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Sistema ABOSistema ABO
Dra. Fabiana [email protected] de Hemoterapia e InmunohematologíaHospital de Clínicas “José de San Martín”
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PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA
1901 Karl Landsteiner El mas importante de todos los
sistemas de grupo sanguíneo en la práctica transfusional
Primer sistema de grupo sanguíneo descubierto
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PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA
Único sistema de grupo sanguíneo en el cual existen anticuerpos circulantes predecibles dirigidos hacia antígenos ausentes en los glóbulos rojos de todos los individuos
Sin exposición previa por transfusión o embarazo
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PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA
La transfusión de glóbulos rojos ABO incompatibles produce la lisis intravascular inmediata de las células
RHPT inmediata y severa Aun hoy se reporta como causa de
muerte asociada a la transfusión
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PERSPECTIVA HISTORICAPERSPECTIVA HISTORICA
La tipificación ABO es la prueba inmunohematológica mas utilizada
La detección de incompatibilidad ABO entre donante y receptor es la base de las pruebas de compatibilidad pretransfusionales
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HERENCIAHERENCIA
1924 Bernstein describe teoría de la herencia del sistema
Demuestra que un individuo hereda un gen ABO de cada progenitor y que ambos determinan que antígenos están presentes en la membrana del GR
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HERENCIAHERENCIA
Expresión codominante Locus en el cromosoma 9 Ocupado por gen A, B o O en cada
cromosoma Genes A y B codifican
glicosiltrasferasas específicas Gen O es considerado amorfo
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HERENCIAHERENCIA
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FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS
Interacción de genes de 3 locus separados:– Hh– ABO– Se
No producen antígenos Producen glicosiltransfersas
específicas que adicionan azúcares inmunodominantes a una sustancia precursora común
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FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS
Sustancia precursora Tipo 2 Galactosa terminal unida a N-acetil-
galactosamina mediante uniones β 1→4
Sustancia precursora Tipo 1 Galactosa terminal unida a N-acetil-
galactosamina mediante uniones β 1→3
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β 1→4
FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS
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FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS
Gen
Glicosiltransferasa
Azúcar inmunodomin
anteAntígeno
H α-2-L-fucosiltransferasa L-fucosa H
Aα-3-N-
acetilgalactosaminil-transferasa
N-acetil-galactosamina A
Bα-3-D-
galactosiltransferasa
D-galactosa B
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FORMACION DE ANTIGENOSFORMACION DE ANTIGENOS
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GENETICA MOLECULARGENETICA MOLECULAR
Los genes ABO se componen de 7 exones
Exones 6 y 7 codifican para el dominio catalítico de las glicosiltransferasas
Reacciones serológicas débiles se deben a la presencia de sustituciones de aa producidas por– Deleciones– Mutaciones– Recombinación de genes
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ANTIGENOSANTIGENOS
Gen A produce mayor cantidad de transferasa específica que el gen B
Gen A: 810.000 a 1.170.000 sitios antigénicos
Gen B: 610.000 a 830.000 sitios antigénicos
Ambos A y B: 600.000 sitios antigénicos A y 720.000 sitios antigénicos B
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ANTIGENOSANTIGENOS
Desarrollados a los 37 días de la vida fetal
El RN tiene del 25 al 50% del número total de sitios antigénicos del adulto
La expresión de antígenos A y B se desarrolla por completo a los 2 a 4 años de vida y permanece constante
La expresión fenotípica puede variar con la edad, raza, interacciones genéticas y en estados de enfermedad
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ANTIGENOSANTIGENOS
Presentes en la membrana de – Glóbulos rojos– Plaquetas– Linfocitos– Células endoteliales– Células epiteliales
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ANTIGENOS SOLUBLESANTIGENOS SOLUBLES
Presentes en secreciones normales – Saliva– Lagrimas– Bilis– Leche– Jugo gástrico– Liquido amniótico
