prueba de luminol

Aplicación de luminolen huellas

de escena del crimen

William Ivan Alejandro LLANOS TORRICOWilliam Ivan Alejandro LLANOS TORRICO

Julio de 2.010Julio de 2.010

El lugar de los hechos

La fase más importante en la investigaciónEs irrepetibleHan de localizarse todos los indicios

para su posterior envío al laboratorio.Si los indicios no se detectan, no se

preservan, no se embalan adecuadamente, no llegará a haber identificación criminalística.

Situaciones características en el Lugar de Hechos

Siempre es posible que se hayan producido mezclas, contaminaciones o pérdida de indicios.

Los indicios son frágiles y pudieron haberse manipulado.

Los indicios pueden pasar inadvertidos. Los indicios pueden sufrir alteraciones en sus

características

Tipos de indicios

Sangre:Sangre:

Sustancia viscosa, roja y espesa, presente en el sistema circulatorio (arterias, arteriolas, capilares y venas), constituidas por una parte líquida o plasma y una parte de elementos celulares (hematíes, leucocitos y plaquetas).

“Podemos asegurar que con respecto al ser humano, existen numerosas diferencias sanguíneas individuales que ya han sido puestas de manifiesto, e indudablemente todavía existen otras que aún no han sido establecidas”.

Karl LandsteinerDisertación Nobel, 1930.

“Cada nuevo individuo es único en su información genética, de aquí el término de individualidad biológica. En cualquier parte del organismo siempre se encuentra el mismo material genético, propio de cada individuo y diferente de cualquier otro, excepto en el caso de gemelos monocigotos”.

Zannoni – Primarrosa1.999.

Identificación del individuo de quien procede

Entre sus funciones se tienen:

Trasportar el oxígeno y eliminar el anhídrido carbónico.

Promover las defensas del organismo frente a las infecciones.

Termorregulación. Regulación osmótica. Nutrición celular.

Sangre:Sangre:

Volemia:Volemia:Volumen normal de sangre de una persona.

Cálculo:Cálculo: 6 – 8 % del peso corporal. 13 / 14 parte del peso corporal.

M – 10%.

Sangre:Sangre:

ComposiciónComposición

Fracción LíquidaFracción Líquida

Fracción SólidaFracción Sólida(Elementos Celulares)(Elementos Celulares)

Agua – 90%

Sólidos – 10%

Proteínas.Lípidos.Glúcidos.Sales Minerales.Enzimas.

Glóbulos Rojos.

Glóbulos Blancos.

Plaquetas.

Sangre:Sangre:

ElementosElementosCelularesCelulares

Glóbulos RojosGlóbulos Rojos(Hematíes o Eritrocitos):(Hematíes o Eritrocitos): Anucleados, bicóncavos, circulares. 7 – 7,5 m diámetro. 2 – 3 m espesor. 85 M volumen. 5.000.000 x mm3H. 4.500.000 x mm3H.

Sangre:Sangre:

ElementosElementosCelularesCelulares

Glóbulos Blancos (Leucocitos):Glóbulos Blancos (Leucocitos): Nucleados. 6.500 – 7.00 mm3. Granulocitos E: 1,5% parásitos. Granulocitos B: 0,5% respuestas alérgicas. Linfocitos: 26% detectan y atacan células

cancerosas. Monocitos: 6% devoran células muertas o

dañadas (Macrófagos).

Sangre:Sangre:

Hemoglobina:Hemoglobina:Estructura:Estructura:CromoproteínaPM 64.500 – 96% Globina – 4% Hemo

Globina:Globina:Fracción proteica constituida por cuatro cadenas polipeptídicas.

Hemo:Hemo:Núcleo porfirínico formado por cuatro grupos pirroles unidos por puentes de meteno (=C) que constituyen anillos tetrapirrólicos.16 Isómeros – Nº 9 presente en elementos biológicos.Un átomo de hierro está ligado a los cuatro nitrógenos en el centro del anillo.1 Molécula de Hemo = 4 Grupos Hemo.

Examen visual preliminar:Examen visual preliminar: Aspecto. Color. Forma. Número. Dimensiones. Ubicación.

Importancia Criminalística:Importancia Criminalística: Data de los hechos. Intensidad de las lesiones. Reconstrucción de los hechos. Admitir o refutar alegatos. Identificación de sujetos.

Sangre:Sangre:

Color:Color:

Ropa blanca y soportes claros y absorbentes:

Contornos muy nítidos por penetrar la sangre en los tejidos. Reciente: Roja. Antigua: Morena o parda y aún negruzca. Una vez seca: diminutas masas, ligeramente elevadas como

pequeñas escamas brillantes, más o menos resquebrajadas según condiciones ambientales.

Forma:Forma:

Manchas de proyección.

Manchas por escurrimiento.

Manchas por contacto.

Manchas por impregnación.

Manchas por limpiamiento.

Manchas por arrastre.

Importancia:Importancia:

Reconstrucción de los hechos.

Intensidad de las lesiones.

Admitir o refutar alegatos.

