proyecto 17 unprg

EFECTO DEL ACEITE, MELAZA Y FITO CUP SOBRE LA VIABILIDAD GERMINATIVA DE CONIDIAS DE TRICHODERMA VIRIDE Y PAECILOMYCES LILACINUS

EFECTO DEL ACEITE, MELAZA Y FITO CUP SOBRE LA VIABILIDAD GERMINATIVA DE CONIDIAS DE TRICHODERMA VIRIDE Y PAECILOMYCES LILACINUS.

ContenidoINTRODUCCIN3I.REVISIN DE LITERATURA4TRICHODERMA VIRIDE4PAECILOMYCES LILACINUS5II.OBJETIVOS6III.MATERIALES6IV.METODOS:8Lugar de ejecucin8CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES10V.RESULTADOS11Evaluacin de la germinacin de conidias de Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus. 11VI.DISCUSIN24Discusin sobre la germinacin de conidias de Trichoderma viride.24Discusin sobre la germinacin de conidias de y Paecilomyces lilacinus.25VII.CONCLUSIONES26Conclusiones sobre la germinacin de conidias de Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus.26VIII.RECOMENDACIONES27IX.INCONVENIENTES:27X.ANEXOS28XI.BIBLIOGRAFIA31

INTRODUCCIN

En la bsqueda de encontrar enemigos naturales que nos permitan controlar enfermedades, tenemos dos hongos que son materia de estudio para este proyecto Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus.Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus estn perdiendo su eficacia para controlar patgenos y se especula que el aceite vegetal que nos permite separar las conidias del sustrato vegetal de cultivo (generalmente arroz) y la melaza para mejorar las condiciones de establecimiento del hongo en la rizsfera, estn influyendo en la germinacin de las conidias. Tratando de desarrollar la hiptesis que se maneja, sobre cual es el efecto del aceite y la melaza en la germinacin de las conidias, se desarrollara el protocolo.El proyecto se llev a cabo en el laboratorio de fitopatologa, desarrollando de manera adecuada el protocolo, siguiendo los pasos y respetando los tiempos para concluir satisfactoriamente el trabajo.El protocolo se extendi, debido a que los resultados de la primera experiencia no dieron los resultados esperados, tratando de encontrar resultados que sean tiles para dar una respuesta a la hiptesis planteada.

I. REVISIN DE LITERATURATRICHODERMA VIRIDETrichoderma viridees unhongoy un biofungicida.Se utiliza para lasemillayel tratamiento del suelopara la supresin de diversas enfermedades causadas porhongos patgenos. El micelio deT.viridepuede producir una variedad de enzimas, incluyendocelulasasylas quitinasasque puede degradar la celulosa y quitina, respectivamente.El moho puede crecer directamente sobre la madera, que se compone principalmente de celulosa, y en los hongos, las paredes celulares de los que se componen principalmente dequitina.Este hongo parasita losmiceliosy cuerpos fructferos de otros hongos cultivados, incluyendohongos, y se le ha llamado la "enfermedad del moho verde de las setas".Las setas afectadas estn distorsionados y poco atractivo en apariencia y el cultivo se reduce.La actividad fungicida haceT.viridetil como control biolgico contra hongos patgenos de plantas.Se ha demostrado proporcionar proteccin contra patgenos tales comoRhizoctonia,Pythiumy hastaArmillaria. Se encuentra naturalmente en el suelo y es eficaz como tratamiento de semillas en el control de enfermedades de las semillas y transmitidas por el suelo, incluyendoRhizoctonia solani,Macrophomina phaseolinayFusariumespecies.Cuando se aplica al mismo tiempo que la semilla, que coloniza la superficie de la semilla y mata no slo los agentes patgenos presentes en lacutcula, sino que tambin proporciona proteccin contra los patgenos del suelo.

