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Taller Práctico N° 1
¿La mancha corresponde a sangre de origen humano?
Introducción
La investigación de Laboratorio de las manchas de sangre es escalonada y presenta cinco pasos sucesivos: Observación de las muestras, ensayos preliminares, ensayos confirmatorios, investigación de la especie y
tipificación de la mancha de sangre humana.
Pruebas de orientación o presuntivas Los ensayos preliminares, tienen valor como ensayos de orientación o
presuntivo, porque no aseguran la presencia de sangre en la mancha sospechosa y se realizan sólo cuando hay suficiente cantidad de muestra,
para no dificultar, por falta de la misma, las pruebas posteriores de certificación de la existencia de sangre, de investigación de especie y tipificación o ADN. Estas pruebas al ser rápidas y fáciles de realizar, son
adecuadas para practicar con mucho éxito en la escena del crimen y tener una idea preliminar de la presencia, forma y cantidad de sangre in situ, más
aún si han intentado retirar o modificar dichas manchas de sangre.
Ejercicio Nº 1
Procedimiento
Recibida la muestra o espécimen, este será cuidadosamente descrito, graficado y fotografiado, desde su envoltorio o contenedor y su contenido será esparcido sobre una superficie amplia, lisa y limpia, utilizando siempre
guantes de nitrilo o látex. A continuación se procederá a realizar la marcha metodológica de análisis de manchas de sangre.
A. Pruebas Presuntivas para Detección de Manchas de Sangre
Los ensayos preliminares son pruebas rápidas basadas en la actividad de peroxidásica que posee el grupo HEMO de la hemoglobina de la sangre y
que en presencia de agua oxigenada y de ciertos reactivos orgánicos reducidos o reactivos cromógenos (fenolftaleína, tetrametilbencidina, verde de malaquita, etc.), dan lugar a la aparición de coloraciones o
quimioluminiscencia, que orientan sobre la posible existencia de sangre en las muestras analizadas.
H2O2 + HEMOGLOBINA = H20 + O + REACTIVO = COLOR O LUMINISCENCIA En el caso de todas las pruebas presuntivas, las muestras serán
previamente colocadas en placas de vidrio, lunas de reloj o placas de toque de porcelana, luego se empaparan pequeños pedazos de papel
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filtro o hisopos de algodón limpio o estéril, previamente humedecidos
con suero fisiológico o agua destilada y una vez empapados, se procederá a realizar pequeños toques lentos con las muestras o se
pondrán sobre estas por un lapso de dos minutos, luego de estos se retiran el papel o el hisopo, sobre la cual deberá aplicarse una gotas del reactivo de Kastle Meyer (fenolftaleína reducida en medio alcalino y
presencia de zinc), se espera unos segundos, por si hubiera oxidantes extraños en el medio (reacción falso positiva), de lo contrario se
procederá a agregar una gota de agua oxigenada (30 o 20 volúmenes), finalmente deberá agregarse una gota de etanol; la aparición de un color rojo grosella intenso o rosado intenso característico, indica la presunta
presencia de sangre.
Cuando exista la sospecha de que el material hemático, ha sido difundido por intento de lavado de la supuesta mancha de sangre, se pueden realizar los ensayos directamente sobre porciones de las
mismas. O en casos en que la muestra se encuentre sobre madera, metales y baldosas, se toma la muestra directamente con el papel filtro
o hisopo previamente humedecido con suero fisiológico. Cuando la reacción del cromógeno produzca quimioluminiscencia la prueba se
efectuará en la oscuridad o penumbra, según corresponda al luminol o Bluestar.
Test de Fenolftaleína - Kastle Meyer
Dejamos caer unas gotas de suero fisiológico o agua destilada en ausencia del primero sobre un hisopo de algodón o una tira de papel filtro, con el cual tomaremos la muestra de la mancha de sangre
seca.
Coger el tubo aplicador de fenolftaleína y reventar las ampollas de vidrio que contiene en su interior, una por una, luego agitar suavemente y retirar la tapa roja y exponer el tapón absorbente.
Luego aplicamos los tubos de fenolftaleína, poniendo en contacto el
tapón absorbente o dejando caer una gota sobre el hisopo o papel filtro, dejar caer una gota de alcoholo etílico, sobre el hisopo o papel filtro y de manera inmediata aparecerá una coloración fucsia o rojo
grosella.
