Cambios microbiológicos y biodiversidad de las bacterias indígenas cultivables en  Sanbao  gran corvina amarilla (Pseudosciaena crocea), un salado y fermentado de mariscos chino He Zhang, Li Yan, Kunhua Xu, Jiajia Wu y Zhiyuan Dai

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Resumen: Sanbao gran corvina amarilla es una especie de salado chino y mariscos fermentados procesada mediante la adición de 50% de sal y fermentación a alta temperatura [alrededor de 30 ° C] durante 20 d. Para tener una buena comprensión del cultivo la diversidad de los microorganismos presentes en la fermentación, las propiedades químicas y microbianas de este producto, se detectaron inicialmente, seguido por la identificación de bacterias recuperadas de diferentes períodos de fermentación mediante PCR-RFLP y 16S rRNA análisis de secuenciación de genes. En total, 105 aislamientos indígenas fueron recuperados con 3 medios y la mayoría de estos diferentes, los aislados recogidos de tanto MRS y MSA medio fueron finalmente agrupados en el género de Staphylococcus (S.). En medio de los 90 estafilococos, S. xylosus, S. saprophyticus y S. nepalensis se recuperaron las especies cultivables más prevalecientes durante todo el proceso de producción (70 aislamientos, 77,8%), mientras que otras 5 especies, a saber, S. aureus, S. vitulinus, S.sciuri, S. equorum, y S. succinus formó una fracción menor (20 aislamientos, 22,2%) de las comunidades de Staphylococcus. Bacterias del ácido láctico, Pseudomonas, Proteus, y Bacillus constituidos por poblaciones triviales en el período inicial de la fermentación y luego dio el camino hasta el Staphylococcus inmediatamente después. La alta concentración de sal utilizada durante el procesamiento es como tener una influencia marcada en las poblaciones microbianas implicadas. Los datos obtenidos en este trabajo podrían ser referidos en el control y la optimización del proceso de fermentación y seleccionando de cepas adecuadas para la fermentación de productos acuáticos.

Palabras clave: diversidad, fermentación, las bacterias del ácido láctico, Sanbao gran corvina amarilla, Staphylococcus____________________________________________________________________________

Introducción Tradicionales productos pesqueros fermentados espontáneamente han sido durante mucho tiempo consumidos en los países del sudeste asiático y las regiones del noreste de Asia, como Tailandia, Corea, Japón y China (Kopermsub y Yunchalard 2010; Zeng y otros 2013). En China, hay más de 100 tipos de productos pesqueros fermentados fabricados con diferentes técnicas de procesamiento producidas principalmente en Zhejiang, Jiangsu, Hubei, Fujian, y las provincias de Shandong (Xu 2012).En la provincia de Zhejiang, los tradicionales productos de pescado fermentados son siempre procesados con alto contenido en sal de acuerdo con la preferencias y el (en chino) técnica "Sanbao" es uno de los métodos de

procesamiento de fermentación tradicionales populares en esta distrito. Durante el procesamiento Sanbao, las sales se añaden 3 veces en el 0 (pescado fresco) ,1er y quinto día de fermentación con la sal a la proporción de peces de 10%, 20% y 20%, respectivamente. Después de 20 d de la fermentación, el mal olor podría convertirse en una parte del perfil del olor deseable en los productos pesqueros fermentados mientras que los productos están libres de olor a pescado y del sabor. Estudios anteriores han indicado que los microorganismos juegan un papel crítico en la fermentación de peces y las especies involucradas en la fermentación del pescado son de gran variedad (Guan y otros 2011). Normalmente, en productos de la pesca con bajo contenido de sal, las bacterias Gram