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ANTIGENOS SOLUBLESANTIGENOS SOLUBLES
Presentes en fluidos patológicos – Derrame pleural– Peritoneal– Pericárdico– Quistes de ovario
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ANTIGENOSANTIGENOS
En membrana de GR pueden ser:– Glicolípidos– Glicoproteínas– Glicoesfingolípidos
En secreciones son:– Glicoproteínas
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ANTIGENOS SOLUBLESANTIGENOS SOLUBLES
Gen Se codifica α-2-L-fucosiltransferasa 80% de la población que hereda un gen
secretor Se (SeSe o Sese) es secretora Modifica sustancia precursora tipo 1
para expresar sustancia H que puede ser modificada para expresar sustancia A o B en las secreciones
Glicoproteínas
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SUBGRUPOS ASUBGRUPOS A
1911 von Dungern describe A1 y A2 de acuerdo a la reacción de GR con anti-A y anti-A1
99% de individuos A son A1 o A2 – 80% A1 o A1B– 20% A2 o A2B
Diferencia es cualitativa y cuantitativa Reaccionan con igual intensidad con
reactivos anti-A
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REACTIVOS ANTI-A y ANTI-HREACTIVOS ANTI-A y ANTI-H
Anti-A1:– Anti- A1 humano absorbido (anti-A de
individuos B absorbido con GR A2)
– Lectina Dolichos Bilorus Anti-H
– Lectina Ulex Europaeus
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SUBGRUPOS ASUBGRUPOS A
Diferencias cuantitativas:– Menor número de sitios antigénicos– Menor cantidad de transferasas– Cadenas menos ramificadas
Diferencias cualitativas:– Diferencias en la estructura antigénica– Sutil diferencia en las transferasas
– Formación de Anti- A1 en algunos subgrupos
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
Diferencias cuantitativas Gen A1 produce mayor concentración
de α-3-N-acetilgalactosaminil-transferasa– Convierte casi toda la sustancia H en
820.000 a 1.700.000 sitios antigénicos A1
en los GR adultos– Gen A2 produce solo entre 240.000 y
290.000 sitios antigénicos En ambos el azúcar inmunodominante
es N-acetil-galactosamina
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
Diferencias cualitativas 1 a 8% de A2 y 22 a 35% de A2B
producen anti-A1
A1 presentan antígeno A y A1
A2 solo presentan antígeno A
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
Cantidad de sustancia H
O > A2 > B > A2B > A1 > A1B
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
4 formas diferentes de Ag. H – H1 y H2 cadenas rectas no ramificadas
– H3 y H4 cadenas completamente ramificadas
H1 y H2 son convertidas a antígenos Aa Ab por transferasas A1 y A2
H3 y H4 son convertidas a antígenos Ac Ad por transferasas A1
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
Mas sustancia H remanente en GR A2 (H3 H4)
En algunos individuos A2 – muy poco Ac – no hay Ad
Anti-A1 dirigido a determinantes Ac Ad
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
Transferasa B es mas eficiente que la A en convertir sustancia H en el antígeno correspondiente
Transferasa A2 falla completamente
A2B pierde componentes Ac Ad y produce anti-Ac y Ad (anti-A1)
RN deficiencia de H3 y H4 (Ac y Ad)
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SUBGRUPOS A SUBGRUPOS A
Glóbulos rojos A1:– Aa Ab Ac Ad
– H3 y H4 completamente convertidos en A1
Glóbulos rojos A2:– Predominantemente Aa Ab
– Sitios antigénicos H3 y H4
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Se reconocen por discrepancias ABO
< 1% Características:
– Disminución de sitios antigénicos A– Variación en la aglutinación con anti-
AB– Variación en la detección de Ag H
– Presencia o ausencia de anti-A1
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Métodos para diferenciar fenotipos débiles A3; Ax; Aend; Am; Ay; Ael
Prueba directa con anti-A, anti-AB anti-H Inversa con GR A1 A2
Técnicas de adsorción-elusión con anti-A Búsqueda de sustancia A y H en saliva Búsqueda de glicosiltransferasas en
suero Descartar enfermedades
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
A3
Patrón de aglutinación en campo mixto con anti-A y anti-AB
35.000 sitios antigénicos por GR Actividad débil en suero de
α-3-N-acetilgalactosaminiltransferasa
Heterogeneidad de enzimas aisladas en diversos individuos A3
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Individuos A3 se dividen en 3 grupos de acuerdo a reacción de transferasas:– Grupo 1: reacciona a pH 7 y tiene
baja actividad– Grupo 2: no detectable– Grupo 3: reacciona a pH 6 y muestra