Naturaleza sanguínea. Determinación de especie. Identificación del individuo. Data de la mancha de sangre. Cantidad de sangre que compone la mancha. Región del cuerpo de donde procede la sangre. Sexo genético de la persona de quien procede la sangre. Grupo etario. Agentes extraños a su naturaleza (medicamentos, drogas

ilícitas, agentes patógenos).

Problemas forenses que planteaProblemas forenses que planteauna muestra de sangre:una muestra de sangre:

Naturaleza Sanguínea:Naturaleza Sanguínea:

TÉCNICATÉCNICA INDICADORINDICADOR SEÑALSEÑAL SENSIBILIDADSENSIBILIDAD

Adler Bencidina Azul Intenso 1 / 200.000

O - Tolidina Orto – Tolidina Azul Verdoso 1 / 200.000

MedingerVerde de Malaquita

(leuco derivado)Verde 1 / 1.000.000

K – Meyer Fenolftaleína Rojo 1 / 1.000.000

LuminolHidracida del Ácido Alfa Amino ftálico

Quimioluminiscencia blanco azulada

1 / 5.000.000

Métodos de Orientación:Métodos de Orientación:¿Es Sangre?¿Es Sangre?

MétodosMétodosDe Certeza:De Certeza:

Histológicos.

Biológicos.

Físicos (Cromatográficos – Instrumental).

Microquímicos.

MicroquímicosMicroquímicos

TeichmannTeichmann → Cristales deClorhidrato de Hematina.

Métodos de Certeza:Métodos de Certeza:

TakayamaTakayama → Cristales deHemocromógeno.

GuarinoGuarino → Cristales deHematoporfirina(Ácida – Alcalina).

MétodosMétodos

Determinación de Especie:Determinación de Especie:

UhlenhuttUhlenhutt::Proteínas Séricas (Halo Isogenético).

Hexagon Obti – Test (Banda Azul)Hexagon Obti – Test (Banda Azul)::Hemoglobina Humana Sub Tipos HbAo, HbA2, Hb F y Hb S.

HistológicosHistológicos

BioquímicosBioquímicos

ADNADN

Sistemas tendentes a la determinaciónSistemas tendentes a la determinaciónde la identidad biológica:de la identidad biológica:

Sistemas Eritrocitarios:Sistemas Eritrocitarios:

ABO:ABO: A; B; AB; O; y Sub Grupos.

Rh:Rh: D; d; C; c; Cc; E; e; Ee.

MNS:MNS: M; N; MN.

Otros sistemas:Otros sistemas: Kell; Lewis; Kidd; Diego; P; otros.

Sistema ABO:Sistema ABO:

AntecedentesAntecedentes

AntígenosAntígenosA

AglutinógenosB

α → Alfa – Anti A

β → Beta – Anti BAnticuerposAnticuerpos

Test de LandsteinerTest de Landsteiner IncompatibilidadSanguínea

LA PRUEBADE

LUMINOL

LUMINOLEl Luminol químicamente denominado como: 3 aminophtalahidrazida (5-amino-2, 3-dihidro-phthalazino-1,4-diona) fue sintetizada por Smicthz en el año de 1902, comprobando a la vez, que esta sustancia produce una brillante quimioluminiscencia (producción de luz por reacción química: Una fuerte luz fluorescente azul en soluciones ácidas con pH menor de 7).

Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de apellido Lommel, observó dicha quimioluminiscencia después de la oxidación del compuesto en medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7).

En 1934 el investigador Albrecht denominó a este compuesto LUMINOL, por las propiedades quimioluminiscentes que presentaba.Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da en presencia del peróxido de hidrógeno.

En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina.

En el año de 1937 se reportó la primera aplicación forense del Luminol, como prueba presuntiva de detección de sangre, dicho ensayo fue realizado por Walter Specht. Este investigador roció sangre en variossubstratos como paredes, gradas, piedras, y tierra dejándola expuesta por 14 días a las condiciones ambientales. Seguidamente aplicó el Luminol yfotografió los resultados. Todas las áreas que contenían manchas de sangre presentaron luminiscencia que perduró por 15 minutos. En esta ocasión el Luminol funcionó bien con manchas de sangre frescas y viejas; se observó mayor respuesta quimioluminiscente en las manchas de sangre viejas, que en las manchas frescas o nuevas.

En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher, basándose en la investigación de Specht, aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo resultados satisfactorios.

En 1942, McGrath, recomendó el uso de la prueba de Luminol, para la detección de sangre, él notó que las manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática.

Los investigadores Lytle y Hedgecock, en el año de 1978 estudiaron los efectos del Luminol en solución alcalina, en la sangre detectada por la prueba, concluyendo que no afectaba la actividad enzimática de los eritrocitos, pero no reportan los efectos del reactivo en la determinación de grupo ABO en las manchas, ni análisis de marcadores genéticos (ADN). La prueba de Luminol es extremadamente sensible en la detección de sangre. En 1986Thornton y colaboradores detectaron luminiscencia, a simple vista, proveniente de sangre que fue diluida 1:10000 partes.

En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher, basándose en la investigación de Specht, aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo resultados satisfactorios.

