UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDERFACULTAD DE EDUCACION, ARTES Y HUMANIDADES

LICENCIATURA EN BIOLOGIA Y QUIMICA

Realizado por: AIDA LUZ TAPIAS RODRIGUEZ MARLY PAOLA CACERES HERRERA

PRÁCTICA N0 3: RECONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

DIÁGNOSTICO EVALUATIVO

Los estudiantes al ingresar al laboratorio de Biología debe de identificar las partes que

componen el microscopio con el fin de realizar un buen trabajo unitario o en equipo para lograr

un excelente aprendizaje.

Hoy en día es importante conocer el buen manejo del microscopio para optimizar la realización

de las prácticas y así lograr un mejor conocimiento.

OBJETIVOS

Reconocer las partes del microscopio y el poder de resolución de este frente al ojo humano.

Comprender la importancia del microscopio para toda investigación científica.

Familiarizarse con el manejo del microscopio compuesto.

Realizar un enfoque de una preparación microscópica

INTRODUCCIÓN

El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin embargo, no se pueden ver a simple

vista cosas que midan menos de una décima de milímetro. Y muchos de los avances en química,

biología y medicina no se hubieran logrado si antes no se hubiera inventado el microscopio.

El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en experimentos con lentes, lo que

sucedió de similar manera pocos años después con el telescopio de Hans Lippershey (1608). Entre

1590 y 1600, el óptico holandés Zacharías Janssen (1580-1638) inventó un microscopio con una

especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm de largo soportado por tres delfines de

bronce; pero se obtenían imágenes borrosas a causa de las lentes de mala calidad. Estos primeros

microscopios aumentaban la imagen 200 veces.  Estos microscopios ópticos no permiten agrandar

la imagen más de 2000 veces. En la actualidad los de efecto túnel los amplían 100 millones de

veces.

Galileo hizo un microscopio en el Siglo XVII. Durante el siglo XVII muchos estudiosos de las lentes

y los microscopios hicieron toda clase de pruebas y ensayos para lograr un resultado de mayor

precisión. Entre los intentos fue el del italiano Marcello Malpighi (1628-1694) que en 1660 logró ver

los vasos capilares de un ala de murciélago.

 El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:

El sistema mecánico está constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y

detener los instrumentos a observar.

El sistema de iluminación comprende un conjunto de instrumentos, dispuestas de tal

manera que producen las ranuras de luz.

El sistema óptico comprende las partes del microscopio permiten un aumento de los

objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente".

PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. PARTE MECANICA. Comprende los siguientes dispositivos.

Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio.

Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene además el

condensador y el diafragma.

Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-objetos que contienen a

las preparaciones.

Ganchos de la platina: permiten sujetar la muestra sobre la platina.

Tornillo de enfoque: Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de

la platina para obtener la distancia a la cual el objeto puede ser observado nítidamente; es

decir, el enfoque preciso para el observador.

Tornillo macrométrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque

para lograr una observación precisa. Este tornillo de mayor tamaño. Está ubicado en la

parte superior del microscopio. Se usa con los objetivos de 4x y 10x.

Tornillo micrométrico: se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Este se

utiliza para movilizar la platina a distancias muy pequeñas, por lo tanto se utiliza

principalmente para afinar el enfoque. Único a usarse cuando observamos objetos con el

objetivo de magnificación alta. Da un enfoque preciso de la imagen, se usa con los

objetivos de 40x y 100x.

Revólver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos para

diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativamente.

2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los dispositivos de

iluminación.

Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo cercano al ojo del observador.

Su aumento puede ser de 6X, 10X y 15X.

Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro extremo del tubo, en el

revólver. El de menor aumento es más corto (3.2X,4X, 8X y 10X) y el de mayor aumento es

más largo (40X y 44X). Puede existir además un objetivo de inmersión de 100 a 150

aumentos.

Condensador. Lente que concentra el haz luminoso hacia la preparación.

Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparación.

Espejo o luz incorporada. Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el

sistema óptico del microscopio.

CARACTERISTICAS DE LA VISION CON EL MICROSCOPIO

1. Grado de Aumento: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido al efecto de

los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta el lente

ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la imagen de

un objeto 40 veces, ésta al pasar por la lente ocular será nuevamente aumentada.

Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación total en este caso será:

10X x 40X = 400X. Este resultado permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la

imagen de un objeto.

2. Poder de Resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre

sí. Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos a la cual

pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser todavía

distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un microscopio

compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numérica

(propiedad óptica de la lente).

3. Distancia de Trabajo. Es la distancia que existe entre el objeto en observación y el lente

objetivo. Esta distancia variará según el aumento de la lente objetivo con la cual se trabaje. Es

inversamente proporcional al grado de aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento del lente

objetivo menor será la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de inmersión la

distancia de trabajo será mínima. En estos casos es necesario usar aceite de inmersión entre el

lente objetivo y la preparación debido a que el índice de refracción para este tipo de lente es la del

aceite y no la del aire. Esto permite obtener una imagen de gran tamaño y al mismo tiempo de gran

nitidez.

 SISTEMA DE ILUMINACIÓN

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la

preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende

los siguientes elementos:

Fuente de iluminación: se trata clásicamente de una lámpara incandescente de

tungsteno sobre voltada; en versiones más modernas con leds. Por delante de ella se sitúa

un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que

permite controlar el diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar

que exceda el campo de observación produciendo luces parásitas.

El espejo: necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del microscopio

y ya alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos.

Suele tener dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las

direcciones. La cara cóncava se emplea de preferencia con iluminación artificial, y la plana,

para natural (luz solar). Los modelos más modernos no poseen espejos sino una lámpara

que cumple la misma función que el espejo.

Condensador: está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los

rayos luminosos sobre el plano de la preparación, formando un cono de luz con el mismo

ángulo que el del campo del objetivo. El condensador se sitúa debajo de la platina y su

lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto

con la preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación);

existen condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el espacio entre

esa lente superior y la preparación.

Diafragma: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para

ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el

contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la

resolución del sistema óptico.

TRAYECTORIA DEL RAYO DE LUZ A TRAVÉS DEL MICROSCOPIO

El haz luminoso procedente de la lámpara pasa directamente a través del diafragma al

condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada sobre

la preparación a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar al

ocular, donde es captado por el ojo del observador.

Propiedades del microscopio

Poder separador. También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del

microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden

verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es

menor a una décima de milímetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda

de la radiación empleada; en el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido

es de 0,2 décimas de micrómetro (la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el

microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 Å.

Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto

a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de las

aberraciones de las lentes utilizadas.

Ampliación del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el

diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si

el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100

veces mayor linealmente que el tamaño real del objeto (la superficie de la imagen será

1002, es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que está proporcionando un

microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular

empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la

ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere

decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces, también expresado como 450

diámetros.

MANEJO DEL MICROSCOPIO

1. Limpiar el espejo, condensador y los lentes del microscopio.

a. Eliminar el polvo mediante un soplete de aire o pincel fino.

b. Frotar sin presionar, con papel de lente, usando este solo una vez.

2. Comprobar si el lente objetivo de menor aumento está a continuación del tubo; si no es así, debe

colocarse en dicha posición haciendo girar el revolver hasta alcanzar un "tope" que lo indique.

3. Abrir completamente el diafragma y observando a través del ocular, mover el espejo

orientándolo de modo que la luz reflejada se observe en un círculo uniformemente iluminado. Este

constituye el "campo óptico". Una vez obtenida la iluminación máxima, NO SE DEBE CAMBIAR LA

POSICION DEL MICROSCOPIO. Con luz incorporada no hay espejo.

4. Ubicar y sujetar el porta-objetos en la platina, procurando que la preparación se halle en el

centro de la abertura circular.

5. Mover el tornillo macrométrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia la

preparación, hasta llegar a un tope.

6. Observando por el lente ocular, mover nuevamente el tornillo macrométrico en el sentido inverso

hasta que aparezca la imagen.

7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe usar el tornillo

micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo macrométrico.

8. Cuando los tornillos macro y micrométrico se encuentren incorporados en un solo dispositivo, el

ajuste fino se hace solo después de haber realizado el avance rápido de acercamiento a la

preparación.

9. Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se encuentre en el

centro del campo, hacer girar el revolver cambiando el lente objetivo hasta llegar al "tope" y

accionar solamente el tornillo micrométrico hasta obtener la nueva imagen.

