Extracción mejorada de matriz en lípidos de Agilent

PIERDA DE VISTA LOS LÍPIDOS, ENCUENTRE LOS ANALITOS

Figura 1. Superposición de cromatograma de barrido completo de GC/MS de un extracto de aguacate QuEChERS no tratado (negro), comparado con la limpieza de C18/PSA tradicional (rojo) y un extracto tratado con la extracción mejorada de matriz en lípidos de Agilent (azul).

Cuentas frente a tiempo de adquisición (min)

1,6

1,5

1,4

1,3

1,2

1,1

1

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0

x106

5 76 8 109 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35

Aguacate — Extracto de Quechers antes de dSPEAguacate — Extracto de Quechers con limpieza de C18/PSAAguacate — Quechers con limpieza de EMR en lípidos

Extracción de matriz al 92 % con EMR en lípidos

¿LOS LÍPIDOS SOBRECARGAN SUS MUESTRAS?

La interferencia de los lípidos es un problema para los laboratorios que miden residuos a nivel de trazas en alimentos grasos o en matrices biológicas complejas. Los lípidos se pueden acumular en el instrumento y en la columna, acortando la vida útil de estos y reduciendo la sensibilidad de los analitos debido a la supresión iónica. La necesidad de mantenimiento del MS también aumenta, debido a los depósitos de lípidos en la fuente. La necesidad de extracción de lípidos se comprende bien, pero los métodos actuales con frecuencia sacrifican la recuperación de los analitos, al extraer algunos de los analitos objetivo junto con los lípidos.

Ahora, ya no tendrá que elegir entre extracción de lípidos y recuperación de los analitos, pues la innovadora Extracción mejorada de matriz en lípidos de Agilent ofrece la extracción de matriz y la recuperación de los analitos más completas que pueda ofrecer un producto de preparación de muestras.

La extracción mejorada en matriz en lípidos, a DIFERENCIA de otros tipos de preparación de muestras, es un absorbente exclusivo que extrae de manera selectiva los lípidos de matrices complejas y muestras muy grasas, como el aguacate, lo que permite la extracción de lípidos sin pérdida de analitos.

EXTRACCIÓN MEJORADA DE MATRIZ EN LÍPIDOS DE AGILENT

2

KITS QuEChERS Agilent SampliQ estándar

Extracción/partición (6 pasos)

Mezclar y centrifugar

Transferir a dSPE (absorbentes)

Mezclar y centrifugar

Evaporar/reconstituir o diluir

Filtrar y eliminar precipitado

Transferir a vial del automuestreador

El innovador absorbente en la extracción mejorada de matriz (EMR) en lípidos sustituye al C18/PSA en su metodología de kits QuEChERS Agilent SampliQ para reducir de forma significativa los efectos de la matriz y la recuperación de los analitos. Se puede aplicar universalmente al análisis de analitos objetivo polares, de polaridad media y no polares, ofreciendo una eficaz extracción de matriz.

*Nota: El paso de pulido se omite para el análisis de tetraciclinas.

KITS QUECHERS AGILENT SAMPLIQ DE EMR—Lipid

Extracción/partición (6 pasos)

Mezclar y centrifugar

Transferir a dSPE (EMR en lípidos y H2O)

Mezclar y centrifugar

Pulir y secar*

Evaporar/reconstituir o diluir

Transferir a vial del automuestreador

Tipo de muestra Extracción (%)

Aguacate 92

Aceite de oliva 73

Aceite de aguacate 82

Aceite de colza 75

Hígado de ternera 97

Pienso de gato húmedo 91

Pimentón 91

Comino 72

Lúpulo 57

Cúrcuma 47

Pimienta negra 22

Cebolla 41

Fresa 10

Ciruela 12

Pimiento rojo 61

Espinaca 61

Naranja 52Manzana 66

33

MINIMICE LOS LÍPIDOS. MAXIMICE LOS RESULTADOS.

