Protocolo Transfección DNA viral HBV

1. El día previo a la transfección, sembrar 4,5x105 de células Huh7 en placas de 60 mm en un

volumen final de medio de cultivo de 5 mL.

2. Día de la transfección (para una placa):

a. En un tubo eppendorf, agregar 4 ug de DNA en 250 uL de medio Optimem y en otro

tubo, agregar 10 uL de Lipofectamina 2000 (Invitrogen) en 250 uL de medio Optimem.

Incubar durante 5 minutos.

b. Mezclar el contenido de ambos tubos (DNA + Lipofectamina) e incubar durante 20

minutos.

c. Durante los 20 minutos de incubación DNA/Lipofectamina, retirar el medio de cultivo

de la placa y lavar con PBS 1X. Luego, agregar 4,5 mL de medio Optimem.

d. Pasados los 20 minutos de incubación, agregar los 500 uL de la mezcla

DNA/Lipofectamina a la placa. Mover la placa suavemente para homogenizar.

e. Incubar a 37°C y 5%CO2 durante 4-6 horas.

f. Retirar medio Optimem, lavar células con PBS 1X y agregar 5 mL de medio de culitvo

completo (DMEM suplementado con 10% FBS, 1% penicilina-estreptavidina, 1%

glutamina 200 mM).

Nota: Realizar este protocolo para cada DNA viral (4.5 y RT). Para las placas control, sólo agregar

Lipofectamina 2000.