PAECILOMYCES LILACINUSEs el enemigo natural de muchos gneros de nematodos y algunos insectos como mosca blanca y chinche. Es efectivo para nematodos de los gneros Meloydoginae, Pratelynchus y Radophulus. El hongo parasita los huevos y hembras de los nematodos con la participacin de enzimas lticos causando deformaciones, destruccin de ovarios y reduccin de la eclosin. Produce toxinas que afectan el sistema nervioso y causan deformacin en el estilete de los nematodos que sobreviven, lo que permite reducir el dao y sus poblaciones. A valores de pH ligeramente cidos, se producen toxinas que afectan el sistema nervioso de los nematodos.Modo de accinEl hongo Paecilomyces lilacinus aplicado en concentraciones mayores a 107 u.f.c/ml produce sustancias que actan sobre los huevos y larvas de los gneros: Meloidogyne, Pratylenchus y Radopholus, provocando deformaciones, vacuolizaciones y prdida de movimiento. Se puede observar vacuolizaciones internas de las larvas del primer estado, segmentacin y gastrulacin atpicas. El hongo es capaz de penetrar el huevo, crecer dentro del mismo y destruir el embrin.EfectividadEs utilizado para el control de los diferentes tipos de Nematodos fitopatgenos: Radopholus sp., Helicotylenchus sp., Meloidogyne sp., Scutellonema sp. Pratylenchus sp. y Globodera sp; en los cultivos de Banano, caf, flores, frutales, pltano, tomate, arroz, etc.Ventajas No contamina el ambiente. No es txico en humanos, animales y plantas. Al establecerse en el campo constituye un reservorio benfico de inoculo. Puede usarse en la agricultura orgnica y convencional.II. OBJETIVOS Determinar si el aceite, la melaza de la caa de azcar y el fito cup (fosfito de cobre) afectan la viabilidad germinativa de las conidias de Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus.

III. MATERIALES La prctica se desarroll de acuerdo al protocolo nmero 2, se utilizaron los siguientes materiales: Para la preparacin de PDA: 18 gr de agar agar. 20 gr de azcar blanca 250 gr de papa Agua destilada Olla arrocera Una jarra milimetrada Una cuchara 6 botellas de vidrio (para servir el PDA)

Sepa de trichoderma viridae y paecilomyces lilacinus. Papel reciclado Alcohol Algodn Guantes y mascarillas Jeringas Papel toalla Hilo pabilo Mecheros 14 pomos de vidrios ( uno para cada tratamiento)

Para multiplicar el hongo: En placa Petri: 4 placas Petri servidas con PDA. Sepas de trichoderma viridae y Paecilomyces lilacinus. 2 jeringas de 1ml Guantas Mascarilla 2 mecheros

En botellas de sporade 14 botellas de sporade (1 para cada tratamiento). 4 placas Petri servidas con los hongos 2 jeringas de 5ml (1 para cada hongo) 80ml de agua destilada (40 para cada hongo) 2 mecheros Guantes Mascarilla.

IV. METODOS:Lugar de ejecucin LaboratorioTratamientos ProductoHongoDosis (%)

1. Aceite vegetalT. viride5

2. Aceite vegetalT. viride10

3. Aceite vegetalP. lilacinus5

4. Aceite vegetalP. lilacinus10

5. MelazaT. viride5

6. MelazaT. viride10

7. MelazaP. lilacinus5

8. MelazaP. lilacinus10

9. Fosfito de Cobre (Fito Cup)T. viride5

10. Fosfito de Cobre (Fito Cup)P. lilacinus7

11.Testigo sin aplicacin (solo agua)T. viride-

12.Testigo sin aplicacin (solo agua)P. lilacinus-

Produccin de los T. viride y de P. lilacinus Primero es necesario cultivar los hongos mencionados en el sustrato arroz. Cultivar 6 botellas por hongo. Usar el hongo despus de 10 das de cultivado.

Aplicacin de los productos El contenido de cada botella, ponerlo en un vaso o recipiente de vidrio de 500 ml de capacidad. Agregar la solucin del Aceite vegetal (soya, maz o girasol) al vaso que contiene el hongo + el sustrato. Agregar el aceite en la dosis establecida. Por ejemplo, dosis 5 % significa que a 95 ml de agua de cao hay que agregarle 5 ml de aceite. Esta solucin debe ser agregada al vaso hasta casi llenarlo y remover para desprender las conidias del sustrato arroz. Este proceso debe demorar aproximadamente 5 minutos. Acto seguido, filtrar las conidias con una gasa, recibindolas en otro recipiente. Guardar los vasos en condiciones aspticas y a temperatura ambiente, para el siguiente da.

