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DOCUMENTO Qumica Clnica 2006; 25 (2) 104-110

NDICE

0. Introduccin1. Objeto y campo de aplicacin2. Normas para consulta3. Definiciones4. Requisitos metrolgicos: criterios de aceptacin5. Procedimiento 5.1. Patrones 5.2. Condiciones ambientales 5.3. Procedimiento de calibracin 5.4. Clculo del error sistemtico y de la incertidumbre de

medida 5.5. Frecuencia de calibracin6. Aplicaciones7. BibliografaAnexo 1. Clculo de la incertidumbreAnexo 2. Ejemplo de resultados de calibracin

0. INTRODUCCIN

Las pipetas que se utilizan para la dispensacin de volmenes que pudieran afectar, directa o indirectamente, la calidad de los resultados generados en el laboratorio, deberan estar apro-piadamente calibradas.

Segn las normas para la gestin de la calidad ISO 15189 e ISO 9001, los laboratorios clnicos deben establecer una pro-gramacin que controle y demuestre peridicamente que sus instrumentos de medida se encuentran calibrados y mantener documentos que describan los procedimientos de calibracin y los criterios de aceptacin, as como informes que contengan datos de las calibraciones efectuadas.

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN

La presente recomendacin describe un procedimiento gravi-mtrico para la calibracin de pipetas y dispensadores mec-nicos de volmenes superiores a 0,05 mL2.

2. NORMAS PARA CONSULTA

Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volu-mtricos accionados mediante pistn. Parte 1: Termino-

loga, requisitos generales y recomendaciones de uso. UNE-EN-ISO 8655-1: 2002. Madrid: AENOR; 2002.

Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volum-tricos accionados mediante pistn. Parte 2: Pipetas tipo pis-tn. UNE-EN-ISO 8655-2: 2002. Madrid: AENOR; 2002.

Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volum-tricos accionados mediante pistn. Parte 5: Dispensadores. UNE-EN-ISO 8655-5: 2002. Madrid: AENOR; 2002.

Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volu-mtricos accionados mediante pistn. Parte 6: Mtodos gravimtricos para la determinacin del error de medicin. UNE-EN-ISO 8655-6: 2002. Madrid: AENOR; 2002.

Asociacin Espaola de Normalizacin. Laboratorios Clni-cos. Requisitos particulares relativos a la calidad y la compe-tencia. UNE-EN-ISO 15189: 2003. Madrid: AENOR; 2003.

Asociacin Espaola de Normalizacin. Sistemas de ges-tin de la calidad. Requisitos. UNE-EN-ISO 9001: 2000. Madrid: AENOR; 2000.

Centro Espaol de Metrologa. Vocabulario internacional de trminos fundamentales y generales de metrologa (VIM). Madrid: Ministerio de Obras Pblicas, Transpor-tes y Medio Ambiente; 1994.

Entidad Nacional de Acreditacin. Expresin de la incer-tidumbre de medida en las calibraciones. CEA-ENAC-LC/02 (Rev.1). Madrid: ENAC; 1998

Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular. Comit Cientfico. Comisin de Metrologa. Recomendaciones para la calibracin de balanzas y para la estimacin de la incertidumbre de las medidas de masa en el laboratorio clnico. Barcelona: Quim. Cln. 2004; 23: 35-39.

3. DEFINICIONES

3.1. CalibracinConjunto de operaciones que establecen, en condiciones espe-cificadas, la relacin entre los valores de una magnitud indica-dos por un instrumento de medida o un sistema de medida, o los valores representados por una medida materializada o por un material de referencia, y los valores correspondientes de esa magnitud realizados por patrones (VIM).

NOTA: En el caso de material volumtrico, es el conjunto de operaciones que establecen la relacin entre el volumen dis-pensado y el volumen nominal o seleccionado correspondiente del aparato (ISO).

3.2. Error mximo permitido (de un instrumento de medida)Valor extremo de un error permitido por especificaciones, regla-mentos, etc., para un instrumento de medida dado (VIM).

