http://www.unizar.es/lagenbio

UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA. FACULTAD DE VETERINARIA.

ZARAGOZA (ESPAÑA)

POLIMORFISMO GENÉTICO DEL GEN DE LA LEPTINA A TRAVÉS DEL MÉTODO PCR-RFLP

EN DOS POBLACIONES DIFERENTES

INTRODUCCIÓNBúfalo de agua Raza Siboney

- Mezcla de genotipos de río y depantano

- Producción 1000kg de leche porlactancia, con un ordeño diario y conuna duración de la lactancia en unrango de 250-270 días.

- Fuerte adaptación- Elevada fertilidad y longevidad en la

producción- Importancia primordial en la vida de

los productores y en su economía:Carne, cuernos, piel y leche(mantequilla, queso, yogurt, crema)

- Cruzamiento 5/8H-3/8Z- Producción de 2585kg de leche por

lactancia, con un ordeño diario y conuna duración de la lactancia en unrango de 245-270 días.

- Adaptación al ambiente tropicalhúmedo

- Adecuada fertilidad y longevidad enla producción.

- Principal genotipo de producción deleche en manos de la mayoría de losganaderos cubanos

INTRODUCCIÓNFunción de la leptina: Gen Candidato

146 Aa producida a partir de un precursor de 167 Aa

La proteína plasmática

tiene un peso molecular

de 16kD y se transcribe

a partir del gen ob

Las variaciones en este gen se asocian con caracteres cuantitativos de importancia económica en ganado lechero:- balance energético- producción de leche- el peso vivo- fertilidad - InmunidadLiefers et al. (2002) Sau3AI-AB B allele improving milk productionBuchanan et al. (2003) B allelemore milk, Cerón et al. (2009) ganancia de peso, % grasa en la canal y mayor peso al año Souza et al. (2009) determinaron que Lep 1620 (A / G) se asoció con el peso al destete

LEP (alelo B) Candidato importante a ser utilizado en la mejora de características productivas y

reproductivas en estas razas de importancia vital en Cuba

Conocer la variabilidad del gen LEPTINA en dospoblaciones genéticamente distintas y de granimportancia en Cuba

- Siboney de Cuba, cruzamiento 5/8 Holstein x3/8 Cebú

- Búfalos de agua de Cuba (Bubalus bubalis)]

OBJETIVO

MATERIALES Y MÉTODOS- 118 búfalos de agua (cruzamientos no

controlados entre animales Carabao yBuffalypso)

- 50 bovinos de la raza Siboney deCuba, clínicamente sanos y criados demanera extensiva en el territorio de laprovincia Mayabeque (EPG “El Cangre” eInstituto de Ciencia Animal (ICA))

Extracción de AND genómico: Kit comercial de Promega Wizard ® Genomic DNA purification de acuerdo al protocolo MSRP protocol (Promega Corp., Madison, WI). Calidad y cantidad de ADN (ng/uL) para cada muestra: Nanodrop ND1000 (ThermoScientific).

Cebador Secuencia 5´-3´ Talla Referencia

LEP-BsaF GTC TGG AGG AGG CAA GCA GAG T 522pb Lien et al., 1997

LEP-BsaR CCA CCA CCT CTG TGG AGT AG

LEP-SauF TTG AGT GGC TTG TTA TTT TCT TCT 422pb Somayeh et al., 2012

LEP-SauR GTC CCC GCT TCT GGC TAC CTA ACT

BsaAI

Sau3A

Variabilidad genética: GENEPOP Versión 4.0.10 (Rousset 2008): test exacto para la desviación

del HWE, las frecuencias alélicas así como la He y Ho

522pb422pb

522pb

441pb 390pb303pb

LEP-BsaAILEP-Sau3AAA: 390+32

BB: 303+88+31

AB: 390+303+88+31

RESULTADOS

RFLPs

SNP

POBLACIÓN

Búfalos de Cuba (n=118) Siboney de Cuba (n=50)

Frecuencias génicas

LEP-BsaAI A 0.691 0.160

B 0.309 0.840

LEP-Sau3A A 0.377 0.380

B 0.623 0.620

Frecuencias genotípicas

LEP-BsaAI

AA 0.50 0.02

AB 0.38 0.28

BB 0.12 0.70

LEP-Sau3A

AA 0.14 0.18

AB 0.47 0.40

BB 0.39 0.42

RESULTADOS F

recu

enci

as g

énic

as y

gen

otí

pic

as p

or

po

bla

ció

n

RESULTADOS Indicadores poblacionales

CONCLUSIONES- Se consiguió la amplificación de ambas regiones del gen con cebadores

comunes en búfalos y en bovinos

- Identificación de polimorfismo en ambas poblaciones

- Las f.a (LEP-Bsa AI) es muy distinta en las dos poblaciones

- Existe equilibrio Hardy-Weinberg, en ambas la Ho es mayor que la He

- Este estudio permitió detectar 2 SNPs en el gen LEP en ambasespecies ganaderas, observándose alta frecuencia de alelo B.

- Esto puede ser base para futuros estudios de asociación concaracteres de interés económico y decisiones en la selección dereproductores

MUCHAS GRACIAS