presencia de igm anti- vca ebv en pacientes con hepatitis a bioq. corina micozzi bioq. maría del...
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Presencia de IgM anti- Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes VCA EBV en pacientes con hepatitis Acon hepatitis A
Bioq. Corina MicozziBioq. Corina Micozzi
Bioq. María del Pilar Bioq. María del Pilar CorralCorral
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Hepatitis AHepatitis A
Familia: Familia: PicornaviridaePicornaviridae Virus RNA, no envueltoVirus RNA, no envuelto Tamaño: 27 nmTamaño: 27 nm
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Causas de Hepatitis viral Causas de Hepatitis viral agudaaguda
2 5
93
0
20
40
60
80
100
%
HAVHBVCriptogénicas
N= 3120, 1981 – 1996. Edad 5.8 (1-18 años), 84% < 10 años
Ciocca M. Vaccine 18 S71- S74,2000
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Manifestaciones Manifestaciones clínicasclínicas
7%
7%
86% Hepatitis Ictéricas
Hepatitis Anictéricas
Hepatitis Atípicas
Ciocca M. Vaccine 18 S71- S74,2000
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Manifestaciones Manifestaciones clínicasclínicas
1%2%
4%7%
86%Hepatitis Recurrentes
Hepatitis colestásicas
Hepatitis Fulminantes
Ciocca M. Vaccine 18 S71- S74,2000
Hepatitis Atípicas:
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Hepatitis Hepatitis fulminantesfulminantes
6
30
64
0
20
40
60
80
100
%
HAVHBVCriptogénicas
N= 70, 1981 – 1996. Edad 4.5 (1-15 años) 92.4% < 10 años
Ciocca M. Vaccine 18 S71- S74,2000
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MARCADORES MARCADORES SEROLOGICOS DEL EBVSEROLOGICOS DEL EBV
CLINICA
IgM VCA
anti EA
IgG VCA
IgG EBNA
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““Detección de IgM anti-VCA EBV Detección de IgM anti-VCA EBV en pacientes con Hepatitis A”en pacientes con Hepatitis A”
Corral M.P., Micozzi C., Carchio S., Batalla M., Corral M.P., Micozzi C., Carchio S., Batalla M., CioccaM., Moreiro R.CioccaM., Moreiro R.
Hospital de Pediatría “Prof. Dr. Juan P. Garrahan”
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Objetivo:Objetivo: Estimar el porcentaje de Estimar el porcentaje de pacientes con infección aguda por pacientes con infección aguda por Hepatitis A que presentan anticuerpos IgM Hepatitis A que presentan anticuerpos IgM anti-VCA EBV en nuestro hospital anti-VCA EBV en nuestro hospital
Muestra:Muestra: 53 pacientes con IgM anti-HAV 53 pacientes con IgM anti-HAV positiva con pedido IgM anti-VCA EBV en el positiva con pedido IgM anti-VCA EBV en el período enero-diciembre de 2004período enero-diciembre de 2004
Corral y col. 2005
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Resultados:Resultados:
En En 11(20.7%)11(20.7%) de los 53 niños con hepatitis de los 53 niños con hepatitis A se detectaron IgM anti-VCA EBV A se detectaron IgM anti-VCA EBV
Diagnósticos en el momento de la consultaDiagnósticos en el momento de la consulta::
– 6 Insuficiencias Hepáticas (IH)6 Insuficiencias Hepáticas (IH)– 4 Hepatitis Agudas4 Hepatitis Agudas– 1 Púrpura1 Púrpura Tromocitopénica Tromocitopénica
Corral y col. 2005
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Evolución:Evolución:
Virus aislados: Genotipo IaVirus aislados: Genotipo Ia
6 Insuf. Hepática
2 fallecieron 1 TXH 3 resolvieron IH
1 HAI
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55%45%
IgM VCA Positivan=11 12%
88%
IgM VCA Negativan=42
P valor (Test de Fisher 2 colas)= 0.0057
Corral y col. 2005
No Insuficiencia Hepática Insuficiencia HepáticaOdds Ratio= 8.8
Resultados:Resultados:
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“ “ Simultaneous detection of IgM antibodies Simultaneous detection of IgM antibodies against the hepatitis A virus and the viral against the hepatitis A virus and the viral capsid antigcapsid antigen of Epstein-Barr virus in acute en of Epstein-Barr virus in acute hepatitis”hepatitis”Naveau S, Delfraissy JF, Poitrine A, Poynard T, Chaput JC.Naveau S, Delfraissy JF, Poitrine A, Poynard T, Chaput JC.