1Composicin de la Comisin: J. Batista Castellv, F. Canalias Reverter, F.J. Gella Toms, B. Gonzlez de la Presa, R. Ruiz Morer, M. Snchez Manrique (Presidenta).2Para volmenes inferiores a 0,05 mL, la evaporacin durante el proceso de calibracin debe ser compensada por clculo o tomar medidas adicionales para evitarla.

Recomendaciones para la calibracin de material volumtrico en el laboratorio clnico

Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa MolecularComit CientficoComisin de Metrologa1Documento E, Fase 3, Versin 1Preparado por R. Ruiz Morer

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NOTA: En el caso de material volumtrico, es el valor extremo superior o inferior permitido para la desviacin del volumen dis-pensado a partir del volumen nominal o el volumen seleccionado de un aparato volumtrico accionado mediante pistn (ISO).

3.3. Error sistemticoMedia que resultara de un nmero infinito de medidas del mismo mensurando realizadas bajo condiciones de repetibili-dad menos un valor verdadero del mensurando (VIM).

NOTA: En el caso de material volumtrico, es la diferencia entre el volumen dispensado y el volumen nominal o volumen seleccionado de un aparato volumtrico accionado mediante pistn (ISO).

3.4. Exactitud (de un instrumento de medida)Aptitud de un instrumento de medida para dar respuestas prximas a un valor verdadero (VIM).

3.5. ImprecisinCoeficiente de variacin de un conjunto de resultados obte-nidos al medir repetidamente un mensurando con un mismo procedimiento de medida.

3.6. Incertidumbre de medidaParmetro, asociado al resultado de una medicin, que carac-teriza la dispersin de los valores que podran razonablemente ser atribuidos al mensurando (VIM).

3.7. Intervalo de medidaMdulo de la diferencia entre dos lmites de un intervalo nominal (VIM).

3.8. PatrnMedida materializada, instrumento de medida, material de referencia o sistema de medida destinado a definir, conservar o reproducir una unidad o uno o varios valores de una magnitud para que sirvan de referencia (VIM).

3.9. Rango de indicacinConjunto de valores limitado por las indicaciones extremas (VIM).

3.10. ResolucinLa menor diferencia de indicacin de un dispositivo visualiza-dor que puede percibirse de forma significativa (VIM).

3.11. TrazabilidadPropiedad del resultado de una medicin o de un patrn tal que pueda relacionarse con referencias determinadas, generalmen-te a patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de comparaciones teniendo todas las incertidumbres determinadas (VIM).

3.12. Valor nominalValor redondeado o aproximado de una caracterstica de un ins-trumento de medida que sirve de gua para su utilizacin (VIM).

4. REQUISITOS METROLGICOS: CRITERIOS DE ACEPTACIN

El error mximo de medida de volumen permitido (EMP) en el laboratorio clnico depende sustancialmente del objeto de la

medicin. De forma general pueden establecerse las siguientes categoras:

A. Mediciones de volumen que pueden afectar al valor de una magnitud de un patrn/calibrador o relaciona-das con un proceso de calibracin. Por ejemplo, en la reconstitucin de un calibrador liofilizado.

B. Mediciones de volumen que pueden afectar al valor de una magnitud de un material de control o relacionadas con procesos de control/verificacin. Por ejemplo, en la reconstitucin de un control liofilizado.

C. Mediciones de volumen que pueden afectar el valor de una magnitud de una muestra. Por ejemplo, en procedi-mientos de medida manuales o dilucin de una muestra para su reproceso.

D. Otras mediciones de volumen. Por ejemplo, en la prepa-racin de disoluciones de reactivos.

Teniendo en cuenta el estado actual de la tecnologa de los instrumentos para la dispensacin de volumen utilizables en los laboratorios clnicos, se recomiendan los requisitos para el error mximo permitido de las mediciones de volumen que se muestran en la siguiente tabla. Estos valores deben conside-rarse como una aproximacin razonable y aplicable a muchas situaciones del laboratorio clnico. No obstante, determinadas circunstancias pueden exigir requisitos ms o menos estrictos que los aqu recomendados.