% d

e re

cupe

ració

n de

los a

nalit

os (n

=6) e

n 50

ppb

de

agua

cate

forti

ficad

o co

n pe

stici

das

120

100

80

60

40

20

0Metamidofos

Limpieza con EMR en lípidosLimpieza con dSPE C18/PSALimpieza con absorbente de circonio

Tiofanato metilo

Ácido 2,4-DBentazona TPPDicloropropeno Penconazol EPN Captafol

La EMR en lípidos extrae de forma significativa las contribuciones de la matriz, mejorando la recuperación de numerosos analitos y minimizando la necesidad de tener preparaciones y métodos independientes.

La extracción de matriz más eficiente con EMR—Lipid produce una mayor precisión y una mayor exactitud de los resultados.

Figura 2. Datos de recuperación para análisis de residuos de múltiples pesticidas en aguacate, mostrando algunos de los 73 pesticidas analizados. Con la extracción mejorada en matriz en lípidos de Agilent, el 92 % de los pesticidas estaba dentro del intervalo de recuperación aceptable de entre el 70 y el 120 %.

Figura 3. Número de analitos con % de recuperaciones dentro del intervalo de % de recuperaciones aceptable entre 70-120 % para el análisis de fármacos de uso veterinario en hígado de bovino, que pone de manifiesto el mayor número de resultados aceptables tras la limpieza con extracción mejorada en matriz en lípidos de Agilent frente a la limpieza con absorbente de circonio. %

de

recu

pera

ción

de a

nalit

os (n

=6) e

n 50

ppb

de

fárm

acos

de

uso

vete

rinar

io

forti

ficad

os e

n m

uest

ras d

e hí

gado

bov

ino

30

25

20

15

10

5

0

Limpieza con EMR en lípidos

REC<70 %REC entre 70–120 %REC>120

Limpieza con C18/PSA Limpieza con absorbente de circonio

EMR—LIPID

4

Ventajas cromatográficas de la preparación de muestras con EMR—Lipid

Una extracción eficiente de los lípidos de las muestras sin extraer los analitos es la clave para mejorar el rendimiento cromatográfico y conseguir los mejores datos de calidad, especialmente con los detectores selectivos de masas de alta sensibilidad.

Un protocolo de kits QuEChERS Agilent SampliQ de EMR—Lipid mejora de manera considerable la precisión, reproducibilidad y cuantificación de niveles bajos al usar GC/MS y LC/MS (Figura 4).

Figura 4. Las mejoras de la cromatografía se pueden observar en el análisis de muestras preparadas con la extracción mejorada de matriz en lípidos de Agilent, incluyendo una mejor sensibilidad debido a la supresión iónica de matriz reducida, una mejor relación señal-ruido, y menos interferencias, que permiten una integración precisa con sistemas GC o LC de triple cuadrupolo.

VENTAJA MAYOR SENSIBILIDAD DE ANALITOS

MEJOR RELACIÓN SEÑAL/RUIDO

MENOS INTERFERENCIAS PARA UNA INTEGRACIÓN PRECISA

Ejemplo EPN en aguacate con LC-QQQ Captan en aguacate con GC-QQQ Permetrina en aguacate con GC-QQQ

Limpieza con EMR en lípidos

Limpieza con absorbente de circonio

Limpieza con C18/PSA

3.2

3

2.8

2.6

2.4

2.2

2

1.8

1.6

1.4

1.2

1

0.8

0.6

0.4

0.2

0

+MRM (324,1 -> 296,1)AVBVR POQ4.d

x103

1,0

0,5

0

Tiempo de adquisición (min)14,2 14,46 15 15,4 15,6

Coun

ts

14,863 min.

x104

2,6

2

1,6

0,8

0,5

0,2

-0,2

Tiempo de adquisición (min)12,7 13 13,2 13,4 13,6

13,163 min.

+MRM (151,0 -> 79,1)AVMBPI-a-CD C2 pico 50 ppb-1.D x104

5

4,25

3,25

2,25

1,25

0,75

-0,25

Tiempo de adquisición (min)20,4 20,6 20,8 21 21,2

20,788 min.