1/3 de la actividad normal en A1.Puede convertir O en A sin patrón A3
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Pueden presentar Anti-A1 Se detecta sustancia A en
individuos secretores Alelo dominante del gen ABO Heterogeneidad molecular
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Ax
No aglutina con anti-A Aglutina con la mayoría de anti-AB 4.000 sitios antigénicos por GR No se detecta transferasa en suero Puede detectarse fácilmente con
técnicas de adsorción-elusión Producen anti-A1
Solo se detecta H en secretores
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Aend
Campo mixto con anti-A anti-AB < 10%
3.500 sitios antigénicos solo en los GR que aglutinan
No se detecta transferasa en suero Puede producir anti-A1
Solo se detecta H en secretores Variantes de Aend : Afinn y Abantu
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Am
No aglutina o muy débilmente con anti-A
200 a 1.900 sitios antigénicos por GR No se detecta transferasa en suero Puede confirmarse con técnicas de
adsorción-elusión Cantidad normal de sustancia A y H
en secretores
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Ay
No aglutina con anti-A y anti-AB 200 a 1.900 sitios antigénicos por GR Trazas de transferasa en suero Técnicas de adsorción-elusión menos
actividad en eluido que Am
Sustancia A y H en secretores menos que normal
Mutación familiar. No es alelo de ABO
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SUBGRUPOS DEBILES DE A SUBGRUPOS DEBILES DE A
Ael
No aglutina con anti-A y anti-AB Solo detectable por adsorción-
elusión No se detecta transferasa en suero Solo sustancia H en secretores Usualmente presenta anti-A1
Puede presentar anti-A Alelo raro del locus ABO
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SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B
Métodos para diferenciar fenotipos débiles
B3; Bx; Bm; Bel
Tipo y potencia de aglutinación con anti-B, anti-AB anti-H
Presencia o ausencia de aglutininas en suero
Técnicas de adsorción-elusión con anti-B
Búsqueda de sustancia B y H en saliva Producida por alelos de gen B
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SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B
B3
Patrón de aglutinación en campo mixto con anti-B y anti-AB
Transferasas en suero pero no en membrana
Alelo raro locus ABO Ausencia de anti-B en suero Cantidad normal de sustancia B en
secretores
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SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B
B3
Aglutinación débil con anti-B y anti-AB
No presenta transferasas en suero o en membrana
Alelo raro locus ABO Presencia de anti-B débil en suero Cantidad aumentada de sustancia
H y B en secretores
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SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B
Bm
No aglutina con anti-B y anti-AB Técnicas de adsorción-elusión con anti-B Presenta transferasas con poca actividad Alelo raro locus ABO o interacciones
genéticas Presencia de sustancia H y B en
secretores Mas frecuente en Japón
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SUBGRUPOS DEBILES DE B SUBGRUPOS DEBILES DE B
Bel
No aglutina con anti-B y anti-AB Técnicas de adsorción-elusión con
anti-B No presenta transferasas en suero Puede presentar anti-B débil en
suero Solo sustancia H en secretores
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FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY
1952 Bhende Genotipo hh Genes ABO presentes sin expresión 130 fenotipos reportados en el
mundo No presentan antígenos A, B y H en
membrana Fenotipo O en prueba directa No reacciona con anti-H
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FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY
Categoría 1: deficientes de H no secretores hh sese– presenta anti-A, anti-B, anti-AB en el
suero– Potente anti-H de amplio rango térmico
en suero– Ausencia de fucosiltransferasa en suero– Presencia de transferasa A y B en suero
– Solo compatibles con GR Oh
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FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY
Categoría 2: parcialmente deficientes de H no secretores– Expresan formas débiles de antígeno A y
B– Técnicas de adsorción-elusión– No se detecta transferasa H– Producido por gen mutante de H que
produce bajos niveles de transferasa– Toda la sustancia H se convierte en A y B – Anti-H en suero menos potente que Oh
– Ah, Bh y ABh
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FENOTIPO BOMBAYFENOTIPO BOMBAY