Categora EMP (%)

A 1 B 2 C 3 D 5

Para cada pipeta o dispensador del laboratorio deben esta-blecerse las medidas que con dicho instrumento se efectan y asignarle como error mximo permitido el ms estricto de las categoras de medida que se realizan con el mismo. El error mximo permitido se utilizar como criterio de aceptacin de las calibraciones.

5. PROCEDIMIENTO

5.1. PatronesPara la calibracin de las pipetas debe utilizarse como patrn una balanza previamente calibrada y de resolucin adecuada para el volumen de la pipeta a calibrar.

La balanza puede ser calibrada por el propio laboratorio clnico3 o por una empresa externa, en cuyo caso la calibracin debe acompaarse de un certificado de calibracin expedido por un laboratorio acreditado o un instituto nacional de metro-loga, debiendo constar en dicho certificado la trazabilidad al patrn nacional, la incertidumbre expandida y el factor (o probabilidad) de cobertura que se ha utilizado en el clculo de la incertidumbre expandida.

5.2. Condiciones ambientalesDeben evitarse situaciones ambientales extremas, procurando que la calibracin se realice bajo condiciones similares a las

3Ver documento Recomendaciones para la calibracin de balanzas y para la estimacin de la incertidumbre de masa en el laboratorio clnico.

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de uso de la pipeta. Evitar las corrientes de aire y reducir en lo posible la duracin de la ejecucin de las medidas u otras condiciones que pudieran favorecer la evaporacin.

5.3. Procedimiento de calibracinCuando la pipeta es de volumen variable, seleccionar para la calibracin el volumen mnimo, el volumen mximo y un volumen intermedio, y para cada uno de ellos proceder como sigue.

A. Antes de realizar la calibracin debe llevarse a cabo una inspeccin visual de la balanza, comprobar que est adecuadamente calibrada y llevar a cabo su limpieza, si es oportuno.

B. Colocar el recipiente de pesada en el plato de la balan-za, pesarlo y anotar el valor de la tara (que se tendr en cuenta para seleccionar la incertidumbre expandida correspondiente al punto de calibracin de la balanza ms cercano a la masa total que se mide). Realizar un ajuste a 0 de la tara.

C. Dispensar el volumen de agua destilada correspondiente al volumen nominal de la pipeta en el recipiente y anotar el valor de la pesada.

D. Repetir el apartado C 10 veces consecutivas.

5.4. Clculo del error sistemtico y de la incertidumbre de medida

A. Los clculos se realizan individualmente para cada uno de los puntos de calibracin4.

B. Calcular el valor medio (vm) y la desviacin tpica (si) de cada serie de 10 medidas.

C. Calcular el error sistemtico relativo (ESrel), expresado en %, restando el valor nominal (vn) de la media obteni-da para dicho volumen, y dividiendo posteriormente por el valor nominal.

vm-vnESrel = 100vnD. Calcular la incertidumbre relativa combinada expandida

para una probabilidad de cobertura de aproximadamente el 95% (Urel), expresada en %:

si2 + 0,084 r2 + 0,25 up2Urel = 200 vm

En el ANEXO-1 se detalla el origen de los trminos de esta ecuacin.

E. Evaluar los resultados. La suma del valor absoluto de ESrel con la Urel debe ser inferior o igual al error mxi-mo permitido. Estas condiciones son aplicables a todos los puntos de calibracin.

5.5. Frecuencia de calibracinSe recomienda calibrar las pipetas y dispensadores cada 3 meses.

Ello debe considerarse como una aproximacin, pudiendo variar en funcin de la frecuencia y naturaleza del uso de la pipeta o dispensador.

Tambin deberan calibrarse siempre que exista alguna sos-pecha de funcionamiento incorrecto o de haber sido sometidas a algn trato inadecuado u otra situacin que pueda compro-meter su funcionamiento.