En 1942, McGrath, recomendó el uso de la prueba de Luminol, para la detección de sangre, él notó que las manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor concentración de metahemoglobina y hemática.

La prueba del Luminol emplea:

• el Carbonato de Sodio para crear una solución alcalina de pH 10.4-10.8,• Perborato de Sodio como agente oxidante, y el• Luminol como la sustancia a ser oxidada con la subsecuente emisión de luz.

La sangre es el sistema peroxidasa que cataliza la reacción.

Fundamento teóricode la prueba de luminol

1. Carbonato de Sodio2. Perborato de Sodio Trihidratado3. Luminol (5-amino-2,3-dihydrophthalazine 1,4-dione)

Reactivos utilizados para la prueba de luminol

1. Pesar 3,5 gramos de Perborato de Sodio en una balanza analítica. Depositar la medida en un beaker de 1.000 ml de volumen.

2. Pesar 25 gramos de Carbonato de Sodio y 0,5 gramos de Luminol en una balanza analítica y colocarlos juntos en un recipiente limpio. 3. Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una probeta de 1.000 ml de capacidad.

Preparación del reactivo

4. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los 3,5 gramos de Perborato de Sodio. 5. Agitar hasta disolver por completo. 6. Agregar a esta solución la medida de Carbonato de Sodio y Luminol.

7. Agitar hasta disolver por completo.

8. Verter la solución disuelta en el atomizador.

Preparación del reactivo

• Antes de la aplicación del reactivo el personal debe vestir prendas que lo protejan del contacto directo con el Luminol. Es imprescindible la utilización de mascarillas que impidan la inhalación del atomizado.

• Se debe procurar una completa oscuridad para la aplicación del reactivo.

• Aplicar el reactivo por aspersión, en las zonas del escenario en donde se sospecha la presencia de sangre.

Cómo se aplica la prueba

• En un lapso no menor de 10 segundos debe aparecer una reacción lumínica que evidencia la actividad peroxidasa que posee la sangre entre otras sustancias.

• Después de localizar los diferentes focos lumínicos se procede a evaluar la naturaleza de estos. • De sospechar que los focos lumínicos se deben a la presencia de sangre (manchas de color y aspecto característico), se debe delimitar el área de reacción positiva con cinta adhesiva o con un marcador a base de agua, esto con el objetivo de facilitar el levantamiento de muestra y el registro fotográfico.

Cómo se aplica la prueba

• Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto directo con la sustancia. Es necesario asegurarse de que todo el personal presente este debidamente protegido. • La vida media del Luminol ya preparado, es de 8 horas, por lo que debe tenerse la precaución de no exceder este tiempo en su aplicación. • La prueba de Luminol es presuntiva para detectar la presencia de sangre, esto significa que requiere de otras técnicas como la determinación de especie para afirmar la presencia de sangre.

Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba

• Esta sustancia no es corrosiva y no mancha • Se ha observado que no tiene efectos destructivos e inhibitorios sobre la sangre, permitiendo la realización de análisis posteriores de ABO y ADN.

• Una desventaja de esta técnica es que por ser basada en laactividad peroxidasa y esta estar presente en muchas sustancias tales como ciertos metales, jugo de fruta, detergentes y productos de limpieza en general, es común obtener reacciones inespecíficas.


• Antes de la aplicación de la prueba se debe realizar un ensayo previo con controles positivos, falsos positivos y negativos, para evaluar la efectividad del reactivo. • El reactivo de Luminol muestra una alta sensibilidad ante la presencia de sangre, se observan reacciones positivas en muestras diluidas, hasta diez mil veces y capaz de detectar manchas de 25 años de antigüedad.


Varios estudios han demostrado que el luminol provoca la pérdida de diversos marcadores genéticos.

Debido a que el luminol es hidrosoluble, también puede diluir una muestra ya diluída. Esto coloca al indicio por debajo de los límites de detección.

La fotografía en la Prueba del Luminol es de suma importancia para la investigación criminalística, ya que ella muestra toda la labor realizada por el equipo de aplicación, como a la vez permitirá al juzgador en el proceso del debate, como se manifestaron las manchas de sangre, su dinámica, arrastre, etc.

Fotografía de la prueba luminol

Fijar fotográficamente escenarios reactivados con Luminol, depende de varios factores:

• ISO de la película • Tiempo de exposición • Duración de la luminiscencia del químico• Intensidad de la luminiscencia•Tomas en total oscuridad

Para obtener imágenes positivas de la escena se deben de controlar varios factores, sujetos algunos a variaciones como el tiempo de exposición, espacio y luz.

Fotografía de la prueba luminol

Comparación con reactivos para pruebas

de campo de sangre- Fluoresceina

- Bluestar- Luminol

Pruebas comparativas

Sangre lavada y repintada

FLUORESCEINA BLUESTARTiempo de exposición: 20 s

LUMINOL

Tiempo de exposición: 1 m 15 s

Sangre lavada y limpiada del piso


LUMINOL


Sangre lavada en alfombra

FLUORESCEIN BLUESTARTiempo de exposición: 20 s

LUMINOL


Sangre lavada con detergente para ropa


LUMINOL


GraciasGracias

prueba de luminol

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