Tcnicas y Mtodos de estriado en caja y tubo (medios de cultivo)

a) Estriado bsico: Se calienta el asa de inoculacin hasta que quede color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo, dejar que el asa se enfri durante 3-5 segundos. Recoger una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa Petri. Levantar la tapa de la placa Petri que se va a sembrar en un ngulo de 45, colocar el asa en la parte de atrs de la caja, tocar con el asa el medio y pasarlo a travs de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.b) Estriado para aislar: implica una sola inoculacin de una seccin de la placa Petri y a continuacin disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial de dos a tres secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de microorganismos.c) Estriado por cuadrantes: se divide la parte inferior de la caja Petri en cuatro partes iguales con un marcador. Se esteriliza el asa y se estra el 1er cuadrante con el procedimiento bsico de S. Se trabaja en el sentido de las agujas del reloj, estriando cuadrante por cuadrante, esterilizando el asa antes de seguir a otro.d) En tubo: esterilizar el asa como ya se mencion anteriormente. Tomar la porcin de muestra con el asa. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa tomar el tubo por la parte inferior. Con el dedo meique de la mano con la que sostiene el asa, retirar el tapn de algodn o la tapa de rosca del tubo, y retngala, no la coloque en la mesa de trabajo. Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasndola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineracin los microorganismos contaminantes que se encuentren en esa zona. Introducir el asa con la muestra en el tubo. A partir de aqu la siembra se puede realizar de distintas maneras:Deslizando el asa desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cua trazando una lnea longitudinal.Deslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia arriba, imprimindole un movimiento de zigzag.Moteando toda la superficie de la cua con un hisopo.

Al concluir la siembra se flamea y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en el mechero.Tcnicas estrilesLas placas de Petri son un ambiente rico en nutrientes, por lo que es importante la utilizacin de tcnicas estriles en todo momento. Nunca dejes a una placa de Petri abierta. Siempre expn a tu asa de inoculacin a las llamas antes y despus de transferir las bacterias de un medio a otro. Algunos laboratorios pueden requerir el uso de una mscara o trabajar dentro de una campana de tiro descendente para reducir al mnimo los contaminantes ambientales.Tcnica de estriado bsicoCalienta el asa de inoculacin hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfre durante 20 o 30 segundos, pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa de Petri. No necesitas de una presencia bacteriana visible. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrs del plato, toca con el asa en el medio y psalo a travs de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante. Algunos laboratorios pueden querer que gires la placa a 90 grados y repitas el procedimiento de inoculacin para una cobertura completa.Estriar para aislarEstriar para aislar implica una sola inoculacin de una seccin de la placa de Petri y a continuacin, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacterilogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea de bacterias que nacen de un solo progenitor.Estriado en T

Para llevar a cabo con precisin un estriado en T, dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divdela por la mitad. A continuacin, dibuja una lnea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la seccin ms grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la lnea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones ms pequeas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de la segunda seccin a travs de la tercera.SIEMBRA EN AGAR INCLINADO EN TUBO DE ENSAYE.El agar, una sustancia similar a la gelatina que se extrae de las algas rojas, es usado comnmente para cultivarmicroorganismos. Se le agregan varios nutrientes para favorecer el crecimiento bacteriano y se coloca tanto en placas planas como en tubos de ensayo. Cuando se coloca en un tubo de ensayo, el agar est en forma lquida. Estos luego son colocados en ngulo para que se enfren y solidifiquen, creando una superficie inclinada, o un agarinclinado(agar slant, en ingls).INCLINACINLos medios de agarinclinadose realizan llevando el agar a punto de ebullicin y vertindolo en un tubo de ensayo. Antes de que el agar se enfre y solidifique, el tubo de ensayo se colocainclinado sobre un lado. Una vez que el agar se enfra, el tubo puede volver a colocarse en posicin vertical y el agar que se encuentra en su interior se verinclinado.El inculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera: En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante punsin en el medio contenido en la parte inferior del tubo En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