Negativas se inhiben mientras que la Gram positivas, particularmente las bacterias ácido lácticas (BAL),convertidos predominantemente en microorganismos (Paludan-Muller y otros, 2002; Hwanhlem y otros 2011;Dai y otros 2013). El efecto beneficioso de los laboratorios implicados en la fermentación de estos productos se han asociado con su capacidad para iniciar un descenso rápido del pH mediante la producción de ácido láctico en los primeros días de fermentación, lo que contribuye a un producto seguro previniendo el crecimiento de los organismos de descomposición y patógenas (Leroy y otros 2006). Mientras tanto, en el alto contenido de sal procesada en los productos de pescado, Staphylococcus constituye el número más alto (Guany otros 2011). Generalmente, gram positivos y catalasa positivos cocos, especialmente el estafilococos coagulasa negativos, participan en el desarrollo del sabor de muchos productos con alto contenido de sal en el pescado fermentado y productos cárnicos, principalmente a través de aminoácidos y ácidos grasos de degradación (Hammes y Hertel 1998; Talon y Leroy 2006). Todas estas reacciones proteolíticas y lipolíticas deseables inducidas por ambos microorganismos y endógenos de la influencia el cuerpo de los peces tanto en el desarrollo de la textura y el sabor a través de la formación de varios compuestos de bajo peso molecular, principalmente péptidos, aminoácidos, aldehídos, ácidos orgánicos, aminas, y ácidos grasos, que son conocidos como importantes compuestos de sabor o precursores de compuestos de sabor (Leroy y otros 2006). Hasta la fecha, los productos pesqueros fermentados son fabricados principalmente con el proceso de fermentación espontánea tradicional que se basa exclusivamente en microorganismos indígenas que se encuentran naturalmente en el pescado fresco o en el entorno de producción y por lo tanto, es difícilgarantizar la coherencia de los productos finales. Además, el crecimiento del deterioro y (oportunistas) bacterias patógenas ampliamente extendidas en el medio ambiente, tales como Enterobacteriaceae y Enterovocci ,y Staphylococcus aureus (Marty y otros 2012), también ponen en peligro la seguridad del producto. A veces, las actividades bacteriana como reacciones de carboxilación de los aminoácidos precursores dentro de ciertos (Lactobacillus, Pediococcus y Streptoco-ccus)enterobacteriaceae (Klebsiella, Escherichi

a,Proteus,Pseudomonas, Shigella) podría conducir a cantidades peligrosas de la formación de aminas biógenas en fermentación carne mentado y los productos pesqueros (Ten Brink y otros 1990; Anastasio y otros 2010). En este caso, el uso del motor de arranque culturas sería un enfoque óptimo para el control y la opción timización del proceso de fermentación (Gotz 1990). Ha sido conocido que la espontanea diversidad microbiana del fermentado de productos alimenticios es fundamental para la búsqueda de cultivos iniciadores proveen nuevas propiedades y la identificación de las especies de la fermentación de microorganismos permitiría una fermentación más predecible del proceso, dando al producto una mayor consistencia en la calidad y el descenso de los riesgos higiénicos (Kopermsub y Yunchalard 2010; Marty y otros 2012). Por consiguiente, la investigación de la diversidad microbiana, rasgos tecnológicos y la calidad higiénica de la fermentación de microorganismos en productos de pescado fermentado espontáneamente pueden proporcionar valiosos datos para empezar la selección de los productos. Este estudio fue diseñado para evaluar la diversidad cultivable de microorganismos indígenas que participan en la espontánea y tradicional fermentación de las corvinas amarillas de Sanbao  (LYC, Pseudoscicrocea Aena) la producción, lo que podría proporcionar a la microbiología básica conocimientos previos y datos para la recogida del cultivo iniciador. La Reacción en Cadena de la Polimerasa-longitud de los fragmentos de restricción polimorfismo métodos (PCR-RFLP) combinado con secuenciación aprovechando el enfoque se utiliza principalmente como un enfoque rápido y potente para las especies de la identificación de los aislados recogido de diferentes periodos de fermentación durante la producción Sanbao.