Presencia de marcadores serológicos del EBV en 15 pacientes Presencia de marcadores serológicos del EBV en 15 pacientes con hepatitis aguda con IgM anti-HAV positiva.con hepatitis aguda con IgM anti-HAV positiva.
Gastroenterol Clin Biol. 1985;9(2): 109-12
15 pacientes HAV IgM +
9 IgM VCA EBV +
8 EBNA +
7 EA +
• REACTIVACION DEL EBV
• REACTIVACION DE CLON B SECRETOR DE ANTICUERPOS ANTI- EBV
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““Anti-Epstein-Barr virus IgM antibodies in Anti-Epstein-Barr virus IgM antibodies in viral hepatitis A and B: significance and viral hepatitis A and B: significance and prevetion”prevetion”Freymuth F, Foucaunt P, Quibriac M, Petitjean J, Ajehenbaum F, Freymuth F, Foucaunt P, Quibriac M, Petitjean J, Ajehenbaum F, Pujol MPujol M
Presencia FR en pacientes con Presencia FR en pacientes con hepatitis A que presentaban IgM VCA hepatitis A que presentaban IgM VCA EBV.EBV.
FR presente en suero de pacientes como reacción FR presente en suero de pacientes como reacción inespecífica a enfermedad viral. inespecífica a enfermedad viral.
FR presente en título elevado en 25% pacientes con FR presente en título elevado en 25% pacientes con hepatitis viral aguda.hepatitis viral aguda.
Gastroenterol Clin Biol. 1986;10(5): 441-2
La remoción FR eliminaba seropositividad IgM
anti-VCA EBV
• FALSO POSITIVO POR LA PRESENCIA DEL FR
PRESENTE EN LOS PACIENTES
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Paciente 3 años, femenino.Paciente 3 años, femenino. Examen físico: ictericia, hepatomegalia con hígado palpable.Examen físico: ictericia, hepatomegalia con hígado palpable. Laboratorio inicial: Laboratorio inicial: GOT 495, GPT 616GOT 495, GPT 616, FAL 723. Hemograma: , FAL 723. Hemograma:
GB: 20000 (L: 68%) QUICK: 12.1 seg. KPTT: 35.4 seg. GB: 20000 (L: 68%) QUICK: 12.1 seg. KPTT: 35.4 seg. Serologías: Serologías:
Pediatric Infectious Disease Journal.1994; 13(5) 413-12
““False positivity of IgM antibody to Epstein-Barr False positivity of IgM antibody to Epstein-Barr viral capsid antigen during acute Hepatitis A viral capsid antigen during acute Hepatitis A infection”.infection”.
Fikar C. McKee C.Fikar C. McKee C.
IgM HAV positiva IgG HAV positivaIgM VCA > 1: 80IgG VCA > 1: 1280 EBNA > 1: 80anti- EA < 1: 10 FR < 20 UI/l
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IgG VCA +EBNA +
Contacto previo con EBV
EA -
Virus NO reactivado
IgM VCA +
Virus Hepatitis A induce reactivación de secreción de acs. anti-VCA EBV
Pediatric Infectious Disease Journal.1994; 13(5) 413-12
IgM HAV positiva IgG HAV positivaIgM VCA > 1: 80IgG VCA > 1: 1280 EBNA > 1: 80anti- EA < 1: 10 FR < 20 UI/l
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FALSO POSITIVO DE IGM VCA EBVFALSO POSITIVO DE IGM VCA EBV
CICLO LITICO DEL EBVCICLO LITICO DEL EBV
REACTIVACION DE UN CLON B REACTIVACION DE UN CLON B SECRETOR DE ACS. ANTI EBVSECRETOR DE ACS. ANTI EBV
¿Cómo interpretamos la presencia ¿Cómo interpretamos la presencia IgM anti-VCA EBV en pacientes IgM anti-VCA EBV en pacientes con Hepatitis A?con Hepatitis A?
