Prueba cruzada mayor    Se llevará a cabo una vez que tengamos seleccionada una bolsa compatible con el grupo sanguíneo del receptor para determinar si son compatibles el resto de los antígenos de la sangre donada con los anticuerpos del receptor.    La prueba cruzada mayor es un test indirecto de la antiglobulina y puede realizarse del siguiente modo:1. Se toma una muestra de la sangre donada que queramos analizar y se prepara una suspensión de hematíes al 2-5%, que se lavan para eliminar las proteínas plasmáticas y el anticoagulante.2. En un tubo de hemólisis añadimos 2 gotas de la suspensión de los hematíes del donante y 2 del suero del receptor. Antes de pasar a la siguiente fase se puede centrifugar la mezcla y leer.3. Mezclar bien e incubar a 37 °C durante 30-60 minutos; si existen anticuerpos que reaccionen contra algunos de los antígenos presentes en los hematíes del donante éstos se fijarán, quedando sensibilizados. Podemos acortar esta fase añadiendo a la mezcla 2 gotas de albúmina al 22-30%. Y, como en la fase anterior, podemos centrifugar la mezcla y leer.4. Lavar la mezcla con solución salina 3 o 4 veces. Como siempre que se lavan los hematíes, al final del último centrifugado se decanta todo lo posible el sobrenadante para obtener un botón seco de hematíes. De este modo sólo quedan en el tubo los análisis los hematíes, recubiertos o no por los anticuerpos, y se eliminan los anticuerpos que aún permanezcan libres.5. Añadir dos gotas del reactivo (antiglobulina humana). Si los lavados anteriores no fueron efectivos y han quedado IgG libres la antiglobulina humana puede consumirse uniéndose a ellas, y no a las IgG unidas a los hematíes, dando un resultado negativo falso.6. Mezclar bien para suspender los hematíes y centrifugar a 3.400 rpm durante 20-30 segundos o 1.000 rpm durante 1 minuto.7. Golpear suavemente el fondo del tubo para desalojar el sedimento celular y agitarlo suavemente para resuspender los hematíes. Examinar microscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación.

    La lectura permite dos posibilidades: Reacción negativa: la suspensión de hematíes es homogénea, ya que éstos no

han sido aglutinados por la antiglobulina humana. Lo interpretamos como que el suero del receptor no presenta anticuerpos contra los antígenos del donante y las muestras son compatibles.

Reacción positiva: la antiglobulina humana ha aglutinado los hematíes del donante. Lo interpretamos como que el suero del receptor presenta anticuerpos contra determinados antígenos eritrocitarios del donante y las muestras son incompatibles. No podemos transfundir esta sangre donada a este receptor.

 La prueba cruzada abreviada puede hacerse de este modo:1. Se prepara una suspensión de hematíes del donante al 2- 5%, lavados.2. En un tubo se añaden 2 gotas del suero del receptor y dos de la suspensión de hematíes y se mezclan bien.3. Se centrifuga la mezcla y observamos si hay o no aglutinación o hemólisis.