Materiales y métodos

Preparación de Sanbao LYC

LYCs (peso aproximadamente 230 a 270 g) fueron adquiridos de la Compañía de productos Yingzhou Aquatic en la ciudad de Zhoushan, Zhejiang provincia y transportados al laboratorio en hielo dentro de 4 h.Inicialmente, LYCs ninguno eviscerado se limpiaron con agua del grifo y untado con sal (10% del peso de pescado) fuera del cuerpo.

Después de incubar a 30 ° C durante 1 d, un parcial de sal (8% de los peces peso) se metió en el vientre de pescado a través del ano con un palillo y otra porción de la sal (8% del peso de pescado) era recubierto en el cuerpo de los peces de manera uniforme. Más tarde, los peces se colocaron en un barril con una capa de sal (4% del peso de pescado) en la parte inferior y todo el vientre de pescado se mantuvo hacia arriba. La capa de pescado preparado fue sometida a una presión (40% del peso de pescado) y se incubaron a 30 ° C durante 4 d. Por último, los peces tratados se recubrieron con sal (20% del peso del pez). Se mantuvo de nuevo y con la presión (15% del peso de los peces) a 30 ° C durante otros 15 d.

Muestreo y caracterización fisicoquímica

Las muestras se recogieron en los días predeterminados (0, 1, 5, 10, 15a, 20a del día de fermentación) para seguimiento de la medición de las propiedades físicas: valor de pH se detectó utilizando el pH-metro (Ultra sobremesa básica, Denver Instrument, EE.UU.) Con 10 g muestras homogeneizadas en 90 ml de agua esterilizados; contenido de sal era determinado de acuerdo con los procedimientos (1997) AOAC y humedad contenido tura se midió mediante un medidor de humedad (MB45, Ohaus Instrumento, Nueva York, EE.UU.); contenido de histamina del pescado fresco y el producto final se analizaron mediante líquida de alta resolución sistema de cromatografía según el método propuesto por BenGigirey y otros (1999) con el 5 μ m, 150 × 4,6 mm Sunfire Columna C18 (Waters, Milford, EE.UU.). Propósito estándar de histamina comprado por Sigmal Chemical Co. Se utilizó como un positivo control.

Enumeración y aislamiento de microorganismos

Diez gramos de la muestra recogida se cortaron en pequeños y especies y a continuación, añadido en 90 ml de solución salina estéril (NaCl al 0,85%, w / v) y se mezcla suavemente. Las alícuotas de 100 μ L diluciones decimales en serie se propagan en medios selectivos por duplicado. Bacterias mesófilosaeróbicas,LAB,enterobacteriacea y Staphylococcus se enumeraron utilizando Plate Count Agar (PCA), De Man Rogosa y Sharp (MRS) agar, Violeta Rojo Bilis glucosa Agar

(VRBGA) y Manitol Salado Agar (MSA, Puente de Tierra de Beijing, Beijing, China), respectivamente, y todas las placas se incubaron a 30°C durante 48 h. Descuento del 5% de NaCl se añadió a cada uno de los medio comercial aplicado en este estudio. Las placas obtenidas de 30 a 300 unidades formadoras de colonias (UFC) por gramo fueron seleccionados para la enumeración. Diez colonias fueron recogidas arriba de la placa diluida adecuada basada en diferentes morfologías y después se purificó 2 veces. Gram tinción y la prueba de producción de catalasa se realizaron con los cultivos purificados. Por un largo tiempo de preservación, los cultivos purificados se almacenaron a -80 ° C con 30% glicerol.

