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Modo de empleo

Bactus ABLunastigen 3SE-141 44 Huddinge Sweden

Phadebact®

Pneumococcus Test

USO PROPUESTOPhadebact® Pneumococcus Test está destinado a la detección de Streptococcus pneumoniae.

RESUMEN Y EXPLICACION DEL ANALISISStreptococcus pneumoniae (neumococo) es un habitante común en las vías respiratorias superiores de los seres humanos y desde allí puede invadir los pulmones y el sistema circulatorio. El neumococo es por consiguiente la causa más frecuente de neumonía lobular en los adultos. La cuarta parte de estos pacientes presentan cuadros de bacteriemia, generalmente al comienzo de la enfermedad (1).Los microorganismos pueden también invadir la cavidad pleural o diseminarse al endocardio, el pericardio, las meninges, las articulaciones etc con complicaciones subsiguientes (2).El neumococo ha sido identifi cado en infecciones del oído medio, mastoides y de la vista y a veces incluso aislado del líquido peritoneal, orina, secreción vaginal y otros especímenes clínicos. Hay varios métodos conocidos para la identifi cación del neumococo. La prueba de sensibilidad a la optoquina (ethylhydrocupreine hydrochloride), el método más ampliamente usado, diferencia los neumococos más sensibles de la mayoría de los otros estreptococos alfa hemolíticos típicos más resistentes. Phadebact® Pneumococcus Test, basado en la técnica de coaglutinación, permite la rápida identifi cación del neumococo, usando una técnica simple y rápida en porta.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTOEl test de coaglutinación Phadebact® Pneumococcus Test contiene los siguientes reactivos: Pneumococcal Reagent y Pneumococcal Control. Pneumococcal Reagent se compone de anticuerpos específi cos antineumocócicos, desarrollados en conejo y acoplados a la proteína A de estafi lococos no viables (3, 4). Pneumococcal Control se compone de gamaglobulina de conejo no inmunizado, acoplada a la proteína A de estafi lococos no viables. Cuando una muestra neumocócica se mezcla con Pneumococcal Reagent, los antígenos específi cos en la superfi cie celular reaccionan con los anticuerpos específi cos del reactivo formando una red de coaglutinación, visible a ojo desnudo.

REACTIVOSCada equipo de Phadebact® Pneumococcus Test contiene reactivos en cantidad sufi ciente para efectuar 50 determinaciones. Los reactivos son de color azul (azul de metileno) para facilitar la interpretación de los resultados.

Composición de los reactivos• Pneumococcal Reagent 1 vial Anticuerpos específi cos desarrollados en conejo, acoplados a estafi lococos no viables. • Pneumococcal Control 1 vial Gamaglobulina de conejo no inmunizado ligada a estafi lococos no viables. LISTO PARA USAR

Otros componentes• Goteros• Portas desechables• Modo de empleo

PrecaucionesSolo para diagnóstico in vitro.Atención! Los reactivos contienen azida sódica como conservante. La azida sódica puede reaccionar con el plomo y el cobre de las cañerías, formando azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar los residuos use abundante agua para evitar la formación de estas azidas. Favor de referir al procedimiento de descontaminación recomendado por CDC.

Preparación de los reactivosLos reactivos están LISTOS PARA USAR.

Caducidad y almacenamientoLa fecha de caducidad se indica en la etiqueta exterior y en las etiquetas de los viales. Se recomienda almacenar el kit entre 2-8°C. Los reactivos no deben congelarse.

OBTENCION Y MANIPULACION DE LAS MUESTRASFavor de referir a un manual estándar de microbiología concerniente a la colección y preparación de muestras.Las muestras a investigar pueden tomarse de cualquier parte del cuerpo donde hayan organismos viables. La torunda deberá sumergirse en un medio de transporte, como por ejemplo Stuart, en caso de ser transportada al laboratorio. La torunda deberá llegar al laboratorio dentro de 24-48 horas. No se necesitan conservantes ni aditivos durante el transporte o cultivo. Las muestras de pacientes tratados con antibióticos pueden contener pocas o ninguna bacteria viable.

PROCEDIMIENTOMateriales suministradosVer REACTIVOS.

Anticuerpos ligados a estafi lococos Coaglutinación

Microorganismo con antígenos correspondientes

Aspecto de la reacción

Ausencia de reacción Reacción positiva

Ponga una gota del reactivo y una del control en los correspondientes óvalos marcados. Fig.2.

Fig. 2Fig. 1

Fig. 3

Fig. 4

Marque los óvalos correspondientes al control y a las muestras. Colecte las colonias de la placa con un asa de inoculación o equivalente. Frote las colonias suave y completamente en los correspondientes óvalos marcados en el porta. Fig. 1Nota! El exceso de colonias o la contaminación con otras especies puede resultar en una reacción incompleta.

Mezcle las gotas suave y completamente con un asa de inoculación o equivalente. Use un asa nueva para cada reactivo. Fig. 3.

Balancee el porta y observe la reacción dentro de un minuto. Fig.4.

Materiales requeridos pero no suministrados• Cultivos primarios• Asas de inoculación desechables o equivalente• Reloj con lectura fácil de minutos

Parámetros del análisisTemperatura de la reacción temperatura ambienteDuración de la reacción 1 minutoVolumen de Pneumococcal Reagent una gota Volumen de Pneumococcal Control una gota

Preparación de las muestrasFavor de referir a un manual estándar de microbiología para información sobre la preparación de cultivos primarios.