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Determinación IgM Determinación IgM anti-VCA EBVanti-VCA EBV
Método: Inmunofluorescencia Indirecta Método: Inmunofluorescencia Indirecta IFIIFI
““Gold standard”Gold standard” Alta Sensibilidad y Alta Sensibilidad y
EspecificidadEspecificidad
Carballal- Oubiña, 1996
IgM VCA EBV POSITIVA
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Determinación IgM Determinación IgM anti-VCA EBVanti-VCA EBV
IFI:IFI:
Carballal- Oubiña, 1996
FALSOS RESULTADOSFALSOS RESULTADOS
FACTOR REUMATOIDEOFACTOR REUMATOIDEO
FALSO POSITIVOFALSO POSITIVO
TÍTULO DE IGG ESPECÍFICATÍTULO DE IGG ESPECÍFICA
FALSO NEGATIVOFALSO NEGATIVO
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Falso positivo por FRFalso positivo por FR
Carballal- Oubiña, 1996
Eliminación IgG específica
Eliminación FR
Pretratamiento del suero
Eliminación Falso Positivo
IgG específica
Soporte con antígeno viral
Suero paciente
FR
Anti- IgM marcado
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FALSO POSITIVO DE IGM VCA EBVFALSO POSITIVO DE IGM VCA EBV
¿Cómo interpretamos la presencia ¿Cómo interpretamos la presencia IgM anti-VCA EBV en pacientes con IgM anti-VCA EBV en pacientes con Hepatitis A? Hepatitis A?
REACTIVACION DE UN CLON B REACTIVACION DE UN CLON B SECRETOR DE ACS. ANTI EBVSECRETOR DE ACS. ANTI EBV
CICLO LITICO DEL EBVCICLO LITICO DEL EBV
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Reactivacion de clon B Reactivacion de clon B secretorsecretorde Acps. anti EBVde Acps. anti EBV En 1996, Gutierrez y col. :En 1996, Gutierrez y col. :37 pacientes (6 a 40 años) con infección por 37 pacientes (6 a 40 años) con infección por
HAV HAV InicioInicio: 7 pacientes ANA y ASMA : 7 pacientes ANA y ASMA ++ 5 pacientes solo ASMA 5 pacientes solo ASMA ++ 2 - 4 meses2 - 4 meses: Autoanticuerpos : Autoanticuerpos --
Altos títulos de ANA y ASMA ( 1:80)
Probable expresión de una respuesta Probable expresión de una respuesta inmunológica no específica a la inmunológica no específica a la
infección viral infección viral
12 (32.4%)
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En 1998, Lopez y col. :En 1998, Lopez y col. :
38 pacientes (2-13 años) con infección por HAV38 pacientes (2-13 años) con infección por HAV
Acps anti-actina: Acps anti-actina:
Reactivacion de clon B Reactivacion de clon B secretorsecretorde Acps. anti EBVde Acps. anti EBV
Positivización transitoria de Acp anti-actina
Probable estimulación no específica de los Probable estimulación no específica de los LBLB
InicioInicio: 47,3% : 47,3% + + Al mesAl mes: 12,9% : 12,9% ++A los 3 mesesA los 3 meses: 2.9% : 2.9% ++A los 5 mesesA los 5 meses: Ninguno : Ninguno ++
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CICLO LITICO DEL EBVCICLO LITICO DEL EBV
REACTIVACION DE CLON B SECRETORREACTIVACION DE CLON B SECRETORDE ACS. ANTI EBVDE ACS. ANTI EBV
¿Cómo interpretamos la presencia ¿Cómo interpretamos la presencia IgM anti-VCA EBV en pacientes con IgM anti-VCA EBV en pacientes con Hepatitis A? Hepatitis A?
