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EVALUACIÓN DE SEMEN EN EL GATO DOMÉSTICO: ANÁLISIS DE RUTINA Y METODOLOGÍAS ESPECIALES FELINO Basic and advanced evaluations of cat’s semen Maria Alejandra Stornelli Curso de Reproducción Animal, Instituto de Teriogenología, Departamento de Ciencias Clínicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Equipo #1

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Page 1: Presentación gato rep

EVALUACIÓN DE SEMEN EN EL GATO DOMÉSTICO:

ANÁLISIS DE RUTINA Y

METODOLOGÍAS ESPECIALES FELINO

Basic and advanced evaluations of cat’s semen

Maria Alejandra Stornelli

Curso de Reproducción Animal, Instituto de

Teriogenología, Departamento de Ciencias Clínicas, Facultad de

Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata,

Equipo #1

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RESUMEN

La evaluación de semen felinoha sido motivo de diversasinvestigaciones en la últimadécada no solo por el interésde los investigadores en lareproducción del gatodoméstico sino también por suuso como modeloexperimental para el estudiode felinos silvestres.

La colección de semen permitela obtención de material parasu uso en clínica reproductiva,biotecnologías de lareproducción e investigación.

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INTRODUCCIÓN

El semen debe evaluarse antes de realizar una inseminación artificialcon semen fresco o criopreservado, al igual que previo a laconservación del mismo

esta manera podremos conocer la calidad de semen de un reproductory/o como han soportado los espermatozoides el proceso decriopreservación.

Esta información nos permitirá estimar la probabilidad de lograr unapreñez y una gestación con alto número de fetos al utilizar el semen delreproductor mediante servicio natural y/o inseminación artificial.

En el paciente con una enfermedad infecciosa bacteriana del aparatogenital, el análisis bacteriológico de semen nos permitirá aislar elagente etiológico e implementar la terapia antibiótica específicamediante la selección de la droga por antibiograma. (Stornelli yStornelli, 2002a, b).

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RECOLECCIÓN DE SEMEN

A diferencia de lo que ocurre en otras especiesdomésticas donde la recolección de semen suele nopresentar mayores inconvenientes, en el gato estapráctica se presenta como el primer desafío dentro delproceso de obtención y evaluación de la muestraseminal.

La electroeyaculación es el método más utilizado para larecolección de semen en felinos, sin embargo la vaginaartificial puede utilizarse en algunos gatos entrenados.

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OBTENCIÓN DE SEMEN MEDIANTE VAGINA

ARTIFICIAL

Puede fabricarse una vagina artificial, seccionando yadaptando una pera de goma pequeña a un ependorf o aun tubo de pequeño calibre (Johnston et al., 2001).

La vagina precalentada a 36ºC, se coloca cuando elmacho realiza la monta de la hembra y se colecta así eleyaculado.

La colecta puede realizarse sin utilizar una hembra encelo, previo entrenamiento del macho a la eyaculaciónmediante manipulación.

Sin embargo si se realiza una adecuada sociabilizacióndel gatito y se lo entrena desde la pubertad un mayornúmero deanimales logra eyacular manualmente.(Stornelli y Stornelli, 2002a).

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OBTENCIÓN DE SEMEN MEDIANTE

ELECTRO EYACULACIÓN

La electroeyaculación permiteobtener semen de todos losanimales que posean la víaneurológica implicada intacta.

Una limitante es la necesidad desometer al animal a unaanestesia general a fin de evitarlas molestias que este métodoproduce sobre el mismo(Concannon y Lein, 1983).

El clorhidrato de ketaminapuede utilizarse a una dosis de25 mg/Kg (Cline et al., 1980).

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Para la realización de esta técnica debe utilizarse unelectroeyaculador, el cual consta de un vástago (fuentede electrodos) y una fuente de voltaje.

Previa evacuación de las heces, el vástago lubricado esintroducido entre 7 y 9 centímetros en el recto con loselectrodos ubicados hacia ventral (Axnér y Linde-Fosberg, 1998). El pene es exteriorizado y se lo colocadentro de un tubo.

Se necesitan aproximadamente 80 estímulos de entre 2y 7 voltios para lograr un eyaculado (Axnér y Linde-Fosberg, 1998 Axnér et al., 1998).

Los estímulos se dividen en tres series con un descansode 2 a 3 minutos, entre cada serie.

Con cada estímulo ocurre una extensión rígida de losmiembros posteriores, la cual indica que el estímulo hasido adecuado (Axnér y Linde-Fosberg,1998; Howad etal., 1984).

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Se ha comprobado que la electroeyaculación permiteobtener un eyaculado de mayor volumen pero menorconcentración espermática que la vagina artificial(Dooley y Pineda, 1986).

Cuando seutilizaron 4 a 7 voltios se obtuvo mejorconcentración que cuando se utilizó 1 o 2 voltios.

