tecnología del adn recombinante
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El desarrollo del ADN recombinante, ha dado tresdesarrollos científicos importantes que puedenconsiderarse como las piedras angulares de latecnología: Introducir ADN en E. Coli (transformación) y
después seleccionar las bacteriastransformadas.
Purificar el ADN plasmídico con altosrendimientos.
Descubrimiento y la purificación de lasenzimas de restricción.
Con estos tres sencillos procedimientos puedellevarse a cabo la ingeniería genética.
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Se ha descrito en muchas especies de bacterias quetienen la capacidad de fijar ADN en forma natural.Sólo un pequeño porcentaje de una poblaciónbacteriana tiene ésta capacidad, y se dice que éstaspocas células son competentes.
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En E. Coli, las células competentesno existen en forma natural, sinoque tienen que fabricarse portratamiento con soluciones de CaCL2en frío. Después de éstetratamiento, las células se mezclancon el ADN que va a introducirse,se les somete a un ligero choquetérmico y se les permite que serecuperen.
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No se conoce el mecanismo preciso por el cualentra el ADN en la bacteria. El proceso no esmuy eficiente, pero puede lograrse unatransformación de 10^7 bacterias por organismode ADN, que es suficiente para los objetivos dela ingeniería genética
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Son moléculas de ADN que se mantienen en
forma autónoma y que se encuentran con
frecuencia en bacterias y en algunos
eucariontes inferiores.
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No son esenciales para el crecimiento, pero
confieren algunas propiedades poco
usuales a las células que los albergan. Los
plásmidos se replican independientemente
del cromosoma y algunas veces se les
describe como ADN extracromosómico.
La mayoría de los
plásmidos son
moléculas circulares
de ADN, aunque se han
encontrado modelos
lineales.
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Las propiedades que confierenlos plásmidos sonextremadamente variadas.
El primer plásmido que
se identificó en E. Coli
confiere la habilidad de
participar en el
intercambio conyugal
simple de formación
genética
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Éste plásmido se conocecomo factor F (DeFertilidad). El factor F esbastante grande, delorden de 96 000 pares debases. También estransmisible, es decir,que tiene la capacidadde promover el acto deconjugación otransferirse de unacélula bacteriana a otra
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Otros plásmidos que
son similares y que en
algunos casos están
relacionados con el
factor F, son los
factores R (
resistencia). Éstos
confieren resistencia a
los antibióticos y
también son
transmisibles y
provocan graves
problemas clínicos.
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Algunos plásmidos proporcionan
propiedades poco usuales a las bacterias
huésped por ejemplo los plásmidos TOL
permiten que Pseudomonas sp degraden el
tolueno y lo utilice como fuente de carbono
Fig. Pseudonomas sp
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Todos los plásmidos que se
han descrito hasta ahora
son grandes, algunos
plásmidos como el
Rhizobium tiene hasta 300
Kb de longitud y solo
existen una o dos copias por
cada célula. La purificación
de estos plásmidos es difícil
y en general los
rendimientos son bajos
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Sin embargo también se conocen muchos
tipos de plásmidos pequeños de menos de
0 Kb. Éstos por lo general no son
transmisibles y con frecuencia sólo
confieren un fenotipo simple a la bacteria
huésped.
.Existen de 20 a 40
copias por célula y
pueden purificarse con
facilidad.
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Uno de los primeros deestos plásmidos que secaracterizó se aisló deE. Coli y se le llamóColE1 . Produce unaproteína llamadacolicina E1 que destruyeotras cepas de E. Coli.Sin embargo lasbacterias que contienenéste plásmidos sonresistentes a la colicinaE1
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*Alvarado Muñoz Carlos Enrique
*Balam Villarreal Wendy L.
*Montero Espinosa Leopoldo
*Ortega Morales Claudia Margarita