Categoría 3: Fenotipo para-Bombay hh Se – Expresan formas débiles de antígeno A B y
H– Aglutinados solo por lectina anti-H– Técnicas de adsorción-elusión revelan H en
GR– Anti-IH reactivo a baja temperatura en
suero– Cantidad normal de sustancia H A y B en
saliva – Se detecta transferasa H débil
– Oho ; Oh
A ; OhB ; Oh
AB
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Errores tipificación Errores tipificación ABOABO
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CAUSAS DE ERRORCAUSAS DE ERROR
Identificación incorrecta de materiales
Identificación incorrecta de muestras
Errores administrativos Registro de resultados incorrecto
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CAUSAS DE ERRORCAUSAS DE ERROR
Confusión o mezcla de muestras Relación suero-células inapropiada Reactivos contaminados o
inactivados Material de vidrio sucio
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CAUSAS DE ERRORCAUSAS DE ERROR
Falla en la interpretación de hemólisis
Temperatura de reacción > 20°C Centrifugación insuficiente o
excesiva Centrifugas mal calibradas
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DISCREPANCIAS ABO
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GRUPO 1GRUPO 1Pérdida de reactividad del anticuerpo Edad:
– RN: producción de anticuerpos entre 3 y 6 meses de vida
– Ancianos: disminución de la producción de anticuerpos
Drogas inmunosupresoras Quimerismo: doble población de
GR que produce campo mixto
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GRUPO 1GRUPO 1Pérdida de reactividad del anticuerpo Enfermedades:
– Hipogamaglobulinemia asociada a Leucemias y linfomas
– Agamaglobulinemia congénita– TMO – Inmunodeficiencias
Dilución por transfusión de plasma Subgrupos de ABO
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GRUPO 1GRUPO 1ResoluciónAumentar la reacción en la prueba inversa Incubar a mezcla a TA durante 15-30
min Incubar a mezcla a 16°C o a 4°C
durante 15-30 min Utilizar autocontrol y control con GR “O”
para evitar autoaglutininas frías Quimerismo: transfusión de sangre o
TMO, EXT o HFM
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GRUPO 2GRUPO 2Pérdida de reactividad del antígeno Genotipos inusuales: subgrupos A o B
con expresión antigénica disminuida. Enfermedad: leucemia aguda o
linfoma de Hodgkin pueden deprimir la expresión antigénica
Sustancias específicas de grupo en gran concentración: inactivan el suero al usar sangre entera (Ca estómago y páncreas, quiste de ovario)
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GRUPO 2GRUPO 2Pérdida de reactividad del antígeno Antígenos adquiridos: acción de Gram-
o debido a alteraciones del intestino grueso (Ca colon y recto u obstrucción intestinal) Mecanismos: adsorción de polisacáridos bacterianos a los GR (Proteus mirabilis)
Anticuerpos contaminantes en los reactivos contra Ag de baja frecuencia
Anticuerpos anti acriflavina (anti-B)
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GRUPO 2GRUPO 2Resolución
Resolver subgrupos de A Interrogar sobre enfermedad de
base Uso de GR lavados (exceso
sustancia grupo específica y anticolorantes)
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GRUPO 2GRUPO 2Resolución Acidificar Anti-B a pH6 o investigar
presencia de sustancia A en secretores (Ag B adquirido)
Probar diferentes lotes de antisueros para evitar la presencia de anticuerpos contra Ag de baja
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GRUPO 3GRUPO 3Anormalidades plasmáticas
Formación de Rouleaux o pseudoaglutinación
Aumento GG: – discrasia de células plasmáticas– Mieloma Múltiple– macroglobulinemia de Waldenström
Elevación de fibrinógeno Expansores plasmáticos: dextrán
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GRUPO 3GRUPO 3Resolución
Agregar solución fisiológica en el tubo
Utilizar GR lavados
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GRUPO 4GRUPO 4Anticuerpos adicionales Autoanticuerpos:
– aglutinación espontánea por auto Ac fríos
– pacientes con AHAI caliente– Causada por drogas
Anti-A1: en individuos A2 o A2B
Anticuerpos irregulares Poliaglutinación: alteración de la
superficie
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GRUPO 4GRUPO 4Resolución
Autoanticuerpos fríos: – Lavar GR a 37°C– Autoadsorción
Autoanticuerpos calientes– Tratar GR con Cloroquina
Anticuerpos irregulares: uso GR Ag negativo
Determinar el tipo de poliaglutinación utilizando lectinas
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Muchas Gracias