Extracción de ADN genómico y amplificación del gen

El ADN genómico se extrajo con bacterias kit de ADN genómico (Beijing Zoman Biotecnología Co. LTD., Beijing, China) de acuerdo a el manual de instrucciones. La amplificación del 16S rDNA fue logrado con cebadores 27F (5 -AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3) y 1492r (5 -GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3) de acuerdo con el protocolo descrito antes (Dai y otros 2013) utilizando un T100TM Termociclador (laboratorios Bio-Rad, EE.UU). El amplicón de fragmentos de genes ropB parciales de Staphylococcus se generaron utilizando pares de cebadores de 2643F (5 -CAA TTC ATG GAC CAA GC-3) y 3241R (5 -GCD ACD TGD TCC ATA CCT GT-3) describió previamente (Drancourt y Raoult 2002) y la reacción PCR se llevó a cabo siguiendo el protocolos reportados por Marty y otros (2012). Todos los productos de PCR se resolvieron por electroforesis en 1% (w / v) geles de agarosa y los geles se visualizaron con Imagen MolecularR ChemiDocTM XRS+

(Laboratorios Bio-Rad, EE.UU).

Analiza la restricción de amplificados de PCR

Restricción de los fragmentos amplificados de estafilococos aislados se llevaron a cabo mediante la digestión de los amplicones con Mbo II primero.A continuación, la combinación de enzimas de Hae III y Hha I, o TSPR I y Taq I fueron seleccionados para la digestión adicional según los resultados iniciales. Enzimas Hae III, Msp I

y Afa I fueron elegidos para el análisis de restricción del presunto aislamiento de Enterobacteriaceae.Todas las enzimas endonucleasas de restricción utilizadas en este estudio de tetramericos se adquirieron de Fisher Scientific Co. Thermo (EE.UU.).Los patrones de restricción fueron examinadas usando 2% (w / v) en gel de agarosa con the100 escalera de ADN pb (Takara Biotecnología (Dalian) Co. Ltd.,China). Se llevaron a cabo análisis de imágenes de patrones de restricción con Laboratorio de ImagenTM Software (Bio-Rad Laboratories, USA).

16S rRNA secuenciación de genes y la identificación molecular

Los amplicones del 16S rDNA fueron amplificados inicialmente como se ha descrito anteriormente y se purificó con el gel Mini Purificación Kit (Zomanbio, China) y luego presentado para la secuenciación por Nanjing Jinsirui Biotecnología Co. Ltd. La secuenciación Se analizó y determinó a través del básico local de datos de alineación enla búsqueda de la herramienta en la base de datos NCBI (http: // blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast  .cgi) y el GenBank asignado Número de la accesión es KJ958195 -KJ958217. La secuencia de 16S Rrna de genes determinados se alinearon con las secuencias de las cepas obtenidas de la base de datos y luego el árbol filogénico fue construido por el método de vecino a participar en el uso de la Software MEGA 4.1.

Resultados y discusión Características fisicoquímicas a lo largo del proceso de fermentación

La fermentación se llevó a cabo siguiendo el tradicional Sanbao Técnica de procesamiento de LYC. Seis muestras se obtuvieron de diferentes periodos de fermentación para las pruebas de carácter físico-químicas. El valor de pH del pescado aumentó abruptamente 6,82-7,82 después de la primera añadida de sal y luego disminuyó gradualmente a 6,80 en el final de la fermentación. El aumento inicial de pH fue posiblemente debido a la formación de compuestos básicos nitrogenados como resultado de la enzima y la actividad proteolítica microbiana, mientras que

el aumento gradual en la fermentación de la población microbiana puede dar lugar a una del ácido orgánico y corresponden a la siguiente disminución del valor del pH. A medida que el contenido de sal del Sanbao LYC aumentó constantemente de 0,4% a 35,65% (w / v), el contenido de humedad desciende rápidamente de 77,58% a 50,93% hasta el décimo día de fermentación se le añadió 3 veces sal. Entonces, la variación del contenido de sal y el contenido de humedad tendía hacia la estabilidad y se detuvo finalmente a 36,20% y 46,51%, respectivamente. Este alto nivel de NaCl es probable que tenga una influencia pronunciada en el crecimiento microbiano y la velocidad de fermentación, y por lo tanto sobre la calidad y la seguridad sensorial del producto (Paludan-Muller y otros, 2002). Aunque no se detectó histamina en la fresca LYC muestreo hay que destacar el contenido de histamina y el producto final incluso llegó a 91,67 mg / kg, que ha superado la guía nivel de 50 mg / kg establecido por la US Food and Drug Administration (FDA, 2001) y también estaba cerca del límite de concentración del consumo humano de 100 mg / kg en algunos productos de la pesca según la Unión Europea [Reglamento (CE) no 1441/2007].