6. APLICACIONES

El proceso de calibracin de las pipetas y dispensadores permite obtener evidencia objetiva de que, cuando se utiliza el instrumento para efectuar dispensaciones de volumen, no se cometen errores inadmisibles, esto es, superiores el error mximo permitido.

Es posible que, en el caso de las pipetas de volumen varia-ble, se obtengan resultados insatisfactorios en alguno de los puntos de calibracin (por ejemplo en el volumen de valor ms bajo). Esto no cuestiona todas las mediciones que se efectua-ron con anterioridad con la misma pipeta, sino tan slo aqu-llas cercanas al punto de calibracin para el que se obtuvieron resultados anmalos. La pipeta puede utilizarse restringiendo su intervalo de medida o variando el error mximo permitido en funcin de la escala de medida.

7. BIBLIOGRAFADybkaer R. Vocabulary for use in measurement procedures and descrip-

tion of reference materials inlaboratory medicine. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1997; 35:141-73.

Correspondencia:SEQC Comisin de Metrologac/ Padilla, 32308025 Barcelona

4La Comisin de Metrologa de la SEQC ha preparado una hoja de clculo apropiada para estos fines y que puede ser obtenida en el sitio de la Comisin de Metrologa de la web de la Sociedad.

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Anexo 1 Clculo de la incertidumbre

Las medidas realizadas con la pipeta, tienen las siguientes fuentes de incertidumbre (u):

A. Incertidumbre debida a la medida (ui):Los errores aleatorios de dispensacin ocasionan imprecisin en las medidas. Este componente de la incertidumbre puede ser calcu-lado a partir de la desviacin tpica de las medidas repetidas (si).

ui = si

B. Incertidumbre debida a la resolucin (ur):La resolucin (r) de la pipeta ocasiona errores aleatorios de redondeo. La amplitud de la distribucin de los posibles errores es igual a la resolucin y, en ese intervalo, cualquier valor tiene las mismas probabilidades de producirse (distribucin rectangular o uniforme). En este tipo de distribucin, la desviacin tpica (sr) es igual a la amplitud de la distribucin dividida por la raz cuadrada de 12.

rur = sr = = 0,29 r

12(En las pipetas de volumen fijo, el valor de resolucin es 0).

C. Incertidumbre debida al patrn (up):Se calcula a partir de los datos que proporciona el certificado de calibracin de la balanza: la incertidumbre expandida (up) del punto de calibracin de la balanza ms cercano a la masa total que se mide (incluyendo recipiente)5, generalmente para el 95% de confian-za, y el valor del factor de cobertura empleado (habitualmente kp = 2)

up upup = = up 2

D. Otros componentes de la incertidumbre, como el ocasionado por la presin del aire y la densidad del agua, pueden ser ignorados por su escasa relevancia en las aplicaciones habituales del laboratorio clnico.La incertidumbre combinada tpica (uc) puede calcularse a partir de la suma de cuadrados de las incertidumbres de cada componente

up2

uc = ui2 + ur2 + up = si2 + 0,292 r2 + = si2 + 0,084 r2 + 0,25 up2 22

y la incertidumbre combinada expandida (uc) para el intervalo de confianza de aproximadamente el 95% resulta de multiplicar la anterior por el factor de cobertura 2.

uc = 2 si

2 + 0,084 r2 + 0,25 up2

Finalmente, la incertidumbre relativa combinada expandida (Urel) resulta de dividir la incertidumbre absoluta combinada expandida por el valor medio (vm) medido de cada punto de calibracin (volumen)

6 y, multiplicndola por 100, se expresa en porcentaje.

uc si

2 + 0,084 r2 + 0,25 up2

Urel = 100 = 200 vm vm

5En caso de disponer nicamente del valor de la incertidumbre relativa combinada expandida (Urel) respecto al punto de calibracin de la balanza requerido, debe aplicarse la siguiente frmula para obtener el valor de Up: Urel

up = valor masa 100

6En esta frmula se ha despreciado, teniendo en cuenta el tamao habitual del EMP, la diferencia entre el volumen medido y el valor nominal.

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