Kits de fenolftaleína y modo de aplicación
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Ejercicio Nº 2
Como usar BLUESTAR FORENSIC
El objetivo principal de los test presuntivos quimioluminiscentes como
Bluestar, es revelar la presencia de rastros hemáticos latentes no visibles ya sea porque fueron erradicados intencionalmente como suele ocurrir en la
mayoría de los casos, y así poder tomar muestras para obtener un posible perfil genético, accesoriamente se pueden documentar fotográficamente la presencia de las reacciones quimioluminiscentes.
Es importante mencionar que antes de aplicar Bluestar, debemos estar
seguros que todas las técnicas para detección de rastros hemáticos visibles ya han sido empleados u otras evidencias ya han sido procesadas así como huellas latentes, este procedimiento debe ser el último en aplicarse,
inclusive el reconocimiento y documentación de patrones hemáticos.
Verificar que la escena no está contaminada con agua, blanqueadores o lejía (superficies
húmedas), sino deberemos esperar a que estas sequen antes. Para
ingresar deberemos usar ropa de protección o bioseguridad, es importante colocar el protector de
calzado primero en un pie, luego pisar el piso de la escena y luego el
otro pie deberá ser cubierto con su respectivo protector y recién apoyarlo en el piso así aseguramos
que no contaminaremos la escena.
Primero recorrer la totalidad de la escena de crimen, desde el punto más alejado de la entrada hacia la salida, primero se trataran los pisos, luego
paredes y finalmente techos. Una vez determinado el área por donde empezaremos a trabajar, se
colocara el equipo fotográfico con trípode, debido a que las fotografías de luminol se hacen en penumbra, sin flash, con máxima apertura del
diafragma (2,8 como mínimo) y por lo menos 30 segundos de tiempo de exposición. Deberían haberse tomado fotografías antes del procesamiento para mostrar cómo se veía la escena antes de la aplicación del Bluestar.
También, se deberá limitar el área fotográfica a capturar antes de la aplicación del reactivo y una vez listo el equipo fotográfico se aplicara el
reactivo en la zona antes delimitada y apenas se empiece a evidencias la reacción se debe accionar el disparador de la cámara fotográfica, no olvidar que esta captura durará 30 segundos.
Aplicar el rociador con la boquilla graduada en el rocío más fino, para evitar
diluir la muestra biológica para el examen de ADN, por lo que no se deberá
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aplicarse más de dos veces el sobre la zona quimioluminiscente por esta
razón. No debemos olvidar que normalmente el patrón hemático a evidenciar será el de tipo limpiamiento en la mayoría de las veces, pudiendo
en el mejor de los casos identificar el tipo de objeto usado para limpiar o erradicar las manchas de sangre.
Uso de BLUESTAR® FORENSIC en una escena de crimen probable
1. El técnico debe vestir ropa de protección para prevenir la contaminación.
2. Prepare la solución de BLUESTAR® FORENSIC ya sea con el KIT BLUESTAR® FORENSIC o las TABLETAS BLUESTAR® FORENSIC., esperando que se disuelvan las tabletas antes de usar el rociador,
mientras esto sucede deberemos adecuar un ambiente de semi penumbra para aplicar Bluestar.
3. Unos minutos después, el técnico debe hacer pruebas de su efectividad con una muestra de sangre como control positivo.
4. Oscurezca el área que se va a tratar con BLUESTAR® FORENSIC.
5. Rocíe BLUESTAR® FORENSIC sobre el área sospechada con un atomizador (incluido en la versión de kit). El técnico rocía la mezcla
desde una distancia de por lo menos 50 cm. (20"). Una luminiscencia azulosa indica un resultado positivo. Esta luminiscencia comienza a
desvanecerse después de un minuto y se puede volver a lograr con una nueva rociada.
6. El técnico debe realizar el mismo procedimiento sobre un área sin manchas de la misma superficie para que sirva como control negativo.
7. Las pruebas de confirmación se deben realizar directamente en el sitio, utilizando HEXAGON OBTI. El análisis de ADN, se debe efectuar
entonces en el laboratorio. Recoja muestras de los materiales que presentaron luminiscencia para mayor análisis (determinación del origen de sangre humana con HEXAGON OBTI y/o análisis de ADN).
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Ejercicio Nº 3
Pruebas de Certeza o Confirmatorias Procedimiento de uso del OBTI HEXAGON
OBTI HEXAGON, es un test inmunocromatográfico, que es el complemento
perfecto para BLUESTAR FORENSIC. Esta rápida prueba visual permite verificar que una mancha de sangre es de origen humano ya que usa anticuerpos monoclonales contra la hemoglobina humana, con una
sensibilidad de 0,1 μg/ml de hemoglobina.
