reporte de cromatografia en placa fina y columna

8/20/2019 Reporte de cromatografia en placa fina y columna

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Práctica No.4 “Fundamentos de la cromatografía en columna y en capa delgada”

Universidad Autónoma

Metropolitana

Práctica No. 4Fundamentos de la cromatografía en

columna y en capa delgada Laboratorio de QuímicaOrgánica

Profesor: Negrón Silva Guillermonri!ue

Ayudante: "odrígue# "omán $iridiana

"o%as Sandoval &aria Sarai

o!as "andoval Maria "arai


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Práctica No.4 “Fundamento de lacromatografía en columna y en capa -na.”

O#$%&'(Omplear la cromatografía para separar y puri-car los componentesorgánicos de una me#cla inaria de composición desconocida.

MA)O &%*')O

/a cromatografía es un m0todo !ue permite la separación1identi-cación y determinación de los componentes !uímicos enme#clas comple%as.

/os m0todos cromatógra-cos ,acen uso de una fase estacionaria yuna fase móvil. n todas las separaciones cromatografícas1 lamuestra se despla#a con una fase móvil1 !ue puede ser un gas1 unlí!uido o un 2uido. sta fase móvil se ,ace pasar a trav0s de una faseestacionaria con la !ue es inmiscile1 y !ue se -%a a una columna o auna super-cie sólida. /as dos fases se eligen de tal forma1 !ue loscomponentes de la muestra se distriuyen de modo distinto entre lafase móvil y la fase estacionaria. 3!uellos componentes !ue sonfuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente

con el 2u%o de la fase móvil por el contrario1 los componentes !ue seunen d0ilmente a la fase estacionaria1 se mueven con rapide#. 5omoconsecuencia de la distinta movilidad1 los componentes de la muestrase separan en andas o #onas discretas !ue pueden anali#arsecualitativa y6o cuantitativamente.

n esta práctica de laoratorio se reali#ara 7 tipos de cromatografía1en placa -na y en columna.

Placa +na

/a cromatografía en capa -na 89/5: es una t0cnica analítica rápiday sencilla1 muy utili#ada en un laoratorio. sta permite determinar elgrado de pure#a deun compuesto1 determinar así la efectividad de una etapa de puri-cación1 comparar muestras 8si dos muestras corren igual en placa podrían ser id0nticas. Si1 por el contrario1 corren distinto entonces no son la misma sustancia:1 reali#ar el seguimiento de una reacción1 estudiar cómodesaparecen los reactivos y cómoaparecen los productos -nales o saer cuándo la reacción ,a acaado.


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/a muestra a anali#ar se deposita en un e;tremo de una lámina de plástico o aluminio !uepreviamente ,a sido recuierta de una -na capa de adsorente 8faseestacionaria:. ntonces1 la lámina se coloca

en una cueta cerrada !ue contiene uno o varios disolventes me#clados 8eluyente o fase móvil:.

3 medida !ue la me#cla de disolventes asciende por capilaridad a trav0s del adsorente.

evelado de las placas/a mayor parte de las placas de cromatografía llevan un indicador2uorescente !ue permite la visuali#ación de los compuestos activos ala lu# ultravioleta 87


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>eterminación del "f

/a retención y la selectividad en la separación dependen de los

valores respectivos de las constantes de los diferentes e!uilirios!uímicos !ue tienen lugar1 !ue están en función de)

• /a polaridad del compuesto. /os solutos más polares !uedaránmás retenidos puesto !ue se adsoren más -rmemente a loscentros activos de la fase estacionaria1 mientras !ue los nopolares se eluirán con mayor facilidad.

• /a naturale#a del disolvente. 3sí1 para un mismo compuesto1 unaumento en la polaridad del disolvente facilita su

despla#amiento en la placa./a relación entre las distancias recorridas por el soluto y por eleluyente desde el origen de la placa se conoce como "f.

Para calcular el "f

"f ? distancia recorrida por el compuesto 8@: 6 distancia recorridapor el eluyente 8A:

/a distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de lamanc,a.


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Se recomienda elegir un eluyente en el !ue los componentes de la me#cla presenten un "f medio entorno a (.+6(.


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)romatogra+a en

placa +na

Para el reactivo 31 D151 >1 y F1 Duscar la

fase ideal

cortas placas de silicade apro; de 7;4 cm1marcar los ordes de

(.4 cm

me#clar unacominacion en

proporcion diferenteo igual de acetato de

etilo y eter depetroleo como fase

n cada placa desilica poner una 4

gota s de 31D1 51 >1 1y F respectivamentemediante un capilar

poner cada una encontanto con nuestrafase seleccionada en

una cuetacromatoggra-ca

revelar cada placaa%o una lu# =$.

si no aparece una

manc,a cerca delcento seguir

proando con unadiferente propotcion

de fase.


móvil o eluyente.ste puede ser un disolventeCnico o dos misciles de distinta polaridad. n el siguiente recuadro se recogepor orden creciente de fuer#a eluyente los disolventes más comCnme

nte empleados.

