UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIASDEPARTAMENTO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICAPRACTICA Nº 13

EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL DE LA YEMA DE HUEVO

OBJETIVOS

1. Extraer colesterol de la yema del huevo, utilizando acetona como disolvente. 2. Determinar cualitativamente la presencia de colesterol en la yema de huevo mediante un

método calorimétrico.

TEORIA RELACIONADA

Los lípidos presentes en la yema son de naturaleza variada, destacando los triacilglicéridos, el colesterol y los fosfolípidos. Mediante una extracción fraccionada se pueden separar los menos polares, solubles en acetona (triacilglicéridos y colesterol) de los más polares (fosfolípidos), que serían solubles en disolventes como la mezcla cloroformo/metanol.

Los métodos analíticos para la determinación del colesterol se dividen en colorimétricos y enzimáticos. De los primeros, el más popular es el de Liebermann-Burchard, en el que la reacción tiene lugar en un medio ácido fuerte (ácido sulfúrico). La etapa inicial del proceso consiste en la protonación del grupo hidroxilo del colesterol, seguido de su deshidratación para formar un ión carbonio 3,5-colestadieno. La oxidación secuencial de este ión carbonio alílico por el sulfúrico produce un compuesto cromóforo, el colestahexano-ác. sulfónico, que absorbe energía en la zona de la luz visible, a 410 nm.

MATERIALES

Vaso de precipitado 100 mLVaso de precipitado 50 mLPipeta de 5 mLAgitador de vidrioTubos de ensayo (2)

PROCEDIMIENTO

1. Extracción de colesterol de la yema de huevo.

Cascar un huevo de gallina con precaución y separar la clara de la yema, teniendo cuidado de no romper ésta. Decantar la clara y tomar 1 g de la yema, en un vaso de 50 ml. Añadir sobre la yema 5 ml de acetona fría y agitar con la varilla de vidrio, hasta obtener una suspensión homogénea. Verter el contenido en un tubo de centrífuga y centrifugar a 2000 RPM durante 10 minutos.

Concluida la centrifugación, retirar el sobrenadante con pipeta. Guardar el sobrenadante, al que llamaremos extracto acetónico A1, y reextraer el sedimento con otros 5 ml de acetona, agitando con la varilla y repitiendo la centrifugación. El nuevo extracto obtenido se llama extracto acetónico A2.

2. Reconocimiento de colesterol mediante la prueba de Liebermann-Burchard

Agregar a cada tubo una cantidad adecuada del reactivo de Liebermann-Burchard. Observar los resultados. Que tubo presenta una coloración mas intensa?

Preguntas complementarias:

1. Dónde ha encontrado usted más colesterol, en la fracción A1 o en la A2? Por qué?2. Consultar sobre los métodos enzimáticos para la determinación de colesterol.3. Cuales son los valores de referencia para el contenido de colesterol en sangre humana.4. Que relación existe entre el contenido de colesterol y el riesgo de contraer enfermedad vascular

arteriosclerótica.

 BIBLIOGRAFÍA:

PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. México. MaGraw- Hill Latinoamericana, S.A.

CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

LÓPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional sede Bogotá.