1. Desenroscar la tapa roja, del frasco, teniendo cuidado de no romper la punta roja.
2. Recoger la presunta muestra de sangre con la varita de colección que
está unida a la tapa o donde se haya visto la mayor intensidad de quimioluminiscencia en el caso de usar el producto Bluestar.
3. Volver la tapa con su varita al tubo, enroscar y agitar suavemente. El tiempo máximo puede variar de 2 a 30 minutos, dependiendo de la cantidad de muestra recogida.
4. Retirar la cámara inmunocromatográfica de su envoltorio. 5. Sosteniendo el tubo verticalmente, rompa la punta de la tapa roja.
6. Luego dispensar 2 gotas dentro del pocillo de muestra de la cámara inmunocromatográfica.
7. Espere 5 minutos para leer los resultados, el resultado negativo, debe
ser confirmado después de 10 minutos.
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Taller Práctico Nº 2
Reconocimiento de Patrones de Manchas de Sangre
Las manchas de sangre y los patrones se clasifican en función de las
características físicas del tamaño, forma, ubicación, concentración y
distribución. Sin embargo, no es sino un paso más en el análisis global.
La categorización prepara el escenario para que el analista pueda definir
con mayor eficacia el origen de un evento que dio origen a una mancha
de sangre en particular.
Existen actualmente dos asociaciones internacionales que han
estandarizado la nomenclatura o terminología a utilizarse en la
descripción de los diversos patrones hemáticos.
El Grupo de Trabajo Científico de Análisis de Patrones de Manchas de
Sangre (SWGSTAIN) comprende a expertos de América del Norte, Europa,
Nueva Zelanda y Australia.
La Asociación Internacional de Analistas de Patrones de Manchas de
Sangre (IABPA), actualmente tiene una membresía en todo el mundo
incluyendo investigadores científicos forenses e investigadores de las
fuerzas de la ley, con aproximadamente 800 integrantes e incluye
Latinoamérica.
Ejercicio Nº 1.
Para este ejercicio usted deberá identificar cada uno de los patrones
hemáticos mostrados.
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Terminología IABPA y SWGSTAIN:
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Coloque dentro en el paréntesis el número de patrón que corresponda.
a. ( ) Patrón de Contacto o transferencia.
b. ( ) Rozamiento.
c. ( ) Limpiamiento.
d. ( ) Chorro Arterial.
e. ( ) Sangre arrojada o lanzada.
f. ( ) Sangre expirada.
g. ( ) Goteo pasivo.
h. ( ) Goteo profuso o goteo sobre sangre.
i. ( ) Escurrimiento.
j. ( ) Patrón Vacio.
k. ( ) Patrón producido por insectos.
l. ( ) Anillos de burbuja.
m. ( ) Esqueletos.
n. ( ) Retro spray o retrosalpicadura.
o. ( ) Piscina o charco.
p. ( ) lanzamiento interrumpido.
q. ( ) Impregnación o saturación.
r. ( ) Salpicadura de baja velocidad (SBV).
s. ( ) Salpicadura de velocidad media (SVM).
t. ( ) Salpicadura de alta velocidad (SAV).
u. ( ) Patrón de sangre proyectada o reguero.
v. ( ) Rastro de goteo de sangre.
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Paso N° 1
Punto de Origen Bidimensional o de Convergencia
Para localizar el punto de convergencia, usted deberá trazar la
trayectoria seguida por cada gota de sangre antes de impactar en la
superficie donde se encuentra la mancha de sangre. El punto de
convergencia es un punto localizado en el mismo plano donde se ubica
la mancha de sangre y sirve como el primer paso para obtener la
ubicación de la fuente de sangrado, también llamado área o punto de
origen o punto tridimensional.
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Considérese a cada mancha de sangre como una elipse y como tal, estas
constarán de dos ejes uno mayor y otro menor, trazando una línea en el
eje mayor en dirección de la fuente de la sangre (direccionalidad), estas
líneas de trayectoria se interceptan y el punto de intersección de estas
líneas, indican con mucha aproximación la ubicación de la fuente de
sangre, pero en el mismo plano de las manchas y a este punto se le
denomina el punto o área de convergencia.
ÁREA O PUNTO DE CONVERGENCIA
PUNTO O ÁREA DE ORIGEN BIDIMENSIONAL
Área de convergencia
Las líneas inician en el borde de la gota de sangre
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Ejercicio Nº 1.