![Page 25: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/25.jpg)
Herramientas en el Herramientas en el laboratoriolaboratorio
SerologíaSerología Muestra únicaMuestra única Muestras pareadasMuestras pareadas Biología MolecularBiología Molecular
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Herramientas en el Herramientas en el laboratoriolaboratorio
SerologíaSerología Muestra únicaMuestra única Muestras pareadasMuestras pareadas Biología MolecularBiología Molecular
![Page 27: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/27.jpg)
Muestra Unica Muestra Unica Anti Anti VCAVCAIgMIgM
Anti Anti VCAVCAIgGIgG
Anti Anti EAEAIgGIgG
Anti Anti EBNA-EBNA-
11IgGIgG
Primo Primo InfecciónInfección ++ ++(-)(-) ++ --ReactivaciReactivaciónón ++(d)(d) ++ +/-+/- ++Activación Activación no no específicaespecíficadel del sistema sistema inmuneinmune
++ ++ -- ++CDC, 2002; Hess 2004
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Muestra Unica Muestra Unica Anti Anti VCAVCAIgMIgM
Anti Anti VCAVCAIgGIgG
Anti Anti EAEAIgGIgG
Anti Anti EBNA-EBNA-
11IgGIgG
Primo Primo InfecciónInfección ++ ++(-)(-) ++ --ReactivaciReactivaciónón ++(d)(d) ++ +/-+/- ++Activación Activación no no específicaespecíficadel del sistema sistema inmuneinmune
++ ++
--(Tb (Tb
detectable detectable en en
personas personas sanas)sanas)
++CDC, 2002; Hess 2004
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Herramientas en el Herramientas en el laboratoriolaboratorio
SerologíaSerología Muestra únicaMuestra única Muestras PareadasMuestras Pareadas Biología MolecularBiología Molecular
![Page 30: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/30.jpg)
Muestras pareadasMuestras pareadas
Muestras 15 - 20 días de diferenciaMuestras 15 - 20 días de diferencia IFI: Titulación de IgGIFI: Titulación de IgG Elevación del título de IgG mayor o Elevación del título de IgG mayor o
igual a 4 vecesigual a 4 veces
Aalto, 1998
Test de avidez (Ig G): Alta o moderadaTest de avidez (Ig G): Alta o moderada
Reactivación del EBV
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Recordar que la presencia de marcadores serológicos de reactivación no siempre es sinónimo de enfermedad
CDC, 2002
![Page 32: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/32.jpg)
Herramientas en el Herramientas en el laboratoriolaboratorio
SerologíaSerología Muestra únicaMuestra única Muestras PareadasMuestras Pareadas Biología MolecularBiología Molecular
![Page 33: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/33.jpg)
Biología MolecularBiología Molecular
Fase aguda, lítica de la infecciónFase aguda, lítica de la infección
Virus en plasma o
suero
Fase latente de la Fase latente de la infeccióninfección
1 / 101 / 1055 ó 10 ó 1066 LB LB
Virus en PBMC
Real Time PCR Real Time PCR cuantitativacuantitativa
PTLD
![Page 34: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/34.jpg)
Brengel-Pesce y col., 2002
Real Time PCR Real Time PCR
![Page 35: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/35.jpg)
Real Time PCR Real Time PCR
Yancoski y col.; 2004
Sin síntomas <50 copias/ml1.69 log/ml
Con síntomas Clínicos:1.59104copias/ml4.20 log/ml
Nro ptes 90 11 9
![Page 36: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/36.jpg)
Real Time PCR Real Time PCR cuantitativacuantitativa
Alta carga viral /presencia de virus en circulación:Alta carga viral /presencia de virus en circulación:
Fase lítica del EBVFase lítica del EBV Baja carga viral Baja carga viral / ausencia de virus en circulación:/ ausencia de virus en circulación:
Fase latente del EBVFase latente del EBV
Util para diferenciar si pacientes con Hepatitis A + Util para diferenciar si pacientes con Hepatitis A + IgM VCA EBV: IgM VCA EBV:
Fase lítica del EBVFase lítica del EBV Sistema inmune activado de forma no específicaSistema inmune activado de forma no específica
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Real Time PCR Real Time PCR cuantitativacuantitativa
La presencia de genoma viral en La presencia de genoma viral en circulación no siempre indica circulación no siempre indica enfermedad relacionada al enfermedad relacionada al Epstein-Barr virusEpstein-Barr virus
![Page 38: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/38.jpg)
La presencia de IgM VCA EBV positiva La presencia de IgM VCA EBV positiva no se debe a un falso positivo:no se debe a un falso positivo: Fase lítica del EBVFase lítica del EBV Sistema inmune activado de forma Sistema inmune activado de forma no específicano específica
Estudio exploratorio: Estudio exploratorio:
Contribuye a la patología
Expresión de la patología
ConclusionesConclusiones
IgM HAV + IgM VCA EBV+
> proporción Insuficiencias Hepáticas
IgM HAV+
![Page 39: Presencia de IgM anti- VCA EBV en pacientes con hepatitis A Bioq. Corina Micozzi Bioq. María del Pilar Corral](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062808/5665b4b51a28abb57c9364f3/html5/thumbnails/39.jpg)
ConclusionesConclusiones
Real time PCR: Herramienta que Real time PCR: Herramienta que nos ayudará a definir entre ambas nos ayudará a definir entre ambas opcionesopciones
Grupo con ambos marcadores Grupo con ambos marcadores positivos que no presentó positivos que no presentó Insuficiencia Hepática.Insuficiencia Hepática.
Importancia de que “algo nos Importancia de que “algo nos llame la atención”llame la atención”