También se ha demostrado que el voltaje de estimulaciónno afecta la viabilidad, la motilidad ni la osmolalidad,pero si afecta y pH del semen obtenido por este método(Dooley y Pineda, 1986).

esto probablemente se asocie a lacantidad de secreciónproveniente de las glándulas accesorias que posea lamuestra.

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OBTENCIÓN DE SEMEN MEDIANTE LAVAJE

VAGINAL POST- SERVICIO

El macho debe realizar un servicio e inmediatamentedespués la hembra debe ser sedada para implementarun lavaje vaginal, el cual se realizará con soluciónsalina fisiológica a 37ºC .

Los espermatozoides recolectados por este métodopueden sufrir alteraciones relacionadas con latécnicade toma de muestra utilizada (Axnér y Linde-Fosberg,1998).

El lavaje vaginal con 1 ml de solución fisiológicapermite obtener entre 40 x104 y 10 x106espermatozoides (Howad et al., 1984).

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RECUPERACIÓN DE ESPERMATOZOIDES

DE LA VEJIGA

Se ha comunicado que el gato eyacula entre 15 y 90 % desemen en forma retrógrada en la vejiga urinaria (Dooley yPineda, 1986).

Es así que la recuperación de espermatozoides de lavejiga puede ser usada para determinar si el gato produceespermatozoides. (Howad et al., 1984)

la eyaculación retrógrada tiene lugar cuando el fluido que va a ser eyaculado, que normalmente sale a través de la

uretra, se redirecciona hacia la vejiga. Normalmente, el esfínter de la vejiga se contrae y el semen va hacia la uretra

por la menor presión

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COLECCIÓN DE SEMEN A

TRAVÉS DEL EPIDÍDIMO

Los espermatozoides epididimales pueden obtenersepor corte de la cola del epidídimo en un medio derecolección, para ser evaluados y posteriormentecriopreservados. (Axnér y Linde-Fosberg, 1998; Axneret al., 1999; Axner 2000).

Este es un método útil y eficaz en la preservación desemen de animales domésticos de gran valor quesufren muerte súbita o en especies silvestres quemueren en zoológicos o reservas (Axnér etal., 1998, 1999, Tittarelli et al., 2006).

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EVALUACIÓN DE SEMEN

Si bien la evaluación de semen es un método complementariode inestimable ayuda en la valoración de la capacidadreproductiva de un macho, es solo uno de los varioscomponentes que la conforman.

El espermograma debe ser analizado dentro del conjunto deparámetros normales y anormales relacionados con elreproductor.

La evaluación de solo un eyaculado no permite emitir un juiciosobre el semen de un macho, solo varias evaluacionespermitirán evitar interpretaciones erróneas asociadas a malaobtención o acondicionamiento de la muestra, errores deprocesado de la misma, producción de un eyaculadoincompleto, interrupción del reflejo de erección y/oeyaculación, etc.

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LAS CARACTERÍSTICAS SEMINALES QUE

POSEEN MAYOR CORRELACIÓN

CON LA FERTILIDAD

Número total de espermatozoides en el eyaculado.

Porcentaje de motilidad progresiva.

Porcentaje de alteraciones morfológicas observadas.

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ANÁLISIS MACROSCÓPICO

Volumen: el volumen del eyaculado es pequeño y varíasegún el método utilizado para su obtención. Cuando larecolección se realiza con vagina artificial el volumenalcanza entre 0,12 ml, y 0,25 ml mientras que conelectroeyaculación pueden obtenerse hasta 0,74 ml

Color: el color es blanquecino, pudiendo ser amarillo sise contamina con orina y rosado o rojizo si se contaminacon sangre (Feldman y Nelson, 1996).

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ANÁLISIS MICROSCÓPICO

Concentración espermática: puede oscilar entre 13x106 a 153 x106 espermatozoides totales.

Los métodos de conteo son los usados rutinariamente enla contrastación de Evaluación de semen en el gatodoméstico: camara de neubauer, camara de burker ycontadores celulares.

Motilidad individual: el porcentaje de motilidad seestima en platina térmica, a través de la observación deuna gota de semen puro a 400 X. Se ha comunicado comonormal una motilidad progresiva de entre 60 y 90 %(Axner et al., 1998, Johnston et al., 2001).

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Morfología espermática: La morfología espermáticaes un dato esencial en la evaluación de la calidad seminal.El espermatozoide felino mide aproximadamente 26 μmde largo a diferencia del canino que mide 36 μm(Johnston et al. 2001).

La identificación de formas anormales se realiza, en elanálisis rutinario, mediante microscopía de contraste defase o mediante diferentes tinciones (Diff-Quik, Giemsa, Spermac).

El conteo se realiza a 1000 X observando 100 o 200células.

