Hongos presentes en muestras de la UNI

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERAHongos presentes en muestras de la UNITrabajo realizado para el curso de Microbiologa Ambiental

Delfin Vargas Ricardo JavierTasaico Salas Daniel Fernando

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

8 de mayo de 2014

ContenidoINTRODUCCIN1MARCO TERICO1OBJETIVOS3MATERIALES Y MTODOS4RESULTADOS5DISCUSINES6CONCLUSIONES7RECOMENDACIONES7FUENTES DE INFORMACIN8ANEXOS8

INTRODUCCIN

La presencia de microorganismos en cada rincn del planeta es indiscutible, y la Universidad Nacional de Ingeniera no es la excepcin. En esta oportunidad, los alumnos del curso de Microbiologa Ambiental como parte de su aprendizaje se propusieron determinar qu microorganismos estan presentes en muestras de alimento y agua escogidas al azar. Con el fin de aprender las distintas tcnicas de cultivo de microorganismos, as como su reconocimiento por microscopa. Este trabajo se enfocar en la presencia de Hongos en las muestras ya mencionadas.MARCO TERICOLos hongos constituyen un gran grupo de organismos, en este grupo estan incluidos los mohos, las setas y las levaduras. Se han descrito aproximadamente 100 000 especies de hongos y se estima que podran existir hasta 1.5 millones de especies (Madigan et al, 2009).Los hongos son quimiorgantrofos, normalmente tienen necesidades nutricionales sencillas y la mayora son aerobios. Muchos hongos pueden crecer en condiciones extremas de pH bajo o alta temperatura (hasta 62 gradios centgrados), lo que combinado con la facilidad de dispersin de las esporas fngicas, hace que estos organismos sean contaminantes habituales de alimentos, medios de cultivo y todo tipo de superficie. La mayora de los hongos son multicelulares y forman un entramado de filamentos conocidos como hifas (Fig.1). Las hifas estan formadas por paredes celulare tubulares que rodean la membrana citoplasmtica.Fig. 1. Hifas del hongo Penicillium. Fuente: wikipedia.org

Las hifas habitualmente crecen juntas sobre una superficie y forman ovillos compactos denominados colectivamente micelio o moho, que son visibles fcilmente sin necesidad de microscopio (Fig. 2). La presencia de esporas confiere al micelio un aspecto polvoriento.Fig. 2. Colonias de Aspergillus Fuente: wikipedia.org

Algunos hongos forman estructuras reproductivas macroscpicas denominadas cuerpos fructificantes, en las que se producen esporas y desde las cuales pueden dispersarse. Ej. Las setas (Fig. 3). Algunos hongos crecen como organismos unicelulares estos se denominan levaduras.Fig. 3. Cuerpo fructfero de Boletus edulis Fuente: wikipedia.org

Agar Saubouraud DextrosaMedio de crecimiento no selectivo, utilizado para el cultivo de hongos, particularmente aquellos asociados con infecciones cutneas (piel y pelo). Tambin es til para el cultivo de levaduras. Los nutrientes fundamentales de este medio son las peptonas, la casena y la dextrosa. Se puede lograr selectividad agregandole clorafenicol y un pH cido que inhibe el crecimiento y desarrollo bacteriano. Agente solidificante: Agar.OBJETIVOS

Determinar qu tipo de microorganismos estan presentes en cinco muestras de alimento y agua. Preparar medios de crecimiento adecuado para el cultivo de distintos organismos. Realizar cultivos in vitro de distintos microorganismos. Observar en microscopio las colonias de microorganismos cultivados, utilizando la tcnica de tincin de Grahm.

MATERIALES Y MTODOS

Preparacin del medioEn un matraz erlenmeyer se mezcl 6.5 gramos de polvo de Agar Sabouraud Dextrosa en 100 mL de agua destilada. Se agit la mezcla hasta disolver el medio parcialmente y despus se procedi a calentar, agitando frecuentemente durante 2 minutos para poder disolver completamente el polvo. Luego el matraz fue taponeado con algodn y asegurado para evitar su contaminacin post esterilizacin. Se coloc en el autoclave a por 15 minutos. Despus se dejo solidificar y se almacen en el refrigerador por una semana. Las muestras que se probaron fueron: cebo de res, agua del camote servido en el comedor universitario de la UNI, agua del grifo del laboratorio, agua del grifo de la casa de un compaero y el aire circulante en el laboratorio.CultivoSe calent el matraz erlenmeyer para poder verter la solucin a las placas petri, todo se realiz bajo los cuidados de desinfeccin del area de trabajo y con un mechero al lado para esterilizar tanto la boca del matraz como el asa de Khole. Se obtuvieron 5 placas petri con las muestras anteriormente mencionadas y en cada una de ellas se procedi a la siembra por agotamiento en las 5 placas petri. Con un Estilgrafo 0.1 se escribi en la tapa de la placa petri el nmero de la muestra y se procedi a colocar las placas en la incubadora por 24 horas a . Pasado este tiempo se sacaron las placas y se dejaron al aire libre por una semana.ReconocimientoPasado los 7 das se realiz una observacin macroscpica y microscpica de cada una de las placas. Para la observacin microscpica se utiliz un microscopio ptico de espejo y se realiz tincin de Grahm en las muestras 1, 2 y 4. En la muestra 5 solo se realiz coloracin violeta.