Por lo que sabíamos, el consumo de alimentos con altos niveles de histamina puede causar síntomas similares a alergias en los seres humanos sensibles y la contaminación de la histamina en el pescado y sus productos puede causar intoxicación alimentaria (Rabie y otros 2009; Mixto FAO / OMS de Expertos Meeing 2012). Por lo tanto, los resultados obtenidos en nuestro estudio gestas monitoreo cuidadoso de los contenidos de histamina en estos productos está presionando. El alto valor de la histamina en Sanbao LYC podría ser atribuido al hecho de que las vísceras y agallas permanecieron en el cuerpo del pescado durante todo el proceso de fermentación, que proporcionan más oportunidad para el crecimiento de bacterias formadoras de histamina que por lo general habitan en las vías intestinales, las vísceras y agallas.

El crecimiento de la población microbiana durante Sanbao LYC fermentación

La variación de la población microbiana durante la fermentación Sanbao LYC reveló en la Figura 1. Los datos iniciales cuenta microbianas en la muestra Sanbao LYC indicó que la fresca pescado era un buen hábitat para los microorganismos. Con la sal añadido por primera vez, todas las poblaciones bacterianas investigadas cerradas en este estudio experimentaron un descenso rápido. A partir de entonces, la sal agregada para el segundo tiempo al final de la jornada primera fermentación, y con excepción de las enterobacterias, los números de la aeróbica recuento de mesófilos, LAB, y Staphylococcus recuentos todos rebote para niveles relativamente altos de 5,26 ± 0,06, 4,93 ± 0,10, 5,10 ± y 0,01 log UFC / g, respectivamente, hasta el día de fermentación quinto. Después la tercera adición proceso de sal, tanto del recuento de aerobios mesófilos y los recuentos de Staphylococcus disminuyeron gradualmente de una manera similar y se mantuvo a un nivel moderado al final de la fermentación alrededor de 2,74 ± 0,05 y 2,06 ± 0,08 log UFC / g. Esta variación similares la tendencia predijo que los estafilococos fueron probable que sea el población bacteriana dominante en el final de la fase de fermentación.

Entre todos los microorganismos ensayados, Enterobacteriaceaee presuntivas eran los más sensibles a la concentración de sal como sus recuentos disminuyeron inmediatamente y rápidamente después de la adición de la sal (Figura 1). Las enterobacterias fueron eliminadas progresivamente con población inicial de 3,8 ± 0,05 log UFC / g, y no podría ser detectado hasta el día 10 de fermentación. Como la sal añadida al primer tiempo, el crecimiento de la flora microbiana natural en el pescado fresco era inhibido obviamente con la concentración relativamente alta de sal.Después de la segunda etapa de adición de sal, menos halófilas y tolerante a la sal microorganismos se eliminan, dando paso a la más halófilas y los tolerantes a la sal ya presentes en el pescado (Anihouvi y otros 2007).