Se ha comunicado que el semen normal posee alrededordel 70 % formas normales.

Las anormalidades morfológicas que han sidoidentificadas son: macrocefalia, microcefalia, cabezadoble, gota citoplasmática proximal y distal, cabezassueltas, colas enrolladas (Johnston et al., 2001).

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Alteraciones morfológicas encontradas en semen de bagre rayado (Pseudoplatystoma metaense) postdescongelación.

a. espermatozoide normal; b. cabeza aislada; c. flagelo aislado; d. cabeza degenerada; e. flagelo doblado; f. flagelo fracturado; g. flagelo doblado; h. microcefalia y flagelo

aislado; i. flagelo doblado; j. flagelo fracturado; k y l. macrocefalia y flagelo fracturado. Observaciones en fresco (100X), realizadas en semen crioconservado diluido con una

solución de formaldehido 35% (4%)-citrato de sodio (2,9%, Na2H (C3H5O (COO)3).

).

•Se ha establecido como normospérmico al semen felino que posee másdel 60% de espermatozoides normales (Axner, 2000; Johnston et al.,2001).•No se conoce la relación exacta entre defectos morfológicos específicos yfertilidad in vivo en gatos (Howad et al., 1984, 1990).

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Integridad de membrana: Se evalúa rutinariamentemediante tinciones como eosina-nigrosina o eosina azulde anilina, tinciones que permiten diferenciar entreespermatozoides vivos y muertos.

Tinciones fluorescentes (rodamina-isotiosianato defluoresceína) así como ultramicroscopía permitenevaluar la integridad de membrana detectandoalteraciones mínimas de la misma.

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ULTRAMICROSCOPIA Y MORFOLOGÍA

ESPERMÁTICA

El microscopio electrónico de transmisión permite realizar laevaluación de las estructuras intracelulares e identificarnumerosos defectos estructurales, tanto de la cabeza como dela cola.

El diagnostico definitivo de algunas de estas alteraciones essolo posible mediante MET, por ejemplo el síndrome deKartagener.

En este síndrome la presencia de una atenozoospermia totalestá asociada a una alteración de los cilios que conforman elflagelo espermático, por ausencia de los brazos de dineína(Lungarella et al., 1982),

el estudio de la morfología espermática mediante METpermite también identificar el tipo y localización del dañoocurrido en los espermatozoides luego del proceso decriopreservación.

evaluar la capacidad de protección de diluyentes

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ANÁLISIS FISICOQUÍMICO

Osmolalidad: es aproximadamente de 320 mOsm(Johnston et al., 1988, 2001).

PH: oscila entre 6,6 y 8,8 (Melrose y Laing, 1970;Liège, 1992; Johnston et al., 2001; Stornelli yStornelli, 2002b).

Fosfatasa alcalina: el semen felino es rico enfosfatasa alcalina y esta enzima puede servir comoindicador de obstrucción ductal. (Melrose yLaing, 1970; Liège, 1992, Stornelli y Stornelli, 2002a).

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ANÁLISIS BACTERIOLÓGICO

Microbiología seminal: las bacterias aeróbicasaisladas a partir de eyaculados provenientes degatos sanos incluyen:

• E coli,

• Pseudomona Aeruginosa,

• Proteus Mirabilis,

• Klebsiella SP

• Streptococo y Stafilococo.

Estas bacterias constituyen la flora saprofita de lauretra distal y prepucio del macho.

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CONCLUSIONES

La reproducción felina ha captado la atención denumerosos científicos en la última década.

El creciente interés sobre este área del conocimiento serelaciona no solo con las implicancias que tiene sobre lamedicina y reproducción del gato doméstico, sinotambién con la posibilidad de utilización del Felis catuscomo modelo para el estudio de felinos silvestres.

El desarrollo de la fecundación in vitro y la transferenciaembrionaria ha impulsado la actualización deconocimientos de la fisiología reproductiva felina,realizándose importantes descubrimientos lo cual haestimulado el desarrollo de la IA y la criopreservación desemen.

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BIBLIOGRAFÍA

Pineda, M., & Dooley, M.(30 09 2010). Métodos para la recolección de semen en el gato doméstico. Avances En Ciencias Veterinarias, 6(1). Consultado el oct 20, 2012, de http://www.avancesveterinaria.uchile.cl/index.php/ACV/article/viewArticle/4622/4509

RAMIREZ-MERLANO, JA; MEDINA-ROBLES, VM y CRUZ-CASALLAS, PE. Crioconservación seminal de bagre rayado Pseudoplatystoma metaense (Teleostei, Pimelodidae), bajo diferentes protocolos de congelación. Arch. med. vet. [online]. 2011, vol.43, n.2 [citado 2012-10-22], pp. 135-144 . Disponible en: <http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301732X2011000200006&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0301-732X. doi: 10.4067/S0301-732X2011000200006.