Evaluacin de la viabilidad germinativa Realizar montajes de las conidias, en portaobjetos, a las 24, 48, 72 y 96 horas despus de haber aplicado el producto. El montaje debe ser hecho con la misma suspensin de esporas. Observar minuciosamente la morfologa de las conidias, comparando con el Testigo sin aplicacin, as tambin el color y registrar el porcentaje de conidias germinadas, en tres campos pticos de observacin. Sacar el promedio de la lectura de campos pticos por cada Tratamiento.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

MESDIAACTIVIDAD

23preparacin del PDA

Enero28Se sirvi las placas

29Se sembraron los hongos

4Se sirvi placas para P.lilacinus ( la anterior se contamino)

5Preparacion de sustrato de arroz para T. viride

Febrero5Se aplico T. viride Al sustrato de arroz en las botellas

23Se paso el T. viride del sustrato a los frascos con sus respectivos tratamientos.

23Se paso P. lilacinus de las placas al sustrato de arroz.

24-02 Observacion germinativa de conidias de T, Viride

02Fin de la observacin germinativa de conidias de T. Viride

Marzo04-09Observacion germinativas de conideas de P. lilacinus.

5Fin del proyecto

V. RESULTADOS Evaluacin de la germinacin de conidias de Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus. (EXPERIENCIA 1)

EVALUACION REALIZADA A LAS 24 HORAS.

TRICHODERMA VIRIDE (TESTIGO 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0320

CAMPO OPTICO ii0213

CAMPO OPTICO iii0229

PROMEDIO0254

TRICHODERMA VIRIDE (ACEITE 5% 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0172

CAMPO OPTICO ii0190


PROMEDIO0191


CAMPO OPTICO i0121

CAMPO OPTICO ii0145


PROMEDIO0142

TRICHODERMA VIRIDE (MELAZA 5% 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0320

CAMPO OPTICO ii0213


PROMEDIO0254


CAMPO OPTICO i0336

CAMPO OPTICO ii0219


PROMEDIO0264

TRICHODERMA VIRIDE (FITO CUP 5% 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0626

CAMPO OPTICO ii0523


PROMEDIO0624


CAMPO OPTICO i0125

CAMPO OPTICO ii0179


PROMEDIO0162

EVALUACION REALIZADA A LAS 48 HORAS.TRICHODERMA VIRIDE (TESTIGO 48 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0270

CAMPO OPTICO ii0256


PROMEDIO0242


CAMPO OPTICO i0212

CAMPO OPTICO ii0185


PROMEDIO0203


CAMPO OPTICO i0177

CAMPO OPTICO ii0130


PROMEDIO0146


CAMPO OPTICO i0360

CAMPO OPTICO ii180


PROMEDIO0266


CAMPO OPTICO i0626

CAMPO OPTICO ii0632


PROMEDIO0660


CAMPO OPTICO i0248

CAMPO OPTICO ii0286


PROMEDIO0262


CAMPO OPTICO i0230

CAMPO OPTICO ii0187


PROMEDIO0204


CAMPO OPTICO i0331

CAMPO OPTICO ii0280


PROMEDIO0297


CAMPO OPTICO i0144

CAMPO OPTICO ii0189


PROMEDIO0175


CAMPO OPTICO i0116

CAMPO OPTICO ii0145

CAMPO OPTICO iii085

PROMEDIO0115


CAMPO OPTICO i0381

CAMPO OPTICO ii0299


PROMEDIO0331


CAMPO OPTICO i0324

CAMPO OPTICO ii0227


PROMEDIO0244


CAMPO OPTICO i0210

CAMPO OPTICO ii0235


PROMEDIO0201


CAMPO OPTICO i0241

CAMPO OPTICO ii0204


PROMEDIO0237


CAMPO OPTICO i0244

CAMPO OPTICO ii1145


PROMEDIO0196


CAMPO OPTICO i0176

CAMPO OPTICO ii0198


PROMEDIO0195


CAMPO OPTICO i088

CAMPO OPTICO ii1102

CAMPO OPTICO iii073

PROMEDIO087


CAMPO OPTICO i2243

CAMPO OPTICO ii0199


PROMEDIO0220


CAMPO OPTICO i0128

CAMPO OPTICO ii1127


PROMEDIO0135

EVALUACION REALIZADA A LAS 24 HORAS.PAECILOMYCES LILACINUS (TESTIGO 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0298