El grupo de manchas de sangre que se describen más abajo,
corresponden a manchas de sangre fueron encontradas en el piso de
una escena de crimen, halle el punto o puntos de convergencia o punto
de origen bidimensional e interprete sus resultados.
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Ejercicio Nº 2.
En este ejercicio usted deberá determinar el punto o puntos de origen
bidimensional (Ver la siguiente figura).
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Paso N° 2
Determinación del ángulo de impacto
El ángulo de impacto puede ser matemáticamente determinado, basado en forma elíptica o esférica de la mancha de salpicadura de
sangre.
ANGULO DE IMPACTO
Veamos el siguiente ejemplo para poder hacer este cálculo: Tenemos una gota de sangre con las siguientes características, veamos el
siguiente gráfico:
Donde el seno del ángulo = Lado opuesto/hipotenusa.
O es lo mismo decir ancho de la mancha de la gota de
salpicadura/largo de la mancha de la gota de salpicadura y
obtenemos el siguiente resultado
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1,5 /3,0 = 0,5
En realidad, estamos buscando la función seno inversa porque
estamos trabajando al revés.
Ejemplo: Sen (ángulo) = 0,5 Sen -1 0,5 = ángulo
Resolviendo con la ayuda de una calculadora o la función arco seno o con la ayuda de una tabla de funciones trigonométricas:
Tenemos que el Sin -1 0.5 = 30°.
Funciones Trigonométricas
Consideramos como “Funciones trigonométricas para ángulos
agudos” aquellas funciones que son empleadas cuando se
implica una existencia de un ángulo menor de 90 grados
sexagesimales, generalmente presentes en triángulos
rectángulos.
Es por ello que es muy común encontrar tales, en textos
especializados como: Definiciones de funciones trigonométricas por
triángulos rectángulos.
Destacando las seis funciones ya conocidas como “razones
trigonométricas”:
Dichas nociones de (Seno, Coseno, Tangente) surgen de manera muy
natural al estudiar las propiedades métricas. De una polígono como lo
es el triángulo rectángulo.
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NOTA:
Como medir las manchas de salpicadura.
Como restaurar las elipses ubicadas en las manchas de salpicadura.
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Ejercicio Nº 1
Manchas Problemas
1 2 3 4
1 6 5
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TABLA DE DATOS DE GOTEO ANGULAR
N° Eje mayor (largo) L
Eje menor (ancho) A
Sen A/L
Arco seno
Ángulo
1
2
3
4
5
6
7
8
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TABLA DE FUNCIONES TRIGONOMÉTRICAS
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Ejercicio Nº 1
Determinación de la localización de la víctima en la escena, en el
momento del ataque (Punto de Origen Tridimensional).
Para intentar reconstruir la secuencia de eventos en base a la morfología
de las manchas de sangre, el primer paso es determinar el lugar desde
donde se originó la mancha de sangre o sangrado, este proceso
involucra cuatro pasos:
1. Determinar la direccionalidad de las gotas de salpicadura.
2. Determinar el punto de convergencia de la trayectoria de varias gotas
de salpicadura en un plano bidimensional.
3. Calcular el ángulo de impacto de cada mancha de gota y finalmente,
4. El punto de origen tridimensional o ubicación de la fuente de sangre.
Usando el ángulo del impacto, los estudiantes pueden ahora determinar
la altura de la fuente de sangre sobre el punto de la convergencia. Un
triángulo recto se puede construir con la altura sobre la superficie del
blanco como un cateto o lado y la distancia horizontal del punto de la
convergencia a la fuente de la sangre como un segundo cateto o lado.
Ahora se puede determinar la altura substituyendo la distancia de la
fuente de la sangre y del ángulo del impacto en la definición de la
tangente del ángulo en cuestión.
El área o punto ubicado en el espacio tridimensional, donde la fuente de
sangre estuvo localizada, en el momento del incidente de sangrado por
impacto. Esta incluye el área de convergencia con una tercera dimensión
en el eje Z, el cual es perpendicular al piso, tiene tres dimensiones y se
determina incluyendo el ángulo de impacto.
Usando el ángulo del impacto, se puede determinar la altura de la
fuente de sangre sobre el punto de la convergencia. Un triángulo recto
se puede construir con la altura sobre la superficie del blanco como un
cateto o lado opuesto al ángulo y la distancia horizontal del punto de la
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convergencia a la fuente de la sangre y como un segundo cateto o lado
adyacente. Ahora se puede determinar la altura substituyendo la
distancia de la fuente de la sangre y del ángulo del impacto en la
definición de la tangente del ángulo en cuestión.