+MRM (183,1 -> 168,1)AVMBPI-a-CD C2 pico 50 ppb-1.D

3.2

3

2.8

2.6

2.4

2.2

2

1.8

1.6

1.4

1.2

1

0.8

0.6

0.4

0.2

0

x103

1,0

0,5

0

Tiempo de adquisición (min)14,2 14,46 15 15,4 15,6

Coun

ts

+MRM (324,1 -> 296,1)AVZ-Sep+ POQ 4.d

14,863 min.

+MRM (151,0 -> 79,1)AV Z-Sep+ C5 pico 50 ppb-1.dx105

1,6

1,2

1,0

0,8

0,5

0,2

-0,1

Tiempo de adquisición (min)12,7 12,9 13,2 13,4 13,6

Coun

ts

13,163 min.

x104

7

6

5

4

2

1

0

Tiempo de adquisición (min)20,4 20,6 20,8 21 21,2

20,819 min.

+MRM (183,1 -> 168,1) AVMZ-Sep+ C5 pico 50 ppb-1.D

x103

1,0

0,5

0

Tiempo de adquisición (min)14,2 14,46 15 15,4 15,6

Coun

ts

+MRM (324,1 -> 296,1)AVC8 PR-Q3.d

14,855 min.

+MRM (151,0 -> 79,1)Post-S 50 ppb cSPE graso C1-2.Dx105

1,4

1,2

1,0

0,8

0,5

0,2

-0,1

Tiempo de adquisición (min)12,7 12,9 13,2 13,4 13,6

Coun

ts

*13,174 min.

x104

7

6

5

4

2

1

0

Tiempo de adquisición (min)20,4 20,6 20,8 21 21,2

20,833 min.

+MRM (183,1 -> 168,1) AVdSPE graso, pico 50 ppb-1R.D

5

Sin una limpieza de muestras eficaz, la eficiencia y la calidad analíticas se ponen en riesgo, ya que las matrices grasas se acumulan en el instrumento y en la columna. Con la EMR en lípidos, el rendimiento del sistema se mantiene incluso después de 100 inyecciones de una muestra de matriz grasa como el aguacate. La menor necesidad de mantenimiento permite aumentar el número de muestras y aprovechar sus activos al máximo, lo que aumenta al máximo la productividad en su laboratorio.

Una preparación de muestras más rápida agiliza la productividad del laboratorio

Figura 5. Respuesta de analitos en 100 inyecciones de muestras de aguacate. El trifenil fosfato (TPP) se usa frecuentemente como patrón interno. Una limpieza insuficiente de las muestras puede originar la supresión o intensificación de la señal, que conllevará una mala calidad de los datos, errores y necesidad de nuevos análisis de las muestras. La superior capacidad de extracción de matriz que se consigue con la extracción mejorada de matriz en lípidos de Agilent consigue una fuente más limpia y una respuesta de MS más homogénea con el paso del tiempo, para obtener datos de mayor calidad, disminuir la necesidad de repetir los análisis y reducir la resolución de problemas y el mantenimiento de la fuente, actividades que requieren mucho tiempo.

Figura 6. Condiciones de la fuente de GC/MS durante las 2.500 inyecciones de muestras de aguacate, demostrando una frecuencia significativamente reducida del mantenimiento de la fuente de MS (limpieza o sustitución) al usar la extracción mejorada de matriz en líipidos de Agilent.

Con la EMR en lípidos hay una menor necesidad de mantenimiento y calibración del sistema al haber menos interferencias de la matriz de la muestra. Como resultado, es menos necesario repetir el análisis de las muestras. Esta ventaja le permite trabajar con un mayor rendimiento, consiguiendo un ahorro de costes y un laboratorio más eficiente.