Cul es el propsito de estriar una placa de agar?Los estudios que implican los cultivos microbianos a menudo requieren la identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea porcin de este cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible mezclar una mezcla de bacterias individuales en unidades que forman colonias.MaterialesEstriar una placa de agar requiere placas de agar nutrientes, un asa para la inoculacin, un cultivo de bacterias, una disolucin desinfectante como lysol al 10%y un mechero de bunsen. Tambin tendrs que vestir ropa de seguridad como una bata de laboratorio, y lentes de seguridad contra productos qumicos. El inoculo para rayar se toma a partir del cultivo stock bacteriano utilizando el asa y estriando atraves de las placas de agar nutriente.Mtodos-tcnicas Estriado bsicoCalienta el asa de inoculacin *hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfri durante 20 o 30 segundos pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una muestra de cultivo bacteriano a partir de un caldo o de una placa petri, no necesitas una presencia bacteriana visible. Levanta la placa de petri, que vas a sembrar en un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrs del plato, toca con el asa en el medio y psalo atraves de la superficie de la placa con un movimiento en forma de ``S`` de atrs hacia adelante. Estriar para aislarImplica una sola inoculacin de una seccin de la placa petri y a continuacin, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial de dos otras secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de microorganismos generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bactemotogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea de bacterias que nacen de un solo progenitor Estriado en ``T``Para Llevar a cabo con precisin un estriado en T, dibuja una T en la parte posterior de la placa petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo, con un marcador permanente, divdela por la mitad. Dibuja una lnea divisora en una de las mitades hasta formar una T. jira la placa de manera que la seccin ms grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula le medio con el barrido en forma de S pero no crucen la lnea media. Estriado por cuadrantesEste es un mtodo de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de 3. Divide la parte inferior de la placa Petri en 4 partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos bsicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabajo en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro como lo hiciste en el mtodo de estratificado en T y calentado el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el uno hasta el cuadrante adyacente.ESTRIADO EN TUBO (INOCULACIN EN TUBO)Por estras1)Coger el asa por el cabo, introducirla directamente en la zona de color azul de la llama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente se produce a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto2)Retire el instrumento de la llama y espero de 4 a 5 seg. Con el objetivo de que el asa enfri3)Con el asa estril y fra tome el volumen o fragmento de la muestra que ser sembrado y trasldelo de inmediato para el medio de cultivo selectivo.4)Con la mano puesta a la que sujeta el asa tome el tubo para la porcin inferior. Con el dedo meique de la mano que sostiene el asa y retire del tubo del tapn de algodn a la tapa de rosca y retegola5)Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo pasndola y o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar incineracin, los microorganismo contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo6)Introduzca el asa con el volumen o fraccin de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cua a partir de este punto la siembra puede realizarse de diferentes maneras.Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba por toda la superficie de la cua trazando una lnea longitudinalDeslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia arriba, impidindole o movimiento de zigzagMotiando toda la superficie con un hisopoEfectuado cualquiera de las 3 bonotes explicadas pero adicionalmente rotndolo en medio con el asa, haciendo un pequeo corte longitudinal7)Al concluir las siembra se flamea la boca y se toponea nuevamente el tubo procesando a esterilizar el asa en las llamas del mechero

Estriado en tubos de ensayo.Siembra en tubos de cultivo con medio slidoLas siembras en tubos con medio slido, por lo general se emplean para la conservacin de un cultivo puro proveniente de una placa o para la siembra de pruebas bioqumicas como el medio OF, SIM y MIO. El pico del tubo. Del medio con agar se inocula primero por puncin (cuando es necesario), seguido por una estra en el pico del tubo desde el fondo a la parte superior con un movimiento en S a medida que se retira el asa.Siembra en medios de cultivo lquidos.La siembra en tubos de cultivo en medio lquido, el tubo debe inclinarse en un ngulo de 30 y el asa de inoculacin debe tocar la superficie interna del vidrio, justo encima del punto donde la superficie del agar forma un ngulo agudo. Cuando el tubo es vuelto a su posicin vertical, el rea de inoculacin queda sumergida debajode la superficie, se puede agitar suavemente el asa en el interior del medio lquido.Tipos de cultivo en tubos de ensayo:Siembra por estras en superficie:Se utilizan los medios de cultivo inclinados, se toma una muestra de alguna colonia con el asa estril y sobre la superficie del medio se desliza sta en forma de estras.Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asa bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profunda de la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.Por picadura o puncin:Se utilizan los medios de cultivo en un tubo solidificado en forma inclinada y en forma recta, se toma la colonia y se introduce en el medio picndolo longitudinalmente. Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semislido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este mtodo se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias. sufinalidad es estudiar la movilidad de las bacteriasSiembra en TSI:(Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol.En este medio se siembra por picadura y estras en superficie, para estudiar los cambios que ocurran en la superficie y profundidad.Siembra por dilucin:

Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados. Su finalidad es poner la bacteria en suspensin.

Cul es el propsito de estriar una placa de agar?Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea porcin de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que muestran caractersticas que ayudan a identificar el organismo.Mtodos - Tcnicas1) Estriado bsicoCalienta el asa de inoculacin hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfre durante 20 o 30 segundos, Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa de Petri. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ngulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrs del plato, toca con el asa en el medio y psalo a travs de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.2) Estriar para aislarEstriar para aislar implica una sola inoculacin de una seccin de la placa de Petri y, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacterilogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea de bacterias que nacen de un solo progenitor.3) Estriado en TDibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divdela por la mitad. A continuacin, dibuja una lnea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la seccin ms grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la lnea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones ms pequeas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de la segunda seccin a travs de la tercera.4) Estriado por cuadrantesEste es tambin un mtodo de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos bsicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el mtodo del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante adyacente.