La identificación de Staphylococcus aísla

En total, 42 LABs presuntivos y 52 presuntos Staphylococcus se recogió de MRS y MSA

agares, respectivamente, y todos estos aislamientos eran gram-positivos y catalasa positiva. En esto caso, tratamos de amplificar el gen rpoB parcial de todos los aislados recibido de ambos medio MRS y MSA y 90 de los amplificados se obtuvieron. Más tarde, el análisis RFLP 2 a paso se llevó a cabo para la agrupación de los aislamientos. El análisis RFLP inicial con el enzima restricción Mbo II resultó en 2 grupos, Tipo H y Tipo T (Tabla 1). Los aislados agrupados en Tipo H se digirieron con Hae III y Hha I aún más, mientras que los aislamientos de tipo T se distinguieron por combinación de TSPR I y Taq I en su lugar. Finalmente, todos la 90 aislamientos fueron clasificados en 13 grupos de RFLP diferentes con fragmentación tamaño osciló 104 a 591 pb (Tabla 1). Al menos 1 aislado Se seleccionó de cada tipo de perfil RFLP para el gen 16S rRNA secuenciación, que confirmó la identidad de los aislamientos en las especies nivel (Tabla 1), y la mayoría de las secuencias eran perfectamente idénticos a los datos en el Banco de Genes (99% a 100%). Staphylococcus era confirmado como el género predominante recuperado de ambos MRS y MSA agar, que es similar a la que ocurre en los aislados recogió desde el Plasom (Paludan-Muller y otros, 2002). ULTERIORES Además, el Staphylococcus aisladas de la Sanbao LYC muestra una

Figura 1-El crecimiento de las especies de bacterias durante la fermentación de Sanbao LargeYellowCroaker.* Totalaerobicbacteriacounts (opensquares), acidbacteria lácticas (opencircles), Staphylococcus (opentriangles), enterobacterias (abrir triángulos invertidos) se contó con PCA, agar MRS, MSA agar, andVRBGA, respectivamente.

Gen aropB amplificado tamaño del producto en pares de bases; los fragmentos de restricción por debajo de 100 pb no se consideran. Los aislamientos con marca negrita fueron sometidos a secuenciación. PCR-RFLP se basa en la secuencia del gen rpoB con Mbo II como primera enzima de restricción fi. Grupo A con tipo H per fi l fue digerido por Hae III (a) y Hha I (b) más allá. Los aislamientos con tipo T per fi l y luego se digirieron con TSPR I (a) y Taq I (b). (T Cluster: 320-280 pb; Cluster H: desde 330 hasta 220 pb).

gran diversidad con 8 especies identificadas incluyendo S. vitulinus, S. aureus, S. xylosus, S. saoriohyticus, S. nepalensis, S. sciuri, S. succinus, y S. equorum. Por otra parte, la diversidad genética dentro de las especies de S. xylosus, S. saprophyticus y S. nepalensis .También se observaron como todos ellos poseían variados patrones de perfil RFLP. La relación de diferentes especies de Staphylococcus se reflejó en el árbol filogenético construidos el gen 16S rRNA (Figura 2). Muchos estudios han concluido que coagulasa negativos Staphylococcus lococci se recuperan con frecuencia de la muestra relacionada con los alimentos y especialmente en productos fermentados (queso o salchicha seca; Blaiotta y otros, 2004; Mounier y otros 2005; Martin y otros 2006; Algodón y otros 2010; Irlinger 2008). Las especies de S. xylosus, S. succinus, S. equorum, y S. saprophyticus son 4 principales

Figura 2-Aphylogenetictree secuencias on16SrDNA basada construidos por el método de barrio a participar. * Las cepas de tipo M.caseolyticus ATCC 13548T se utilizó como grupo externo. Los números en los nodos indican los valores de arranque (%) derivados de 1000 repeticiones.

Staphylococcus frecuencia recogido de las salchichas fermentadas y productos de queso algodón y otros 2010). En este trabajo, S. xylosus, S. saprophyticus y S. nepalensis fueron los más prevaleciente ing especies cultivables recuperados a lo largo de toda la producción proceso (Tabla 2) con 70 aislar participado del 77,8% del Staphylococcus poblaciones lococcal. Esto fue parcialmente consistentes con estudios sobre tradicionalmente espontáneamente fermentado embutidos mostrando S. xylosus es frecuencia dominante en ellos, seguido por S. saprophyticus (Ravyts y otros 2012; Janssens y otros 2014). La especie S. xylosus son

elegibles como cultivos iniciadores de productos cárnicos fermentados y ha sido ampliamente utilizado como iniciador comercial, y se caracteriza por aroma redondeada y sabor menos ácido (Mauriello y otros, 2004).