RESULTADOS

Observaciones macroscpicos

1) Cebo de res Formacin de abundantes colonias de 3 tipos . Algunas con elevacin convexa, otra en forma elevada irregular y de diferentes tonalidades de color. Todas fueron de textura cremosa con un olor peculiar.

2) Agua de camote

Formacin de solo 2 tipos de colonias. Son de textura cremosa y de elevacin convexa. Aqu creci el mayor nmero de colonias de hongos con respecto a las dems muestras.

3) Agua de la caera de laboratorio A simple vista no creci ninguna colonia.

4) Agua de manos Se encontr colonias en forma de puntos. Estas colonias son de textura cremosa con un olor peculiar.

5) Aire de laboratorio Presencia de 5 tipos de colonias: 3 de textura algodonosa y dos de textura cremosa. Las 3 colonias algodonosas fueron de diferentes colores: negro, marrn y meln. En la colonia de color meln se observ un punto caracterstico de color naranja.

Observaciones microscpicas

1) Cebo de ResSe observ puntos de color morado.

2) Camote de comedor UNINo se logr observar algo.

3) Agua de la caera de laboratorioNo se observ nada porque no crecieron hongos en esta muestra

4) Agua de manosSe observ puntos de color morado.

5) Aire de laboratorioNo se logr observacin alguna

DISCUSINES

De acuerdo con los resultados obtenidos y contrastando con la teora vale decir lo siguiente: Los hongos tipo levaduras tienen un aspecto cremoso de color amarrillo lechoso y con un olor peculiar; este tipo de hongos reaccionan positivamente a la coloracin gram, o sea en el microscopio se vern de color morado. Con este breve resumen de teora, se puede decir con toda seguridad que en la muestras 1, 2, 3 y 4 encontramos solo hongos tipo levadura. Los hongos tipo miceliales presentan un aspecto algodonoso (filamentoso), para ver este hongo en microscopio no se hace la tincin gram, pero para poder observar la presencia de estos se utiliza solo el cristal violeta vindose filamentos coloreados; de acuerdo con lo propuesto, este tipo de hongo se encontr solo en la muestra 5.

De acuerdo con el punto de vista convergente de los experimentadores estos resultados obtenidos no son del todo exactos, ya que existen muchos factores que alteran a las muestras, como por ejemplo al momento de hacer el muestreo, pueda ser que se expusieron indebidamente las muestras contrayendo microrganismos que estn fuera de los parmetros estipulados. Tambin se supuso que al no ver microrganismos en el microscopio de la muestra 5 el microscopio del laboratorio no tiene la capacidad para poder observar las hifas de estos hongos.CONCLUSIONES

De este experimento se puede concluir que los hongos se encuentran en todas partes, pero no son muy patgenos con respecto a los humanos.Segn la tabla de resultados en la parte microscpica solo se vieron puntos de color morado en las 3 primeras muestras; en la cuarta muestra no se logr ver ni macroscpicamente ni microscpicamente, fue un resultado que se esperaba ya que el agua de laboratorio debe ser estar libre de microrganismos que pudieran daar los experimentos hechos en dicha estancia.En el resultado microscpico de la muestra 5 no se llen la tabla, debido a que no se pudo observar ningn microrganismos en el microscopio.RECOMENDACIONES

Se recomienda tener cuidado al momento de realizar la coloracin gram, ya que al realizar incorrectamente la coloracin pueda ser que no se observe muy bien en el microscopio. Trabajar en condiciones aspticas en el laboratorio para evitar la contaminacin de la muestra. Utilizar microscopio en buenas condiciones con buena iluminacin para poder observar distinguidamente los microrganismos a estudiar. Al momento de la toma de muestra, llevar al laboratorio en un continente hermtico para evitar salirse de los parmetros. Tener mucho cuidado al trabajar con microrganismos, ya que son gradualmente patgenos.FUENTES DE INFORMACIN

1. MADIGAN M. T., MARTINKO JOHN M., DUNLAP P. V., CLARK D. P. (2009) Brock Biologa de los microorganismos. Duodcima edicin. Editorial Pearson.2. BBL Sabouraud Dextrose Agar. Consultado: 01/05/2014. Disponible en : www.bd.com/resource.aspx?IDX=22894ANEXOS

Calentamiento del medio congelado

Muestra 2: Camote. Hay presencia de levadurasMuestra 5: Aire. Hay presencia de hongos miceliales.

Muestra 1: Cebo de cerdo. Hay presencia de levadurasMuestra 3: agua de laboratorio. No se observ crecimiento de microorganismos

Muestra 4: Agua de cao. Hay baja presencia de levaduras. La placa petri sin nmero es una muestra de agua de cao contaminada durante la siembra. Se puede observar la presencia de distintos hongos y en mayor cantidad.

Observacin microscpica de la muestra 1 (izquierda) y muestra 4 (derecha)