Los estudios que implican cultivos microbianos a menudo requieren la identificacin de los organismos presentes en un cultivo. Cuando una pequea porcin de ese cultivo se inserta en un medio nutriente que contiene agar, es posible separar una masa de bacterias individuales en unidades que forman colonias. Cada una de estas unidades se desarrolla en colonias discretas que muestran caractersticas que ayudan a identificar el organismo.Estriado en caja.Instrumental.Placas de agar nutrientesAsaCultivo de bacteriasSolucin desinfectanteMechero bunsenEquipo de seguridadMtodos y tcnicas.I. Estriado bsico. Se calienta el asa de inoculacin hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Dejar que se enfri por 20 o 30 segundos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano. Levanta la tapa de la placa petri que vas a sembrar en un ngulo de 45 grados, toca con el asa en el medio y psalo a travs de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrs hacia adelante.II. Estriar para aislar. Estriar para aislar implica una sola inoculacin de una seccin de la placa de Petri y a continuacin, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la seccin inicial de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la poblacin de microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacterilogos tambin utilizan este mtodo para aislar una lnea de bacterias que nacen de un solo progenitor.III. Estriado en T. Para llevar a cabo con precisin un estriado en T, dibuja una "T" en la parte posterior de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente, divdela por la mitad. A continuacin, dibuja una lnea divisoria en una de las mitades para dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la seccin ms grande quede a tu derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la lnea media. Vuelve a calentar el asa para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las secciones ms pequeas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma de S en la esquina derecha de la primera seccin que estriaste, en la nueva seccin. Pon el asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Gira la placa una vez ms y repite el barrido en S de la segunda seccin a travs de la tercera.IV. Estriado por cuadrantes. Este es tambin un mtodo de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos bsicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el mtodo del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante adyacente.Estriado en tubo.Los medios en tubo pueden presentarse slidos en forma inclinada, caldo o bien como medios semislidos. De acuerdo al procedimiento de inoculacin puede emplearse el asa o la aguja para inoculacin. Generalmente se emplea el asa para inocular especmenes en placa y la aguja de inoculacin para la transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio slido.Existen muchas frmulas de caldos, dependiendo de la bacteria que se desee crecer. En los tubos con medio slido, el tubo se pone a enfriar en posicin inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos inclinados son tiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. Las caractersticas del cultivo tales como pigmento son fciles de observar en este tipo de cultivo. Los procedimientos para inocular caldos, tubos inclinados y por picadura sern demostrados antes de que se lleven a cabo.Instrumental.Asa y aguja bacteriolgicaTubos con medios de cultivoPlacas con medio de cultivoMechero bunsen

Mtodos y tcnicas.INOCULACIN DE MEDIOS DE CULTIVO.1. Flamee el asa o aguja por unos segundos en forma vertical.2. Quite el tapn del tubo y mantngalo en la misma mano en que tiene el asa o aguja para inoculacin. Flamee la boca del tubo y tome una pequea porcin de inocul.3. Flamee nuevamente la boca del tubo que tiene el espcimen que va a trasferir y tpelo.4. Quite el tapn del tubo que va a inocular y proceda de acuerdo de acuerdo al medio de cultivo:Caldo: Basta con tocar el medio con el asa o aguja, si es poco caldo inclnelo de manera que no introduzca en el tubo el mango del asa o aguja.Medio semislido: por lo general para este medio se usa la aguja de inoculacin la cual se introduce dentro del medio hasta aproximadamente partes de profundidad. En un solo movimiento.Medio slido inclinado: se lleva el asa o la aguja hasta donde empieza el declive y se sube haciendo un movimiento de zigzag sobre la superficie dibujando as una serie de estras.

Mtodo de siembra para aislamiento por agotamiento o en estraMateriales Placa petri con medio de cultivo Muestra (slida o lquida) Asa de siembra de platinoCon el asa estril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensin anterior en otra direccin. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensin en otra direccin. Esterilizamos y repetimos la operacin. Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la segunda, parte de la primera zona estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro. Estra nica:depositamos la muestra lo ms alejado de nosotros y realizamos la siembra en forma de zig-zag. De esta forma vamos descargando la muestra del asa. Es importante no volver a repasar el trozo de medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que al final de la estra tengamos colonias aisladas es importante que al principio hagamos la estra ms junta y que la cantidad de muestra tomada en el asa sea la adecuada. Estra mltiple:en esta tcnica de aislamiento por agotamiento se realizan varias estras. Esto se puede llevar a cabo flameando el asa de paso en paso, es decir, de estra en estra, o sin flamear el asa. Adems, dependiendo de la forma en la que hagamos las estras, existen varios tipos de estriados: Estriado sobre cuatro cuadrantes:Se utiliza cuando queremos conservar algn microorganismo que nos interesa. Consiste en sembrar uno a uno los cuadrantes, sin flamear el asa entre estra y estra, de tal forma que en el cuarto cuadrante, al ir agotando la muestra del asa, tendremos los microorganismos aislados.