Área

de

pico

TTP

20.000

18.000

16.000

14.000

12.000

10.000

8.000

6.000

4.000

2.000

0

0

Limpieza con EMR en lípidos. La respuesta baja – 4 %Limpieza con C18/PSA. La respuesta aumenta – 35 %Limpieza con absorbente de circonio. La respuesta baja – 50 %

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

Inyecciones de muestras de extracto de aguacate en GC/QQQ

Abun

danc

ia re

lativa

par

a el

ión

de si

nton

ía (%

)

130

120

110

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

0

0 500 1.000 1.500 2.000 2.500

Inyecciones de muestras de aguacate después de la limpieza EMR en lípidos QuEChERS

Tens

ión

del E

M

1.600

1.400

1.200

1.000

800

600

400

200

0

CRITERIO DE RENDIMIENTO DE LOS MÉTODOS

>1.600 V requiere el repuesto del EM Min. 70 Min. 5

Tensión del EMAbundancia relativa del ion MS 219Abundancia relativa del ion MS 502

PARÁMETRO

6

Una preparación de muestras más rápida agiliza la productividad del laboratorio Con más de cien análisis de muestras grasas, la mejor y efectiva limpieza con EMR—Lipid da como resultado menores % de RSD y mayor confianza en los resultados, en comparación con los procedimientos de kits QuEChERS Agilent SampliQ alternativos. Los datos de mayor calidad con una mejor precisión dan como resultado una menor necesidad de reverificación y justificación de los datos, así como un ahorro por precisarse menos repeticiones de análisis.

Figura 7. Reproducibilidad de los pesticidas analizados (%RSD) en inyecciones múltiples de muestras de aguacate en GC/QQQ. Se probaron 50 ppb de muestras de aguacate reforzadas cada cinco inyecciones, y se inyectaron blancos de matriz de aguacate entre ellas. RSD > 20 % se considera como inaceptable y está marcado en rojo.

PesticidasDER de analitos por encima de las 100 inyecciones

en GC/QQQ (n = 20)Limpieza con EMR—Lipid

Limpieza con C18/PSA

Limpieza con absorbente de circonio

Diclorvos 6,2 10,5 16,8

2-fenilfenol 7,0 13,6 19,5

Etalfluralin 12,4 18,8 32,0

Sulfotep 7,1 11,8 17,2

Atrazina 6,8 12,2 19,1

Lindano 8,5 10,8 20,0

Clorotalonil 12,5 11,7 37,4

Diacinón 6,6 11,7 16,9

Clorpirifosmetilo 8,4 8,9 14,9

Diclofluanida 11,7 9,0 25,9

Aldrina 9,8 19,3 25,7

Tolilfluanida 10,5 6,6 17,8

Captan 29,9 51,9 47,1

Procimidona 6,8 14,3 22,5

Bupirimato 6,8 10,4 20,7

Endrina 8,3 12,6 24,1

Sulfato de endosulfán 8,5 12,1 22,4

DDT 21,6 22,4 42,6

Iprodiona 11,0 10,7 40,0

Permetrina 6,8 11,8 18,8

Etilo paratión 11,8 7,2 13,0

TPP 9,1 19,9 28,3

Las ventajas de usar la nueva e innovadora EMR—Lipid son evidentes Productividad mejorada: mejor sensibilidad y relación señal/ruido con menos interferencias de la matriz permiten un procesamiento de datos más rápido y un mayor rendimiento de las muestras.

Costes de laboratorio reducidos: unas muestras más limpias con EMR—Lipid pueden reducir significativamente la necesidad de realizar un mantenimiento de la fuente de MS, por lo que podrá dedicar más tiempo a analizar muestras y menos a la resolución de problemas, con lo que supone en cuanto a tiempo de inactividad, y a la reparación de los instrumentos.

Referencia Descripción 5982-1010 Bond Elut EMR—Lipid dSPE 5982-0101 Tubos para pulido final Bond Elut EMR—Lipid 5982-0102 Bolsa de pulido Bond Elut EMR—Lipid MgSO4

Flujos de trabajo simplificados: una estandarización del sencillo procedimiento de absorbentes únicos maximiza la recuperación de los analitos de una amplia variedad de muestras grasas. Ahorre tiempo y dinero reduciendo costes de materiales, inventario, tiempo de formación y documentación, agilizando de esa forma la productividad de su laboratorio.

Resultados de mayor calidad: un perfil de muestras más limpias permite mayor integridad de los datos y confianza en los resultados, un procesamiento de datos más rápido y menos repeticiones de análisis.

7

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