CAMPO OPTICO ii0213


PROMEDIO0234

PAECILOMYCES LILACINUS (ACEITE 5% 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i054

CAMPO OPTICO ii038

CAMPO OPTICO iii030

PROMEDIO040


CAMPO OPTICO i052

CAMPO OPTICO ii075

CAMPO OPTICO iii048

PROMEDIO0175

PAECILOMYCES LILACINUS (MELAZA 5% 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0102

CAMPO OPTICO ii096

CAMPO OPTICO iii089

PROMEDIO095


CAMPO OPTICO i0155

CAMPO OPTICO ii0166


PROMEDIO0155

PAECILOMYCES LILACINUS (FITO CUP 5% 24 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i089

CAMPO OPTICO ii076

CAMPO OPTICO iii070

PROMEDIO078


CAMPO OPTICO i0184

CAMPO OPTICO ii0162


PROMEDIO0164


CAMPO OPTICO i0436

CAMPO OPTICO ii0376


PROMEDIO0407


CAMPO OPTICO i0170

CAMPO OPTICO ii0198


PROMEDIO0161


CAMPO OPTICO i0376

CAMPO OPTICO ii0342


PROMEDIO0361


CAMPO OPTICO i0676

CAMPO OPTICO ii0379


PROMEDIO0533


CAMPO OPTICO i0976

CAMPO OPTICO ii0742


PROMEDIO0784


CAMPO OPTICO i0605

CAMPO OPTICO ii0784


PROMEDIO0717


CAMPO OPTICO i0987

CAMPO OPTICO ii0879


PROMEDIO0897


CAMPO OPTICO i0675

CAMPO OPTICO ii0435


PROMEDIO0559


CAMPO OPTICO i0653

CAMPO OPTICO ii0781


PROMEDIO0709


CAMPO OPTICO i0876

CAMPO OPTICO ii0987


PROMEDIO0912


CAMPO OPTICO i0335

CAMPO OPTICO ii0362


PROMEDIO0348


CAMPO OPTICO i0854

CAMPO OPTICO ii0695


PROMEDIO0761


CAMPO OPTICO i0567

CAMPO OPTICO ii0589


PROMEDIO0551


CAMPO OPTICO i0304

CAMPO OPTICO ii0335


PROMEDIO0308


CAMPO OPTICO i0288

CAMPO OPTICO ii0243


PROMEDIO0276


CAMPO OPTICO i097

CAMPO OPTICO ii0106


PROMEDIO0109

PAECILOMYCES LILACINUS (FITO CUP 7 % 96 horas)GERMINONO GERMINO

CAMPO OPTICO i0234

CAMPO OPTICO ii0187


PROMEDIO0204

VI. DISCUSINDiscusin sobre la germinacin de conidias de Trichoderma viride.

TRICHODERMA VIRIDE (TESTIGO) En la observacin del tratamiento en las 24, 48,72 y 92 horas, solo encontramos una conidia germinada.

TRICHODERMA VIRIDE (ACEITE 5%) Los tratamientos con aceite al 5% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.

TRICHODERMA VIRIDE (ACEITE 10%) Los tratamientos con aceite al 10% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, solo presenciamos la germinacin de una conidia.TRICHODERMA VIRIDE (MELAZA 5%) En este tratamiento las conideas bien desarrolladas formaban grupos Los tratamientos con melaza al 5% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.

TRICHODERMA VIRIDE (MELAZA 10%) Los tratamientos con melaza al 10% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.

TICHODERMA VIRIDE (FITO CUP 5 Y 7% ) En este tratamientos solo llegamos hasta las 72hrs la rpida deformacin de conidias nos dio a entender. Que el hongo no era resistente al tratamiento del fungicida, en sus observaciones de 24hrs 48hrs y 72hrs no hubo germinacin.