10. Para observar una muestra con el objetivo de inmersión, se coloca una gota de aceite de cedro

encima de la lámina de la preparación antes de girar el revólver. Esto permite que la imagen se vea

con nitidez para realizar la observación ya que este tipo de lentes requiere que el índice de

refracción sea similar al del vidrio.

11. Terminada la observación, girar el revólver para colocar el objetivo de menor aumento en la

primera posición de trabajo.

12. Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio, secando la platina con cuidado.

13. Si usó el objetivo de inmersión, debe limpiarse inmediatamente después de su uso con ayuda

del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, luego limpiar con una segunda

impregnada en xylol y finalmente con una tercera, secar el lente. No usar cantidades excesivas de

solvente pues pueden disolver el cemento de los componentes de los lentes.

14. Mantener cubierto o guardado el microscopio cuando no esté en uso.

15. En sitios con excesiva humedad ambiental deberá guardarse el microscopio en una campana

de vidrio con un desecante como carbonato

TIPOS DE MICROSCOPIOS

En el laboratorio de Biología de la Universidad Francisco de Paula Santander existen diversas

clases de microscopios, la cual consiste en:

MICROSCOPIO Marca Leica

Los microscopios marca Leica ofrecen alta resolución en imagen y

desempeño óptimo, el microscopio que existe en la universidad presenta 3

objetivos de menor aumento u objetivos secos, ellos son 4x tiene una línea de

color rojo, 10 x presenta una línea amarilla y 40 x de línea azul, además

presenta un objetivo de mayor aumento o húmedo que es 100 x, el ocular de este microscopio es

de 10.

MICROSCOPIO Marca OLIMPUS CX21

El microscopio marca Olimpus cx21, presenta los mismos objetivos y las líneas

de colores que el microscopio Leica, tiene mayor calidad de objetivos y

presenta luz amarilla y filtro de color azul en el condensador, lo cual no

produce cansancio en el visión al momento de observar.

MICROSCOPIO Marca CARL ZEIS JENA

Este microscopio tiene mejores oculares hasta 16x, los objetivos son de vidrio

(4x, 10x, 40x, 100x) y el aumento de los lentes es de 10.

MIROSCOPIO Marca LEITZ

Este microscopio no presenta diafragma, tienen un transformador para la luz, presentan objetivos

de menor aumento 10x, 40x, 100x y el aumento es de 10.

MIROSCOPIO Marca LEITZ DE LAMPARA DIRECTA

La luz se le puede regular con el diafragma, presentan objetivos de menor aumento 10x, 40x, 100x

y el aumento es de 10.

MIROSCOPIO marca LEITZ DE LAMPARITA

No tiene objetivo de inmersión, presenta filtro azul y solo tiene tres objetivos, el

de menor aumento es de 3.5 x, 10x y 40x.

ACTIVIDAD PEDÁGOGICA

1. Indica los tipos de lentes que conozcas.

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2. ¿Qué se entiende por distancia focal de una lente?

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3. Los microscopios ópticos son instrumentos basados fundamentalmente en dos

fenómenos luminosos. Indica cuáles son éstos, y explícalos brevemente.

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4. ¿Qué indica el índice de refracción de un medio? Describe la Ley de Snell.

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5. Indica las partes del microscopio de la siguientes figura y nombra sus

componentes

TA

6. ¿Qué nombre recibe la parte del ojo que funciona como una lente?

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PAGINAS WEB

ROJAS TRIVIÑO, Alberto. Conceptos y práctica de microbiología general. (en línea). Disponible en internet en: http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf

PIÑA LÓPEZ, Carmen Eugenia. Guía de laboratorio de biología. Microscopía. (en línea). Disponible en internet en: http://canal.unad.edu.co/laboratorio/pdf/manual.pdf

FARÍAS CHAGOYA, Hugo A; VILLASEÑOR GÓMEZ, José Fernando; MÉNDEZ GARCÍA, Francisco; GARCÍA GARRIDO, Pedro; PÉREZ MURGUÍA, Ricardo y LÓPEZ GARCÍA, Ramón. Manual de prácticas de la materia de biología general. (en línea). Disponible en internet en: http://bios.biologia.umich.mx/files/manualbiologiageneral.pdf