandarización del inóculo
Discos de alto poder (10-300 µg de los antibióticos)
Control calidad (FDA)
Posición
Colocación manual o con un dispensador
No mover
Colocación manual desde el tubo
Colocación con un dispensador automático
2.4.3. Estandarización de los discos
Colocación manual con pinzas estériles
2.4.3.1. Concentración de algunos antimicrobianos
• Incubación
• Observación de los halos de inhibición
• Medida de los diámetros de los halos
2.4.4. Condiciones de incubación y lectura de los resultados
2.4.5. Cepas bacterianas para control de calidad de las pruebas
2.4.6. Fundamento de la prueba de Bauer-Kirby
Elaborado por el CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute)
2.4.6.1. Correlación entre el halo de inhibición y la CMI
2.4.6.2. Ejemplos de sensibilidad/resistencia
Para Staphylococcus aureus
Microorganismos invasores
2.4.6.3. Resultados atípicos
Colonias aisladas dentro del halo
Superposición de halos de inhibición
2.4.6.3. Resultados atípicos
Placas deficientemente inoculadas
• Microorganismos de desarrollo lento
• Microorganismos anaerobios
• Antibióticos de difusión lenta
• Los resultados se refieren a los niveles de antibióticos que se pueden conseguir en suero
• Los resultados no se extrapolan necesariamente a todos los antibióticos de un mismo grupo
2.4.7. Limitaciones de la prueba de Bauer-Kirby
• Técnica de dilución en caldo
• Técnica de dilución en agar
• Técnica de microdilución en caldo
• Test de Épsilon (E-test)
3. Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos con determinación de la CMI
3.1. Técnica de dilución en caldo
32 µg/mL 16 µg/mL 8 µg/mL 4 µg/mL 2 µg/mL
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3.2. Técnica de dilución en agar
Inoculación
Incubación
Lectura
3.2. Técnica de dilución en agar
Replicador de Steers
Replicador manual
3.2. Técnica de dilución en agar
Ventajas
• 32-36 microorganismos
• Control de calidad
• Placas comerciales
• Barata
• Automatización
• Adecuada para laboratorios con gran volumen de trabajo
• CMI
3.2. Técnica de dilución en agar
3.3. Técnica de microdilución en caldo
Ventajas
• 10-12 antibióticos diferentes
• Más microorganismos a menos antibióticos
• Pipetas multicanal
• Lectura automatizada
• Resultados en 4 horas
• E-test (tiras patentadas, AB Biodisk, Suecia)
• Gradiente logarítmico de concentración
• Zona de inhibición elipsoidal (no circular)
• Valor de la CMI en la escala
• Método cómodo, pero caro, no para uso rutinario
3.4. Test Épsilon
CMI
CMI = 0,64 mg/L
CMI = 2 mg/L
3.4. Test Épsilon