SELECCIÓN EMBRIONARIA.Morfológica e invasiva.

Dr. David Agudo Garcillán

IVI Madrid

Time lapse

NGS

Cultivo hasta Blastocisto:

Mejora la selección del embrión, no tenemos que predecir cual llegará a estado de blastocisto.

-Mejora de los resultados.-Permite recomendar SET con mayores tasas de éxito.

D0Ovocitos blandos Membranas rígidas Granuloso Vesiculado Cuerpos refringentes

Cuerpos necróticos Vacuolas REL

- ClusteringTamañoCP pequeño CP gigante

2 cuerpos polares

- Ovocito elongado

ZIR

Zp gruesa

- ZP fina

CP fragmentado

Ovocitos=¿estimulación?

Estrategias para mejorar la calidad ovocitaria

Jennifer Couzin-Frankel. Science (March, 2015)

Selección de espermatozoides clásica y…

GRADO I Ausencia de vacuolas

GRADO II 2 vacuolas (<4%volumen)

GRADO III 1 vacuola grande (>4%volumen)

GRADO IV vacuolas grandes y otras anormalidades morfológicas

Selección del Blastocisto:

Grado 1 o blastocisto temprano (BT): se empieza a hacer visible el blastocele.Grado 2 o blastocisto cavitado (BC): se visualizan perfectamente las distintas partes del blastocisto.Grado 3 o blastocisto expandido (BE): el blastocisto ha aumentado su tamaño y la zona pelúcida es fina.Grado 4 o blastocisto iniciando eclosión (“hatching”): el blastocisto comienza a salir de la zona pelúcida.Grado 5 o blastocisto eclosionado (“hatched”): el blastocisto ya ha salido de la zona pelúcida.

+ resultados estables

+ embriones que lleguen a formar blastocistos

+ un buen programa de vitrificación

¿Por qué no hacersiempre transferenciade blastocistos?

Personal Equipamiento

Condiciones de cultivoestables

Control de calidadCondiciones de laboratorioestables

CONSEGUIR LOS MEJORES EMBRIONES: EL LABORATORIO

¿Es adecuado el cultivo largo para

todos los laboratorios de fecundación in

vitro?

CINEMATOGRAPHS OF LIVING DEVELOPING

RABBIT-EGGS

Lewis WH, Gregory PW.

Science. 1929 Feb 22;69(1782):226-9.

Nos permite cuantificar los tiempos exactos de división celular y

observar de manera pormenorizada el desarrollo embrionario

¿Qué pensáis del protagonista?

¿Argumento de la película?

Predicción

30 horas en cultivo

36 horas en cultivo

2 células

0% fragm

Simétrico

4 élulas

0% fragm

Simétrico

3 células

5% fragm

Asimétrico

? células

Muchos fragmentos

Asimétrico

32 horas en cultivo

34 horas en cultivo

OK

OK

No OK

No OK

Predicción

1ª Criterios de selección

7 Technical Characteristics

Bright FieldOptics Dark FieldBright Field Bright Field Bright Field

12 individuallyculture

Embryos /PT & Culture 12 group culture16 group culture14 Individually

culture14 individually

culture

Pictures every

10’Embryo imaging Pictures every 5’Pictures every 10’ Pictures every 10’ Pictures every 5’

Capacity – Patients 6/system 1/camera1/camera 6/system 6/system

7Focal Planes 1 1 1 4

ManualData Analyses Real TimeManual Manual Manual

Yes - HybridIntegrated Incubator NoNo Yes - Benchtop Yes - Benchtop

Time laps + morfología2ª estabilidad del cultivo

3ª marcadores predictivos time-lapse

• Wong, 2010, Cruz, 2012; Hashimoto, 2012Formación de

blastos

• Meseguer, 2011; Hlinka, 2012; Dal Canto, 2012; Meseguer, 2012; Campbell 2013Implantación

• Azzarello, 2012Recien nacido

vivo

• Wong, 2010; Chavez, 2012; Campbell, 2013; Basile, 2014

Contenido cromosómico

cc2= t3-t2 s2= t4-t3

Zygote t5t4t3t2

t6 BMt8t7

PNF

EB

Primer concepto: Morfocinética

Hours after ICSI <35.6 h35.6-38.2 h 38.2-40.2 h >40.2 h

Implantation 20.5% *

(n=24/116)33.6 %

(n=39/117)25.6%

(n=30/116)15.5% *

(n=18/117)

* p<0.05

10%

15%

20%

25%

30%

35%

<35 35-38 38-41 >41

% Im

pla

nte

d e

mb

ryo

s

Quartiles for 3 cell stageOptimal range for 3 cell stage

Optimal range

Out of range

Segundo concepto: Morfodinámica

División

irregular

3pn 2pn

Morphology

included

Grade A Grade B Grade C Grade D Grade E Discarded

excluded

yes no

yes nono yes

A+ A B+ B C+ C D+ D

CC2 5- 12h CC2 5-12h CC2 5-12h CC2 5-12h

yes no yes no yes no yes no

ExclusionCriteria

Direct CleavageUneven BlastomereMn 4c

T5

48-56h

s2

< 0,75h

S2

<0,75h

Based in a Logistic Regression model

PGS

Biopsia embrionaria

Blastómera D3PB Trofoectodermo D5

Partial gain chromosome 2p

Euploid embryo

Complex aneuploidy

Chaotic pattern

Loss of chromosome 13

Gain of chromosome 21

Secuenciación de nueva generación NGS

Tipo de embrión

Indicación

Calidad embrionaria

MitoScore

Embriones divididos en cuartiles en función de los valores de mts

MitoScore

IMPLANTED

NON

IMPLANTED

MitoScore Indicador de estrés energético en el embrión

Carrier Genetic Test (CGT). ¿Para quién?

Antes del tratamiento con gametos de donantes

❖ Selección de donantes no portadores de la misma mutación que la pareja

que aporta los gametos.

GCT Match nos permite

emplear cualquier

donante, incluso si es

portador de mutaciones.

Se estima que el 5-8% de

la población no es

compatible.

Genoma embrionario y mitTranscriptoma embrionarioProteoma embrionarioMetaboloma embrionariomiRNA

SET con mejores tasas de éxito.

Evitando enfermedades en los recién nacidos.

¡GRACIAS POR VUESTRA ATENCIÓN!