Ee;ano tetraclorometano cloroformo diclorometano acetatode etilo acetona 7propanol metanol agua

n general1 estos disolventes se caracteri#an por tener a%os puntos de eullición y viscosidad1 lo !ue les permite moverse con rápidamente. =sualmente se emplea una me#cla de dos disolventes enproporción variale.

%"AOLLO %/P%'M%N&AL


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)romatogra+a en

columna

montar una ueretaen solporte universal

y lo!uear ele;tremo con un

algodon

mo%ar con un e;ceso de fasemovil

verter suavemente lame#cla de silica gel

,asta '( cmdrenar parcialmnte

la fase movilverter nuestra

solución a separar

arir valvulaagregar de ' a + ml

de fase movil

ir llenando tuos deensayo con lo !uesalga de la ureta

para cada tuo ,aceruna placa -na

cromatogra-ca paraidenti-car !ue esta

saliendo de la ureta

%untar los tuos conlos compuestos !ue

salieron al principio yal ultimo

respectivamnete

colocralos enmatraces esfericos y

llevralos aconcentrar al

rotavapor.


MA&%'AL 0 %A)&'(O"

Material

• Dureta con válvula dete2ón

• ' gradilla con '< tuos deensayo 8'< ml:

• ' matra# esf0rico de '((ml1 %unta 7464(

• 7 vasos de precipitado de'(( y '


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•


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O#"%(A)'ON%"

)romatogra,ía en placa +na

• Duscar la fase ideal para cada reactivo. 8"Fi H (.


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• Para esta placa el reactivo D se encuentraa la mitad1 por lo tanto la fase ideal es solo0ter de petróleo.

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• Para reactivo >1 y F

•

• Prueba 12 7)' acetato de etilo60ter de petróleo

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• Para esta placa el Cnico reactivo !ue seencuentra a la mitad es el F1 por lo tantola fase ideal para este es 7)' acetato deetilo60ter de petróleo.

•

•

• Prueba 12 ')' acetato de etilo60ter depetróleo

•

• Para esta placa amos reactivos !ue seencuentran a la mitad1 por lo tanto la faseideal para estos es ')' acetato deetilo60ter de petróleo.

•

•

•

• Tabla 1. Fase ideal para cada reactivo.


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•

• Para esta me#cla @A la fase ideal es ')'0ter de petróleo6acetato de etilo1 ya !ue @ y

A se tiene diferente polaridad en esta fase,aciendo posile su separación.

• /2 siendo el compuesto menos polarserá el primero en salir.

• 02 siendo el compuesto más polar será elCltimo en salir.

•

Pruebas para muestras 1-13

&ubo 1

•

• n esta placa se puede oservar !ue noe;iste componente @ en la solución !ueempie#a a salir de la ureta.

•

•

•

&ubo 38 68 4 0 9

n esta placa se puede oservar !ue en las4 muestras contienen componente @.

•

•

•

•

&ubo :8 ;8 < - =

•

@

A


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• n esta placa se puede oservar !ue en lamuestra L y K no contiene ningCncomponente. Sin emargo en la muestra Jy M ya e;iste componente A.

•

•

•

Muestra directo de la bureta despus del tubo =

•

•

sta placa se reali#ó con el propósito dedeterminar aun la e;istencia de componente1de la solución !ue sale de la ureta. A nosindicó !ue aCn la solución !ue salía de laureta contenía componente A.

•

•

•

&ubo 1>8 118 13 - 16

•

n esta placa se puede oservar !ue en las 4muestras contienen componente A.

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•

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•

Muestra directa de la bureta para determinar si a?ncontenía compuesto 0.


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• sta Cltima placa se tomó con el propósitode determinar el contenido de la solución!ue salía de la ureta despu0s del tuo '+.

• Se puede oservar !ue esta solución ya nocontenía ningCn componente1 por lo tantoa!uí se concluyó la separación de lasolución @A.

•

•

• 9ala +. 5ontenido de los tuos.

• No.tuo

• 5ontenido

• ' • nada• 7 • @•

+ •

@• 4 • @• < • @• L • nada• K • nada• J • A• M • A• '( • A•

'' • A• '7 • A• '+ • A•

• n un matra# se %untó los tuos J'+ !ue contenían la soluciónmás polar1 en otro matra# los tuos 7< !ue contenían lasolución menos polar.

• Peso matra# 8': ? LJ.JJM g

• Peso matra# 87: ? L7.(


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• /as soluciones de los matraces se concentraron en el rotavapor.

• Peso matra# 8': sol. &as polar ? KM.K


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•

•

• 9ala


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