Procedimiento del ensayoNota! Agite bien los reactivos antes de usar.

Test directo de líquido cefalorraquídeo (CSF)Para la identifi cación de S. pneumoniae en líquido cefalorraquídeo (5) por test directo favor de referir a Phadebact® CSF Test.

Estabilidad de la reacción fi nal La reacción de coaglutinación es estable, pero las buenas prácticas de laboratorio señalan que los resultados deben leerse dentro de 1 minuto. (Observe que la desecación de los reactivos puede ser malinterpretada como reacción positiva).

CalibraciónNo es necesario ningún tipo de calibración.

Control de calidadControl positivoCepas conocidas de neumococo deberán usarse como control positivo (p. ej. ATCC 6303). Las cepas deberán tratarse igual que la bacteria desconocida en el proceso del ensayo.

Control negativoCepas conocidas de estreptococo α−hemolítico deberán usarse como control negativo.

RESULTADOSResultado positivoUna reacción signifi cativamente más intensa con Pneumococcal Reagent comparada con Pneumococcal Control constituye un resultado positivo.

Resultado negativoLa ausencia de reacción con Pneumococcal Reagent acompañada de una reacción negativa con Pneumococcal Control es altamente sugestiva que la bacteria ensayada no es un neumococo o que la cantidad de antígeno es insufi ciente, en cuyo caso el ensayo deberá repetirse usando una cantidad mayor de la muestra.

Resultados indeterminadosEl resultado es indeterminado si la reacción con Pneumococcal Reagent y con Pneumococcal Control son de igual intensidad. En este caso el espécimen no podrá ser identifi cado con Phadebact® Pneumococcus Test. Use un test diferente.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOLos métodos inmunológicos como el de coaglutinación, usados en identifi cación de S. pneumoniae, contiene anticuerpos dirigidos contra los antígenos capsulares de S. pneumoniae. Por esta razón los neumococos desposeídos de cápsula no reaccionan en el test inmunológico. Ciertos tipos de S. pneumoniae tienen antígenos similares al de H. Infl uenzae tipo b lo cual ocasiona reacción cruzada.

CARACTERISTICAS DEL ENSAYOSensibilidad y especifi cidadSe analizaron un total de 450 aislamientos y cepas (6); 304 S. pneumoniae y 146 bacterias alfa hemolíticas de otro tipo, inclusive estreptococos tipo viridans.303/304 (99.7%) de aislamientos de S. pneumoniae fueron correctamente identifi cados por Phadebact® Pneumococcus Test.12/146 (8.2%) de aislamientos alfa hemolíticos no neumocócicos dieron una reacción positiva con Phadebact® Pneumococcus Test. Las cepas fueron:

4 cepas alfa hemolíticas no neumocócicas1 S. viridans grupo K NCTC 53381 S. sangius M 3711 S. mitis (S. mitior) M 5241 S. salivarius 93324 S. milleri OG 7331 H 159 B575 7338

GARANTIALos datos presentados se han obtenido utilizando el procedimiento indicado. Cualquier cambio o modifi cación en el procedimiento no recomendado por Bactus AB puede afectar los resultados, en cuyo caso Bactus AB declina toda responsabilidad de garantía expresada, implícita o reglamentada, inclusive la responsabilidad implicita para venta o condiciones de uso. En dicho caso Bactus AB y sus distribuidores autorizados, no se harán responsables por cualquier daño directo, indirecto o consecuente.

Referencias:1. Bailey and Scott´s diagnostic microbiology. Ed. by Finegold S M, Martin W J, Scott E G. The CV Mosby

Company, Saint Louis, 1978.2. Manual of Clinical Microbiology. Ed. by Lennette E H, Spaulding E H and Traunt J P, Am Soc Microbiol,

Washington DC, 1974.3. Christensen P, Kahlmeter G, Johnson S and Kronvall G: New method for the serological grouping of

streptococci with specifi c antibodies adsorbed to protein A-containing staphylococci. Inf Imn 7 (1973) 881-885.4. Kronvall G: A rapid slide agglutination method for typing pneumococci by means of specifi c antibodies adsorbed

to protein A-containing staphylococci. J Med Microbiol (1973) 187-190.5. Olcén P: Serological methods for rapid diagnosis of Haemophilus infl uenzae, Neisseria meningitidis and

Streptococcus pneumoniae in cerebrospinal fl uid: A comparison of Co-agglutination, Immunofl uorescence and Immunoelectroosmophoresis. Scand J Infect Dis 10 (1978) 283-89.

6. Data on fi le, Bactus AB.

PRODUCTOSPhadebact® COA SystemPhadebact® Streptococcus TestsPhadebact® Streptococcus Respiratory TestPhadebact® Strep A TestPhadebact® Strep B TestPhadebact® Strep D TestsPhadebact® Strep F TestPhadebact® Strep Positive ControlsPhadebact® Pneumococcus TestPhadebact® Haemophilus TestPhadebact® GC Positive ControlsPhadebact® CSF TestPhadebact® CSF Positive ControlsPhadebact® Extraction SolutionsPhadebact® Monoclonal GC TestPhadebact® ETEC-LT TestPhadebact® Salmonella TestPhadebact® Staph Aureus Test

Near Patient TestingPhadirect® Strep APhadirect® Rapid CRP Test

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