S. sarprophyticus menudo se aísla en gran número desde el sur Embutidos fermentados Europea y especialmente dominante en algunos del salami tradicional griega (Samelis y otros 1998; Mauriello y otros, 2004). Aunque, S.

A16S rRNA tamaño gen ampli producto fi cados en pb; los fragmentos de restricción por debajo de 100 pb no se consideran. Los aislamientos con marca negrita fueron sometidos a secuenciación.

sarprophyticus exhibió la inestabilidad de la capacidad para reducir nitrato, el primer criterio en la selección de cepas para ser utilizado como cultivos iniciadores para la fabricación de salchichas, se altos valores transformados de SOD y la actividad que podría catalasa ayudar a prevenir malos sabores producidos por la oxidación de lípidos durante maduración de embutidos. Por lo tanto, se sugirió a ser seleccionados y validado como cultivo iniciador en la producción de algunos alimentos fermentados (Samelis y otros 1998). Sin embargo, consi- cuidado especial ración se debe tomar antes de que se aplica en la industria alimentaria desde esta especie se considera que es potencialmente patógenos y con frecuencia asociado con casos clínicos (Hammes y Hertel 1998; Marty y otros 2012). S. nepalensis (15 cepas, 16%) fue el tercero más grande población bacteriana se recuperó de la Sanbao LYC. Aunque esta especie no se informó a menudo en el producto asociado a los alimentos, Cepas de S. nepalensis recogidos de salsa de pescado japonés ha sido probado para obtener la capacidad de mejorar la salsa de pescado olor y es probable para mejorar el olor desagradable de mariscos fermentados (Fukami y otros 2004a, b).

Otras cinco especies, a saber, S. aureus, S. vitulinus, S. sciuri, S. equorum, y S. succinus formó una fracción menor de la Staphylococcus comunidades cocos de la biota Sanbao LYC (Tabla 2). S. aureus es el patógeno estafilococo más conocido que produce una gran número de toxinas que causan intoxicaciones de origen alimentario (Akineden y otros 2008). Afortunadamente, S. menos aislamientos aureus fue simplemente detectan en el pescado fresco y las muestras iniciales de fermentación y no S. aureus fue encontrado después de que el día de fermentación quinto. S. vitulinus, que eran considera lo más específico de acogida en el fresco LYC, han sido también peración Ered de varios tipos de salchichas fermentadas (algodón y otros 2010). Generalmente, S. succinus y S. equorum desempeñan papeles importantes en el proceso de maduración de cierta producción de embutidos secos fermentados (Ravyts y otros 2012). Corbi`ere Morot-Bizo y otros (2006) han indicado que esas 2 especies representan el 82% de Staphylococcus poblaciones cocos en francés embutidos fermentados naturalmente, y una considerable proporción entre el otro fermentado queso, carne salchichas, así como

productos de pescado fermentados (Mauriello y otros 2004; Guan y otros 2011). Se ha predicho que positivo-gramo y catalasa cocos positivos, especialmente el coagulasa negativo Estafilococos, participar en el desarrollo de sabor de muchos productos cárnicos fermentados principalmente a través de amino y ácido graso degradación (Talon y Leroy 2006). Berdague y otros (1993) sugerido que Staphylococcus spp., en lugar de LAB, podría tener una efecto predominante en el desarrollo del sabor salchicha. En este caso, considerable alto porcentaje de la población microbiana y buena diversa entre las especies en el Staphylocuccus investigados en este trabajo podría ser de gran importancia para el gusto y el sabor del producto final.