Usando la Ley de las tangentes se puede calcular el punto de origen o la
altura o distancia dependiendo de la situación piso para el primer caso y
pared para el segundo. Volviendo al triángulo rectángulo y añadiendo el
ángulo de impacto, se puede determinar la altura desde donde se
originó la salpicadura de sangre. La altura de la fuente de la sangre es el
lado opuesto al ángulo de impacto. Para solucionar la altura (o el lado
opuesto al ángulo de impacto), se aplica la Ley de las tangentes.
Esto se entenderá mejor con el siguiente ejemplo: Imaginen que los
investigadores de una escena del crimen observaron manchas de sangre
en el suelo de la cocina. Los investigadores dibujaron líneas de
convergencia y midieron la distancia desde la zona de convergencia para
el borde frontal de una gota de sangre. Esa distancia se registró como
1,75 metros. Después de la medición de la longitud y la anchura de la
gotita de la sangre y el uso de la Ley de los senos, se determinó que el
ángulo de impacto era de 27 grados. La policía quería para determinar
el punto de origen, o la altura desde el piso donde la persona estaba
sangrando.
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Resolviendo el problema planteado, tenemos que:
Tan = lado opuesto/ lado adyacente = Altura/Distancia
Tangente del ángulo de la mancha de sangre salpicada = Altura de la herida/Distancia desde la mancha de la gota sangre a la zona de convergencia.
Se sustituyen los valores en la ecuación:
Tan 27 ° = Altura de la herida/distancia
Tan 27 ° = Altura/1,75 m.
Resolviendo con la ayuda de una calculadora o la función arco tangente
o con la ayuda de una tabla de funciones trigonométricas:
Tan 27 ° = h/1,75 metros
0.51 = h/1,75 metros
Despejando h (altura):
h = ~ 0,89 metros es la distancia por encima del suelo, desde donde la
lesión proyecto la sangre.
Cateto opuesto o altura
Cateto adyacente o distancia del área de
convergencia al borde de
la mancha de sangre
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Fig. Nº 1. (Figura Problema).
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Taller Práctico Nº 5
Ejercicio Nº 1.
Determinación de la Naturaleza del Agente Impactante
A continuación se presenta en el grafico inferior un conjunto de
manchas de sangre de tipo salpicadura, producidas a consecuencia de
un impacto, para lo cual deberá medir el ancho de dichas gotas de
salpicadura (eje menor de la elipse), ordenarlos en tres grupos de
tamaño y encontrar el porcentaje de frecuencia de cada grupo y luego
determinar el tamaño preponderante.
Por investigaciones realizadas, se sabe que existe una relación entre el
tamaño de las gotas de salpicadura de una mancha de sangre y la
velocidad con que impacto el agente impactante y esta a su vez con el
tamaño de las manchas de salpicadura, esta información puede ser
crucial a la hora de intentar determinar el tipo de arma o agente
impactante que causó las gotas de salpicadura en una escena de crimen.
Las manchas de salpicadura de acuerdo a su tamaño, se ha clasificado
como sigue
1. Impactos de baja velocidad.- Compatibles con sangre que cae de una
herida abierta, o una superficie saturada de sangre, producto de la
fuerza de la gravedad, son de gran tamaño generalmente gotas de
tamaño predominantemente superior a los 4,0 mm. Estas gotas
aumentaran de tamaño a medida que aumenta la altura de caída sin
embargo, el tamaño de las salpicaduras, permanecerá constante
después de aproximadamente 4,0 pies (122 cms.,
aproximadamente).
2. Impactos de velocidad media.- Son compatibles con golpes con
objetos contundentes como un palo, un mazo, una herramienta
pesada, piedras, puño o pateaduras, etc. y producen
preponderantemente gotas de tamaño mayores a 1,0 mm y menores
a 4,0 mm.
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3. Impactos de alta velocidad.- Que son compatibles con impactos de
proyectiles de armas de fuego y accidentes con maquinaria a alta
velocidad y produce predominantemente gotas de tamaño entre 0,1
mm a 1,0 mm. (Fig. Nº 1).
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Fig. Nº 1
Tabla Nº 1
Grupo de
Intervalo
Tamaño de mancha
(ancho)
N° de gotas % de Frecuencia
(0,1 – 1,0) mm.
(1,0 – 4,0) mm.
(4,0 a más) mm.