(*) COMO DISCUSIN GENERAL, MIENTRAS OBSERVBAMOS LOS DIFERENTES TRATAMIENTOS EXISTA GRAN CANTIDAD DE CONIDAS MALTRATADAS O DEFORMES, ESTAS AUMENTABAN SEGN EL DIA DE OBSERVACIN.Discusin sobre la germinacin de conidias de y Paecilomyces lilacinus.

PAECILOMYCES LILACINUS (TESTIGO) El testigo a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presento germinacin de conidias.PAECILOMYCES LILACINUS (ACEITE 5%) Los tratamientos con aceite al 5% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.PAECILOMYCES LILACINUS (ACEITE 10%) Los tratamientos con aceite al 10% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.PAECILOMYCES LILACINUS (MELAZA 5%) Los tratamientos con melaza al 5% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.PAECILOMYCES LILACINUS (MELAZA 10%) Los tratamientos con melaza al 10% tomada a las 24, 48, 72 y 92 horas, no presentaron germinacin de conidias.

(*) COMO DISCUSIN GENERAL, LA OBSERVACIN DE ESTE HONGO FUE MUY LIMPIA NO EXISTA MATERIA EXTRAA O ALGUNA CONIDEA QUE FUERA MALTRATADA, LAS CONIDAS ERAN MAS PEQUEAS QUE LAS DE T. VIRIDE Y ANDABAN EN GRUPO.

VII. CONCLUSIONESConclusiones sobre la germinacin de conidias de Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus. Se concluye que en ninguno de los 10 tratamientos (testigo, aceite y melaza) realizados en el laboratorio, germinaron las conidias. A pesar que en algunos tratamientos germinaron conidias pero la cantidad germinada es insignificantica, ya que en relacin al nmero de conidias promedio de cada campo ptico es demasiado menor a las no germinadas Se concluye que el posible factor causal de que las conidias no germinaran, fue que no se tuvo alimento inmediato para los hongos, porque el testigo tampoco germino. Se concluye que P. lilacinus es ms resistente al Fito cup que T.viride

VIII. RECOMENDACIONES Se recomienda aumentar las dosis sealadas ya que en el caso de T. viride aunque sea insignificantica la germinacin es posible que sea por la muy baja dosis suministrada. Se recomienda intentar hacer el trabajo con otros mtodos germinativos,

IX. INCONVENIENTES:

Cierre de la universidad por un mes (diciembre) por motivos de festividades. Solicitud a la Ing. Vallejos Vilchez Olga para el uso del laboratorio de fitopatologa, esto se hizo en conjunto con los dems grupos. Contaminacin de la primera multiplicacin que de P. lilacinus lo que conllevo aun retraso de 1 semana para preparar para una segunda multiplicacin.

X. ANEXOS

PDA

Sirviendo placas con PDA

Trichoderma viridae Paecilomyces lilacinus

Preparacin del sustrato de arroz con arena de rio.

Aplicacin de los hongos a las botellas con sustrato de arroz

Tratamientos de Trichoderma viride y Paecilomyces lilacinus

OBSERVACION DE LAS CONIDIAS

XI. BIBLIOGRAFIA

[1]Biofertilizantes y Biocontroladores (s.f.) mag [En lnea]. Recuperado el 08 de marzo el 2015. http://www.mag.go.cr/bibioteca_virtual_ciencia/biofertilizantesbiocontroladores.pdf [2]Funguicida biolgico [en lnea]: Proyecto Especial Chavimochic, La Libertad. [Fecha de consulta 08 de marzo del 2015]. Disponible desde internet: http://www.chavimochic.gob.pe/portal/Ftp/Informacion/Folletos/2013/Trichoderma_Viride_TAS.pdf [3]Paecilomyces lilacinus (s.f.) ecured [En lnea]. Recuperado el 17 de septiembre del 2014, de http://www.ecured.cu/index.php/Paecilomyces_lilacinus [4]Trichoderma viride (s.f.) Wikipedia [En lnea]. Recuperado el 16 de septiembre del 2014, de http://en.wikipedia.org/wiki/Trichoderma_viride

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