Identificación de LAB y aislamientos presuntivos de Enterobacteriacea LAB se han considerado como la especie predominante en varios productos alimenticios fermentados incluyendo muchos pescado fermentado productos (Françoise 2010; Hwanhlem y otros 2011), sin embargo, en este estudio se detectó una presencia marginal de LAB. Cuatro LAB aislamientos recogido de pescados frescos fueron identificados como Macrococcus (M.) caseolyticus y el otro era divergens Carnobacterium a través de la secuenciación del 16S rDNA directa. El notable alto Concentración de NaCl aplica para el procesamiento Sanbao LYC puede causar una amplia inhibición de las bacterias incluyendo nonhalophilic LAB, que era consistente con estudios previos que muestran una concentración de hasta 7% da como resultado la inhibición de LAB (Horner 1997). En consecuencia, baja cantidad de la población podría ser el LAB razón por la cual no se observó ninguna variación más fuerte en el pH durante el Fermentación Sanbao LYC.

Las especies de la familia Enterobacteriacea se detectan con frecuencia en fresco o mariscos procesados y responsable de la descomposición de pescado (Yin y otros 2002). En el trabajo de presentar este documento, Enterprise obacteriacea constituía una pequeña población en el período inicial de la fermentación Sanbao LYC. Once aislados recuperados de la Medio VRBDA finalmente se clasifica en 3 géneros y 5 especies,

a saber, Pseudomonas (Ps.) putida, Sal. fulva, Proteus (Pr.) penneri, Pr. Vulgar, y Bacillus (B. subtilis) (Tabla 3). Sólo 2 Pr. Penneri y 1 Pr. vulgaris pertenecen a la familia Enterobacteriaceae. Tenga en cuenta que 55% de la VRBDA aísla pertenecen al género Pseudomonas, que tiene han considerado como los microorganismos más prolíficos durante la almacenamiento de pescado, independientemente de su origen (Gennari y otros 1999). La especie predominante de Ps. putida era también frecuentemente aislado a partir de muestras frescas y fermentadas y por lo general los que intervienen en el deterioro de pescado, carne y leche para la producción de H 2 S y / o amina biogénica.

Conclusión El Sanbao LYC fue procesada siguiendo el tradicional Sanbao técnica con alta oncentración de NaCl, que puede tener una influencia pronunciada sobre las poblaciones microbianas que intervienen como así como el sabor de los productos finales. Aunque, rara vez nismos nismos podrían sobrevivir bajo la alta presión osmótica ambiente , una buena diversidad de especies entre las bacterias predominantes Staphylococcus recuperó de todavía se observó la Sanbao LYC. Un conocimiento profundo de la diversidad microbiológica y variaciones durante la fermentación del producto pesquero debe ser útil para el desarrollo de entrantes indígenas, que es muy prometedor porque permite que los productos a ser producido tanto con alta Sanitaria tario y cualidades sensoriales. Además, relaciona el principal problema a este producto es el contenido considerable alta histamina. Los causando la acumulación de histamina en este producto debe ser investigado cuidadosamente en futuros estudios. Los datos obtenidos en este trabajo podrían ser referidos en el control y la optimización de la fermentación proceso y selección de cepas adecuadas para productos acuáticos fermentación . Se requieren más estudios para obtener una mejor comprensión de la metabólica (características tecnológicas) personajes de las dominantes especies implicadas en la fermentación.

Reconocimiento

Este trabajo de investigación fue apoyada financieramente por el Zhejiang Programa

Provincial Pública (2014C32048) y National Key Tec nología de I + D del programa (2012BAD29B06).

Autor Aportes

H. Zhang y Li Y. diseñó el estudio y la terpretaron los resultados. JJ Wu y ZY Dai recogieron datos de prueba y redactó el manuscrito. KH Xu asistió al banco de trabajo.Referencias

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