UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIASDEPARTAMENTO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICAPRACTICA Nº

ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS

OBJETIVOS:

Comprobar la desnaturalización y coagulación de proteínas. Realizar ensayos de precipitación de proteínas al mezclarlas con sales de metales

pesados, o con reactivos acídicos. Verificar la importancia de la reacción de Biuret para el reconocimiento de

proteínas.

TEORIA RELACIONADA

Las proteínas son un grupo de biomoléculas caracterizados por su gran variedad estructural y enorme diversidad de funciones biológicas. Las proteínas de cada ser vivo, animal o vegetal son específicas ya que están codificadas por su genoma. A pesar de que desempeñan la misma función, las proteínas presentan ligeras variaciones estructurales en las diferentes especies. Químicamente pueden diferenciarse en proteínas simples, constituidas únicamente por aminoácidos y proteínas complejas que contienen material adicional como carbohidratos, lípidos o ácidos nucleicos.

Las proteínas pueden variar sus características de solubilidad mediante alteraciones en el medio acuoso en el que se hallen disueltas. Cuando una proteína se disuelve en agua, las fuerzas hidrofílicas, electrostáticas y los puentes de hidrógeno, participan positivamente, aportando un mayor grado de solubilidad entre más efectivas sean estas interacciones. Sin embargo factores físicos como el calor, radiaciones, variaciones en los valores de pH y la presencia de solventes que afecten estas interacciones, pueden producir serias alteraciones en la solubilidad. Algunas veces pueden ocurrir cambios en la estructura nativa de la proteína y se considera que en estas condiciones la proteína se ha desnaturalizado. El fenómeno físico observado en este caso, es la formación de un coágulo o proceso de coagulación.

MATERIALES Y REACTIVOS

10 tubos de ensayo1 Pinza para tubo de ensayo3 Pipetas de 5 mL1 Frasco lavador1Gotero1 Estufa o calentador1 Beaker de 400 mL1 Gradilla1 termómetroSoluciones de albúmina, caseína y gelatina

Ácido Pícrico saturadoÁcido tánico al 10%Ferrocianuro de potasio acuosoAcetato de plomo al 2 %Ácido Acético 10%Sulfato cúprico al 2% Cloruro de mercurio al 2% Reactivo de BiuretBuffer pH 4.7

PROCEDIMIENTO:

I. Preparación de soluciones de proteínas. Solución de albúmina: Se prepara mezclando lentamente una clara de huevo con aproximadamente 100ml de agua, la mezcla se filtra sobre gasa para eliminar la mayor parte de la espuma. Caseína: se toma 1 g de caseína y se le agrega lentamente 100 ml de NaOH 0.5 M con agitación continua, reposar la mezcla durante 5 minutos y de haber espuma se filtra sobre gasa. Gelatina: se disuelve 1 g de gelatina en 100 mL de solución salina al 1 %.

II. Determinación del punto de coagulación de una proteína y demostración de la desnaturalización:

Rotule 2 tubos de ensayo grandes con las letras A y B, agregue a cada uno 4.5 ml de solución de albúmina de huevo. Agregue 0.5 ml de Buffer pH 4.7 al tubo A.Coloque los tubos en un baño de María y aumente la temperatura en forma gradual anotando cualquier cambio en los tubos y la temperatura a que ocurre. Continúe calentando hasta la ebullición del agua y prolongue el calentamiento por 5 minutos mas, separe el tubo A, déjelo enfriar y agregue 4 ml de buffer pH 4.7, llévelos al baño de agua caliente hasta ebullición. Determine si el precipitado que se ha formado, redisuelve después de enfriar o diluir con agua.El punto isoeléctrico de la albúmina de huevo esta alrededor de pH 4.7; aquí la coagulación por calentamiento ocurre mas rápidamente que a pH diferente; la desnaturalización ocurre primero después de calentar; entonces se presenta floculación, cuando el punto isoelectrico se restablece, el calentamiento da origen a que la floculación se transforme en coagulación.

III. Precipitación de Proteínas

a) Precipitación con sales metálicas: En una serie de tres tubos se adiciona en cada uno 1 mL de solución ALBUMINA de huevo; adicione a uno 4 gotas de solución de cloruro mercúrico al 2%, al segundo 4 gotas de una solución de acetato de plomo al 2%, mas 3 gotas de acido acético y al tercero 4 gotas de sulfato cúprico al 2%, obsérvese cuidadosamente la formación o no de precipitados. Explique. Repetir el procedimiento con solución de caseína y luego por solución de gelatina.

b) Precipitación con reactivos acídicos: En tres tubos de ensayo coloque en cada uno 1.5 mL de solución de caseína.. Añádale al primero 3 gotas de una solución acuosa saturada de ácido pícrico, al segundo igual cantidad de una solución de ácido tánico al 10% y al tercero 3 gotas de una solución acuosa de ferrocianuro de potasio y 1 gota de ácido acético al 10%. Observe lo que ocurre. Repetir el procedimiento remplazando la solución de caseína por solución de albúmina.

IV. Reacciones coloridas:

Las proteínas pueden formar compuestos coloreados al reaccionar con determinados reactivos, entre los que se encuentra el reactivo de Biuret. Reacción de Biuret: Es característica del enlace peptídico. A 1.5 ml de la solución proteica, añada 1 ml de reactivo de Biuret. Deje reposar la mezcla y observe lo que ocurre.

PREGUNTAS:

1. Consultar en forma clara y breve en que consiste la desnaturalización de las proteínas.

2. Explique que sucede cuando el cabello se somete a los tintes, de ris y alisado, este proceso es reversible o irreversible.

3. Explique por que las pezuñas, los cuernos, las uñas, el cabello y las plumas no se disuelven con el agua..

4. Consultar de qué depende la solubilidad de las proteínas.5. Explique cuando es positiva la reacción de biuret, escriba la reacción6. Consulte otras técnicas utilizadas para la cuantificación de proteínas.

BIBLIOGRAFÍA:

PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. México. MaGraw- Hill Latinoamericana, S.A.

CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

LÓPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional sede Bogotá.